RNA de interferncia O que ?

uma fita que se liga ao mRNA de um gene interrompendo indiretamente a sntese protica;

Mediado por pequenos RNAs de fita dupla;

Silenciamento por inibio da traduo e/ou degradao do RNAm;

RNA de interfernciaDescrito pela primeira vez em petnias;

Plantas transgnicas, super expressando genes para produo de pigmentos;

Apresentavam flores brancas devido inibio da sntese do pigmento por silenciamento do transgene e do gene endgeno;

cossupresso;

Em 1998, o mecanismo de interferncia comeou a ser elucidado.

RNA de intefernciaImportncia:

- Mecanismo de defesa do organismo (antiviral);

- Silenciamento ps-transcricional de genes;

- Permite estudar a funo de genes especficos.

RNA de interfernciaCaractersticas:

Presente em muitos organismos;

Atua como mecanismo de defesa endgeno em nematoides, plantas e fungos;

Os dsRNAs envolvidos neste processo, podem ser classificados em trs principais:

miRNAssiRNAsshRNAs

miRNAs (microRNAS) Pequenos dsRNAs endgenos;

Silenciadores ps-transcricionais, inibindo a traduo do RNAm-alvo em protena;

Sua descoberta: Caenorhabditis elegans;

Conhecidos como reguladores fundamentais da expresso gnica em plantas e animais.

miRNAs (microRNAS)Os genes que codificam miRNAs so transcritos pela RNA polimerase II;

Formam o pri-miRNA (longo microRNA primrio);

clivado por um complexo proteico: RNAse III (Drosha) e protena Pasha;

A clivagem resulta no microRNA precursor (pr-miRNA);

Contendo cap 5 e cauda poli(A)

O pr-miRNA exportado para o citoplasma (exportina-5);

clivado pela Dicer gerando um miRNA maduro;

A Dicer envolvida na incorporao de uma das fitas do miRNA a um complexo denominado RISC;

.

miRNAs (microRNAS)

O complexo RISC permite o pareamento entre a fita do miRNA incorporado e a regio homloga do RNAm-alvo por complementaridade de bases.

Complementaridade total ocorre degradao do RNAm;

Complementaridade parcial ocorre represso da traduo e posterior degradao do RNAm.

miRNAs (microRNAS)

siRNA (short interfering RNAs)So molculas sintticas de dupla fita de RNA;

Atuam por meio de pareamento a sequncias complementares ao RNA mensageiro alvo;

Causando sua degradao: silenciamento especfico do gene;

Silenciamento do gene-alvo possibilita a obteno de informaes sobre a funo exercida na clula pela protena que esse gene codifica;

siRNA (short interfering RNAs)As protenas argonautas so tambm responsveis pela seleo da fita do siRNA que ser incorporada ao RISC.Pareamento a sequncias complementares ao RNA mensageiro alvoSilenciamento especfico do gene

Existem trs atributos importantes para se projetar e selecionar um siRNA:

Potncia;Especificidade;Estabilidade s nucleases;

Um dos fatores crticos para o sucesso da tcnica de RNAi a capacidade do siRNA em silenciar especificamente o RNAm-alvo;

Tambm podem reconhecer e interferir com a expresso de RNAs mensageiros que apresentam homologia parcial com o RNAm-alvo. siRNA (short interfering RNAs)

shRNAs (short hairpin RNAs)So RNAs de dupla fita;

Construdos para apresentar uma estrutura semelhante aos miRNAs;

Podem ser introduzidos prontos na clula ou transcritos dentro da clula;

O transcrito processado pela Dicer da mesma forma que os miRNAs.

REFERNCIASAMBROS, V. The functions of animal microRNAs. Nature. 431:338-378, 2004.

BERNSTEIN, E.; DENLI, A. M.; HANNON, G. J.. The rest is silence. RNA. 2001 Nov;7(11):1509-21.

CULLEN, B. R. RNA interference: antiviral defense and genetic tool. Nat Immunol.,2002; 3:597.

FIRE et al. Potent and specific genetic interference by double-stranded RNA in Caenorhabditis elegans. Nature. 1998. 391:806.

HCK, J.; MEISTER, G. The Argonaute protein family. Genome Biol 2008; 9(2):210

MORRIS et al. Small Interfering RNA-Induced Transcriptional Gene Silencing in Human Cells. Science 2004; 305(5688):1289-92.

MEISTER, G.; TUSCHL, T. Mechanisms of gene silencing by double-stranded RNA. Nature. 2004 Sep 16;431(7006):343-9.

NAPOLI, C.; LEMIEUX, C.; JORGENSEN, R. lntroduction of a chimeric chalcone synthase gene into Petunia results in reversible co-suppression of homologous genes in trans. The Plant Cell 1990; 2:279-89.

PADDISON et al. Short hairpin RNAs (shRNAs) induce sequence-specific silencing in mammalian cells. Genes & Dev 2002; 16:948-58

RAND et al. Argonaute2 cleaves the anti-guide strand of siRNA during RISC activation.Cell 2005; 123(4):621-9.

RICARTE FILHO, J. C. M.; KIMURA, E. T. MicroRNAs: novel class of gene regulators involved in endocrine function and cancer. Arq Bras Endocrinol Metab 2006; 50(6):1102-7.

RIVAS et al. Purified Argonaute2 and a siRNA form recombinant human RISC. Nat Struct Mol Biol 2005; 12(4):340-9.

TUSCHL et al.. Targeted mRNA degradation by double-stranded RNA in vitro. Genes Dev.. 1999. 13:3191.

ZAMORE, P. D. RNA interference : listening to the sound of silence. Nat Struct. Biol.,2001. 8:746.

um evento conservado durante a evoluo, ocorrendo em vrios organismos eucariontes e atuando como mecanismo de defesa. Esse rna serve para proteger os organismos de ataques de vrus e para eliminar produtos de transcries anmalas. Os RNAs dupla fita so classificados de acordo com sua origem e funo em pelo menos 3 categorias.