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UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO DE JANEIRO

Faculdade de Farmácia Projeto: Farmacannabis-UFRJ

Responsável: Profa. Dra. Virgínia Martins Carvalho - [email protected]

Laboratório de Análises Toxicológicas

Departamento de Análises Clínicas e Toxicológicas Av. Carlos Chagas Filho, 373, CCS - Bloco A - 2º andar

Cidade Universitária - RJ, CEP: 21.941-902

RELATÓRIO FINAL DE OFICINAS FARMACANNABIS

ANO 2016

A maioria das oficinas foram realizadas nas casas de responsáveis de pacientes que já eram assistidos por cultivadores. Foi adotado o procedimento de obserção sem intervenção, o projeto não dispunha de recursos analíticos em 2016 para avaliar de forma concreta as técnicas. Embora a técnica de extração com gelo seco fosse teoricamente pouco eficiente foi adotada cautela para não intervir nos tratamentos em andamento, pois um método teoricamente mais eficiente poderia gerar extratos mais concentrados e implicar em efeitos tóxicos nos pacientes.

A partir de dezembro de 2016 foi oferecido aos responsáveis de pacientes, especialmente suas mães, a possibilidade de preparação dos extratos de seus filhos sob acompanhamento e orientação farmacêutica no Laboratório de Análises Toxicológicas (LATox).

17/09/16

Matéria-prima vegetal: Flores secas de Cannabis sp. de 2 variedades identificadas por cultivadores como (a) "Harle-Tsu" e (b) "Cinderela"

Segundo percepção e expêriencia empírica de cultivadores a variedade Harle-

Tsu é rica em canabidiol (CBD), enquanto a variedade Cinderela é rica em ∆9-tetrahidrocanabinol (∆9-THC).

Não houve pesagem do vegetal seco1, apenas estimado o volume em béquer de plástico, cerca de 2L.

As flores secas da variedade Harle-Tsu foram inseridas em bolsa com tela perfurada (bolsa dotada de malha semelhante a uma peneira denominada na cultura canábica de "bag para produção de kief" e inserido o gelo seco, em torno de 1 kg.

A bolsa foi aparada em balde plástico e agitada vigorosamente até extração de material pulverizado de textura fina semelhante a material particulado, embora parte 1 Responsáveis de pacientes eram orientados a não manter balança de precisão em casa para em caso

de diligência policial não terem elementos que pudessem constituir evidência de tráfico. Isso

demonstrava entre outros fatores a necessidade de produção no ambiente laboratorial.







do material tenha sido suspenso no ar e perdido ao ambiente, quantidade considerável foi recuperada no balde plástico. Esse material recuperado no balde e denominado "kief" pelos cultivadores foi transferido para panela elétrica dotada de hélice misturadora (semelhante à hélice do liquidificador) com controle de homogeneização, tempo e temperatura (Magical Butter, comercializada nos EUA com ilustrações na embalagem que remetem à produção de manteiga de maconha). Foi adicionado à panela óleo de soja orgânico (cerca de 1,5 litros) e ajustado o ciclo para 4h à 104 ºC.

Enquanto foi aguardado o ciclo de decocção (aquecimento contínuo) e homogeneização, procedeu-se a extração da resina das flores secas da variedade Cinderela com álcool de cereais. Foi transferida cerca de 1L de flores (medido em béquer plástico) para recipiente de vidro e adicinou-se 2L de álcool de cereais, homogeneizou-se cerca de 30 minutos com mixer seguido de filtração. Após filtração o material líquido foi transferido para panela de inox e o álcool evaporado em banho-maria até obtenção da resina semelhante a uma cera.

Após o término do ciclo de decocção, foi adicionado óleo de coco, cerca de 500 mL e a resina de Cinderela foi adicionada ao extrato oleoso (Harle-Tsu) da panela elétrica para obtenção do que os cultivadores denominaram "óleo rico CBD e THCA ".

A concentração estimada pelos preparadores foi de 20% v/v apenas por comparação de volume em béquer de plástico, nenhum critério gravimétrico ou volumétrico de precisão foi adotado.

O óleo final foi composto pelo óleo obtido pela decocção em panela "Magical Butter" misturado com a resina obtida pela extração alcoólica da variedade "Cinderela" (Quadro 1).

Quadro1. Concentrações de canabinóides nos extratos artesanais.

Canabinóide Óleo final Resina

mg/mL mg/mL

CBDA 1,89 0,07 CBD 1,21 0,33

THCA 0,04 0,14 CBN 0,22 8,42 THC 1,52 28,30

Legenda: CBDA=ácido canabidiólico; CBD=canabidiol; THCA=ácido tetrahidrocanabinólico; CBN=canabinol (produto de degradação do (∆9-THC); THC=∆9-tetrahidrocanabinol; ND=não detectado.







11/12/16

Esta oficina iniciou-se na casa de mãe de paciente no dia 11/12/16 e foi concluída no LATox-UFRJ no dia 14/12/2016 – apenas flores Harle-Tsu.

Foi solicitada às mães que reservassem um pouco de flores secas de Harle-

Tsu para testar o método de extração alcoólica no Laboratório.

Extração física com gelo seco

Extração física de cerca de 2 litros de flores com gelo seco para produção de “kief”. Esse material finamente pulverizado denominado "kief" foi transportado ao LATox onde foi pesado (massa=190 gramas). Os 190 gramas de material finamente pulverizado foi transferido para a panela "Magical Butter", misturado com 1 L de óleo de soja orgânico e ajustado o ciclo de 4h/104ºC. Após o término do ciclo programado adicionou-se 700 mL de óleo de coco orgânico com rendimento total de 2000 mL (2 L) de óleo

Uma parte das flores foi separada ainda na casa da mãe de paciente para realização de extração alcoólica no LATox, conforme segue:

Extração alcoólica experimental realizada inteiramente no LATox

Foram pesadas as flores secas (21,86 g) e após separação mecânica adicinou-se 500 mL de álcool absoluto (HPLC) gelado, procedeu-se a agitação mecânica durante 20 minutos e filtração. O álcool foi evaporado em chapa de aquecimento sem controle de temperatura. Após completa evaporação a resina apresentou massa de 2,0 gramas que foi dissolvida em 120 mL de óleo de soja orgânico.

Os teores de canabinóides são apresentados no Quadro 2.







Quadro 2. Concentrações de canabinóides nos extratos artesanais.

PORCENTAGEM DE CBD OBTIDO NA EXTRAÇÃO DO MATERIAL VEGETAL SECO: cerca de 4%

Importante ressaltar que os resultados analíticos só foram obtidos no 2º

semestre de 2017, após obtenção de financiamento coletivo para compra

de insumos e após aquisição do equipamento utilizado nas análises

(HPLC-DAD) pelo LATox com recurso indepente do financimento coletivo.

Assim não foi sugerida intervenção na maneira como os responsáveis

vinham fazendo os extratos.

Embora não houvesse como medir os teores de canabinóides nos

extratos por falta de recursos tecnológicos e insumos, os pacientes foram

convidados a fazer encontros e troca de experiências no LATox.

Canabinóide Gelo seco

Extração alcoólica

mg/mL mg/mL

CBDA 2,67 0,06

CBD 1,21 7,95

THCA 0,07 ND

CBN 0,00 ND

THC 0,10 0,33








ANO 2017

11/01/2017

Mãe de paciente trouxe ao LATox um pote de 500 mL de vidro contendo flores secas de cannabis variedade Harle-Tsu. As flores secas foram pesadas e apresentaram massa=15,7 gramas. Foi acompanhada a extração física por gelo seco que resultou em 5,1 gramas de material finamente pulverizado “kief”. Devido à quantidade reduzida de material não havia como utilizar a panela "Magical Butter", pois a mesma precisa de no mínimo 500 mL de volume líquido.

O material pulverizado (15,7 gramas) foi misturado com 100 mL de óleo de coco orgânico em béquer de vidro e submetido diretamente à chapa de aquecimento, sob temperatura de 108ºC (controlado por termômetro) durante 4 horas.

Concentração kief/óleo = 5,1g/100 mL = 0,051 g/mL ou 51 mg/mL

Os teores de canabinóides são apresentados no Quadro 3.

Quadro 3. Concentrações de canabinóides no extrato artesanal.


mg/mL

CBDA 2,32 CBD 1,06

THCA 0,05 CBN ND THC ND

24/06/2017

Dois responsáveis de pacientes cultivaram plantas Harle-Tsu, o 1º adotou cultivo out door e contribuiu com flores secas que apresentaram massa=23,9 gramas; o 2º adotou cultivo in door e contribuiu com duas porções de flores secas, a 1ª colhida em 01/05/17, massa=32,7 gramas e a 2ª colhida em 26/05/17, massa=37,9 gramas.

Após retiradas alíquotas de cada amostra para pesquisa as flores foram reunidas resultando em massa=84,7 gramas. A amostra foi pulverizada com gelo seco resultando em 31,17 gramas de material finamente pulverizado (kief). O material








pulverizado foi transferido para a panela "Magical Butter" e misturado 500 mL de óleo de soja orgânico e ajustado o ciclo para 4h/104ºC. Os teores de canabinóides são apresentados no Quadro 4.



mg/mL

CBDA 4,33 CBD 3,30

THCA 0,11 CBN ND THC 0,25

17/11/2017

Foram empregadas 2 plantas da variedade Harle-Tsu de porte pequeno que demoraram no mínimo 6 meses entre a fase vegetativa e floração. Após colheita das flores e folhas a planta foi seca por 30 minutos em forno com chama baixa (temperatura não controlada, pois foi realizada em casa) resultando em 60 gramas de flores e 15 gramas de folhas. As amostras vegetais (75 gramas) apresentaram aspecto friável (quebradiço) e foi passada por um peneira de inox sendo facilmente triturada e reduzida a pó. À amostra pulverizada adicionou-se 900 mL de álcool de cereais, grau alimentício e homogeneizou-se em banho de ultrassom por 1 hora, após esse período o extrato alcoólico acondicionado em vidro âmbar foi deixado em maceração em local escuro por 3 dias. Após o período de maceração a amostra foi filtrada em papel de filltro e o resíduo novamente misturado com 600 mL de álcool de cereais e homogeneizado por mais 1 h em banho de ultrassom. Após segunda filtragem os extratos alcoólicos foram reunidos e evaporados em chapa de aquecimento de porcelana em temperatura inferior a 160°C. Após completa evaporação obteve-se 23,2 gramas de resina com teor de CBD=140,74 mg/g (em 23,2 gramas de resina havia 3,27 g de CBD). A resina foi dissolvida em 200 gramas de óleo vegetal (100 gramas de óleo de coco orgânico e 100 gramas de óleo de soja orgânico) para obtenção de teor em torno de 16 mg/mL, conforme pedido dos responsáveis do paciente que optaram por maior quantidade de extrato mesmo que mais diluído. A concentração final de canabinóides no extrato é apresentado no Quadro 5.









Canabinóide Extração alcoólica

mg/mL

CBDA 4,25 CBD 17,43

THCA ND CBN 0,15 THC 0,73

PORCENTAGEM DE CBD OBTIDO NA EXTRAÇÃO DO MATERIAL VEGETAL SECO: cerca de 5%

EVOLUÇÃO DA PLANTA (VARIEDADE HARLE-TSU):

INÍCIO: 19/05/17








APÓS 3 MESES: 21/08/17







APÓS 6 MESES: 12/11/17 - VISUALIZAÇÃO DAS DUAS PLANTAS COLHIDAS E DE SEUS TRICOMAS (ESTRUTURAS COM A RESINA COM CANABINÓIDES)







PLANTA SECA: 14/11/17

Conclusão:

Considerar no cultivo da variedade Harle-Tsu e produção artesanal, 6 meses entre o enraizamento do clone até a colheita e que a cada 100 g do peso seco da planta será extraído em torno de 5 gramas de CBD, ou seja, 5000 mg de CBD.

Mais informações sobre esta variedade:







https://www.kingofcbdgenetics.com/sohum-seed-genetics

https://www.leafly.com/hybrid/harle-tsu

http://en.seedfinder.eu/strain-info/Harle-Tsu/Southern_Humboldt_Seeds_Collective/

https://www.socalclonehouse.com/harle-tsu

29/11/2017

Foi empregada 1 planta de porte pequeno da variedade Cannatonic. A planta foi seca em casa no forno sem controle de temperatura em chama baixa durante 30 minutos, rendimento de material vegetal seco, flores=10 gramas e folhas=4 gramas. Após retirada de 2 gramas de cada espécime para pesquisa, 8 e 2 gramas de flores e folhas, respectivamente, foram reunidas homogeneizadas e misturadas com 250 mL de álcool de cereais. Esse processo foi realizado em casa e deixou-se em maceração em recipiente de vidro âmbar durante 6 dias.

Após o período de maceração o extrato alcoólico foi levado ao LATox, filtrado e evaporado em banho maria resultando em 1,31 gramas de resina. A resina foi misturada com 50 gramas de óleo de girassol. Os teores de canabinóides nesse extrato são apresentados no Quadro 6.



mg/mL

CBDA 0,09

CBD 0,25

THCA 4,77

CBN 0,08

THC 2,71

08/01/18

Uma planta de porte pequeno, variedade Harle-Tsu, foi colhida, seca, pulverizada por trituração e misturada com 500 mL de álcool de cereais e deixada em








maceração durante 36 dias, este procedimento foi realizado em casa e após o período de maceração o extrato foi filtrado sendo identificado que havia pulgão entre o resíduo. O filtrado foi evaporado em banho maria e obtido 2,01 gramas de resina que foi dissolvida em 20,2 gramas de azeite de oliva orgânico.

A planta estava sendo cultivada desde junho de 2017, portanto 6 meses para colheita.

Não foi possível estimar a porcentagem de CBD obtido no material vegetal seco porque o mesmo não foi pesado. Os teores de canabinóides nesse extrato são apresentados no Quadro 6.



mg/mL

CBDA 4,44

CBD 5,69

THCA 0,11

CBN 0,06

THC 0,28

Orientações

A única variedade de planta analisada rica em CBD foi a variedade Harle-Tsu. Todas as plantas dessa variedade foram obtidas por clonagem e cultivadas por cerca de 6 meses desde a obtenção da muda até a colheita.

Em duas oficinas a extração alcoólica rendeu cerca de 5% CBD em relação ao peso do material vegetal seco, assim considerar como valor teórico: cada 100 gramas de material vegetal seco (Harle-Tsu) renderá 5 gramas de CBD, ou seja, 5000 mg de CBD + 100 mL de óleo = 50 mg/mL de CBD.

Extração por gelo seco: pouco eficiente, passível de contaminação, perda do material pulverizado que dispersa para o meio ambiente. Processo de obtenção gera material particulado irritante para as vias áreas do manipulador e de pessoas que participam.








Extração alcoólica: utilizar etanol (álcool) grau alimentício ou farmacêutico, ao adquirir o álcool de cereais, verifique se o mesmo é realmente adequado para uso alimentício, conhecido como "álcool para fazer licor".

Retirar os caules e secar a planta (flores e folhas) por 1 hora em forno elétrico em temperatura em torno de 80ºC. Os canabinóides evaporam a partir de 150°C.

Homogeneizar muito bem a amostra com o ácool, evite utensílios de plástico que são mais passíveis de contaminação. São recomendados utensílios de vidro e inox.

Realize a evaporação em banho maria. Pode ser utilizado um Pirex de vidro introduzido em uma frigideira com água. Recipientes de vidro com paredes altas irá aumentar o tempo de evaporação, mas cuidado com recipientes de paredes muitos baixas para não cair água na resina.

ATENÇÃO A EVAPORAÇÃO DO ÁLCOOL GERA VAPORES INFLAMÁVEIS, FAÇA A EVAPORAÇÃO EM LOCAL VENTILADO!

Planejamento dos teores de CBD ou outros canabinóides só é possível em preparação laboratorial com acompanhamento do processo onde se analisam os teores de canabinóides na resina e se calcula a quantidade de veículo (óleo) para se obter determinado teor de canabinóide em mg/mL.

Artesanalmente se pode adotar na extração alcoólica da variedade Harle-Tsu que cada 100 gramas de material vegetal seco renderá 5 gramas de CBD (5% do peso seco).

Dentre os veículos para dissolução da resina, os que se mostraram mais adequados foram:

� Triglicerídeo de cadeia média (TCM), ultrapurificado de óleo de coco que não tem cheiro nem sabor e não solifica em baixas temperatura. Custo em torno de R$ 80,00/vidro de 250 mL.

� Azeite de oliva extra virgem.

� Óleo de girassol.

Misturar óleos diferentes (soja e coco ou outras combinações) pode resultar em incompatibilidades que impactam no gosto e aparência do extrato, portanto não é recomendável.







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Página no Facebook: https://www.facebook.com/FarmaUFRJ)

100 g de material 1L Filtração Evaporação Dissolução em seco (Harle-Tsu) Agitação 20 min banho-maria óleo (teor teórico 80ºC/1 hora 50 mg/mL de CBD* *Valor teórico aproximado em 100mL de óleo com base nas oficinas apresentadas, somente a análise laboratorial determinará o teor real. 100 g de material seco é obtido com 2 a 3 plantas floridas, portando considerar que a cada 3 plantas da variedade Harle-Tsu é possível obter 100 mL de extrato rico em CBD na concentração de 50 mg/mL.

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