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UNIVERSIDADE FEDERAL DE MATO GROSSO
CAMPUS DE SINOP
INSTITUTO DE CIÊNCIAS AGRÁRIAS E AMBIENTAIS
CURSO DE AGRONOMIA
REINDUÇÃO DA TOLERÂNCIA À DESSECAÇÃO EM SEMENTES
GERMINADAS DE MILHO (Zea mays L.)
SUELEN CAROLINE HEEP
SINOP – MT
Outubro – 2016
UNIVERSIDADE FEDERAL DE MATO GROSSO
CAMPUS DE SINOP
INSTITUTO DE CIÊNCIAS AGRÁRIAS E AMBIENTAIS
CURSO DE AGRONOMIA
REINDUÇÃO DA TOLERÂNCIA À DESSECAÇÃO EM SEMENTES
GERMINADAS DE MILHO (Zea mays L.)
SUELEN CAROLINE HEEP
PROF. DR. CARLOS VINICIO VIEIRA
Trabalho de Conclusão de Curso (TCC) apresentado ao Curso de Agronomia do ICAA/CUS/UFMT, como parte das exigências para a obtenção do Grau de Bacharel em Agronomia.
SINOP – MT
Outubro - 2016
DEDICATÓRIA
Dedico aos meus pais, Lizete e Mario, minha irmã Gabriela
e meus avós, Eleutério (in memorian) e Glaci, sempre presentes em mim.
“Acredite:
Muitas das cancelas e porteiras que vislumbramos em nosso destino e que resguardam
tantas coisas que almejamos não possuem cadeados...
Talvez uma tramela, tão somente...
Basta “apeiar” e ter coragem de abrí-las...
Quem tem sede de caminhos necessita ser estrada...” Caine Teixeira Garcia
AGRADECIMENTOS
Agradeço principalmente aos meus pais, vovó Glaci e meu falecido vovô Eleutério, e a
Coda, pela criação que recebi, ensinamentos, puxões de orelha, cuidado e carinho, à minha
irmã Gabi, minha prima Tati, irmã de criação e coração, Bruninho, pelo companheirismo,
amizade, incentivo, amor, muito obrigado por serem minha família, se pudesse escolher,
seriam vocês, meus amores eternos.
Aos amigos que a faculdade me deu, seja os desde o início dessa caminhada, como os que
apareceram pelo caminho, nos momentos ruins, nos melhores, de descontração, de estudo,
nos de ócio, de todas as horas, amo todos e agradeço pela ajuda, conselhos, carinho, pelos
puxões de orelha, sinceridade, de tomar uma, mas só uma! Raúna, Guilherme, Priscila, Ana
Flávia, Luana, Naiara, Núbia, César (Pato), Leonardo e aos demais que se fizeram
presentes nesse tempo todo, muito obrigada, espero poder sempre estar presente do
mesmo modo que foram pra mim, que a amizade se estenda pra vida toda.
As minhas amigas especiais, que mesmo não estando comigo aqui o tempo todo sempre
me incentivaram, apoiaram, me trouxeram alegrias, renderam histórias, diferentes, mas
especiais de igual modo, sempre se fizeram presentes e quero que assim continue pra
sempre, amo vocês, Gessica e Dayane.
Agradeço ao meu orientador, Professor Carlão, que também foi um dos meus melhores
professores, ao Célio, Ramiro e a Ellen pela ajuda no laboratório, Marcelo pela ajuda no
trabalho. Ao Ricardo, Fabio, Thiago, Netão e Eduardo, muito obrigada pelo aprendizado e
companheirismo no estágio.
E por tudo que Deus me proporcionou, a vida, aos familiares, amigos, alegrias e momentos
difíceis que me serviram de lição, aprendizado e crescimento pessoal.
SUMÁRIO
RESUMO..................................................................................................................................8
ABSTRACT..............................................................................................................................9
1. INTRODUÇÃO............................................................................................................10
2. REVISÃO LITERÁRIA................................................................................................12
2.1 A Cultura do Milho................................................................................................12
2.2 Aspectos da Germinação na Cultura do Milho (Zea mays L.)..............................13
2.3 Tolerância à dessecação......................................................................................14
2.4 Reindução da Tolerância à Dessecação Pós Protrusão da Raiz Primária em
Sementes..............................................................................................................17
3. MATERIAL E MÉTODOS...........................................................................................19
3.1 Germinação das Sementes de Milho....................................................................19
3.2 Método de Secagem e Reidratação das Sementes.............................................19
4. RESULTADOS E DISCUSSÕES...............................................................................21
5. CONCLUSÃO.............................................................................................................25
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS......................................................................................26
RESUMO
A cultura do milho apresenta grande importância mundial, principalmente para alimentação
animal na produção de carnes, sendo o Brasil um dos maiores produtores mundial do grão.
Com o crescimento de fenômenos climáticos adversos para a produção, objetivou-se no
trabalho avaliar a capacidade de manter a tolerância à dessecação após a germinação das
sementes de milho. As sementes protundidas foram submetidas a diferentes tempos de
desidratação, de 6, 12, 24, 48, 72, 84 e 96 horas em sílica gel, diminuindo seu teor de água
para até 10,22%. Houve posterior reidratação das sementes, para a retomada de
crescimento, onde a menor taxa de sobrevivência foi de 71%, afirmando assim que houve
satisfatória reindução da tolerância à dessecação em sementes germinadas de milho (Zea
mays L.).
Palavra-chave: dessecação, milho, reindução, Zea mays L.
ABSTRACT
The culture of maize has great importance worldwide, mainly for animal feed in meat
production, with Brazil one of the largest world producers of grain. With the growth of
adverse weather phenomena for the production, the aim in this study was to evaluate the
ability to maintain tolerance to desiccation after germination of corn seed. The prestressed
seeds were submitted to different dehydration times of 6, 12, 24, 48, 72, 84 and 96 hours on
silica gel, reducing its water content up to 10,22%. There were rehydration seeds, for the
resumption of growth, where the lower survival rate was 71%, stating that there was so
satisfactory re-induction of desiccation tolerance in maize germinated seeds (Zea mays L.).
Keyword: desiccation, Corn, re-induction, Zea mays L.
10
1. INTRODUÇÃO
A cultura do milho possui importância mundial devido ao seu uso na alimentação
animal e na humana, na produção de óleos e, em alguns países, na fabricação de etanol.
Em virtude de sua localização, o Brasil apresenta condições que permitem que o milho seja
cultivado em quase toda sua área agrícola (POTTKER, 2000). No país a cultura encontra-se
entre as espécies mais cultivadas, atingindo uma área total de 15,4 milhões de hectares
dividida em dois períodos, milho safra e safrinha, com estimativa total de média de 5400
Kg/ha, uma produção de 83,5 milhões de toneladas do grão (CONAB, 2016).
O estresse por baixa disponibilidade hídrica é um dos fatores que mais limitam o
desenvolvimento e a produtividade agrícola. Mais de 90% da área de milho cultivada no
mundo é de sequeiro, e as perdas em produtividade anual em decorrência da seca ficam em
torno de 15% do potencial de rendimento total, as perdas são mais intensas em regiões
tropicais que dependem de temporadas de chuvas relativamente imprevisíveis para o
desenvolvimento da cultura (EDMEADES, 2008). Durante a germinação das sementes,
ocorre uma série de reações de hidrólise e síntese de substâncias e tecidos os quais exigem
plena disponibilidade de água. Além de mediar os processos metabólicos do
desenvolvimento, a água é responsável pela manutenção da organização do sistema de
membranas celulares (MARCOS FILHO, 2005).
Sementes ortodoxas, como as do milho, passam por uma redução natural do teor de
água no final do processo de desenvolvimento, ficando num estado seco quiescente, o que
possibilita o seu armazenamento e sobrevivência nas várias condições ambientais
(BEWLEY e BLACK, 1985). Durante o período de formação e maturação das sementes, a
água assume papel crucial, atuando inicialmente na expansão e divisão celular e,
posteriormente, como veículo para os produtos da fotossíntese que farão parte dos tecidos
da semente ou serão armazenados para futura utilização nas fases iniciais da germinação.
Sementes maduras de milho, à medida que sofrem desidratação natural, tornam-se
tolerantes a temperaturas de secagem elevadas em consequência de mudanças físicas,
fisiológicas e bioquímicas que ocorrem juntamente com a redução do teor de água
(HERTER e BURRIS, 1989; CHEN e BURRIS, 1991).
A tolerância à dessecação é a capacidade que alguns organismos têm de tolerar a
perda de mais de 90% do seu conteúdo total de água e retomar o metabolismo e
11
desenvolvimento normal após a reidratação (COLVILLE e KRANNER, 2010). A sensibilidade
à dessecação é um fenômeno fisiológico complexo e envolve uma série de mecanismos
deletérios e/ou protetores dependendo das condições da dessecação (LI e SUN, 1999).
Após a germinação, a tolerância à dessecação é gradativamente reduzida, a raiz primária é
a primeira parte a perder a tolerância logo após a protrusão, que é totalmente perdida com o
desenvolvimento da plântula (BUITINK et al., 2003). Estudos realizados com outras
espécies mostraram que a tolerância à dessecação pode ser reestabelecida em sementes
ortodoxas germinadas, a espécie Medicago truncatula com até 2,0 mm de raiz primária
retomaram o crescimento em condições apropriadas de germinação (BUITINK et al., 2003;
FARIA et al., 2005). Sementes que apresentam tolerância à dessecação apresentam-se
importantes em estudos relacionados à reindução de tolerância à dessecação.
Como não há estudos relacionados à reindução da tolerância a dessecação em
sementes germinadas de milho submetidas à secagem, ou efeitos de estresse hídrico, o
objetivo do trabalho foi de avaliar a capacidade de tolerância à dessecação em sementes
protundidas de milho e a sua reindução de tolerância à dessecação, dispostas à secagem
com uso de sílica gel em sementes de milho.
12
2. REVISÃO LITERARIA
2.1 A Cultura do Milho
Pertencente à família Poaceae, do grupo das angiospermas, o milho (zea mays L.) é
uma cultura adaptável a diferentes condições ambientais. Planta anual, ereta, com 1 a 4
metros de altura, robusta e com alto potencial produtivo, arquitetada para a produção de
grãos. De acordo com Aldrich (1982) a planta de milho possui enorme eficiência em
armazenar energia. De uma semente que pesa pouco mais de 0,3 g origina-se uma planta
com mais de 2,0 m de altura, dentro de um espaço de tempo de nove semanas produzindo
cerca de 600 a 1.000 sementes. Originária da América Central com cultivo desenvolvido e
em evolução a aproximadamente 10 mil anos. O milho é o cereal mais cultivado no mundo,
sendo o Brasil o terceiro maior produtor mundial do grão, e o estado do Mato Grosso o
maior produtor nacional (MAPA, 2016).
Apesar de sua adaptabilidade apresenta necessidade de muita radiação solar,
temperaturas em torno de 24° e 30° e boa disponibilidade hídrica. Essa é uma cultura de
rendimento muito variável, em função de déficits hídricos causados por variações climáticas,
cujo efeito depende da intensidade, época e duração em relação ao ciclo de crescimento e
desenvolvimento da planta (JURGENS et al., 1978 ; CUNHA & BERGAMASCHI, 1992).
Modificações no comportamento climático observado nas últimas décadas e as
projetadas para o futuro próximo trarão, provavelmente, alterações no ciclo hidrológico
afetando o desenvolvimento das culturas, sua produção e o consumo de água
(VÁRALLYAY, 2010). As restrições originadas por indisponibilidade de água do solo ou pela
alta demandam evaporativa, ativam mecanismos fisiológicos que possibilitam a planta a
tolerar e amenizar as limitações, alterando o crescimento e desenvolvimento, e até mesmo
minimizando as perdas na produção final. A cultura necessita aproximadamente 600 mm de
precipitação para expressar um bom potencial produtivo. O período do pendoamento e
formação dos grãos necessita de aproximadamente 7 mm diários, podendo aumentar a
necessidade caso as temperaturas sejam muito elevadas e se submetido à seca, gera
grandes perdas de produtividade. Períodos de seca no início do desenvolvimento da cultura
podem estimular um melhor desenvolvimento radicular, desde que, haja água disponível
abaixo da faixa de 20 cm, dita como camada agricultável do solo (MAGALHÃES, 2002).
Mecanismos como o sistema radicular extenso, pequeno tamanho de células, cutícula foliar
espessa e cerosa, a frequência estomática, acúmulo de metabólitos intermediários, o ajuste
osmótico e a resistência à desidratação das células podem contribuir a resistência à seca
(MAGALHÃES, 1995).
13
O submetimento a estresse hídrico no período de germinação é raro, pois a planta
necessita de 2,5 mm diário em clima quente e seco, mas devido a intempéries registradas
nos últimos anos, o plantio tardio pode sofrer com secas e não atingir esse nível de
precipitação, o que pode prejudicar o estabelecimento da cultura, diminuindo o estande,
havendo por vezes a necessidade de replantio em casos mais agravantes.
2.2 Aspectos da Germinação na cultura do Milho (Zea mays L.)
O padrão mínimo de plântulas normais em testes de germinação, exigido para
comercialização de sementes de milho no Brasil, é de 85% (ABRASEM, 2013), porém sabe-
se que as informações previstas em teste de germinação não são precisas para o
comportamento das sementes em condições de campo, principalmente quando as
condições são adversas.
Germinação de uma semente é a reativação do crescimento do embrião, resultando
na ruptura da cobertura da semente e na emergência da plântula (COPELAND &
McDONALD, 1995). A embebição de sementes maduras e viáveis promove a reativação dos
sistemas metabólicos existentes, levando à síntese de novos componentes que promovem
expansão e divisão celular enquanto a plântula se estabelece (CASTRO; BRADFORD;
HILHORST, 2004). As atividades metabólicas da semente que culminam com a efetiva
retomada de crescimento pelo eixo embrionário se aceleram à medida que a semente, posta
no substrato apropriado, absorve água (CARVALHO e NAKAGAWA, 2000). Após a fase
inicial de absorção, os potenciais hídricos da semente e do solo tendem a ficar muito
próximos e o fluxo inicialmente estabelecido pode ser alterado por qualquer redução do
potencial hídrico (YOUNG et al., 1983) ou por problemas na condutividade hidráulica do solo
(COLLIS-GEORGE e HECTOR, 1966). Porém a resposta das sementes a diferentes graus
de embebição varia, podendo ocorrer germinação, deterioração e em níveis mais críticos
podendo ocorrer a morte das mesmas. A redução progressiva do potencial hídrico do solo
apresenta tendências de redução na porcentagem e nas velocidades de germinação e de
emergência (PIANA, 1980; YOUNG et al., 1983). Restrições na disponibilidade hídrica
relacionam-se com limitações na divisão e no crescimento celular, apresentando prejuízos
ao desenvolvimento das plântulas que tendem então a apresentar anormalidades (ROGAN
e SIMON, 1975; HEGARTY, 1978).
Segundo Popinigis (1977), para que a germinação ocorra é necessário um teor
mínimo de água, que varia de espécie. Esse valor de potencial hídrico, abaixo do qual a
germinação não ocorre no milho (cv. AL-34), é a partir de -0,81 MPa, condição em que a
semente apresenta teor de água em torno de 25%. Em um trabalho conduzido por Martinelli,
Martins e Nakagawa (2000), em condição de estresse hídrico não há diferenças na
14
porcentagem de germinação das sementes pelo tamanho do grão, porém foi verificado
diferenças na emissão de raiz primária, nas quais as sementes menores apresentaram
maior taxa de emissão. Mesmo assim, abaixo de -0,81 MPa, a germinação foi inibida
completamente em todas as classes de sementes. Por mais que a germinação ocorra, o
atraso na emergência proporciona uma ampliação no tempo de exposição à ação dos
patógenos (MARCOS FILHO, 1986). Conforme Copeland (1995), o solo, em situação de
capacidade de campo, possibilita a máxima germinação. No entanto, a germinação ainda
ocorre com teores de água do solo situados entre a capacidade de campo e o ponto de
murcha permanente (DONEEN e McGILLIVRAY, 1943). Porém no trabalho do autor foi
constatado que em um valor intermediário de -0,81 MPa, até possibilitou à semente atingir o
teor de água de 25% e emitir a raiz primária, porém não foi suficiente para que a plântula
desse continuidade ao desenvolvimento e emitisse todas as estruturas necessárias para a
sua sobrevivência. Segundo alguns autores, o teor de água do substrato mais propício para
emergência de plântulas está na faixa de 40% a 60% da capacidade de saturação do solo.
Resultados obtidos por Piana e Rodrigues da Silva (1998), mostram que em ambiente de
hidratação inferior à -15 atm, no 14o dia após a semeadura, sementes apresentavam-se
com aspecto de não haverem absorvido água e em ambiente de -15 atm as sementes
apresentavam-se intumescidas. O fato de não ocorrer emergência nestes potenciais hídricos
concordam com dados de Hunter & Erickson (1952), que colocam -12,5 atm como valor
mínimo para desencadear o processo de germinação.
Comum no campo situações de déficit hídrico onde até ocorre a hidratação da
semente, mas não a germinação, as sementes que não atingiram teor de água que permita
seu desenvolvimento podem até tolerar essa condição de estresse, e na supressão desta
condição, continuar o processo de estabelecimento ou morrer por causas fisiológicas ou
patológicas. Assim, sementes de alto vigor mostraram que uma vez expostas às condições
adversas de estresse hídrico, possivelmente utilizam a energia para possibilitar o
crescimento da raiz e o desenvolvimento completo da plântula, e as sementes de baixo
vigor, apresentando alta deterioração e baixo nível de energia, não conseguem superar
condições adversas e apresentam desempenho inferior nessas condições (HEGARTY,
1977).
2.3 Tolerância à Dessecação
A tolerância à dessecação é um fenômeno complexo, envolvendo a interação de
ajustes metabólicos e estruturais, permitindo que as células resistam a perdas consideráveis
de água sem a ocorrência de prejuízos acentuados (MARCOS FILHO, 2005). Sabe-se que a
tolerância de sementes à dessecação decresce à medida que a germinação avança, sendo
inibida ou perdida geralmente a partir da protrusão da raiz primária (BEWLEY e BLACK,
15
1994). Reisdorph e Koster (1999), estudando a perda progressiva da tolerância a
dessecação em sementes germinadas de Pisum sativum, encontraram maior sensibilidade
na região da raiz primária, demonstrando ser esta a primeira a sofrer danos por secagem,
Buitink et al. (2003), também observou que em sementes em processo germinativo, a raiz
primária é a primeira estrutura a perder tolerância à dessecação. Assim, diversos autores
obtiveram sucesso em trabalhos utilizando tamanho de raiz primária como modelo
experimental para avaliação de alterações ocorridas durante a perda da tolerância à
dessecação.
Segundo Parcy et al.(1994), sementes ortodoxas em seu processo de
desenvolvimento apresentam duas etapas importantes em seu desenvolvimento fisiológico,
uma no período de maturação da semente, que é quando adquire a tolerância, e a segunda
no processo germinativo que é quando a semente perde essa capacidade. Durante a
maturação, ocorre a ativação de mecanismos relacionados à tolerância à dessecação e
redução dos demais processos, ocorrendo o oposto durante a germinação (KERMODE e
FINCH-SAVAGE, 2002; NEDEVA e NIKOLOVA, 1997; PARCY et al.,1994).
Sementes ortodoxas, como o milho, passam por uma redução natural do teor de
água no final do processo de desenvolvimento, possibilitando seu armazenamento e
sobrevivência em diferentes condições ambientais. Essa dessecação tem um papel
importante no término do desenvolvimento e preparo da semente para germinação após
reidratação. Tem sido demonstrado que essas sementes não germinam e também não
apresentam síntese de enzimas essenciais à germinação se não passarem por essa
secagem natural que ocorre na pós-maturação ou se não forem submetidas à secagem
artificial em determinado estádio do seu desenvolvimento (KERMODE e BEWLEY, 1989).
A tolerância à dessecação é adquirida na fase de acúmulo de reservas e pode ser
induzida por meio de secagem lenta artificial, em determinados estádios de desenvolvimento
(VERTUCCI e FARRANT,1995). Um estudo conduzido por Dekkers (2015), onde se fez a
divisão entre quatro momentos, na ruptura da testa, protrusão da raiz, com uma raiz
principal de 3 a 5 mm de comprimento, e com o aparecimento dos primeiros pêlos
radiculares apresentou que nas primeiras três fases, as sementes foram capazes de
suportar a dessecação após um tratamento em PEG (polietilenoglicol) e taxas de
sobrevivência das mudas foram perto de 100%, já na ultima fase este número caiu para 20-
40% indicando que esta capacidade de tolerância à dessecação era em grande parte
perdida nesta fase. Outra característica notável era que diferente partes de sementes
apresentaram níveis variáveis de reindução de tolerância à dessecação como em
Arabidopsis, os cotilédones foram o tecido mais tolerante seguido dos hipocótilos e raízes. O
provável final da fase de aquisição de tolerância à dessecação em sementes de milho
ocorre a partir do estádio 3 de linha de leite (LL-3) (FARIA et al. 2004). A medida que
16
perdem água, lentamente adquirem tolerância à secagem em temperaturas mais elevadas.
Diversas mudanças bioquímicas ocorrem nas células das sementes para prepará-las para
tolerar a perda de água de seus tecidos. Dentre essas mudanças, está a síntese de
proteínas na fase final de maturação, conhecidas como “LEA” (Late Embriogenesis
Abundant) (BEWLEY e BLACK, 1994), cuja detecção e acúmulo nas fases finais do
desenvolvimento de sementes têm sido correlacionados com aquisição de tolerância à
dessecação em várias espécies (BLACKMAN et al., 1991; THOMMAN et al., 1992;
KERMODE,1997). O padrão de acúmulo, a ocorrência abundante e as características físicas
de resistência à desnaturação e hidrofilicidade das proteínas LEA sugerem seu papel na
tolerância à dessecação, protegendo os componentes celulares da falta de água,
promovendo ajuste osmótico ou substituindo a água (HAN et al. 1997). Segundo Thomann
(1992), proteínas LEA moduladas por ABA, acumulam em embriões de sementes de milho,
durante a secagem lenta, fase correspondente à aquisição de tolerância à dessecação.
Em sementes de milho, o acúmulo de radicais livres bem como a intensificação da
peroxidação de lipídios e de esterificação de fosfolipídios foram associadas à perda de
tolerância à dessecação (LEPRINCE et al., 1994a, 1994b e 1995). O tratamento de
secagem imposto prematuramente ou como ocorre nas fases finais do desenvolvimento de
sementes de milho, age como um sinal para o estímulo à síntese de a-amilase (ROSA,
2004). Estas enzimas são produzidas pela camada de aleurona em resposta à síntese do
ácido giberélico (GA3), após a redução do conteúdo do ácido giberélico, quando a semente é
submetida à secagem, seja natural na fase pós-maturação ou artificial, em estádios mais
precoces do desenvolvimento (EVANS et al., 1975; ARMSTRONG et al., 1982).
Sementes de milho apresentam redução gradativa da sensibilidade à dessecação
após a maturidade e quando submetidas a uma secagem prévia em baixa temperatura
(35ºC), adquirem tolerância à secagem a 50ºC (HERTER e BURRIS, 1989; ROSA, 2004).
Nessas sementes ocorreu indução de tolerância à alta temperatura, em decorrência da
ativação de mecanismos de defesa contra os efeitos danosos da retirada de água,
observados por Chen e Burris (1991). Borowski (1995) e Mao (1995) verificaram que
mutantes de milho, intolerantes à dessecação e que não produzem ácido abscísico e nem
proteínas LEA, após a imposição do estresse de água apresentaram tolerância, em resposta
à aplicação exógena de ácido abscísico.
Enzimas associadas exclusivamente a processos pós-germinativos têm sua
produção induzida pela secagem da semente durante seu processo de desenvolvimento e
maturação. É fundamental, porém, que a dessecação seja controlada, pois existe diferença
entre a secagem rápida e a secagem lenta. A secagem lenta de sementes imaturas de soja,
por exemplo, resultou em sementes viáveis, com degradação de clorofila e formação de
enzimas específicas da germinação, enquanto a secagem rápida resultou em sementes
17
inviáveis, de coloração verde e sem formação das enzimas de germinação (ADAMS et al.
1983). Autores concluíram, então, que a secagem provavelmente atua nos processos finais
de desenvolvimento, preparando a semente para a germinação e para o crescimento da
plântula. Em sementes de milho, a aquisição de tolerância à secagem sob alta temperatura
é associada à atividade da enzima catalase e pouco associada à atividade das enzimas
superoxido dismutase e peroxidase. Sementes de milho tolerantes à alta temperatura de
secagem apresentam maior quantidade de proteínas LEA, bem como maior síntese de
enzimas a-amilase, do que sementes intolerantes.
2.4 Reindução da Tolerância à Dessecação Pós Protrusão da Raiz Primária em
Sementes
Black & Pritchard (2002) colocam a desidratação como muito prejudicial durante os
processos de germinação e aos que sucedem, pois provoca danos que incidem no cito
esqueleto como resultado de mudanças que ocorrem no volume celular. Essa rápida
remoção de água também pode ocasionar danos as membranas, mudança de pH,
cristalização de solutos, desnaturação de proteínas. Dekkers et al. (2015) também coloca
que a resposta à dessecação compreende um conjunto complexo de mecanismos de
proteção contra estresses mecânicos causados pela remoção de água, incluindo a
modificação da parede celular, membranas, do cito esqueleto, e compactação da cromatina.
A secagem lenta propicia maior homogeneidade na perda de água, propiciando tempo
necessário para que as sementes germinadas possam fazer novamente síntese de
moléculas e substâncias que atuam na proteção dos tecidos durante a secagem (VIEIRA,
2008). A estabilidade do DNA durante a desidratação e sua capacidade de reparo durante a
reidratação são componentes essenciais de um mecanismo de tolerância completo. A
manutenção da informação genética é fundamental para a tolerância à dessecação e
sobrevivência da célula após a desidratação e reidratação (OSBORNE e BOUBRIAK, 1997).
Buitink et al.(2003) aponta que o estresse moderado pode restabelecer a tolerância a
dessecação em sementes ortodoxas germinadas sensíveis a dessecação, e também sugere
que o ABA e o estresse osmótico agem como dois estímulos independentes necessários
para reinduzir à tolerância à dessecação, o tratamento osmótico poderia inibir o crescimento
radicular até que o ABA fosse acumulado e desempenhasse suas funções. Sreedhar et al.
(2002), em um estudo com embriões somáticos de alfafa, observou que outro efeito
importante do ABA, é a redução de danos celulares devido à proteção de atividades
metabólicas. Assim, o ácido abscísico (ABA) previne a ocorrência da germinação e
desempenha importante papel nos eventos que determinam a tolerância à dessecação.
18
Segundo Buitink. et al. (2003) parâmetros que influenciam o restabelecimento da
tolerância à dessecação são temperatura, potencial hídrico e tamanho da raiz primária
protundida, assim como também observou que essa é a primeira estrutura a perder
tolerância à dessecação, e em um trabalho conduzido por Costa (2016), afirma que raiz
primária é sim o órgão mais sensível à dessecação, porém a capacidade de produzir raízes
laterais é a chave para a sobrevivência das sementes germinadas. A indução da tolerância à
dessecação em sementes germinadas, provavelmente, esteja relacionada com a ativação
de genes responsáveis por vários sistemas de reparo que agem sinergicamente (BOUDET
et al.,2006).
19
3. MATERIAL E MÉTODOS
O Trabalho foi realizado no Laboratório de Sementes da Universidade Federal de
Mato Grosso, no Campus de Sinop.
Foram utilizadas sementes de milho (Zea mays L.) cultivar RK3014, um híbrido triplo
convencional, com certa tolerância a seca e ciclo precoce, da empresa KWS Sementes S.A,
sementes tratadas com fungicida, apresentando 100% de pureza e 89% de germinação
(plântulas normais).
As sementes foram caracterizadas quanto ao teor de água e porcentagem de
protrusão de raiz primária, sendo que o teor de água foi determinado pelo método estufa a
105 ± 3°C por 24 horas (BRASIL, 2009), e a porcentagem de germinação foi avaliada por
meio da semeadura de quatro subamostras de 30 sementes em ágar à temperatura de
25ºC, com leitura após 72 horas de em câmara de germinação.
3.1 Germinação das Sementes de Milho
As sementes de milho a serem germinadas foram colocadas em caixas plásticas
transparentes (gerbox) de 11 x 11 x 3,5 cm, em meio ágar cultura vegetal a 6g/L, mais
prático do que o uso de papel para germinação. Foram postas para germinação 150
sementes por tratamento, no total 8 tratamentos, para que houvesse quantidades de
embriões germinando suficientes para suprir a demanda por plântulas a serem retiradas
para as repetições de cada tratamento.
3.2 Método de Secagem e Reidratação das Sementes
As plântulas foram retiradas assim que protundidas, as repetições não foram todas
simultâneas, então cada tratamento foi dividido em 4 repetições de 25 plântulas e 1
repetição de 30 sementes para teste de umidade, onde todas foram submetidas a secagem.
As plântulas foram dispostas à secagem em telas de 11 x 11 sobre sílica gel em caixas
plásticas vedadas, com controle de umidade relativa (UR%) de 14%, medido com auxílio de
Data logger (HOBO U14-001) e temperatura controlada a 26°C.
A sílica gel, cuja fórmula química é SiO2, é uma substância sintética, trata-se de um
importante composto dessecante e desidratante, capaz de reter a umidade dos ambientes,
processo em que as moléculas de um líquido se aderem à superfície do dessecante. As
sementes não foram submetidas a nenhum pré-tratamento para resistirem mais a
desidratação. A secagem foi testada em 1 tratamento com as sementes somente embebidas
e submetidas à 24 horas de secagem e em 7 tratamentos de sementes com raiz primária
20
protundida, sem utilizar padrões de tamanhos de raízes primárias, em tempos de 6, 12, 24,
48, 72, 84 e 96 horas em sílica, onde 3 amostras de 10 sementes cada foram retidas para
teste de umidade.
Para o processo de reidratação foram realizadas 4 repetições de 25 sementes postas
novamente em caixas gerbox com ágar, nas condições de 25°C e com 12 horas de luz
diárias para germinação.
21
4. RESULTADOS E DISCUSSÃO
No teste inicial de umidade ao qual as sementes foram submetidas, apresentaram
teor de água próximo à 15%, e germinação de 90%, diante desses valores, quando da
montagem de novas repetições foram usadas 30 sementes para se alcançar o total de 25
sementes já protundidas para realização da dessecação destas em sílica gel.
Em estudos realizados por Rosa et al. (2004), observou-se que tratamentos de
secagem em sementes de milho, tratadas com pré-secagem a 35ºC, e posteriormente secas
a 55ºC, até um teor de umidade de 12%, fazem com que haja restabelecimento da
germinação após estresse, observando que esse tratamento de pré-secagem ativou
mecanismos de tolerância a dessecação, por promover uma desidratação gradativa, logo,
mantendo uma integridade estrutural. As sementes utilizadas foram comerciais, e
provavelmente houve processo de secagem artificial para chegar à um teor de água correto
para manter sua qualidade e armazenamento adequado, porém não se pode afirmar o exato
tratamento de secagem utilizado na produção das sementes, para que se possa colocar
como fator de interferência nos resultados.
Outro fator onde esperava haver interferência era em relação ao tamanho das raízes
primárias das sementes postas à dessecação, onde outros trabalhos apresentaram um
tamanho de até 2 mm para que houvesse a retomada de crescimento, porém não se pode
utilizar isso como parâmetro, apenas a sua protrusão, pela grande desuniformidade
apresentada nos tamanhos de raízes primárias nas sementes de milho (Zea mays) (Figura
1). Várias repetições continham plântulas com raízes primárias recém protundidas como de
até 7 mm, todas voltando seu crescimento após dessecação, sem discrepâncias nas médias
de sobrevivência.
22
Figura 1: Sementes protundidas durante e pós-dessecação. Fonte: UFMT- Sinop, 2016.
A taxa de sobrevivência em teores de água de aproximadamente 30% foi de 100%,
das 25 sementes postas a dessecação todas retomaram o crescimento, à medida que o
tempo na sílica aumentou, o que provocou gradativamente um menor teor de água nas
sementes, onde se esperava que a partir de aproximadamente 12% de teor de água a
sobrevivência diminuísse significativamente, não ocorreu, houve a queda, porém ainda se
mostrou positivamente significativa, expressando uma boa média de sobrevivência, ou seja,
retomada de crescimento de 71% (Figura 2).
Figura 2: Tabela relação tempo, sobrevivência total, teor médio de umidade (%) e sobrevivência (%).
Fonte: UFMT – Sinop, 2016.
23
Figura 3: Gráfico de relação de sobrevivência (média do número de sementes que retomaram crescimento) por teor de água (%). Fonte: UFMT – Sinop, 2016.
Teoricamente, sementes quando embebidas, tendem a perder tolerância à
dessecação e apresentam sua viabilidade comprometida, de forma que quando ocorre a
protrusão da raiz primária, caso ocorram condições adversas, tal como períodos de seca
(desidratação), as plântulas caminham para um processo de morte do meristema radicular,
e como consequência ocorre perda da tolerância à dessecação (HONG e HELLIS, 1992;
BUITINK et al., 2003). Após a embebição das sementes, a raiz primária emergida é a
primeira a perder a habilidade de tolerar a secagem, seguida pelo hipocótilo e cotilédones
(BOUDET et al., 2006), acarretando assim a perca da tolerância à dessecação. Entretanto,
várias pesquisas relatam sucesso no restabelecimento da tolerância à dessecação de
sementes germinadas em várias espécies como Medicago trunculata (BUITINK et al., 2003),
Vigna unguiculata L.( WALP.) (SILVA, 2015), para Tabebuia impetiginosa e Alliaria petiolata
( VIEIRA, 2008). Costa (2016) coloca que apesar de outros órgãos serem mais sensíveis à
dessecação, é a capacidade de produção de raízes laterais que levam a sobrevivência e
retomada de crescimento de sementes germinadas, assim o milho tendo um sistema
radicular seminal, dito como temporário, que cessa seu crescimento dando lugar a raízes
nodais ou fasciculadas, seu sistema radicular definitivo, apresenta essa chave para a
retomada de crescimento, a tolerância à dessecação.
A observação de retomada de crescimento foi feita aproximadamente uma semana
após a retirada da sílica gel. Foram contadas como sobreviventes apenas as sementes com
0,00%
5,00%
10,00%
15,00%
20,00%
25,00%
30,00%
35,00%
0
5
10
15
20
25
30
6 12 24 48 72 84 96
Teo
r d
e á
gua
(%)
Sob
revi
vên
cia
Tempo
sobrevivência teor de água
24
raízes bem desenvolvidas, assim a taxa de sobrevivência pode-se apresentar maior com
alguns dias a mais, já que a maioria das sementes que não mostravam raiz aparentemente
bem desenvolvida estavam como nas imagens A e B na figura 4.
Figura 4: Sementes que retomaram o crescimento. Fonte: UFMT - Sinop, 2016.
B A
25
5. CONCLUSÃO
Sementes de milho (Zea mays L.) apresentaram reindução da tolerância à
dessecação, houve queda na média de sobrevivência perante aumento do tempo em
condições adversas, logo na diminuição no teor de água, porém a taxa de retomada de
crescimento permaneceu elevada em valores de teor de água entre 11% e 10%, em torno
de 71% de sobrevivência. Observando que o principal fator determinante para essa
retomada de crescimento tenha sido o crescimento de novas raízes nas sementes
germinadas pós-dessecação em sílica gel.
26
REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS
ADAMS, C.A.; FJERSTAD, M.C.; RINNE, R.W. Characteristics of soybean seed maturation: necessity for slow dehydration. Crop Science, Madison, v.23, n.2, p.265-267, 1983.
ALDRICH, S. R.; SCOTT, W. O.; LENG, E. R. Modern corn production. 2.ed. Champaign: A & L Publication, p. 371. 1982.
ARMSTRONG, C.; BLACK, M.; CHAPMAN, J.M.; NORMAN, H.E.; ANGOLD, R. The induction of sensivity to gibberellin in aleurone tissue of developing wheat grains. I. The effet of dehydration. Planta, Berlin, v.154, n.6, p.573-577, 1982.
BERGAMASCHI, H.; MATZENAUER, R. O milho e o clima. Porto Alegre: Emater/RS-Ascar. 84 p. il. 2014. BEWLEY, J. D.; BLACK, M. Seeds - Physiology of development and germination.2.ed. New York: Plenum Press,p. 445, 1994.
BEWLEY, J.D.; BLACK, M. Seeds: physiology of development and germination. New York: Plenum Press, p.367, 1985.
BLACK, M.; PRITCHARD, H. W. (Eds.). Desiccation and survival in plants: drying without dying. Wallingford, UK: CAB International, 2002.
BLACKMAN, S. A.; WETTLAUFER, S. H.; OBENDORF, R. L.; LEOPOLD, A. C. Maturation proteins associated with desication tolerance in soybean. Plant Physiology, Bethesda, v. 96, p. 868-874, 1991.
BOROWSKI, A. M.; FRITZ, V. A.; WATERS JR., L. Seed maturity and desiccation affect carbohydrate composition and leachate conductivity in shrunken-2 sweet corn. Hort Science, Alexandria, v. 30, n. 7, p. 1396-1399, 1995.
BOUDET, J.; BUITINK, J.; HOEKSTRA, F. A.; ROGNIAUX, H.; LARRÉ, C.; SATOUR, P.; LEPRINCE, O. Comparative analysis of the heat stable proteome of radicles of Medicago truncatula seeds during germination identifies late embryogenesis abundant proteins associated with desiccation tolerance. Plant Physiology, v. 140, n. 4, p. 1418-1436, 2006.
BRASIL. Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento. Art. 87, parágrafo único, inciso II, da Constituição, tendo em vista o disposto na Lei no 10.711, de 05 de agosto de 2003, no Decreto no 5.153, de 23 de julho de 2004, na Instrução Normativa noº 9, de 2 de junho de 2005, e o que consta do Processo no 21000.006198/2012-57. Instrução Normativa n° 45, de 17 de setembro de 2013. Publicação: D.O.U. 20/09/13, Seção 1.
27
BRASIL. Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento. Regras para análise de sementes. Brasília: Secretaria de Defesa Agropecuária/Mapa/ACS, 2009. 309p.
BUITINK, J.; VU, L. B.; SATOUR, P.; LEPRINCE, O. The re-establishment of desiccation tolerance in germinated radicles of Medicago truncatula Gaertn seeds. Seed Science Research, Wellington, v. 13, n. 4, p. 273-286, Dec. 2003.
CARVALHO, N. M. & NAKAGAWA, J. Sementes: Ciência, tecnologia e produção. 4.ed. Jaboticabal: FUNEP, p. 588. 2000.
CASTRO, R. D.; BRADFORD, K. J.; HILHORST, H. W. M. Embebição e reativação do metabolismo. In: FERREIRA, A. G.; BORGHETTI, F. Germinação: do básico ao aplicado. Porto Alegre: Artmed, cap. 9, p. 149-162. 2004.
CHEN, Y.; BURRIS, J.S. Desiccation tolerance in maturing maize seed: membrane phospholipid composition and thermal properties. Crop Science, Madison, v. 30, n. 3, p. 766-770, 1991.
COLLIS-GEORGE, N.; HECTOR, J. B. Germination of seeds as influenced by matric potential and by area of contact between the seed and soil water. Australian Journal of Soil Research, East Melbourne, v.4, p.45-165. 1966.
COLVILLE, L.; KRANNER, I. Desiccation tolerant plants as model systems to study redox regulation of protein thiols. Plant Growth Regulation, v. 62, n. 3, p. 241-255, 2010. CONAB. Acompanhamento safra brasileira de grãos. v. 6- Safra 2015/16 - Sexto levantamento, Brasília, p. 1-140, março 2016. COPELAND, L.O; McDONALD, M.B. Principles of seed science and technology. 3. ed. New York: Chapman & Hall, p.369 - 409. 1995.
COSTA, M. C. D.; FARIA, J. M. R.; JOSÉ, A. C.; LIGTERINK, W.; HILHORST, H. W. M. Desiccation tolerance and longevity of germinated Sesbania virgata (Cav.) Pers. Seeds. Journal of Seed Science, v.38, n.1, p.050-056, 2016.
CUNHA, G.R.; BERGAMASCHI, H. Efeito da disponibilidade hídrica sobre o rendimento das culturas. In: BERGAMASCHI (Coord.) Agrometeorologia aplicada à irrigação. Porto Alegre: UFRGS - Ed. Universitária, p.85-97. 1992.
DEKKERS, J. W. Bas.; COSTA, M. C.; MAIA, J.; BENTSINK, L.; LIGTERINK, W.; HILHORST, H. W. M.; Acquisition and loss of desiccation tolerance in seeds: Desiccation tolerance and longevity of germinated Sesbania virgata (Cav.) Pers. Seeds. Journal of Seed Science, v.38, n.1, p.050-056, 2015.
28
DONNEN, L.D.; McGILLVRAY, J.H. Germination (emergence) of vegetable seed as affected by different soil moisture conditions. Plant Physiology, Lancaster, v. 18, p. 524-529, 1943. EDMEADES, G. Drought tolerance in maize: an emerging reality. Ithaca: Global Status on Commercialized Biotech/GM Crops, 2008.
EVANS, M.; BLACK, M.; CHAPMAN, J.M. Induction of hormone sensivity by dehydration is one positive role for drying in cereal seed. Nature, London, v.258, n.5531, p.144-145, 1975.
FARIA, J. M. R.; BUITIMK, J; VAN LAMMEREN, A. A M.; HILHORST, H. W. M. Changes in DNA and microtubules during loss and re-establishment of desiccation tolerance in germination Madicago truncatula seeds. Journal of Experimental Botany, Oxford, v. 56, n. 418, p. 2119-2130, Aug. 2005.
FARIA, M. A. V. de R.; VON PINHO, R. G.; VON PINHO, É. V. de R.; GUIMARÃES, R. M.; FREITAS, F. E. de O. Germinabilidade e tolerância à dessecação em sementes de milho colhidas em diferentes estádios de maturação. Revista Brasileira de Milho e Sorgo, v.3 n.2, p. 276-289, 2004.
HAN, B.; HUGHES, W. D.; GALAU, G. A.; BEWLEY, J. D.; KERMODE, A. R. Changes in late-embryogenesis-abundant (LEA) messenger RNAs and dehydrins during maturation and premature drying of Ricinus communis L.seeds. Planta, Berlin, v. 201, p. 27-35, 1997.
HEGARTY, T. W. Seed activation and seed germination under moisture stress. New Phytologist, London, v.78, p.349-359, 1977.
HEGARTY, T. W. The physiology of seed hydratation and dehydratation, and the relation between water stress and the control of germination: a review. Plant Cell and Envlronment, New York, v.1, p.101-119, 1978.
HERTER, U.; BURRIS, J. S. Preconditioning reduces the susceptibility to drying injury in corn seed. Canadian Journal of Plant Science, Ottawa, v. 69, n. 3, p. 775-789, 1989.
HONG, T. D.; ELLIS, R. H. The survival of germinating orthodox seeds after desiccation and hermetic storage. Journal of Experimental Botany, Oxford, v. 43, n. 247, p. 239-247, Feb. 1992.
HUNTER, J. R.; ERICKSON, A. E. Relation of seed germination to soil moisture tension. Agronomy Journal, Madison, v.44, p.IO7-lO9, 1952.
JURGENS, S.K.; JOHNSON, R. R.; BOYER, J. S. Dry matter production and translocation in maize subjected to drought during grain fill. Agronomy Journal, Madison, v.70, n. 4, p.678-82, 1978.
29
KERMODE, A. R. Approaches to elucidate the basis of desiccation-tolerance in seeds. Seed Science Research, Oxon, v. 7, p. 75-95, 1997.
KERMODE, A. R.; FINCH-SAVAGE, B. E. Desiccation sensitivity in orthodox and recalcitrant seeds in relation to development. In: BLACK, M.; PRITCHARD, H. W. (Ed). Desiccation and survival in plants: drying without dying. New York: CABI, p. 149-184, 2002.
KERMODE, A. R; BEWLEY, J. D. Development seeds of Ricinus communis L. when detached and maintened in a atmosphere of high relative humidity, switch to a germinative mode without the requirement for complete desiccation. Plant Physiology, Bethesda, v. 90, p. 702-707, 1989.
LEPRINCE, O.; ATHERTON, N.M.; DELTOUR, R.; HENDRY, G.A. F. The involvement of respiration in free radical processes during loss of desiccation tolerance in germinating zea mays l. an electron paramagnetic resonance study. Plant Physiology, Edinburgh, v. 104, n. 4, p. 1333-1339, 1994a.
LEPRINCE, O.; HENDRY, G. A. F.; ATHERTON, N.M. Free radical processes induced by desiccation in germinating maize: The relationship with respiration and loss of desiccation tolerance. Proceedings of the Royal Society of Edinburg Section B - Biological Sciences, Edinburgh, v. 102B, p. 211-218, 1994b.
LEPRINCE, O.; VERTUCCI, C.W.; HENDRY, G. A.F.; ATHERTON, N.M. The expression of desiccation-induced damage in orthodox seeds is a function of oxygen and temperature. Physiologia Plantarum, Copenhagen, v. 94, n. 2, p. 233-240, 1995.
LI, C.; SUN, W. Desiccation sensitivity and actvities of free radical-scavenging enzymes in recalcitrant Theobroma cacao seeds. Seed Science Research, Wallingford, v. 9, n. 3, p. 209-217, 1999.
MAGALHÃES, P. C.; DURÃES, F. O. M.;CARNEIRO, N. P.; PAIVA, E. Fisiologia do milho. Sete Lagoas: EMBRAPA-CNPMS, 2002. (EMBRAPA-CNPMS. Circular Técnica, 22).
MAGALHÃES, P. C.; DURÃES, F.O.M.; PAIVA, E. Fisiologia da planta de milho. Sete Lagoas: EMBRAPA-CNPMS, p. 27. 1995. (EMBRAPA-CNPMS. Circular Técnica, 20).
MAO, Z.Y.; PAIVA, R.; KRIZ, A.L.; JUVIK, J.A. Dehydrin gene expression in normal and viviparous embryos of Zea mays during seed development and germination. Plant Physiology and Biochemistry, Paris, v. 33, n. 6, p. 649-653, 1995. MARCOS FILHO, J. Fisiologia de sementes de plantas cultivadas. Piracicaba: FEALQ, p. 495, 2005.
30
MARCOS FILHO, J. Germinação de sementes. In: CICERO, S. M.; MARCOS FILHO, J.; SILVA, W. R. (Coord.) Atualização em produção de sementes. Campinas: Fundação Cargill, p. 11-39, 1986.
MARTINELLI-SEMENE; A.; MARTINS, C. C.; NAKAGAWA, J. Germinação de milho CV. AL-34 em função do tamanho da semente e do potencial hídrico do substrato. Revista Brasileira de Sementes, vol. 22, nº 2, p.131-138, 2000.
Ministério da Agricultura. Cultura do milho. Disponível em: <http://www.agricultura.gov.br/vegetal/culturas/milho>. Acesso em 20 de janeiro de 2016.
OSBORNE, D. J.; BOUBRIAK, I. I. DNA status, replication and repair in desiccation tolerance and germination. Basic and applied aspects of seed biology. Kluwer Academic. p.23-32, 1997.
PARCY, F. et al. Regulation of gene expression programs during Arabiodopsis seed development: roles of the AB13 locus and of endogenous abcisic acid. The Plant Cell, Rockville, v. 6, n. 11, p 1567-1582, 1994. PIANA, Z.; SILVA, W. R da.; Respostas de sementes de milho com diferentes níveis de vigor a disponibilidade hídrica. Pesquisa Agropecuária Brasileira, Brasília, v.33, n.9, p.1525-31, set.1998.
PlANA, Z. Influência do tamanho da semente de soja (Glycine max (L.) Merril) e nível de umidade do solo na germinação e no vigor. Tese (Doutorado) – Universidade Federal de Pelotas, Faculdade de Agronomia, 1980.
POPINIGIS, F. Fisiologia de sementes. Brasília. AGIPLAN, p. 289, 1977.
POTTKER, D. Recentes avanços no manejo químico do solo para a cultura do milho. In: SANDINI, I. E.; FANCELLI, A. L. Milho: estratégias de manejo para a cultura do milho. Guarapuava, p.63-87. 2000.
REISDORPH, N. A.; KOSTER, K. L. Progressive loss of desiccation tolerance in germinating pea (Pisum sativum) seeds. Physiology Plantarum, Copenhagen, v. 105, n. 2, p. 266-271, 1999.
ROGAN, P. C.; SIMON, E. W. Root growth and onset of mitosis in germinaring Viciafaba. New Phytologist, London, v.74, p.263-265, 1975.
ROSA, S. D. V.; PINHO, É. V. R. V.; VIEIRA, M. G. G. V.; VEIGA, R. D. Indução de tolerância à alta temperatura de secagem em sementes de milho por meio de pré-condicionamento à baixa temperatura. UFV. Revista Brasileira de Milho e Sorgo, v.3, n.2, p.290-310, 2004.
31
SILVA, A. C. da. Re-indução da tolerância à dessecação em sementes germinadas de feijão-caupi (Vigna unguiculata L. (WALP.)). Tese (Doutorado) – Universidade Estadual Paulista, Faculdade de Ciências Agronômicas, Botucatu. 2015. SREEDHAR, L.; WOLKERS, W. F.; HOEKSTRA, F A.; BEWLEY, J. D. In vivo characterization of the effects of abcisic acid and drying protocols associated with the acquisition of desiccation tolerance in alfafa (Medicago sativa L.) somatic embryos. Annals of Botany, v. 89, p. 391-400, 2002.
THOMANN, E.B.; SOLLINGER, J.; WHITE, C.; RIVIN, C.J. Accumulation of group 3 late embryogenesis abundant proteins in Zea mays embryos. Roles of abscisic acid and the viviparous-1 gene product. Plant Physiology, Rockville v. 99, n. 2, p. 607-614, 1992.
VÁRALLYAY, G. The impact of climate change on soils and on their water management. Agronomy Research, v.8, p.385-396, 2010.
VERTUCCI, C. W.; FARRANT, J. M. Acquisition and loss of desiccation tolerance. In: KIGEL, J.; GALILI, G. (Ed.) Seed development and germination. In: NAKAGAWA, J.; CARVALHO, N. M. Sementes: Ciência, tecnologia e produção. Jaboticabal: Funesp, 2012. 5. Ed. 590 p.: Il,; 21 cm, Bibliografia: p.127, ISBN 978-85-7805-090-0.
VERTUCCI, C. W.; FARRANT, J. M. Aquisition and loss of desiccation tolerance. In: KIGEL, J. L.; GALILI, G. (Ed.). Seed development and germination. New York: Marcel Dekker, p. 237-271,1995.
VIEIRA, C. V. Germinação e re-indução de tolerância à dessecação em sementes germinadas de tabebuia impetiginosa e alliaria petiolata. 2008. vi, 98 p. Tese (Doutorado em Fisiologia Vegetal) - Universidade Federal de Lavras, Lavras, 2008.
YOUNG, J.A. et al. Moisture stress and seed germination. Oakland: USDA/ARS, p. 41, 1983.
