XI Reunión del Grupo Español de Inv ción en Radicales Libres …geirli2016granada.eez.csic.es/wp-content/uploads/2016/09/... · 2016-09-15 · XI Reunión del Grupo Español de

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XI Reunión del Grupo Español de Investigación en Radicales Libres Granada, 13‐14 de septiembre de 2016

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Salutación

Después de 18 años vuelve a celebrarse en Granada la Reunión del Grupo Español de Investigación en Radicales Libres (GEIRLI). En diciembre de 1998, el Profesor Luis Alfonso del Río, Vicepresidente del Grupo de 1991 a 1998, organizó dicha reunión, que se saldó con la mayor participación hasta ese momento de expertos nacionales en radicales libres en biología y medicina, y con una altísima calidad de los trabajos presentados. En 2016 celebraremos en la Estación Experimental del Zaidín (CSIC) de Granada la XI Reunión del GEIRLI del 13 al 14 de septiembre (http://geirli2016granada.eez.csic.es) y, al igual que ya se hiciera en 1998, este evento precederá a otro congreso internacional en el que se discutirá sobre las funciones del óxido nítrico (NO) en plantas (http://pno2016granada.eez.csic.es). En esta nueva reunión del GEIRLI se desarrollarán sesiones en las que se combinarán investigaciones en células humanas, animales, de levaduras y vegetales, y se expondrán los últimos resultados en temas relacionados con el estrés oxidativo y los antioxidantes en el daño celular y tisular, los suplementos nutricionales en biología y medicina, y la señalización por Especies de Oxígeno Reactivo (ROS) durante el envejecimiento y en enfermedades y trastornos neurodegenerativos, inflamatorios y cardiovasculares. Finalmente, el miércoles, 14 de septiembre, se celebrará una sesión sobre el metabolismo de Especies de Nitrógeno Reactivo (RNS) en biología y medicina que marcará la finalización de la reunión del GEIRLI y la conexión con el congreso internacional sobre NO en plantas.

En esta XI Reunión tendremos, además, la satisfacción de brindar un homenaje a nuestra compañera María Teresa Mitjavila que fue Secretaria y Vicepresidenta del GEIRLI de 1999-2002 y de 2010-2015, respectivamente. Se celebrarán, asimismo, dos conferencias plenarias impartidas por los Profesores Helmut Sies y Lisardo Boscá.

En total, se presentarán 19 ponencias, 19 comunicaciones orales y 37 pósters de investigadores provenientes de España en su mayoría, pero también de Argentina, Brasil, Alemania e Italia.

Agradecemos la colaboración de nuestros patrocinadores, el Consejo Superior de Investigaciones Científicas, el Grupo Español de Investigación en Radicales Libres (GEIRLI), la Society for Free Radical Research (SFRR)-Europe, la Red Temática del MINECO Rosasnet (Reactive Oxygen Species and Systems), y las empresas Bruker, Merck, Deltaclon y BiQuoChem. Asimismo, expresamos nuestro agradecimiento a Redox Biology que editará un número especial con los trabajos que se presenten en esta reunión. Por último mostramos nuestra gratitud a la Estación Experimental del Zaidín, cuyas instalaciones serán la sede de la reunión.

A todas estas instituciones, a los miembros del Comité Científico y a todos los participantes en la reunión, MUCHAS GRACIAS por vuestra contribución.

Comité Organizador Local

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Índice Comité Científico y Comité Organizador Local

5

Programa Científico

6

Ponencias (L1-L19)

15

Comunicaciones orales (CO1-CO19)

35

Pósters (P1-P37)

55

Lista de participantes

93


5

Comité Científico

• CORPAS, Francisco J. ([email protected]) • LÓPEZ-HUERTAS, Eduardo ([email protected]) • MONSALVE, María ([email protected]) • MUNTANÉ, Jordi ([email protected]) • PALMA, José M. ([email protected]) • DEL RÍO, Luis A. ([email protected]) • RUIZ-LARREA, Mª Begoña ([email protected]) • SASTRE, Juan ([email protected]) • VÍCTOR, Víctor M. ([email protected])

Apoyo técnico

• Carmelo Ruiz Torres • María Jesús Campos Ramos • Marta Rodríguez Ruiz • Tamara Molina Márquez

Apoyo administrativo

• Carmen Lorente Navarro

Comité Organizador Local

• José M. Palma ([email protected]) • Francisco J. Corpas ([email protected]) • Eduardo López-Huertas ([email protected]) • Luis A. del Río ([email protected])

Departamento de Bioquímica, Biología Celular y Molecular de Plantas, Estación Experimental del Zaidín, Consejo Superior de Investigaciones Científicas, C/Profesor Albareda 1, 18008 Granada


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PROGRAMA CIENTÍFICO

Martes, 13 de septiembre

08:00 Entrega de documentación y colocación de pósters

08:45 Bienvenida y apertura del congreso 09:00 Sesión 1. Estrés oxidativo y antioxidantes en lesión celular y tisular

Moderadores: Francisco J. Corpas (Estación Experimental del Zaidín, CSIC, Granada) y Jordi Muntané (Instituto de Biomedicina de Sevilla, IBiS, Sevilla).

09:00 Federico V. Pallardó (Departamento de Fisiología, Universidad de Valencia): L1 Papel del glutatión nuclear en la regulación de la proliferación celular. 09:25 Isabel Fabregat (Institut d'Investigació Biomèdica de Bellvitge, IDIBELL, L2 Barcelona): Role of the NADPH oxidase NOX4 in liver fibrosis and

hepatocarcinogenesis. 09:50 Francisca Sevilla (Centro de Edafología y Biología Aplicada del Segura, CSIC, L3 Murcia): What is Trxo1 doing in plant nuclei? 10:15 Guillermo Sáez (Departamento de Bioquímica y Biología Molecular, Universidad L4 de Valencia): Perfil bioquímico-clínico, estado redox y oxidación del ADN en la

obesidad mórbida y su evolución tras la cirugía bariátrica.

10:40 Pausa-café y visita a pósters

11:35 Comunicaciones orales CO1 Aplicación de marcadores biológicos de estrés oxidativo en el análisis ex vivo de la respuesta inmune e inflamatoria generada por provocación con un panel de componentes agroalimentarios (Elena Lima-Cabello, Víctor Alché, José C. Jiménez-López, Juan de Dios Alché). CO2 Actividad antitumoral de los inhibidores de la calicineurina y mTOR en el hepatocarcinoma: Estudios in vitro e in vivo (Elena Navarro-Villarán, José Tinoco, Granada Jiménez, Sara Aliseda, María A. Rodríguez-Hernández Raúl González, Sheila Pereira, Carmen Bernal-Bellido, Gonzalo Suárez-Artacho, Luís M. Marín-Gómez, María T. Ferrer-Ríos, Juan M. Pascasio-Acevedo, Miguel A. Gómez-Bravo, Francisco J. Padillo, Jordi Muntané).


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CO3 Un estudio transcriptómico revela que el metabolismo oxidativo anti estrés puede explicar gran parte de la resistencia de plantas de soja (Glycine max) al ataque de chinches (Nezara viridula) (Ivana Sabljic, Karina Balestrasse, Jésica Barneto, Romina Giacometti, Jorge A. Zavala, Eduardo A. Pagano). CO4 Influence of pO2 on the characteristics of human hepatocarcinoma cells and their response to oxidative stress (Jenifer Trepiana, Rosaura Navarro, José Ignacio Ruiz-Sanz, Mª Begoña Ruiz-Larrea). CO5 Regulation of glial fibrillary acidic protein (GFAP) by oxidative stress and zinc: role of the type III intermediate filament conserved cysteine residue (Álvaro Viedma-Poyatos, Dolores Pérez-Sala). CO6 Glutathione reductase protects Caenorhabditis elegans against proteotoxic stress (José Antonio Mora-Lorca, David Guerrero-Gómez, Antonio Miranda-Vizuete). CO7 Acute hypoxia produces a superoxide signal through oxygen sensing by mitochondrial complex I and sodium/calcium exchange via NCLX (Pablo Hernansanz-Agustín, Elena Ramos, Tamara Villa-Piña, Elisa Navarro, Esther Parada, Laura Moreno, Alicia Izquierdo-Álvarez, Nuria Sánchez-López, Laura Peláez-Aguado, Daniel Tello, Izaskun Buendia, Anabel Marina, Ángel Cogolludo, Javier Egea, Manuela G. López, Anna Bogdanova, Antonio Martínez-Ruiz).

12:45 Sesión 2. Señalización redox en envejecimiento y enfermedades

degenerativas

Moderadores: Eduardo López-Huertas (Estación Experimental del Zaidín, CSIC, Granada) y Mª Begoña Ruiz-Larrea (Departamento de Fisiología, Universidad del País Vasco, UPV/EHU, Leioa, Vizcaya).

12:45 Antonio Cuadrado (Instituto de Investigaciones Biomédicas Alberto Sols, CSIC, L5 UAM, Madrid): Transcription factor NRF2 is a regulator of macroautophagy. 13:10 Mónica de la Fuente (Departamento de Fisiología, Universidad Complutense de L6 Madrid): Incidencia del sistema inmunitario en la oxidación-inflamación del

envejecimiento. 13:35 Almuerzo 15:15 Comunicaciones orales

CO8 Emerging markers of oxidative stress in APP/PS1 mice as Alzheimer’s Disease model (Raquel Gómez Bardallo, Teresa Carbonell, Norma Alva, Miren Ettcheto, Dmitry Petrov, Antoni Camins).


8

CO9 Regulation of the antioxidant defense in the liver by p38α and NF-κB (Sergio Rius-Pérez, Salvador Pérez, Ana-Martínez Tormos, Raquel Taléns-Visconti, Juan Sastre). CO10 El contenido fenólico del vino dulce Pedro Ximénez aumenta la supervivencia de levaduras sometidas a estrés oxidativo y mejora de los marcadores asociados al proteoma redox hepático en ratones de avanzada edad (Nieves López de Lerma, Esther Donoso-Contreras, José Peinado, Nieves Abril, Rafael A. Peinado). CO11 Diets supplemented with oxytetracyline and rutin changes biochemical parameters in silver catfish (Rhamdia quelen) (Maria A. Pavanato, Érika P. Londero, Tanise S. Pês, Etiane M. H. Saccol, Bernardo Baldisserotto). CO12 El glutatión es cooperante en la actividad tiorredoxina peroxidasa de la peroxiredoxina tipo 1-Cys de levadura (José R. Pedrajas, Brian McDonagh, Francisco Hernández-Torres, Antonio Miranda-Vizuete, Raúl González, Emilia Martínez-Galisteo, C. Alicia Padilla, J. Antonio Bárcena). CO13 2-Cys Peroxiredoxins control chloroplast redox homeostasis in Arabidopsis thaliana (Juan Manuel Pérez-Ruiz, Belén Naranjo, Valle Ojeda, Francisco Javier Cejudo).

CO14 Utilización del biosensor HyPer para monitorizar el flujo intracelular de peróxido de hidrógeno en células de músculo esquelético (Jorge de Andrés, Lorena Rodríguez, Lucía Méndez, Manuel A Sánchez-Martín, Jesús Palomero).

16:25 Darío Acuña (Departamento de Fisiología, Universidad de Granada): La L7 conexión parkin/PINK1/DJ-1/MUL1, diana molecular de la melatonina que explica

sus propiedades antiparkinsonianas. 16:50 Santiago Lamas (Centro de Biología Molecular Severo Ochoa, CSIC, Madrid): L8 MicroRNAs and metabolic regulation in fibrogenesis. 17:15 Pausa-café y visita a pósters.

17:45 Sesión 3. Suplementación nutricional en biología y medicina

Moderadores: José M. Palma (Estación Experimental del Zaidín, CSIC, Granada) y Víctor M. Víctor (FISABIO-Hospital Doctor Peset, Valencia).

17:45 José Viña (Departamento de Fisiología, Universidad de Valencia): L9 Suplementación nutricional como terapéutica dirigida a ApoE en la enfermedad

de Alzheimer.


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18:10 Eduardo López-Huertas (Estación Experimental del Zaidín, CSIC, Granada): L10 Suplementación nutricional en humanos con hidroxitirosol, antioxidante

mayoritario del aceite de oliva. 18:35 Reinald Pamplona (Institut de Recerca Biomèdica, Lleida): Envejecimiento L11 cerebral y restricción de metionina. 19:00 Reunión del GEIRLI (Participación de Giovanni Mann, Presidente de la

SFFR-Europe por video-conferencia).

Miércoles, 14 de septiembre

08:45 Sesión 4. Biología redox desde un abordaje multidisciplinar Sesión patrocinada por la Red Temática del MINECO ROSASNET, Reactive Oxygen Species and Systems.

Moderadores: José Antonio Enríquez (Centro Nacional de Investigaciones Cardiovasculares, Madrid) y María Monsalve (Instituto de Investigaciones Biomédicas Alberto Sols, CSIC-UAM, Madrid).

08:45 Helmut Sies (Heinrich-Heine-Universität Düsseldorf, Düsseldorf, Germany): L12 Oxidative stress and redox signaling: role of hydrogen peroxide. 09:20 Elena Hidalgo (Depto. Ciencias Experimentales y de la Salud, Univ. Pompeu L13 Fabra, Barcelona): H2O2 signaling through one- and two-components redox

relays: bacterial OxyR and eukaryotic peroxiredoxin-Pap1. 09:45 Joaquim Ros (Depto. Ciencia Médicas Básicas, Universidad de Lleida): Altered L14 calcium homeostasis in cellular models of Friedreich ataxia. 10:10 José Antonio Enríquez (Centro Nacional de Investigaciones Cardiovasculares, L15 Madrid): Mitochondrial and nuclear DNA matching shapes organismal metabolism by a

ROS mediated mechanism.

10:35 Pausa-café y visita a los pósters


10

11:10 Comunicaciones orales

CO15 PGC-1α downregulation in the steatotic liver enhances ischemia-reperfusion injury and impairs ischemic preconditioning (Cristina Sánchez-Ramos, Alberto Tierrez, Javier Laso,Ramon Bartrons, Joan Roselló-Catafau, María Monsalve).

CO16 Impaired mitochondrial fusion and fission in leukocytes of type 2 diabetic patients: role of glycemic control (Noelia Díaz-Morales, Susana Rovira-Llopis, Irene Escribano-López, Arantxa Martínez de Marañón, Celia Bañuls, Sandra López-Domenech, Francesca Iannantuoni, Carmen Ramírez, Rosa Falcón, Antonio Hernández-Mijares, Milagros Rocha, Víctor M Víctor). CO17 Regulación redox de tioles proteicos mediante tiorredoxina y/o glutarredoxina en una línea celular de hepatocarcinoma que sobreexpresa NO sintasa-3 (NOS3) (María José López-Grueso, Raúl González, Carlos A. Fuentes-Almagro, Jordi Muntané, J. Antonio Bárcena, C. Alicia Padilla). CO18 Regulación del óxido nítrico por las hemoglobinas de plantas (Laura Calvo-Begueria, María Carmen Rubio, Manuel A. Matamoros, Carmen Pérez-Rontomé, Manuel Becana).

11:50 Sesión 5. Metabolismo de especies de nitrógeno reactivo en biología y

medicina Moderadores: Luis A. del Río (Estación Experimental del Zaidín, CSIC, Granada) y

Jordi Muntané (Instituto de Biomedicina de Sevilla, IBiS, Sevilla). 11:50 Manuela Liberi (Bruker Italy, Milano, Italia): EPR: a tool to characterize Reactive CO19 Oxygen Species now made simpler. 12:05 Juan B. Barroso (Departamento de Biología Experimental, Universidad de Jaén): L16 Ácidos grasos nitrados: nuevos componentes del metabolismo del óxido nítrico

en plantas. 12:30 Francisco J. Corpas (Estación Experimental del Zaidín, CSIC, Granada): L17 Peroxisomes: a nitro-oxidative cocktail.


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12:55 Lección conmemorativa “Ana Navarro” Moderador: Juan Sastre (Departamento de Fisiología, Universidad de Valencia). Ponente: Lisardo Boscá (Instituto de Investigaciones Biomédicas Alberto Sols, CSIC L18 UAM, Madrid): Estrés oxidativo, lípidos y aterogénesis. 13:30 Homenaje Profesora María Teresa Mitjavila Moderadores: Luis A. del Río y Jordi Muntané. Ponente: María Teresa Mitjavila (Departament de Fisiologia i Immunologia, Universitat L19 de Barcelona): Modulación de la disfunción endotelial por dietas ricas en ácidos

grasos poliinsaturados y monoinsaturados.

14:05 Entrega de premios y Conclusiones finales (Jordi Muntané)

14:15 Refrigerio y recogida de pósters

PÓSTERS

P1 Identificación de redoxinas y sus secuencias regulatorias potenciales en los tejidos reproductivos del olivo (Olea europaea L.) (Ana Alcaina, José Ángel Traverso, Amada Pulido, Juan de Dios Alché). P2 Modificaciones de las propiedades antioxidantes del aceite de oliva virgen extra durante el proceso de digestión. Relación con el contenido de clorofilas y carotenoides (Thays H. Borges, Ascensión Rueda, Isabel Seiquer). P3 Regulation of NOX1 and NOX4 during liver regeneration and hepatocarcinogenesis (Daniel Caballero-Díaz, Judit López-Luque , Eva Crosas-Molist, Esther Bertran, Adoración Martínez-Palacián, César Roncero, Joaquim Moreno-Càceres, María García-Bravo, Esther Grueso, Almudena Fernández, María García-Álvaro, Annalisa Addante, Ángela M. Valverde, Águeda González-Rodríguez, Blanca Herrera, Lluis Montoliu, Teresa Serrano, José-Carlos Segovia, Margarita Fernández, Emilio Ramos, Aránzazu Sánchez, Isabel Fabregat). P4 Efecto de polifenoles del olivo sobre mecanismos neurodegenerativos en la enfermedad de Parkinson (Jesús Calahorra, Ana Cañuelo). P5 Ritmicidad circadiana de las defensas antioxidantes en hígado de verrugato (Umbrina cirrosa). Efecto de la frecuencia de alimentación (Gabriel Cardenete, M.


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Carmen Hidalgo, Marta Arizcun, M. Ángeles Pedrosa, Natalia Hernández, Amalia E. Morales). P6 Cambios en la producción de antioxidantes en la simbiosis rizobio- leguminosa inducidos por la salinidad en etapas finales del cultivo (Libertad Cobos-Porras, Miguel López- Gómez, Javier Hidalgo- Castellanos, Carmen Lluch).

P7 Arsenic-induced stress activates antioxidant response in different organs of garlic (Allium sativum L.) plants accompanied by a general decline of the NADPH-generating systems (Rafael Feriche-Linares, Carmelo Ruiz-Torres, Marta Rodríguez-Ruiz, José M. Palma, Francisco J. Corpas). P8 Melatonin at high concentration enhances the toxicity of radio- and chemotherapy in tongue cancer cells (B.I. Fernández-Gil, YQ. Shen, A. Guerra-Librero, J. Florido, M.A. Mendivil-Pérez, V.M. Soto, R.K. Sayed, M. González-Díez, D. Acuña-Castroviejo, G. Escames). P9 Efecto de las condiciones clínicas cardíacas y sistémicas sobre la tolerancia del miocardio humano al daño isquémico: papel del estado basal del estrés oxidativo y nitroso (G. Ferrer-Curriu, K. Casos, M. Perez, A. Blasco-Lucas, E. Permanyer, MA. Castro, JM. Gracia, J. Barquinero, M. Galinanes). P10 Chronic aspartame intake causes changes in transsulfuration pathway, glutathione depletion and liver damage in mice (Isabela Finamor, Salvador Pérez, Carlos E Brenner, Caroline Bressan, Gabriele Cheiran, Maria I Rocha, Marcelo da Veiga, Juan Sastre, Maria A Pavanato).

P11 Implicación del enzima glutatión peroxidasa en el desarrollo de los tejidos reproductivos del olivo (Estefanía García-Quirós, Juan de Dios Alché).

P12 Estrés oxidativo e inflamatorio en células inmunitarias de dos modelos de ratones con envejecimiento prematuro (Antonio Garrido, Julia Cruces, Carmen Vida, Catalina Hernández-Sánchez, Flora de Pablo, Mónica De la Fuente). P13 Sistemas oxidantes y antioxidantes en girasol en respuesta a la toxicidad por Sb (Inmaculada Garrido, Alfonso Ortega, Mª Carmen Álvarez-Tinaut, Francisco Espinosa).

P14 Integración del estrés oxidativo y nitrosativo en la señal de muerte celular inducida por Sorafenib en hepatocarcinoma (Raúl González, María A. Rodríguez-Hernández, Elena Navarro-Villarán, C. Alicia Padilla, Sheila Pereira, Carmen Bernal-Bellido, Gonzalo Suárez-Artacho, Luís M. Marín-Gómez, María T. Ferrer-Ríos, Juan M. Pascasio-Acevedo, Miguel A. Gómez-Bravo, J. Antonio Bárcena, Francisco J. Padillo, Jordi Muntané).


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P15 Defensas antioxidantes y marcadores de estrés oxidativo en músculo de verrugato (Umbrina cirrosa). Efecto del ayuno prolongado y la realimentación (M. Carmen Hidalgo, Amalia E. Morales, Marta Arizcun, Rosa Galera, Elena Alabarces, Gabriel Cardenete).

P16 Characterization of antioxidtive proteins from pomegranate (Punica granatum L.) (Jessica Iglesias, María J. Campos Ramos, Marta Rodríguez-Ruiz, José M. Palma).

P17 El contenido fenólico del mosto y de los hollejos procedentes de la variedad de uva Tempranillo pasificada aumenta la supervivencia de levaduras sometidas a estrés oxidativo (Nieves López de Lerma, Esther Donoso-Contreras, José Peinado, Nieves Abril, Rafael A. Peinado). P18 Molecular modeling of plant catalases and docking studies with GSNO (Javier López-Jaramillo, Marta Rodríguez-Ruiz, Juan B Barroso, José M. Palma, Francisco J. Corpas). P19 El líquido cefalorraquídeo de personas mayores de 74 años muestra un decremento de la actividad de la glutation-S-transferasa (Ángel Martín de Pablos, José Manuel García Moreno, Emilio Fernández Espejo). P20 Cytostatic effect of the lichen microalga Asterochloris erici on the L929 murine fibrosarcoma cell line may be related with high carotenoid lutein content (M. Concepción Matesanz, Mercedes Villa-Carvajal, Javier Linares, Eva Barreno, Myriam Catalá, M. Teresa Portolés).

P21 Influencia del envejecimiento en la susceptibilidad del hígado de cobayas a la toxicidad del paraquat. Efecto de la administración in vivo de melatonina (Mª del Prado Míguez, Asunción Ramos). P22 Zinc protects vimentin from modification by electrophiles and selective cysteine crosslinkers (Andreia Mónico, Sofia Duarte, Alma E. Martínez, Dolores Pérez-Sala). P23 Antioxidants from two Spanish autochthonous pepper varieties: Piquillo and Padrón (José M. Palma, Francisco J. Corpas, Luis A. del Río, Tamara Molina). P24 Analysis of protein oxidative modifications in human follicular fluid (Irantzu Pérez, Susana Meijide, M. Luisa Hernández, José Ignacio Ruiz-Sanz, Mª Begoña Ruiz-Larrea). P25 Influencia de los contaminantes naturales y sintéticos sobre el estado oxidativo de organismos acuáticos (Amalia Pérez-Jiménez, Eva E. Rufino Palomares, Álvaro Nogués, Miguel Torres, Ana Sanz, José A. Lupiáñez, Cristina Trenzado Romero). P26 Absence of the yeast Hsp31 proteins of the DJ-1 superfamily implicates metabolic changes by imbalance of cellular redox state (Raquel Requejo-Aguilar, Irene Sánchez de Puerta, José A. Bárcena).


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P27 Mecanismos de inducción de la muerte celular por Sorafenib en hepatocarcinoma (María A. Rodríguez-Hernández, Elena Navarro-Villarán, Raúl González, José L. Mauriz, Sheila Pereira, Carmen Bernal-Bellido, Gonzalo Suárez-Artacho, Luís M. Marín-Gómez, María T. Ferrer-Ríos, Juan M. Pascasio-Acevedo, Miguel A. Gómez-Bravo, Javier González-Gallego, Francisco J. Padillo, Jordi Muntané). P28 Modulation of ascorbate biosynthesis in pepper fruits by nitric oxide (NO) (Marta Rodríguez-Ruiz, Rosa M. Mateos, Francisco J. Corpas, José M. Palma). P29 Daño oxidativo molecular en la enfermedad de Niemann-Pick tipo C (Víctor Rodríguez-Sureda, Olga Sánchez, Jorge J. Cebolla, Pilar Irún, Miguel Pocoví, Carmen Domínguez). P30 Papel de la proproteína convertasa subtilisina/kexina de tipo 9 (PCSK9) en el macrófago (César Eduardo Rosales-Mendoza, Marina Mojena, Silvia González-Ramos, Marta Paz-García, Emilio Acosta-Medina, Paloma Martín-Sanz, Lisardo Boscá).

P31 Estudio de microRNAs en suero como predictores y marcadores de envejecimiento y fragilidad en humanos (Iryna Rusanova, Ramy KA Sayed, Marisol Fernández-Ortiz, Darío Acuña-Castroviejo). P32 La expresión génica de HO-1 no está restringida epigenéticamente y requiere factores de transcripción relacionados a estrés en plantas de soja sometidas a radiación ultravioleta-B (Diego Santa Cruz, Natalia Pacienza, Carla Zilli, Eduardo Pagano, Karina Balestrasse, Gustavo Yannarelli). P33 Especificidad funcional de las tiorredoxinas plastidiales f y m en la defensa frente al estrés oxidativo (Antonio J. Serrato, Juan Fernández-Trijueque, Antonio Cantalejo, Mariam Sahrawy). P34 Involvement of the reactive oxygen species (ROS) metabolism in the response of rice (Oryza sativa L.) plants to arsenic stress (Ernestina Solórzano, Francisco J. Corpas, José M. Palma).

P35 Compuestos bioactivos del sofrito modulan la producción de especies oxigenadas reactivas, óxido nítrico y eicosanoides (Carolina Storniolo, Ignasi Sacanella, María T. Mitjavila, Rosa M. Lamuela-Raventos, Juan J. Moreno). P36 Role of p38 signaling pathway in Vismia baccifera-induced cytotoxicity in HepG2 (Jenifer Trepiana, Mª Puy Ancín, Mª Begoña Ruiz-Larrea, José Ignacio Ruiz-Sanz). P37 Los macrófagos, principales contribuyentes a la oxidación en la inmunosenescencia (Carmen Vida, Julia Cruces, Antonio Garrido, Irene Martínez De Toda, Mónica González, Mónica De la Fuente).

XI Reunión del Grupo Español de Investigación en Radicales Libres (GEIRLI)

13-14 de septiembre de 2016

GRANADA

RESÚMENES

Ponencias (L1-L19)

XI Reunión del GERILI, Granada Sesión 1

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L1 Papel del glutatión nuclear en la regulación de la proliferación celular

José Luis García-Giménez1,2, José Santiago Ibañez-Cabellos1, Marta Seco-Cervera1, Ester Berenguer-Pascual1, Carlos Romá1, Federico V. Pallardó1,2,3

1 Departamento de Fisiología, Facultad de Medicina y Odontología. Universidad de Valencia, Av/Blasco

Ibañez 15, 46010 Valencia. 2 CIBERER. Centro de Investigación Biomédica en Red Área Temática de Enfermedades Raras. 3 INCLIVA. Fundación Investigación Clínico de Valencia, Instituto de Investigación Sanitaria.

Autor de contacto: Federico V. Pallardó ([email protected])

En la presente comunicación se revisará el efecto del control redox, el estrés oxidativo y más específicamente el glutatión (GSH) en los mecanismos de regulación epigenéticos a diferentes niveles. Fundamentalmente nos centraremos en aquellos que afectan a la metilación del ADN, la expresión de miRNAs y las modificaciones postraduccionales de histonas (PTMs). Destacaremos el papel del GSH en el núcleo de las células especialmente cuando estas entran en división y el papel de la glutationilación de la histona H3, una nueva PTM descrita por nuestro grupo y su posible papel en la estructura de la heterocromatina y en la carbonilación de histonas, también influencia por el estado redox celular. Discutiremos y revisitaremos la teoría del código de las histonas y la implicación del estado redox nuclear. Se abordará como la oxidación del GSH inhibe la actividad S-adenosil metionina sintetasa (MAT1A), un enzima clave en la síntesis de S-adenosil-metionina (SAM) la cual es usada por las ADN metil-trasnferasas (DNMTs) y las histona metil transferasas (HMTs). Se discutirá el efecto de la alteración del cociente NAD /NADH en la actividad de las histonas deacetilasas de tipo III (HDACs) y las poli-ADP ribosiltransferasas (PARPs). Por último se abordará el papel del estado redox del hierro de los centros catalíticos de enzimas claves y su influencia en la actividad de HDACs y de Tet metilcitosina dioxigenasas (DNA demetilasas) y JmjC histona demetilasas. Demostraremos como el GSH influencia los mecanismos epigenéticos más allá de la mera regulación de los niveles de SAM. Los resultados mostrados destacan la importancia del estrés oxidativo y del GSH como factor clave en la regulación epigenética y su importancia, observada desde hace tiempo, en la regulación de la proliferación celular y en las enfermedades relacionadas con dicho proceso fisiológico básico.

XI Reunión del GERILI, Granada Ponencias Sesión 1

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L2 Role of the NADPH oxidase NOX4 in liver fibrosis and hepatocarcinogenesis

Isabel Fabregat

Bellvitge Biomedical Research Institute (IDIBELL) and Departament de Ciències Fisiològiques II, University of Barcelona, L´Hospitalet de Llobregat, Barcelona, Spain.

Autor de contacto: Isabel Fabregat ([email protected])

The NADPH oxidase (NOX) family has recently emerged as an important source of reactive oxygen species (ROS) in signal transduction. In the liver, NOX4 plays relevant roles mediating Transforming Growth Factor-beta (TGF-β) actions. Our group and others have described that NOX4 mediates TGF-β-induced myofibroblast activation, contributing to the development of liver fibrosis. Indeed, there is an increasing interest in the development of anti-NOX4 drugs as therapeutic tools for chronic liver diseases. However, in hepatocytes and liver tumor cells, we found that NOX4 mediates TGF-β-induced tumor suppressor actions, particularly apoptosis. Overactivation of the Epidermal Growth Factor Receptor (EGFR) pathway in liver tumor cells blocks up-regulation of NOX4 by TGF-β, impairing oxidative stress and cell death, which may switch TGF-β function from tumor suppressor to tumor promoter. In this sense, recent results in our group have revealed that NOX4 silencing in hepatocellular carcinoma (HCC) cells confer them higher proliferative and migratory capacity “in vitro” and higher tumorigenic potential in “in vivo” xenografts in nude mice. Furthermore, NOX4 expression is decreased in HCC patients. Indeed, a better knowledge about the consequences of inhibiting NOX4 in the liver is required before using NOX4-targeted drugs as therapy in liver chronic inflammatory diseases. Work supported by grants from: 1) the Ministry of Economy and Competitiveness (cofounded by FEDER funds): BFU2012-35538, SAF2015-64149-R and ISCIII-RTICC: RD12-0036-0029; 2) AGAUR-Generalitat de Catalunya (2014SGR0334) and 3) the European Cooperation in Science and Technology (COST Action BM1203/EU‐ROS).


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L3

What is Trxo1 doing in plant nuclei?

Francisca Sevilla1, Federico Pallardó2, Aingeru Calderón1, Ana Ortiz-Espín1, Antonio Sánchez-Guerrero1, Ana Jiménez1

1Departamento de Biología del Estrés y Patología Vegetal, CEBAS-CSIC, E-30100, Murcia, Spain. 2Departamento de Fisiología, Facultad de Medicina, Universidad de Valencia, E-46010 Valencia, Spain.

Autor de contacto: Francisca Sevilla ([email protected])

Thioredoxins are ubiquitous small redox proteins that harbor a dithiol active site and regulate target enzymes by thiol/disulfide exchange. In contrast to animal systems, the presence of a classical TRX system in the nucleus is scarcely reported in plants, and the nuclear targets of the different plant TRXs have not yet been identified, thus very little is known about their function in the nucleus. To date, the best-known mitochondrial TRXs are of the o-type. In pea plants, a PsTrxo1 has been located in both, mitochondria and interestingly in nucleus under normal conditions. In pea nucleus, the proliferating cellular nuclear antigen (PCNA) was first characterized as a processivity factor for DNA polymerase delta. Through the interactions with different proteins, currently PCNA is known to be involved in many different cellular processes like: DNA replication, DNA repair, cell cycle control, apoptosis and transcription. Interestingly, it was proposed that nuclear GSH acts as redox sensor at the onset of DNA synthesis by providing the appropriate redox environment. Moreover, in human cells, it has been reported that PCNA was upregulated at S phase when nuclear GSH was and its highest levels. Here we present the identification of PCNA as a PsTrxo1 target through affinity chromatography techniques using purified nuclei from pea leaves. This has been corroborated by bifluorescence complementation and immunodetection. Also the expression pattern of Trxo1 and PCNA has been analyzed by qPCR during the cell cycle of a control and over-expressing PsTrxo1 tobacco BY-2 cell culture, involving Trxo1 in the regulation of the cell cycle progression, possibly through its link with PCNA content and redox state and its influence on glutathione levels and nuclear location.

(This work was supported by MICINN (BFU2014-52452-P co-financed by FEDER ) and Seneca Foundation, Murcia (19876/GERM/15), Spain


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L4

Biochemical-clinical profile, redox state and DNA oxidation in morbid obesity after bariatric surgery

Lidia Monzó1, Concha Cerdá2,7, Antonio Vázquez3, Ramón Trullenque3, Javier Girbés4, Nuria Estañ4, Erika Pérez4, Antonio Iradi5, Dolores Olivares6, Ignacio Cánovas6, Raquel Cortés6, Felipe J. Chaves6, Paula Pérez1, Beatriz Dominguez1, Carmen Tormos1, Patricia

Ortiz1, Guillermo T. Sáez1,4,7

1Dept of Biochemistry and Molecular Biology, Faculty of Medicine-INCLIVA, 2Service of Clinical Analysis, General University Hospital, 3Service of General and Digestive Surgery, and 4Service of

Clinical Analysis, Dr Peset University Hospital, 5Dept of Physiology, Faculty of Medicine-INCLIVA, 6Genomic and Genetic Diagnosis Unit, INCLIVA, University of Valencia

7Oxidative Stress Commission-SEQC

Autor de contacto: Guillermo T. Sáez ([email protected])

Overweight and obesity represent a threat to the health of affected subjects. According to WHO published data obesity is characterized by a growing epidemic worldwide where Spain occupies a prominent place. The importance of this metabolic and nutritional disorder lies primarily on the high incidence and prevalence of associated clinical complications including, metabolic and cardiovascular disorders, endocrine dysfunctions and even cancer.

Obesity, in its different degrees, is accompanied by many clinical and biochemical alterations reflecting the pathological condition of various body tissues and organs systems. Among the mechanisms underlying the pathogenesis of obesity and its complications oxidative stress (EO) plays an important role which is especially evident in morbid obese patients (BMI> 40).

In the present study we have determined, at the systemic level, the degree of EO in morbidly obese patients at baseline and its modulation after bariatric surgery using laparoscopic sleeve gastrectomy (LSG). Compared with the normal weight control group, morbid patients have significantly reduced levels of antioxidant activities (SOD, CAT, GPx and GSH) in their peripheral mononuclear blood cells (PMBc) together with an increase in serum and urine of lipid oxidation products (MDA and F2-IP) and the mutagenic base 8-oxo-dG. In these patients, antioxidant activities and oxidation products gradually normalized after LSG, in most cases achieving normal ranges 12 months after surgery intervention. The reduced expression of mRNAs for hOGG1 protein and the transcriptional factor SIRT1 are in agreement with the progressive reductions of serum 8-oxo-dG levels and its release by the urine, supporting their involvement and regulatory role in DNA repair. The changes of urine 8-oxo-dG levels correlate positively with the serum concentration of 8-oxo-dG, lipid peroxides, triglycerides, glucose, insulin, HOMA index and body weight, and negatively with weight loss and antioxidant activities supporting the possible utility of 8-oxo-dG in a bloodless medium like urine as a potential clinical marker for the monitoring of morbid obesity patients (PI13/01848).


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L5 Transcription factor NRF2 is a regulator of macroautophagy

M. Pajares1, A. I. Rojo1, A. Cuadrado1

Departamento de Bioquímica,Facultad de Medicina, Universidad Autónoma de Madrid.

Autor de contacto: Antonio Cuadrado ([email protected])

Autophagy is a precise and coordinated process. While its control at the level of cell signaling and protein interactions is being elucidated, little is known about transcriptional regulation of autophagy. In this study, we identify the transcription factor NRF2 (NF-E2 related factor 2) as a crucial regulator of autophagy gene expression and its relevance in a mouse model of Alzheimer’s disease (AD) that reproduces impaired Amyloid Precursor Protein (APP) and TAU processing, clearance and aggregation. We screened the chromatin immunoprecipitation database ENCODE for two proteins, MAFK and BACH1 that bind the NRF2-regulated enhancer Antioxidant Response Element (ARE). Using a script generated from JASPAR’s consensus ARE sequence, we identified 27 putative AREs in 16 autophagy related genes. Twelve of these sequences were validated as NRF2 regulated AREs in 9 autophagy genes by additional ChIP assays and quantitative RT-PCR of human and mouse cells after NRF2 activation with sulforaphane. Mouse embryo fibroblasts of Nrf2-knockout mice exhibited reduced expression of autophagy genes, which was rescued by an Nrf2 expressing lentivirus, and impaired autophagy flux when submitted to hydrogen peroxide. In mice co-expressing human APPV717I and TAUP301L, co-localization of these mutant proteins with the NRF2-regulated autophagy marker SQSTM1/p62 was reduced in the absence of NRF2. In AD patients, neurons expressing high levels of APP or TAU also expressed SQSTM1/p62 and nuclear NRF2, suggesting their attempt to degrade intraneuronal aggregates through this autophagy pathway. This study shows that NRF2 modulates autophagy gene expression and offers a new therapeutic strategy to combat proteinopathies.


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L6

Incidencia del sistema inmunitario en la oxidación-inflamación del envejecimiento

Mónica De la Fuente1,2

Departamento de Fisiología Animal II, Facultad de Biología. Universidad Complutense de Madrid. Instituto de Investigación del Hospital 12 de Octubre. Madrid.

Autor de contacto: Mónica De la Fuente ([email protected])

Con el proceso de envejecimiento tiene lugar un estrés oxidativo en el organismo, siendo la teoría de la oxidación una de las más aceptadas para explicar este proceso. Recientemente nuestro grupo de investigación ha propuesto la de la oxidación-inflamación, dos procesos estrechamente relacionados que se dan en mayor medida al envejecer, sugiriéndose también en esta teoría que el sistema inmunitario tiene un papel relevante en la modulación de la “oxi-inflamm-aging”. La comprobación de este hecho se ha realizado estudiando en células inmunitarias de sangre periférica humana, así como del peritoneo y de órganos inmunitarios de animales de experimentación (ratas y ratones), los cambios en una serie de marcadores de estrés oxidativo (niveles y actividad de defensas antioxidantes y de oxidantes) y de estrés inflamatorio (niveles de compuestos anti-inflamatorios y pro-inflamatorios), así como de daño a lípidos y ADN, en individuos adultos, maduros, viejos y longevos. En ratones, con una esperanza de vida de unos dos años, se han valorado esos parámetros en estudios longitudinales, utilizando células inmunitarias peritoneales. Los resultados encontrados demuestran que, al envejecer, las células inmunitarias presentan un aumento del estrés oxidativo e inflamatorio, mostrando los sujetos de gran longevidad (centenarios y ratones longevos) unos valores, en los parámetros analizados, similares a los de adultos. Además, en varios modelos de envejecimiento prematuro en roedores, hemos observado que los animales prematuramente envejecidos tienen un mayor estrés oxidativo e inflamatorio en sus células inmunitarias que los de su misma edad que no tienen envejecimiento prematuro, muriendo siempre mucho antes que estos últimos. En otra serie de experimentos se ha comprobado que la oxidación e inflamación detectada en las células inmunitarias peritoneales reproduce la que presentan las de otras localizaciones y también la de los diferentes tejidos corporales. La participación del sistema inmunitario en la “oxi-inflamm-aging” fue ratificada al detectar que diversas estrategias de estilo de vida (dietas con antioxidantes, enriquecimiento ambiental y social, etc) disminuían ese estrés en las células inmunitarias y, consecuentemente, en el resto del organismo, lo que se acompañó de un aumento de la esperanza de vida en los animales de experimentación.

Financiación: RETICEF (RD127004370018), FIS (PI15/01787)-ISCIII-FEDER.


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L7

La conexión parkin/PINK1/DJ-1/MUL1, diana molecular de la melatonina que explica sus propiedades antiparkinsonianas

Darío Acuña-Castroviejo1,2, Elena Díaz-Casado1,2, Paula Aranda1,2, Marisol Fernández-Ortiz1,2, Ramy KA Sayed1

1Centro de Investigación Biomédica, Parque Tecnológico de Ciencias de la Salud, Universidad de Granada, Avda. del Conocimiento s/n, 18100 Armilla, Granada, Spain.

2Departamento de Fisiología, Facultad de Medicina, Universidad de Granada, Avenida de Madrid 11, 18012 Granada, Spain.

Autor de contacto: Darío Acuña Castroviejo ([email protected])

El daño mitocondrial está directamente ligado a la fisiopatología del parkinson. Además de la inhibición del complejo I, se conoce la existencia de una serie de genes cuyas proteínas se asocian al control de la función mitocondrial y, cuando es necesario, induciendo mitofagia para eliminar las mitocondrias dañadas y evitar el estrés oxidativo y neuroinflamación que de ellas se derivan. Los efectos neuroprotectores de la melatonina y su eficacia para mantener la homeostasis mitocondrial se han demostrado en modelos de parkinson, pero los mecanismos de acción no están claros. Aquí describimos la puesta a punto de un modelo de parkinson crónico inducido por MPTP en embriones de pez cebra, cuyo sistema dopaminérgico es comparable al nigrostriatal humano, que permite el análisis de la respiración mitocondrial in vivo, actividad locomotora, así como la identificación mediante PCR, WB e inmunohistoquímica de γ1-sinucleína, parkin, PINK1, DJ-1, y MUL1, y su relación con la disfunción mitocondrial, bradiquinesia, alteraciones fenotípicas, y la degeneración dopaminérgica. Los resultados muestran que los embriones parkinsonianos manifiestan todas las alteraciones típicas del parkinson clínico, con el aumento de la expresión de γ1-sinucleína y la inhibición de parkin/PINK-1/DJ-1/MUL1, lo que inhibe los mecanismos de mitofagia, acúmulo de mitocondrias dañadas, y mayor estrés oxidativo, que no puede compensarse debido a que los sistemas antioxidantes están también inhibidos. La consecuencia es un aumento de la expresión de iNOS y reducción de las neuronas TH positivas, que se acompaña de malformaciones, bradiquinesia, y aumento de mortalidad. La administración de melatonina es capaz de prevenir todos esos cambios, restaurando la función mitocondrial y dopaminérgica normales, así como los mecanismos de mitofagia, elevando la producción de ATP. Además, cuando se administra después de que el proceso neurodegenerativo MPTP-dependiente está ya presente, la melatonina también es capaz de recuperar dichos cambios degenerativos. Por tanto, identificamos aquí las dianas moleculares de la melatonina que explican sus propiedades neuroprotectoras, al tiempo que demostramos por primera vez la capacidad de la melatonina no sólo para prevenir, sino también para recuperar los eventos fisiopatológicos parkinsonianos en el modelo de pez cebra.

Grants nº P10-CTS-5784 y RD12/0043/0005


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L8

MicroRNAs and metabolic regulation in fibrogenesis

Verónica Miguel, Marta Fierro-Fernández, Nathan L. Price, Carlos Fernández-Hernando, Santiago Lamas

Centro de Biología Molecular “Severo Ochoa” (CSIC-UAM), Yale University School of Medicine

Autor de contacto: Santiago Lamas ([email protected]).

MicroRNAs are small non-coding RNAs acting as regulators of gene expression at the post-transcriptional level and controlling multiple biological processes, including fibrogenesis. Organ fibrosis ultimately consists of an excessive accumulation of extracellular matrix (ECM) proteins leading to the replacement of the normal cellular architecture by dysfunctional tissue. Several cytokine-related pathways, including that of the major player transforming growth factor-β (TGF-β) are involved in this transformation. Previous work from our laboratory showed that the microRNA miR-9-5p exerts a protective role in lung and peritoneal fibrosis by targeting both the TGF-β pathway and NOX4. We also found that miR-9-5p was upregulated in TGF-β1-treated human dermal fibroblasts. The expression of miR-9-5p was also increased in the skin and plasma in the mouse model of bleomycin-induced dermal fibrosis. Using lentiviral constructs we demonstrated that miR-9-5p over-expression was also capable of reducing skin thickness and fibrotic changes in this same model. Our data support that miR-9-5p significantly prevents fibrogenesis in the skin. In the kidney, fibrosis is the final common pathway of highly prevalent clinical conditions as type 2 diabetes mellitus and arterial hypertension, leading to chronic renal failure. Recent work has shown that lipid metabolic alterations and specifically a reduction in fatty acid oxidation are important pathogenetic coadjuvators. To identify miRNAs involved in the metabolic regulation of renal fibrosis, we performed studies in in the renal fibrosis mouse models of unilateral ureteral obstruction (UUO) and folic acid nephropathy (FAN). From a total of 175 array-analyzed microRNAs in the UUO model, 74 showed altered expression in the fibrotic samples. We found downregulation of miR-33-5p in the UUO and FAN models by 40 and 50%, respectively. Studies in miR-33a-deficient mice (KO) subjected to UUO and FAN showed profound differences in the fibrogenic response and metabolic profile between wild type and KO animals. These results support the role of miRNAS in a novel and complex metabolic regulatory pathway related to organ fibrosis.


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L9

Nutritional supplementation as therapeutics aimed to ApoE in Alzheimer’s Disease

Vicent Bonet-Costa1, Vicente Herranz-Pérez 2,3, Mari Carmen Blanco-Gandía4, Cristina Mas-Bargues1, Marta Inglés5, Patricia Garcia-Tarraga2, Marta Rodríguez-Arias4, José

Miñarro4, Consuelo Borras1, José Manuel García-Verdugo2,3, José Viña1,*

1Department of Physiology. Faculty of Medicine. University of Valencia/INCLIVA.Valencia Spain. 2Laboratory of Comparative Neurobiology, Institute Cavanilles, University of Valencia, CIBERNED,

Valencia, Spain. 3Multiple sclerosis and Neuro-regeneration mixed unit, IIS Hospital La Fe, Valencia, Spain. 4Department of Psychobiology. Faculty of Psychology.University of Valencia.Valencia. Spain. 5Department of

Physiotherapy.Faculty of Physiotherapy.University of Valencia.Valencia. Spain.

Autor de contacto: José Viña ([email protected])

Amyloid-β (Aβ) clearance from brain, which is decreased in Alzheimer’s disease, is facilitated by apolipoprotein E which is up-regulated by activation of the RXR/PPARγ dimeric receptor. Genistein, a non-toxic, well tested and inexpensive drug activates the PPARγ subunit of this receptor. Treatment of the APP/PS1 Alzheimer’s mouse model with genistein results in a remarkable and rapid improvement in cognition parameters, such as hippocampal learning, recognition memory, implicit memory and odor discrimination. This is associated with a lowering of Aβ levels in brain, in the number and the area of amyloid plaques (confirmed in vivo by positron emission tomography) as well as in microglial reactivity. Finally, incubation of primary astrocytes with genistein results in a PPARγ-mediated increased release of ApoE. A proof of concept preliminary double blind, placebo controlled trial strongly suggests that genistein may be useful in the treatment of human Alzheimer’s disease.


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L10

Suplementación nutricional en humanos con hidroxitirosol, antioxidante mayoritario del aceite de oliva

Eduardo López-Huertas

Grupo de Antioxidantes, Radicales libre y NO en Biotecnología y Agroalimentación. Estación Experimental del Zaidín, Consejo Superior de Investigaciones Científicas,

C/Profesor Albareda 1, 18008 Granada.

Autor de contacto: Eduardo López-Huertas ([email protected])

El AOV es el único aceite comestible que no se somete a un proceso de refinado posterior a la extracción. En consecuencia, en la composición del AOV existen un 1-2% de compuestos que son transferidos desde las aceitunas hasta el aceite de oliva (los llamados “compuestos minoritarios”). Entre ellos, hay que destacar el hidroxitirosol (HT), antioxidante mayoritario del AOV.

Estudios previos realizados en nuestro laboratorio han mostrado que la suplementación con 4 mg/kg de HT purificado mejoran el perfil lipídico sanguíneo, el estado antioxidante y reduce el tamaño de las lesiones ateroscleróticas (1). También hemos descrito en sujetos humanos el perfil de absorción del HT administrado en solución acuosa, así como la asociación transitoria que existe entre el HT y las lipoproteínas LDL plasmáticas durante el proceso de absorción (2).

Recientemente, se han investigado los efectos crónicos producidos por la administración de HT a un grupo sujetos sanos (n=15). Los voluntarios recibieron un suplemento nutricional que contenía 45 mg de HT puro durante un período de 8 semanas. Se tomaron muestras de sangre y de orina de 24 horas al inicio del estudio (T0), y a los tiempos T4 y T8 semanas. Se analizaron 59 biomarcadores en sangre y 12 en la orina. No se registraron efectos adversos ni abandonos del estudio. El consumo de HT produjo un notable incremento de la vitamina C en la sangre a T4 (T0=23,4±3,2 mol/l frente a T4=46,4±3,1 mol/l) que se mantuvo a T8 (47,8±4,2 mol/L). Por otra parte, la PCR ultrasensible se redujo significativamente en un 60% al final del estudio (T0=6,2±2,9 mg/dl, T4=2,7±0,27 mg/dl, T8=2,6±0,10 mol/l). El resto de los marcadores analizaron no se modificaron significativamente, incluidos los lípidos sanguíneos, enzimas hepáticas, minerales y vitaminas.

González-Santiago et al., Atherosclerosis 2006, 188: 35-42. González-Santiago et al., Pharmacol Res. 2010, 61: 364-370.


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L11

Envejecimiento cerebral y restricción de metionina

Rosanna Cabré, Alba Naudí, Mariona Jové, Victoria Ayala, Manuel Portero-Otin, Isidre Ferrer , Reinald Pamplona

Departament de Medicina Experimental, Universitat de Lleida-Institut de Recerca Biomèdica de Lleida (UdL-IRBLleida), Avda. Rovira Roure 80, 25198 Lleida.

Autor de contacto: Reinald Pamplona ([email protected])

Los lípidos han estimulado y favorecido la evolución del sistema nervioso. El sistema nervioso humano adulto contiene la mayor cantidad y diversidad de clases y especies moleculares lipídicas. El cerebro humano realiza un amplio rango de funciones motoras, sensoriales, reguladoras, comportamentales y cognitivas que son dependientes de la compleja organización de grupos de diversas poblaciones de células nerviosas. En este contexto, postulamos que la diversidad morfológica y funcional entre células neurales también se proyecta y consigue a través de la expresión de perfiles lipídicos particulares. El envejecimiento cerebral es un proceso biológico caracterizado por una alteración progresiva en su estructura y función, aumento de la vulnerabilidad al estrés y la enfermedad, y reducción de las respuestas adaptativas que eventualmente conducen a la muerte celular. Numerosos factores participan en este proceso de envejecimiento y uno de ellos es el estrés oxidativo.

Nuestros resultados demuestran que existe una vulnerabilidad específica de región a la peroxidación lipídica y ofrece evidencias de la presencia de mecanismos neuronales para la biosíntesis de ácidos grasos poliinsaturados en el SN humano. Además, demostramos que el estrés oxidativo aumenta con la edad, con un punto de ruptura a los 60 años, y que estos cambios se asocian con una respuesta adaptativa durante la vida adulta dirigida a preservar la función y supervivencia neuronal. Adicionalmente, desde una aproximación de proteómica redox, hemos constatado que la lesión oxidativa proteica es selectiva, específica y dependiente de región afectando a un grupo de proteínas que cubren el metabolismo energético, citoesqueleto, chaperonas, neurotransmisión y metabolismo del grupo hemo; proteínas todas ellas que comparten también características estructurales que son determinantes de su vulnerabilidad al estrés oxidativo.

Por último, demostramos que intervenciones nutricionales como la restricción calórica y la restricción de metionina, intervenciones ambas anti-envejecimiento y pro-longevidad, inducen una reprogramación metabolómica y lipidómica que se traduce en un aumento de la resistencia al estrés oxidativo.


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L12

Oxidative stress and redox signaling: role of hydrogen peroxide

Helmut Sies1,2

1 Institute of Biochemistry and Molecular Biology I, and 2.Leibniz Research Institute of Environmental Medicine, Heinrich Heine University Düsseldorf, Düsseldorf, Germany.

[email protected]

Normal aerobic metabolism is accompanied by a steady-state level of oxidant production. In oxidative eustress, endogenous oxidants--notably hydrogen peroxide--are utilized for redox signaling in redox regulation of biological processes. A powerful array of defense enzymes and some small-molecular-mass bioactives maintain the physiological level of oxidant challenge. Exposure to more intense oxidative challenge causes damage to biomolecules and may disrupt redox signaling.

In non-phagocytic cells, the setpoint of H2O2 production is at about 2-3 % of total oxygen uptake, i.e. about 50 nmol H2O2 per gram tissue per min, and the concentration is ca. 10 nM H2O2 (see (1)).

Hydrogen peroxide is well-suited for redox signaling (2). While reacting relatively sluggishly with biomolecules (second-order rate constants at about 1 M-1s-1), there are notable exceptions, e.g. certain cysteinyl residues in peroxiredoxins or selenocysteinyl residues in glutathione peroxidases (107 M-1s-1). Thiol peroxidases can act as H2O2 sensors and transducers. In growth-factor signaling, the ligand-receptor interaction leads to activation of plasma-membrane bound NADPH oxidase. The resulting extracellular H2O2 is captured by aquaporins serving as peroxiporins to modify intracellular signaling pathways. Thiol-operated molecular master switches like Nrf2/Keap1 are sensitive to oxidation by H2O2, leading to activation of transcription of defense genes.

Redox processes in biology are organized according to the principles of the Redox Code (3).

(1) Sies, H. (2014) Role of metabolic H2O2 generation: redox signaling and oxidative stress. J. Biol. Chem. 289: 8735-8741.

(2) Marinho, H.S., Real, C., Cyrne, L., Soares, H., Antunes, F. (2014) Hydrogen peroxide sensing, signaling and regulation of transcription factors. Redox Biol. 2: 535-562.

(3) Jones, D.P., Sies, H. (2015) The Redox Code. Antioxid. Redox Signal. 23: 734-46.


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L13

H2O2 signaling through one- and two-components redox relays – bacterial OxyR and eukaryotic peroxiredoxin-Pap1

Alba Domènech, José Ayté, Elena Hidalgo

Oxidative Stress and Cell Cycle Group, Universitat Pompeu Fabra, C/ Dr. Aiguader 88, 08003 Barcelona, Spain.

Corresponding author: Elena Hidalgo ([email protected])

Hydrogen peroxide (H2O2) is an activation messenger of different signaling cascades by virtue of its interaction with cysteine residues in sensor proteins. However, it is generally accepted that the reversible oxidation of thiols in proteins by physiological fluctuations of H2O2 is limited to certain proteins with high reactivity towards peroxides, such as the bacterial transcription factor OxyR and the H2O2 scavengers peroxiredoxins. They have been proposed to define two models of H2O2-dependent redox transduction: prokaryotic OxyR as a one-component redox cascade, and eukaryotic peroxiredoxin-transcription factor as a two-component redox relay. To circumvent the differences arising from the use of different model systems, we have expressed OxyR in fission yeast and compared its activation by environmental and genetic factors to that of the transcription factor Pap1, whose redox activation depends on the upstream peroxiredoxin Tpx1. Bacterial OxyR is reduced in yeast by the thioredoxin system, but its oxidation by H2O2 is significantly faster than the kinetics of OxyR reduction. On the contrary, the Tpx1-dependent oxidation of Pap1 makes this transcription factor nicely suited to respond to low doses of peroxides, but responds in a dual kinetic fashion upon high, Tpx1-inactivating doses of the oxidant. The analysis of the oxidation state of OxyR in wild-type and H2O2-scavenging deficient yeast strains has allowed us to establish the toxic steady-state concentration that blocks aerobic growth in fission yeast, and also the gradient of extracellular-to-intracellular peroxides.


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L14

Altered calcium homeostasis in cellular models of Friedreich ataxia

Rosa Purroy, Fabien Delaspre, Elena Britti, David Alsina, Jordi Tamarit, Joaquim Ros

Departament Basic Medical Sciences. Universitat de Lleida.

Autor de contacto: Joaquim Ros: [email protected]

Frataxin is a mitochondrial protein involved in cellular iron homeostasis whose deficiency in humans causes Friedreich ataxia. Levels of frataxin in these patients vary from 5 to 30% of normal levels and the atrophy of dorsal root ganglia and cardiac hypertrophy are main traits of the disease. These are the reasons why we use primary cultures of cardiac myocytes and dorsal root ganglia neurons obtained from rats as cell models to understand the cellular consequences of frataxin deficiency. Frataxin levels are reduced -by RNA interference- to those found in the disease. Dorsal root ganglia neurons show, after frataxin depletion, markers of apoptotic cell death, increased levels of intracellular calcium, neurite degeneration and decreased mitochondrial membrane potential. In cardiomyocytes, frataxin depletion alters lipid metabolism and promotes the formation of lipid droplets. Also, mitochondria display a “balloon-like” morphology suggesting alterations in membrane permeability transition pore. Most of these phenotypic traits can be reversed with the addition of BH4 anti-apoptotic domain of Bcl-xL protein fused to a TAT peptide. Also, compounds targeting mitochondrial permeability transition pore restores cell viability and they give clues to understand the connection between mechanisms triggering cardiac hypertrophy and alteration of calcium homeostasis in Friedreich ataxia.


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L15

Mitochondrial and nuclear DNA matching shapes organismal metabolism by a ROS mediated mechanism

José A. Enríquez

Centro Nacional de Investigaciones Cardiovasculares, Madrid

Autor de contacto: José A. Enríquez ([email protected])

Human mitochondrial DNA (mtDNA) shows extensive within-population sequence variability. Many studies suggest that mtDNA variants may be associated with ageing or diseases, although mechanistic evidence at the molecular level is lacking. Mitochondrial replacement has the potential to prevent transmission of disease-causing oocyte mtDNA. However, extension of this technology requires a comprehensive understanding of the physiological relevance of mtDNA sequence variability and its match with the nuclear-encoded mitochondrial genes. Studies in conplastic animals allow comparison of individuals with the same nuclear genome but different mtDNA variants, and have provided both supporting and refuting evidence that mtDNA variation influences organismal physiology. However, most of these studies did not confirm the conplastic status, focused on younger animals, and did not investigate the full range of physiological and phenotypic variability likely to be influenced by mitochondria. Here we systematically characterized conplastic mice throughout their lifespan using transcriptomic, proteomic, metabolomic, biochemical, physiological and phenotyping studies. We show that mtDNA haplotype profoundly influences mitochondrial proteostasis and reactive oxygen species generation, insulin signalling, obesity, and ageing parameters including telomere shortening and mitochondrial dysfunction, resulting in profound differences in health longevity between conplastic strains.


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L16

Ácidos grasos nitrados: nuevos componentes del metabolismo del óxido nítrico en plantas

Juan B. Barroso

Grupo de Bioquímica y Señalización Celular en Óxido Nítrico, Área de Bioquímica y Biología Molecular. Departamento de Biología Experimental. Campus Universitario “Las Lagunillas” s/n,

E-23071. Universidad de Jaén, Jaén, España.

Autor de contacto: Juan B. Barroso ([email protected])

En los últimos años los estudios sobre el óxido nítrico (NO) en plantas a nivel molecular se han centrado fundamentalmente en la identificación y caracterización de modificaciones post-traduccionales (PTMs) de proteínas mediadas por NO, tales como la nitración y la S-nitrosilación y el efecto que ejercen sobre la actividad biológica. No obstante, estudios recientes en sistemas animales han demostrado que el NO puede afectar también a otras biomoléculas como los lípidos generando los denominados ácidos grasos nitrados, nitrolípidos o nitroalquenos (NO2-FA). Estos derivados lipídicos nitrados pueden ejercer PTMs sobre dianas proteicas denominadas nitroalquilación que median efectos fisiológicos y señalizadores más potentes que los del propio NO. De hecho, en organismos animales, los NO2-FA se consideran novedosos mediadores de señalización celular que abarcan un amplio conjunto de respuestas celulares entre los que destacan una probada función anti-inflamatoria y beneficios a nivel de salud cardiovascular. Sin embargo, es escasa la información sobre la presencia y la función de estos lípidos nitrados en sistemas vegetales. En este sentido, se ha evidenciado la presencia de aductos de proteína con NO2-FA en el aceite de oliva virgen extra que podrían soportar los beneficios cardiovasculares asociados con la dieta mediterránea. Por otra parte, recientemente se ha procedido a la caracterización funcional de estos derivados lipídicos del óxido nítrico en organismos vegetales, estableciendo la presencia de ácido nitro-linolénico (NO2-Ln), su modulación a lo largo del desarrollo de Arabidopsis thaliana y el papel señalizador en la inducción de la respuesta antioxidante frente a diferentes situaciones de estrés abiótico. En este sentido, los estudios de proteómica y transcriptómica funcional efectivamente indicaron que el NO2-Ln está implicado fundamentalmente en la respuesta de defensa frente a diferentes situaciones que cursan con estrés oxidativo, a través de la modulación de proteínas de choque térmico (HSPs), poniendo además de manifiesto un mecanismo de actuación conservado en sistemas animales y vegetales. La capacidad de señalización de estas moléculas establece un nuevo contexto de investigación en el campo del NO en plantas.

Schopfer et al. (2011) Chem Rev 111: 5997–6021. Fazzari et al. (2014) Plos One 9: e84884. Mata-Pérez et al. (2016) Plant Physiol 170: 686–701. Mata-Pérez et al. (2016) Nitric Oxide 57: 57-63.


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L17

Plant Peroxisomes: a nitro-oxidative cocktail

Francisco J Corpas

Group of Antioxidants, Free Radicals and Nitric Oxide in Biotechnology, Food and Agriculture, Department of Biochemistry, Cell and Molecular Biology of Plants,

Estación Experimental del Zaidín, CSIC, Apartado 419, E-18080 Granada, Spain

Autor de contacto: Francisco J. Corpas ([email protected]) Peroxisomes are single membrane-bound subcellular compartments present in almost all types of eukaryotic cells. The basic enzymatic constituents are catalase and H2O2-producing flavin oxidase which illustrates its prominent oxidative metabolism [1]. Peroxisomes are also characterized by metabolic plasticity, as their enzymatic content can vary according to the organism, cell/tissue type, development stage and environmental conditions. In plant cells, these organelles house a large number of antioxidative enzymes, such as catalase, superoxide dismutase (SOD), components of the ascorbate-glutathione cycle and several NADP-dehydrogenases, involved in different functions [2]. Nevertheless, accumulating data have shown that plant peroxisomes have the capacity to generate nitric oxide (NO) through an L-arginine-dependent nitric oxide synthase (NOS) which strictly depends on NADPH and requires calmodulin (CaM) and Ca2+. Furthermore, peroxisomal NO, together with other related RNS such as peroxynitrite, has been shown to participate in the response to abiotic stresses such as salinity, arsenic, cadmium or drought indicating that peroxisomes have an active nitro-oxidative metabolism [3,4]. As part of this metabolism, the numbers of peroxisomal proteins which undergo NO-mediated post-translational modifications such as nitration and S-nitrosylation have been also demonstrated under physiological and stress conditions [5]. All these data demonstrate the existence of a very dynamic nitro-oxidative metabolism into plant peroxisomes indicating the relevance of these organelles. [1] Corpas FJ (2015) Plant Biol (Stuttg) 17:1099-1103. [2] Leterrier et al (2016) Protoplasma 253: 403-415. [3] Corpas et al (2009) Plant Physiol 151: 2083-2094. [4] Corpas & Barroso (2014) Ann Bot 113: 87-96 [5] Palma et al (2015) Ann Bot 1163: 627-636.

[Supported by Grant AGL2015-65104-P from MINECO, Spain]

XI Reunión del GERILI, Granada Lección Conmemorativa “Ana Navarro”

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L18

Estrés oxidativo, lípidos y aterogénesis / Oxidative stress, lipids and atherogenesis Silvia González-Ramos1, Marta Paz-García1, César E. Rosales1,2, Emilio F. Acosta3,

Marina Mojena1, Patricia Prieto-Chinchilla1, Lisardo Boscá1

1Instituto de Investigaciones Biomédicas Alberto Sols (CSIC-UAM), 28029 Madrid. 2Departamento de Bioquímica y Medicina Molecular. Facultad de Medicina, Universidad Autónoma de Nuevo León. Francisco I Madero y Eduardo Aguirre Pequeño S/N, CP 64460 Monterrey, Nuevo León, México. 3Centro de Estudios

Avanzados de Cuba, La Habana, Cuba.

Autor de contacto: Lisardo Boscá ([email protected])

Macrophages are present in a large variety of locations, playing distinct functions that are determined by its origin and by the nature of the activators present in the environment. From an academic point of view macrophage activation can be classified as pro-inflammatory (M1 polarization) or anti-inflammatory/pro-resolution/deactivation (M2), these profiles coexisting in the course of the immune response, and playing a relevant functional role in the onset of inflammation. Several groups analyzed the metabolic and functional aspects associated with macrophage activation trying to answer the questions about what changes in the regulation of energy metabolism accompany the different types of polarization; to what extent these inputs are necessary for their phenotype and the contribution of this phenotype to the development of atherogenesis and stability of the plaque. The interest of these studies is to envisage the possibility to regulate macrophage outcomes by altering their metabolic activity as a complementary strategy to regulate their participation in the atherogenic process, favoring plaque stability and decreasing their remodelling potential. Our data show that regardless of the challenges used and the availability of energy substrates, macrophages are more than 90% glycolytic, with limited use of other fuels for energy purposes; however, the pathways to generate metabolites from the TCA and glutaminolysis are fully functional and used for other purposes, in particular for the regulation of the polarization phenotype dependent on the HIF transcriptional activity. In this context, we have investigated the role of macrophages in the development of atherogenesis, its diagnosis and its contribution to plaque stability and culprit and non-culprit acute coronary events. These studies allowed us to develop new strategies to evaluate functional atheromatous lesions and to stabilize them using specific metabolic-based signatures.

XI Reunión del GERILI, Granada Homenaje María Teresa Mitjavila

34

L19

Modulación de la disfunción endotelial por dietas ricas en ácidos grasos poliinsaturados y monoinsaturados

M. Teresa Mitjavila

Departament de Biologia Cel·lular, Fisiologia i Immunologia, Facultat de Biologia, Universitat de Barcelona, Avda. Diagonal 647, 08028 Barcelona.

Autor de contacto: M. Teresa Mitjavila ([email protected])

El endotelio desempeña un importante papel en la fisiología del lecho vascular y una disfunción del mismo está asociada a la génesis de la placa de ateroma y a la progresión del proceso aterosclerótico. Todo ello se acompaña de un aumento del estrés oxidativo a nivel vascular. La generación de anión superóxido disminuye la biodisponibilidad del óxido nítrico (NO) y además contribuye a la peroxidación de los ácidos grasos insaturados. Mientras que los ácidos grasos poliinsaturados (AGPI) de cadena larga se oxidan fácilmente in vitro, está descrito su efecto beneficioso en la prevención de la aterosclerosis. Nuestra hipótesis se centró en estudiar si se producían cambios en los niveles de NO a nivel vascular tras la administración de dietas ricas en aceite de pescado (AP) rico en AGPI y también de dietas ricas en aceite de oliva virgen extra (AOVE), rico en ácido oleico (ácido graso monoinsaturado) y en componentes minoritarios con actividad antioxidante. Por otro lado estudiamos algunos de los mecanismos implicados.

Los estudios in vivo con AGPI se realizaron en ratas sanas y en ratones apoE-/- y con AOVE en mujeres con síndrome metabólico, es decir con predisposición a sufrir enfermedades cardiovasculares (proyecto PREDIMED). Los estudios in vitro se realizaron con células ECV304.

Los resultados en animales de experimentación indicaron un aumento en la biodisponibilidad de NO a nivel vascular, que comportaba vasorrelajación, una mayor difusión del NO al interior de las lipoproteínas, protegiéndolas de la oxidación y reducción de las placas de ateroma, de las moléculas de adhesión y de proteínas oxidadas, entre otros mecanismos. Los resultados en humanos tras administrar AOVE indicaban una reducción de productos de oxidación y un descenso de la presión arterial asociada a un aumento de NO en plasma. Por otro lado, la disfunción endotelial en ECV304, inducida por niveles elevados de glucosa y ácidos grasos libres (simulaba una diabetes tipo 2), se corregía tras la incubación en presencia de hidroxitirosol y de un extracto rico en polifenoles presentes en AOVE.

Todo ello indica un efecto beneficioso de los AGPI y del AOVE mediada por NO en la prevención y desarrollo de la aterosclerosis.



GRANADA

RESÚMENES

Comunicaciones orales (CO1-CO19)

XI Reunión del GERILI, Granada Comunicaciones orales

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CO1

Aplicación de marcadores biológicos de estrés oxidativo en el análisis ex vivo de la respuesta inmune e inflamatoria generada por provocación con un panel de

componentes agroalimentarios

Elena Lima-Cabello1, Víctor Alché2, José C. Jiménez-López1, Juan de Dios Alché1

1 Grupo de Biología Reproductiva de Plantas. Departamento de Bioquímica, Biología Celular y Molecular de

Plantas, Estación Experimental del Zaidín, Consejo Superior de Investigaciones Científicas (CSIC), C/Profesor Albareda 1, 18008 Granada, España

2 Centro de Salud “Villanueva de las Torres”, Servicio Andaluz de Salud (SAS), Granada, España

Autor de contacto: Juan de Dios Alché ([email protected])

Las pruebas ex vivo de provocación de sangre completa son de gran utilidad para investigar los cambios en los niveles de citocinas en respuesta a múltiples estímulos como endotoxinas, alérgenos, antibióticos etc. Son también útiles para determinar los efectos de inhibidores o activadores potenciales (ej. agentes farmacológicos) sobre los procesos inflamatorios o inmunológicos. Entre los agentes utilizados para la provocación, se incluyen componentes agroalimentarios simples como proteínas, azúcares, ácidos grasos…, así como muestras complejas de harinas, extractos o aislados proteicos entre otros. El cultivo de sangre completa imita el estado de las células circulantes in vivo, y contiene concentraciones fisiológicas de los factores que median la fisiología inmune e inflamatoria. Los diferentes reactivos de provocación pueden tener como resultado cambios notables en la composición y concentración de dichos factores. Es también de particular interés la generación de situaciones fisiológicas inducidas de forma previa o concomitante con la provocación. Así, hemos incluido en nuestros ensayos tanto sangres sin tratar (control), como sangres inducidas con varios agentes antigénicos y mitogénicos como lipopolisacárido (LPS), fitohemoaglutinina (PHA), y forbol-12-miristato-13-acetato junto con ionomicina (PMA+IO), que fueron sometidas a provocación conjunta con los diferentes componentes agroalimentarios. Tras el cultivo de sangre, analizamos la presencia resultante de citocinas y otros analitos bien en plasma o en células sanguíneas usando métodos como RT-PCR, ELISA, Western Bloting, o análisis multiplex como la tecnología Luminex x-Multi Analyte Profile (MAP). Tres de los numerosos biomarcadores determinados en nuestros análisis mostraron cambios muy significativos en su expresión, como consecuencia de la inducción o depleción de estrés oxidativo: a) el factor de necrosis tumoral (TNFα), b) una interleucina (IL)-1β, y c) la óxido nítrico sintasa inducible (iNOS). En ausencia de estímulos, la producción de estos marcadores fue insignificante. Sin embargo, el tratamiento con LPS indujo la producción de TNFα, IL-1β e iNOS, mientras que la PHA indujo la producción de TNFα e iNOS. Por su parte, el tratamiento PMA+IO mostró una inducción reducida de iNOS e IL-1β, pero incrementó la de TNF-α. Describimos además los cambios en la expresión de estos marcadores de estrés oxidativo tras la provocación de la sangre con diversos componentes agroalimentarios. Trabajo financiado por los proyectos BFU2011-22779 y RTC-2015-4181-2 (MINECO), P2011-CVI-7487 (Junta de Andalucía) y 201540E065 (CSIC) (todos ellos con cofinanciación FEDER), y por el acuerdo EU Marie Curie ref. PIOF-GA-2011-301550. JCJ-L agradece al MINECO el contrato ref. RYC-2014-16536.


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CO2

Actividad antitumoral de los inhibidores de la calicineurina y mTOR en el hepatocarcinoma: Estudios in vitro e in vivo

Elena Navarro-Villarán1, José Tinoco2, Granada Jiménez2, Sara Aliseda1, María A. Rodríguez-Hernández1 Raúl González1, Sheila Pereira1, Carmen Bernal-Bellido2, Gonzalo Suárez-Artacho2, Luís M. Marín-Gómez2, María T. Ferrer-Ríos3, Juan M. Pascasio-Acevedo3,#, Miguel A. Gómez-Bravo2,#, Francisco J. Padillo2,#, Jordi Muntané2,#

1Instituto of Biomedicina de Sevilla (IBiS). Hospital Universitario “Virgen del Rocío”-“Virgen

Macarena”/CSIC/Universidad of Sevilla, España 2Departamento de Cirugía General y Aparato Digestivo, Hospital Universitario “Virgen del Rocío”-

“Virgen Macarena”, Instituto de Biomedicina de Sevilla (IBiS)/CSIC/Universidad de Sevilla, Sevilla, España

3Servicio de Aparato Digestivo, Hospital Universitario “Virgen del Rocío”-“Virgen Macarena”, Instituto de Biomedicina de Sevilla (IBiS)/CSIC/Universidad de Sevilla, Sevilla, España

#CENTRO DE INVESTIGACIÓN BIOMÉDICA EN RED de Enfermedades Hepáticas y Digestivas (CIBERehd)

Autor de contacto: Elena Navarro-Villarán ([email protected])

Introducción: El trasplante hepático es el tratamiento de elección para los pacientes con hepatocarcinoma (HCC) con presencia de 1 nódulo (≤5 cm) y hasta 3 nódulos (≤3 cm). El tipo y duración del tratamiento inmunosupresor se han asociado con la recurrencia tumoral en los pacientes trasplantados. El objetivo del estudio fue evaluar la alteración de la señal proliferativa y apoptótica por diversos inmunosupresores en células de HCC humano. Materiales y Métodos: Se realizó un estudio cinético in vitro para determinar el efecto del inhibidor de la calcineurina (tacrólimus) y mTOR (everolimus y sirolimus) (0-100 μM) en células de HCC diferenciado valorándose parámetros de estrés de retículo endoplásmico, estrés oxidativo/nitrosativo, autofagia, proliferación y apoptosis celular. Los estudios in vivo se realizaron mediante el implante subcutáneo de células tumorales Huh 7 en ratones atímicos. Resultados: Tacrólimus (100 μM) ejerció una mayor actividad pro-apoptótica y anti-proliferativa (12-24 horas) en comparación con everolimus y sirolimus, que se relacionó además con un incremento (3-6 horas) del estrés del retículo endoplásmico (PERK) y descenso de los marcadores de autofagia (Beclin y LC3I/LC3II). Everolimus y sirolimus incrementan transitoriamente (3-12 horas) la autofagia. La actividad proapoptótica y antiproliferativa de los tratamientos dependió del tipo celular (Huh 7>Hep 3B>HepG2). Todos los tratamientos indujeron un rápido (6 horas) aumento de O2.- y óxido nítrico aunque su magnitud dependió de la dosis de los tratamientos. Los estudios in vivo demostraron un potente efecto antitumoral de everolimus, reducción del tamaño del tumor y expresión de ki67, comparado con tacrólimus que demostró un mayor riesgo angiogénico con incremento de la expresión de CD31, y con sirolimus que incrementó el tamaño del tumor desarrollado en el modelo de xenoimplante en ratones atímicos. Conclusiones: 1) La potente actividad pro-apoptótica y anti-proliferativa in vitro de tacrólimus se relaciona con un incremento de estrés del retículo endoplásmico y descenso de los marcadores de autofagia. 2) Los tratamientos inmunosupresores incrementan de forma moderada el estrés oxidativo y nitrosativo intracelular en células de HCC. 3) Los estudios in vivo demuestran un mayor efecto terapéutico de everolimus en comparación con tacrólimus y sirolimus en tumores desarrollados en ratones atímicos.


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CO3

Un estudio transcriptómico revela que el metabolismo oxidativo anti estrés puede explicar gran parte de la resistencia de plantas de soja (Glycine max) al ataque de

chinches (Nezara viridula)

Ivana Sabljic1, Karina Balestrasse1, Jésica Barneto1, Romina Giacometti1, Jorge A. Zavala1, Eduardo A. Pagano1

1Facultad de Agronomía, Universidad de Buenos Aires, INBA (UBA-CONICET), Buenos Aires, AR

Autor de contacto: Eduardo A. Pagano ([email protected])

La soja es uno de los principales cultivos a nivel mundial cuya producción es liderada por Estados Unidos, Brasil y Argentina. En los dos últimos países la chinche verde (Nezara viridula) es la principal plaga animal, para la cual no existe ningún tipo de control mediante transgénesis. Sólo se puede combatir mediante el uso de insecticidas con el consecuente impacto ambiental que esto conlleva. Si bien han sido descritos genotipos resistentes, las bases de esa resistencia no han sido dilucidadas. El objetivo de este trabajo fue analizar los niveles de expresión de los genes que se estimulan o deprimen en respuesta al tratamiento de herbivoría en genotipos contrastantes. Para tal fin, vainas de plantas en estadio R6 de los genotipos IAC-100 (resistente) y Davis (susceptible) fueron puestas en contacto con chinches controlando que el insecto se alimentara durante 10 minutos continuos. A las 24 horas se extrajo el ARN total de las semillas picadas, que fue posteriormente secuenciado en un equipo Illumina HiSeq 1500, previa síntesis a ADNc. Se utilizaron como controles semillas no picadas. La efectividad del tratamiento fue corroborada mediante el análisis de la expresión de genes LOX utilizando PCR en tiempo real. Las semillas del genotipo resistente, si bien fueron picadas, sufrieron un menor daño, lo que demuestra dicha propiedad. El análisis transcriptómico permitió observar que en el genotipo resistente existió una inducción preponderante de la expresión de genes que controlan el daño oxidativo sin afectarse sustancialmente los relacionados con el metabolismo. En cambio, en el genotipo susceptible, si bien existió una respuesta en los genes anti-estrés, se evidenció una mayor inducción de genes relacionados con las vías metabólicas primarias. Paralelamente, fueron medidas las actividades de las enzimas guaiacol peroxidasa (GPOX), catalasa (CAT) y superóxido dismutasa (SOD), y se cuantificó el contenido de H2O2, en semillas sometidas a los mismos tratamientos, luego de 72 horas de producida la herbivoría. También, se comprobó que el genotipo resistente fue más activo que el genotipo susceptible en poner en funcionamiento el metabolismo antioxidante, evidenciando una mayor actividad de todas las enzimas estudiadas y una disminución en el contenido de H2O2.


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CO4

Influence of pO2 on the characteristics of human hepatocarcinoma cells and their response to oxidative stress

Jenifer Trepiana1, Rosaura Navarro1, José Ignacio Ruiz-Sanz1, Mª Begoña Ruiz-Larrea1 1Department of Physiology, Medicine and Nursing School, University of the Basque Country, UPV/EHU,

Leioa.

Autor de contacto: Mª Begoña Ruiz Larrea ([email protected])

The oxygen partial pressure (pO2) at ambient atmosphere is equivalent to 21% oxygen. However, the level of inhaled O2 progressively decreases as it reaches various internal organs and tissues. Thus, under physiological conditions, the pO2 in well-irrigated organs such as lungs, liver and kidneys, ranges from 4 to 14%. Most of the studies using liver cell lines as the biological model have been performed under nonphysiological pO2 conditions (21%). Previous results from our group have demonstrated that a Vismia baccifera aqueous leaf extract induced cytotoxicity and ROS accumulation in human hepatocellular carcinoma HepG2 cells under 21% pO2 (Lizcano et al., Nutrients 2014). The aim of this work was to determine whether pO2 affects a) the tumoral characteristics (growth, steady-state ROS levels, migration and adhesion) of hepatocarcinoma cells, and b) the cell response to oxidants. For this purpose, three hepatoma cell lines with different p53 expression grades, HepG2, Huh7 and Hep3B, were used. Cells were incubated under 21% and 8% pO2 either alone or with V. baccifera leaf extract as the oxidant. Results showed that the cellular proliferation rate and the steady-state levels of mitochondrial O2

- were unaffected by pO2. Reduction in pO2 increased the intracellular basal ROS levels independently of the characteristics of the cell lines. Regarding migration, the highest migration rate was found in HepG2, and the lowest in Hep3B (p<0.001) under both pO2 conditions. The oxygen partial pressure affected differently the migration capacity of the studied cells. Under 8% pO2 the migration rate in Huh7 and Hep3B was lower, while HepG2 showed a higher migration capacity. Cell adhesion was differently affected by pO2 in every of the studied cell lines. Thus, 8% pO2 favoured Huh7 adhesiveness, contrary to the effect in Hep3B. The HepG2 adhesion capacity did not depend on pO2. Despite these differences, the response of hepatocellular carcinoma cell lines to the plant extract were unaffected by the oxygen partial pressure. From the results, we conclude that the stress superimposed conditions in cultures do not modify the response of HepG2, Huh7, and Hep3B to the plant extract.

This work was supported by research grants from the Basque Government (Department of Education, Universities and Research, ref. IT687-13), and University of the Basque Country, UPV/EHU (CLUMBER UFI11/20 and pre-doctoral grant to J.T.). Technical and human support provided by SGIKer (UPV/EHU, MICINN, GV/EJ, ESF) is gratefully acknowledged.


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CO5

Regulation of glial fibrillary acidic protein (GFAP) by oxidative stress and zinc: role

of the type III intermediate filament conserved cysteine residue

Álvaro Viedma-Poyatos1, Dolores Pérez-Sala1

1 Department of Chemical and Physical Biology. Centro de Investigaciones Biológicas, C.S.I.C.

Ramiro de Maeztu, 9, 28040 Madrid, Spain

Autor de contacto: Dolores Pérez-Sala ([email protected]) Glial fibrillary acidic protein (GFAP) is a member of the class III intermediate filament family that is mainly expressed in astrocytes. Under normal conditions, GFAP is involved in cellular homeostasis, being capable of copolymerizing with vimentin. In pathological situations, where oxidative stress and electrophilic lipids are generated, GFAP is involved in astrogliosis and neurodegeneration. We recently reported that the single cysteine residue in vimentin is a critical sensor for oxidative stress. Here we have studied GFAP as a target for modification by electrophilic and oxidant species. We show that GFAP cys294 is targeted by lipoxidation by cyclopentenone prostaglandins, as well as by glutathionylation, in vitro and in cells. Oxidative and electrophilic damage of GFAP filaments in cells leads to a rearrangement that displays differential features depending on the damaging agent and requires the presence of cys294, which is conserved in type III intermediate filaments, including vimentin and desmin. Additionally, we have confirmed the ability of GFAP to homo and heterooligomerize with vimentin in vitro and in cellular models. Importantly, we have observed that GFAP interacts with zinc in vitro. This interaction can lead to GFAP polymerization and protection from modification by electrophiles. Moreover, cellular zinc depletion causes disorganization of GFAP-containing filaments. Taken together, these results show that the function of type III intermediate filaments is regulated by zinc availability and establish the key role of their conserved cysteine residue as a redox sensor and a critical structural element. Funding: SAF2015-68590-R/FEDER


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CO6

Glutathione reductase protects Caenorhabditis elegans against proteotoxic stress

José Antonio Mora-Lorca1, David Guerrero-Gómez1, Antonio Miranda-Vizuete1

1 Instituto de Biomedicina de Sevilla (IBIS), Hospital Universitario Virgen del Rocío/CSIC/Universidad de

Sevilla, 41013 Sevilla, Spain

Autor de contacto: Antonio Miranda-Vizuete ([email protected]) In contrast to mammals, the thioredoxin system is dispensable in the model organism Caenorhabditis elegans as double mutants lacking both cytoplasmic and mitochondrial thioredoxin reductases are fully viable and have no discernable phenotype [1,2]. To test if the glutathione/glutaredoxin system is the main determinant for redox homeostasis in this organism, we have recently characterized the C. elegans gsr-1 gene that encodes both cytoplasmic and mitochondrial isoforms of glutathione reductase. We have found that gsr-1 mutants are sensitized to oxidative stress, have fragmented mitochondria and compromised mitochondrial function, are short-lived and have an aberrant distribution of the interphasic chromatin in the nuclear periphery of the embryonic cells [3]. These data support the notion that the glutathione pathway is the major determinant for redox homeostasis in C. elegans.

Protein aggregation is a major hallmark of many neurodegenerative disorders such as Alzheimer, Parkinson or Huntington Diseases. Proteotoxic stress, generated by aggregation-prone proteins, causes profound perturbations of redox homeostasis in both C. elegans and mammalian models. However, it is not known whether redox homeostasis impacts proteostasis. Interestingly, when the gsr-1 mutation was introduced in worm models of proteotoxicity caused by aggregation-prone proteins, we found that the phenotypes associated to proteostasis maintenance were severely impaired. This protective effect of GSR-1 is independent of the nature of the aggregating protein as well as the tissue where it is expressed. Furthermore, we were able to pharmacologically recapitulate these phenotypes using inhibitors of GSH synthesis, GSSG reduction and GSH depletors, further confirming a protective role of GSH in proteostasis maintenance.

We will present recent data aimed to identify the molecular players and signaling pathways involved in this protective role of GSR-1 and GSH in proteostasis

[1] Stenvall et al. (2011) Selenoprotein TRXR-1 and GSR-1 are essential for removal of the old cuticule during molting in Caenorhabditis elegans. Proc. Nattl. Acad. Sci. USA 108: 1064-1069. [2] Cacho-Valadez et al. (2012) The characterization of the Caenorhabditis elegans mitochondrial thioredoxin system uncovers an unexpected protective role of thioredoxin reductase 2 in β-amyloid peptide toxicity. Antiox. Redox. Signal. 16: 1384-1400. [3] Mora-Lorca et al. (2016) Glutathione reductase gsr-1 is an essential gene required for Caenorhabditis elegans early embryonic development. Free Radic. Biol. Med. 96: 446-461.


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CO7 Acute hypoxia produces a superoxide signal through oxygen sensing by mitochondrial

complex I and sodium/calcium exchange via NCLX

Pablo Hernansanz-Agustín1,2, Elena Ramos1, Tamara Villa-Piña1, Elisa Navarro3, Esther Parada3, Laura Moreno4,5, Alicia Izquierdo-Álvarez1, Nuria Sánchez-López1,6, Laura

Peláez-Aguado6, Daniel Tello7, Izaskun Buendia3, Anabel Marina6, Ángel Cogolludo4,5, Javier Egea3, Manuela G. López3, Anna Bogdanova8, Antonio Martínez-Ruiz1

1 Servicio de Inmunología, Hospital Universitario de La Princesa, Instituto de Investigación Sanitaria

Princesa (IP), E-28006 Madrid, Spain. 2 Departamento de Bioquímica, Facultad de Medicina, Universidad Autónoma de Madrid (UAM) and

Instituto de Investigaciones Biomédicas Alberto Sols, E-28029 Madrid, Spain 3Instituto Teófilo Hernando, Departamento de Farmacología y Terapéutica, Facultad de Medicina,

Universidad Autónoma de Madrid (UAM), Instituto de Investigación Sanitaria Princesa (IP), E-28029 Madrid, Spain

4 Departamento de Farmacología, Facultad de Medicina, Universidad Complutense de Madrid, Instituto de Investigación Sanitaria Gregorio Marañón (IISGM), E-28040 Madrid, Spain

5 Centro de Investigaciones Biomédicas en Red de Enfermedades Respiratorias (CIBERES), Spain 6 Servicio de Proteómica, Centro de Biología Molecular “Severo Ochoa (CBSMO), Consejo Superior de

Investigaciones Científicas (CSIC) – UAM, E-28049 Madrid, Spain 7 Unidad de Investigación, Hospital Santa Cristina, Universidad Autónoma de Madrid (UAM), Instituto de

Investigación Sanitaria Princesa (IP), E-28009 Madrid, Spain 8 Institute of Veterinary Physiology, Vetsuisse Faculty and Zurich Center for Integrative Human Physiology

(ZIHP), University of Zurich, CH-8057 Zurich, Switzerland.

Autor de contacto: Antonio Martínez-Ruiz ([email protected]) Oxygen is a key molecule of aerobic life, but can give rise to reactive oxygen species (ROS) as metabolic byproducts of oxidative phosphorylation. Acute hypoxia produces a superoxide burst, which can signal downstream cell adaptations. Here we show that hypoxia triggers acute deactivation of mitochondrial complex I, changing its catalytic activity from an oxidoreductase to a Na+/H+ antiporter. The subsequent stimulation of mitochondrial Na+/Ca2+ exchanger (NCLX) activity promotes mitochondrial depolarization and superoxide production and underlies the participation of both complex I and NCLX in acute oxygen sensing. NCLX inhibition is associated with the suppression of downstream ROS-driven responses to hypoxia such as hypoxic pulmonary vasoconstriction, HIF-1α stabilization and ischemic brain damage in vivo. These results provide biological explanations for superoxide production in acute hypoxia and highlight complex I and NCLX as potential therapeutic targets in diseases involving mitochondrial ROS signalling, hypoxia and oxidative stress.


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CO8 Emerging markers of oxidative stress in APP/PS1 mice as Alzheimer’s Disease model

Raquel G. Bardallo1, Teresa Carbonell1, Norma Alva1, Miren Ettcheto2,3, Dmitry Petrov2,3,

Antoni Camins2,3

1 Departamento de Biología Celular, Fisiología e Inmunología, Facultad de Biología, Universidad de Barcelona 2 Unidad de Farmacología y Farmacognosia, Facultad de Farmacia, Universidad de Barcelona 3Biomedical Research Networking Center in Neurodegenerative Diseases (CIBERNED), Madrid, Spain Alzheimer’s disease (AD), the most common type of dementia, is a neurodegenerative disorder associated with brain disease. Recent studies show the involvement of obesity and, in particular, of the insulin signalling in cognitive decline, such as AD (Petrov et al. 2015). Oxygen reactive species has been implicated in AD pathogenesis and represent the biological basis for the “oxidative stress hypothesis”. In the present study, we evaluated the effect of disease manifestation and a high-fat diet administration (HFD) in APPswe/PS1 dE9 mice (APP/PS1) at age 6 months versus 3 months, a well-stablished mouse model of familial AD, and C57/MI6 Wild-type mice aged 3 and 6 months in oxidative stress parameters. We analyse its effects on biomolecules affected (TBARS and AOPP), antioxidant enzymes (SOD and GSH-Reductase), antioxidant response (GSH) and biomolecules affected (HSP70) as oxidative stress markers in male mice. Outcomes showed non-significant differences between WT mice and 3 months APP mice. This can be explained because the transgenic mice do not show disease up to 6 months, coinciding with a significant increase in TBARS. As well as, there’s a significant increase in enzymes activity (SOD and GSH-Reductase), meanwhile GSH is decreased in transgenic mice. Decreased GSH levels correlated with lower cognitive ability (Mandal et al. 2015), such as in AD. In addition, declined GSH is delivered in HF-fed APP/PS1 mice. Activation of antioxidant response against oxidative stress can explain this results, which relates with higher expression of HSP70. In fact, recent studies focus on HSP70 against AD for its activating response against stress (Repalli and Meruelo 2015). Finally, two therapies to improve cognitive loss could be effective: focalize on antioxidant therapies against AD and control over diets and lipid metabolism. Mandal, Pravat K, Sumiti Saharan, Manjari Tripathi, and Geetanjali Murari. 2015.

Biological Psychiatry 78 (10): 702–10. Petrov, Dmitry, Ignacio Pedrós, Gonzalo Artiach, Francesc X. Sureda, Emma Barroso,

Mercè Pallàs, Gemma Casadesús, et al. 2015. 1852 (9). Elsevier: 1687–99. Repalli, Jayanthi, and Daniel Meruelo. 2015. Drug Design, Development and Therapy 9

(January): 321–31.


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CO9

Regulation of the antioxidant defense in the liver by p38α and NF-κB

Sergio Rius-Pérez1, Salvador Pérez1, Ana-Martínez Tormos1, Raquel Taléns-Visconti2, Juan Sastre1

1 Department of Physiology, University of Valencia, Faculty of Pharmacy, Burjasot, Valencia, Spain.

2Department of Pharmacy and Pharmaceutical Technology, University of Valencia, Faculty of Pharmacy, Burjasot, Valencia, Spain

Autor de contacto: Juan Sastre ([email protected])

p38α MAPK is a sensor of oxidative cell status. The aim of this work was to assess the role of p38α in the regulation of the antioxidant defense during development and aging of the liver. To this end, wild-type (WT) and p38α liver specific knock-out (KO) mice of three different ages [after weaning, young (4-6 month-old) and old (26 months-old)] were used to determine the gene expression of antioxidant enzymes glutathione peroxidase (Gpx), catalase, glutamate cysteine ligase (Gclc), Cu-Zn superoxide dismutase (CuZnSOD) and MnSOD by RT-PCR. In addition, we measured nuclear levels of Nrf-2 and PGC-1α as well as activation of NF-κB by western-blotting. GSSG/GSH ratio in the liver of p38α KO mice after weaning did not change when compared with WT mice after weaning, whereas liver of p38α KO young mice showed higher GSSG/GSH ratio than young WT mice. However, old p38α KO mice showed lower GSSG/GSH ratio than WT animals. The mRNA expression of Gpx, catalase, Gclc, Cu-ZnSOD and MnSOD did not change after weaning between KO and WT mice. Nevertheless, mRNA expression of these antioxidant enzymes was decreased in young KO mice compared with WT young mice. In contrast, these antioxidant enzymes were up-regulated in p38α KO old mice when compared with p38α WT old mice. Nuclear levels of PGC-1α nor Nrf-2 did not change between young KO and WT. p65 subunit of NF-κB was markeldy phosphorylated in nuclear extracts of WT young mice in comparison with KO young mice. In contrast, p38α KO old mice exhibited higher phosphorylation of nuclear p65 in comparison with WT old mice. In conclusion, deficiency of p38α in the liver abrogates the up-regulation of antioxidant enzymes via NF-κB in young mice, but paradoxically triggers a compensatory mechanism in the long term to induce the antioxidant defense in old mice that diminishes glutathione oxidation.


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CO10

El contenido fenólico del vino dulce Pedro Ximénez aumenta la supervivencia de levaduras sometidas a estrés oxidativo y mejora de los marcadores asociados al

proteoma redox hepático en ratones de avanzada edad

Nieves López de Lerma1, Esther Donoso-Contreras2, José Peinado2 Nieves Abril2, Rafael A. Peinado1

1Departamento de Química Agrícola y Edafología. Edificio Marie Curie.

2Departamento de Bioquímica y Biología Molecular. Edificio Severo Ochoa. 1,2Campus de Rabanales. Universidad de Córdoba.

Autor de contacto: Rafael Peinado ([email protected])

Las levaduras en fase de crecimiento exponencial son sensibles al peróxido de hidrógeno debido a la permeabilidad de sus membranas plasmáticas a esta sustancia, afectando a su supervivencia. Para evaluar el efecto protector frente a esta toxicidad de derivados de vino dulce Pedro Ximénez, se expusieron levaduras S. cerevisiae MMML44 a condiciones de estrés oxidativo en presencia de peróxido de hidrógeno. Las levaduras se incubaron con diversas fracciones fenólicas procedentes del vino. Se uso un control positivo con catequina y un control negativo al que no se añadió ningún polifenol. Se encontró una mayor supervivencia en el caso de las levaduras incubadas con la fracción de flavonoles y procianidinas, lo que indica un efecto protector de estos derivados.

Para comprobar si se observaba un efecto similar, que podría paliar la degeneración celular asociada el envejecimiento, en mamíferos, se utilizaron ratones Mus spretus SPRET/EiJ de 22 meses (ancianos), a los que se suministró en el agua vino dulce Pedro Ximénez previamente desalcoholizado hasta tener una concentración de polifenoles de 83 mg/L (ingesta diaria estimada de 500 µg) . Como grupo control se usaron ratones de la misma edad a los que dio agua conteniendo la misma cantidad de azúcar. Los análisis bioquímicos de sangre mostraron un descenso en los niveles séricos de colesterol, de triacilglicéridos y de fosfatasa alcalina. El análisis histológico de los animales tratados mostró áreas de tejido regenerado, con hepatocitos de aspecto y arquitectura más similar a las de ratones jóvenes (2 meses). Se detectó asimismo una recuperación de los niveles de transcritos de enzimas destoxificantes (i.e., citocromos P450), que se asimilaron a los cuantificados en los animales jóvenes, lo que probablemente ayuda a mantener la función hepática a los ratones de mayor edad. Los análisis del proteoma redox hepático mostraron mayor densidad total de proteínas reversiblemente oxidadas en el grupo control que en el grupo experimental. El análisis 2_DE señaló alrededor de 60 spots proteicos con diferencias significativas en la oxidación de los tioles, de los cuales 40 mostraron menor nivel de oxidación, indicando un alivio en las condiciones de estrés oxidativo asociado al envejecimiento hepático.


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CO11 Diets supplemented with oxytetracyline and rutin changes biochemical parameters in

silver catfish (Rhamdia quelen)

Maria A. Pavanato1, Érika P. Londero1, Tanise S. Pês1, Etiane M. H. Saccol1, Bernardo Baldisserotto1

1 Department of Physiology and Pharmacology, Federal University of Santa Maria, Roraime Avenue, 1000,

Santa Maria, Brazil

E-mail: Maria A. Pavanato ([email protected]) Antibiotics have been used in aquaculture, especially oxytetracycline (OTC), which has advantages in efficiency and economy. However, antibiotics can lead to development of antimicrobial resistance and environmental problems. Thus, it is necessary to search natural alternatives for production. The flavonoid rutin has antioxidant, anti-inflammatory and antibacterial properties. Antioxidants incorporated in the diet of fish may be a natural alternative to minimize problems in farming. Objective: effect of diets supplemented with OTC and rutin on biochemical parameters in silver catfish were investigated. The animals were divided in 4 groups (n = 10) and fed with different diets: i) control; ii) rutin; iii) OTC; iv) OTC+rutin. After 14 days, blood was collected for analysis of aspartate aminotransferase (AST) and alanine aminotransferase (ALT). Fish were euthanized and liver, kidney and gills were removed for biochemical analysis: protein carbonyls (PC) and thiobarbituric acid reactive substances (TBARS); glutathione-S-transferase (GST) and catalase (CAT) activities; non-protein thiols (NPSH) and ascorbic acid (AA). Results: OTC diet increases plasma levels of ALT compared to control. TBARS and PC hepatic levels were higher in OTC and OTC+rutin diets than in control. In kidney, PC was lower in the rutin diet and higher in OTC and OTC+rutin diets, and TBARS levels were higher in OTC diet. In gills, all parameters were higher in OTC diet compared to control. GST activity was lower in OTC diet in all tissues and in OTC+rutin diet in gills. CAT activity was lower in OTC and OTC+rutin diets in liver, in OTC diet in kidney, and in rutin and OTC+rutin diets in gills. AA levels were lower in OTC and OTC+rutin diets. In gills, AA levels were lower in OTC diet compared to all diets, and higher in the OTC+rutin diet than in the control. NPSH hepatic levels were higher in rutin diet and lower in OTC diet, compared to control. This parameter was lower in kidney in OTC and OTC+rutin diets, and higher in gills in the rutin diet, compared to control. Thus, the addition of rutin to the diet of fish is recommended because it decreases LPO and increases the tissue antioxidant response.


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CO12

El glutatión es cooperante en la actividad tiorredoxina peroxidasa de la peroxiredoxina tipo 1-Cys de levadura

José R. Pedrajas1,2, Brian McDonagh3, Francisco Hernández-Torres2, Antonio Miranda-

Vizuete4, Raúl González4, Emilia Martínez-Galisteo5, C. Alicia Padilla5, J. Antonio Bárcena5

1 Grupo Bioquímica y Señalización Celular, 2 Dpto. Biología Experimental, Universidad de Jaén, Paraje las

Lagunillas s/n, 23071 Jaén. 3 Institute of Ageing and Chronic Disease, University of Liverpool

4 Instituto de Biomedicina de Sevilla (IBIS) 5 Dpto. Bioquímica y Biología Molecular, Universidad de Córdoba, e Instituto Maimónides de Investigación

Biomédica de Córdoba (IMIBIC)

Autor de contacto: José Rafael Pedrajas ([email protected]) Este estudio ha demostrado una novedosa acción antioxidante del glutatión reducido (GSH) como colaborador en el mecanismo catalítico de una peroxirredoxina sin que su estado reducido resulte modificado en el proceso. La peroxirredoxina mitocondrial de Saccharomyces cerevisiae, Prx1p, es una peroxirredoxina de tipo 1-Cys que contiene solo un residuo de cisteína, la peroxidática (Cys91). GSH y Prx1p forman un disulfuro mixto cuando Cys91 se sulfenila (Cys-SOH) por el sustrato peróxido. El sistema tiorredoxina mitocondrial (NADPH/Trx3p/Trr2p) deshace este disulfuro mixto, quedando Cys91 reducida y lista para un nuevo ciclo catalítico. El GSH no resulta oxidado en el proceso, por lo que no actúa como un antioxidante sensu stricto. Otra conclusión es que una tiorredoxina tiene actividad desglutationilante, contradiciendo del canon establecido. Por otro lado, el GSH no es imprescindible para la actividad tiorredoxina peroxidasa de Prx1p, ya que la Cys91 sulfenilada de una molécula Prx1p puede reaccionar con el grupo sulfuro de la Cys91 de otra Prx1p. Por tanto, se evidencia por vez primera la formación de un puente disulfuro entre dos cisteínas peroxidáticas, que puede ser también resuelto por la tiorredoxina Trx3p.

Dada la ubicuidad del GSH, este mecanismo podría tener validez universal para otras peroxirredoxinas de tipo 1-Cys-Prx, existentes también en humanos (PRDX6), en el marco de la defensa antioxidante, pero también en el contexto de la regulación de la función proteica por modificación redox de cisteínas. La operatividad de este mecanismo puede tener repercusión en el contexto de enfermedades debidas a disfunción mitocondrial causada por una agresión oxidativa, desde el cáncer hasta las enfermedades neurodegenerativas. Pedrajas JR et al., 2016. Antioxid. Redox Signal. 24:115-28


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CO13

2-Cys Peroxiredoxins control chloroplast redox homeostasis in Arabidopsis thaliana

Juan Manuel Pérez-Ruiz, Belén Naranjo, Valle Ojeda, Francisco Javier Cejudo* Instituto de Bioquímica Vegetal y Fotosíntesis, Universidad de Sevilla and CSIC, Avda Américo Vespucio 49,

41092-Sevilla

Autor de contacto: Francisco Javier Cejudo ([email protected]) Photosynthesis inevitably produces reactive oxygen species (ROS), which can cause oxidative damage but have also an important signalling function. To balance the toxic and signalling activities of ROS, chloroplasts harbour different antioxidant systems including 2-Cys peroxiredoxins (Prxs), which are efficiently reduced by NADPH-dependent thioredoxin reductase C (NTRC). In this work we have analysed the genetic interaction of NTRC and 2-Cys Prxs by the study of Arabidopsis thaliana mutants simultaneously deficient in both enzymes. Strikingly, the deficiency of 2-Cys Prxs suppressed the phenotype caused by the lack of NTRC. Moreover, overexpression of 2-Cys Prxs in the ntrc mutant background aggravated the ntrc phenotype, indicating a dose-dependent suppressor effect of 2-Cys Prxs. The ntrc-trxf1f2 triple mutant, simultaneously devoid of NTRC and f-type thioredoxins (Trxs), shows severe impairment of chloroplast redox homeostasis and a dramatic growth inhibition phenotype, which were also suppressed by decreased levels of 2-Cys Prxs, in the ntrc-trxf1f2-Δ2cp quintuple mutant. These results uncover the key function of 2-Cys Prxs in maintaining chloroplast redox homeostasis.


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CO14 Utilización del biosensor HyPer para monitorizar el flujo intracelular de peróxido de

hidrógeno en células de músculo esquelético

Jorge de Andrés1, Lorena Rodríguez1, Lucía Méndez3, Manuel A Sánchez-Martín2,3,5, Jesús Palomero1,4,5

1 Departamento de Fisiología y Farmacología. 2 Departamento de Medicina. 3 Servicio de Transgénesis.

4Instituto de Neurociencias de Castilla y León (INCYL). 5 Instituto de Investigación Biomédica de Salamanca (IBSAL). Universidad de Salamanca.

Facultad de Medicina. Campus Miguel de Unamuno. Av. Alfonso X El Sabio, s/n. 37007 - Salamanca.

Autor de contacto: Jesús Palomero ([email protected])

El peróxido de hidrógeno (H2O2) es una de las Especies Reactivas del Oxígeno (ROS) que parece desempeñar un papel esencial en numerosos procesos fisiopatológicos, en los que podría actuar como modulador en diferentes vías de señalización celular que son cruciales. Sin embargo, identificar la localización y cuantificar el flujo de H2O2 en células del organismo es virtualmente imposible con la metodología tradicional.

El objetivo de nuestro trabajo es implementar y desarrollar una estrategia metodológica que se fundamenta en la utilización del biosensor de peróxido de hidrógeno HyPer en células de músculo esquelético: mioblastos y miotúbulos de la línea celular C2C12, y potencialmente fibras musculares individuales aisladas del músculo Flexor Digitorum Brevis de ratón. La expresión del biosensor HyPer en las células junto con el análisis de imagen de microscopía de fluorescencia en célula viva nos permitirá monitorizar el flujo intracelular de H2O2 in situ y en tiempo real.

La síntesis del biosensor HyPer se realiza a nivel intracelular en las células en las que actuará como biosensor, y para esto es necesario incorporar previamente a las células la secuencia codificante de HyPer, que está inserta en un vector de clonación (pHyPer-cyto, Evrogen). Para lo cual, utilizamos técnicas de transfección con agentes químicos (JetPEI®, Polyplus transfection™ y Viromer® RED, Lypocalyx). Análizamos las imagenes de microscopía de fluorescencia en célula viva para comprobar tanto la expresión como la funcionalidad de HyPer como biosensor de H2O2. Así, monitorizamos la fluorescencia emitida por las células que expresaban HyPer durante un periodo experimental en el que estas se mantenían expuestas al peróxido de hidrógeno extracelular en el medio o expuestas a un agente reductor, ditiotreitol (DTT).

Los resultados indican que i) es posible la transfección y expresión intracelular del biosensor de H2O2 HyPer en mioblastos y mitúbulos C2C12, y ii) el biosensor HyPer es funcional y detecta los cambios en la concentración intracelular de peróxido de hidrógeno.

Concluimos que utilizando técnicas de transfección química, podemos incorporar el biosensor HyPer en células de músculo esquelético y además se puede monitorizar, in situ y en tiempo real, el flujo intracelular de H2O2 en estas células.


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CO15

PGC-1α downregulation in the steatotic liver enhances ischemia-reperfusion injury and impairs ischemic preconditioning

Cristina Sánchez-Ramos1, Alberto Tierrez2, Javier Laso2, Ramon Bartrons3, Joan Roselló-

Catafau4, María Monsalve1

1Instituto de Investigaciones Biomédicas “Alberto Sols” (CSIC-UAM). Arturo Duperier 4. 28029-Madrid

(Spain). 2Fundación Centro Nacional de Investigaciones Cardiovasculares Carlos III (CNIC). Melchor Fernández

Almagro 3, 28029-Madrid (Spain). 3Unitat de Bioquímica i Biologia Molecular, Departament de Ciències Fisiològiques, Campus de Bellvitge,

IDIBELL-Universitat de Barcelona. Feixa Llarga, s/n. 08907-Hospitalet (Spain) 4Experimental Hepatic Ischemia–Reperfusion Unit, Institut d´Investigacions Biomèdiques de Barcelona

(CSIC). Rosselló 161, 08036-Barcelona (Spain).

Autor de contacto: [email protected] Liver steatosis is associated with mitochondrial dysfunction, elevated ROS levels and a enhanced sensitivity of ischemia-reperfusion (IR) injury and a very limited response to preconditioning protocols. In this study we aimed to determine if the downregulation in the steatotic liver of peroxisome proliferator activated receptor γ co-activator 1α (PGC-1α), a master regulator of mitochondrial metabolism and reactive oxygen species (ROS), that is known to play a relevant role in liver metabolic control, could be responsible for the sensitivity of the steatotic liver to ischemic damage. We found that PGC-1α is induced in the normal liver, following an IR protocol and this induction correlates with increased levels of antioxidant proteins. This induction is severely curtailed in the steatotic liver, and results in a limited induction of antioxidant proteins. PGC-1α-/- mice under chow diet do not have steatotic livers, but show an enhanced sensitivity to IR injury and a lack of response to ischemic preconditioning, that recapitulates the behaviour of the steatotic liver in terms of liver damage, although the inflammatory response differers between both models. We used an in vitro model to analyze how PGC-1α expression is regulated by changing O2 tensions, and found that hypoxia (1% O2) downregulates PGC-1α while reoxygenation (3% O2) induces it, and is responsible for the recovery of antioxidant gene expression following the ischemic period. Conclusion: PGC-1α plays an important role in the protection against IR injury in the liver that is likely associated with its capacity to induce antioxidant gene expression.


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CO16

Impaired mitochondrial fusion and fission in leukocytes of type 2 diabetic patients: role of glycemic control

Noelia Díaz-Morales1, Susana Rovira-Llopis1, Irene Escribano-Lopez1, Arantxa Martínez de Marañón1, Celia Bañuls1, Sandra López-Domenech1, Francesca Iannantuoni, Carmen

Ramírez1, Rosa Falcón1, Antonio Hernández-Mijares1, Milagros Rocha1, Víctor M Víctor1,2

1 Service of Endocrinology, University Hospital Doctor Peset, Foundation for the Promotion of Health and

Biomedical Research in the Valencian Region (FISABIO), Valencia, Spain. 2 Department of Physiology, University of Valencia, Valencia, Spain

Autor de contacto: Noelia Díaz-Morales ([email protected])

Mitochondrial fusion/fission alterations have been evaluated in different tissues of type 2 diabetic (T2D) patients. However, it is not known whether mitochondrial dynamics is disturbed in the leukocytes of T2D patients and whether glycemic control affects its regulation. 91 T2D patients and 78 control subjects were enrolled in the study. Diabetic patients were separated according to glycated haemoglobin (HbA1c) levels below and above 6.5% (48 with HbA1c <6.5% and 43 with HbA1c >6.5%). We evaluated anthropometric and metabolic parameters, leukocyte ROS production (fluorescence microscopy), leukocyte oxygen consumption (Clark-type O2 electrode), mitochondrial fusion and fission (Western blotting) and leukocyte-endothelial interactions (parallel plate flow chamber in vitro model). Anthropometric and metabolic parameters in T2D patients were characteristic of the disease, when compared to control subjects. Interestingly, T2D patients with poor glycemic control (HbA1c >6.5%) showed increased glucose and insulin levels with respect to well-controlled T2D patients (HbA1c <6.5%), and therefore, higher homeostasis model assessment of insulin resistance index (HOMA-IR). We observed increased ROS production in leukocytes from diabetic patients, together with a reduced mitochondrial oxygen consumption rate, especially in poorly controlled patients. Mitochondrial fusion was reduced and fission was increased in diabetic patients, and both features were accentuated in patients with poor glycemic control. In addition, we observed a decrease in leukocyte rolling velocity and an increase in leukocyte rolling flux and adhesion in T2D patients. Furthermore, leukocyte rolling flux rose in parallel to HbA1c levels. The induction of leukocyte-endothelial interactions in diabetic patients was related to a reduced mitochondrial fusion and higher mitochondrial fission. Our findings suggest that mitochondrial dynamics could be influenced by glycemic control in leukocytes of diabetic patients, in which there is decreased mitochondrial fusion and elevated fission related to enhanced leukocyte-endothelial interactions. These findings lead to the hypothesis that poor glycemic control during T2D may alter mitochondrial dynamics, and could eventually promote leukocyte-endothelial interactions and the onset of cardiovascular diseases. Este estudio ha sido financiado por PI13/1025, PI15/1424, PI13/0073, UGP-15-193 y por el Fondo Europeo de Desarrollo Regional (ERDF “A way to build Europe”).


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CO17 Regulación redox de tioles proteicos mediante tiorredoxina y/o glutarredoxina en una

línea celular de hepatocarcinoma que sobreexpresa NO sintasa-3 (NOS3)

María José López-Grueso1, Raúl González

2, Carlos A. Fuentes-Almagro

3, Jordi Muntané

2,

J. Antonio Bárcena1, C. Alicia Padilla

1

1Dpto. Bioquímica y Biología Molecular e IMIBIC. Universidad de Córdoba, Córdoba, ES, 2Dpto. Cirugía

General, Hospital Universitario Virgen del Rocío. IBIS. Universidad de Sevilla, Sevilla, ES, 3Unidad de

Proteómica, SCAI. Universidad de Córdoba, Córdoba, ES.

Autor de contacto: C. Alicia Padilla ([email protected])

Los efectos del óxido nítrico (NO) en vías de señalización se deben en su mayor parte a la modificación por S- nitrosilación de restos de cisteína estructural y funcionalmente importantes en proteínas clave. La reversión de estas modificaciones postraduccionales mediante la eliminación del nitrosotiol es necesaria para que este proceso tenga una implicación en regulación redox. La Tiorredoxina (Trx) y la Glutarredoxina (Grx) son los principales sistemas celulares para el control del estado redox cisteínico habiéndose demostrado actividad desnitrosilasa para la Trx. El objetivo de este estudio es definir el papel de Trx y Grx en la homeostasis redox tiólica y sus proteínas diana en condiciones nitrosilantes. Para ello, se han silenciado Trx1 y Grx1 con siRNA específicos en células HepG2 que sobreexpresan NO Sintasa-3 (NOS3) y se han determinado cuantitativamente los proteomas global (Progenesis QIp) y redox tiólico (MRM-Skyline) diferenciales. Se ha aplicado la técnica de “Biotin Switch” para comprobar que los cambios redox se deben a S-nirosilación. La sobreexpresión de NOS3 provoca muchos cambios a nivel del proteoma global. A nivel de proteoma redox, se han asignado valores de la relación “Cys reducida/Cys oxidada” para cada péptido cisteínico identificado. Así se han determinado dianas de la actividad desnitrosilasa de Trx1. La propia Trx1 se encuentra nitrosilada en su Cys73. Sorprendentemente, algunas Cys están menos oxidadas cuando la Trx1 está silenciada, indicando que posiblemente son sustratos de la actividad transnitrosilasa de Trx1. Estas actividades contrapuestas de Trx son conocidas, pero hasta ahora nunca se había descrito su funcionamiento simultáneo en las mismas condiciones celulares. Por tanto, la Trx1 se suma a la familia de enzimas bifuncionales que posee dos sitios activos con actividades catalíticas opuestas: el sitio activo con el ditiol Cys32- Cys35 funciona con actividad antioxidante eliminando nitrosotioles proteicos mientras que simultáneamente el sitio activo de la Cys73 actúa como un oxidante transfiriendo un grupo nitroso a otros sustratos cisteínicos.


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CO18

Regulación del óxido nítrico por las hemoglobinas de plantas

Laura Calvo-Begueria, María Carmen Rubio, Manuel A. Matamoros, Carmen Pérez-Rontomé, Manuel Becana

Departamento de Nutrición Vegetal, Estación Experimental de Aula Dei, Consejo Superior de

Investigaciones Científicas, Apartado 13034, 50080 Zaragoza.

Autor de contacto: Manuel Becana ([email protected])

Las hemoglobinas (Hbs) vegetales se clasifican en tres clases según su filogenia y propiedades bioquímicas. Las Hbs de clase 1 tienen una afinidad extrema por el O2 y son inducibles por hipoxia y óxido nítrico (NO). Sus funciones incluyen regular la concentración de NO y mantener el estado energético de las células en hipoxia. Estas funciones se atribuyen a la actividad NO dioxigenasa (NOD) de la proteína en su forma oxiferrosa, que reacciona con el NO generando nitrato y la forma férrica de la proteína: NO + Hb2+O2 --> NO3

- + Hb3+. Las Hbs de clase 2 tienen una afinidad moderada por O2 y son inducidas por citoquininas y estrés por frío, pero no por hipoxia. Las Hbs de clase 3 tienen una baja afinidad por O2 y son homólogas a las Hbs truncadas de procariotas. Las funciones de las Hbs de clases 2 y 3 no están todavía bien definidas. En nuestro laboratorio hemos purificado y caracterizado las tres clases de Hbs de la leguminosa modelo Lotus japonicus. En esta especie se expresan dos Hbs de clase 1 (LjGlb1-1 y LjGlb1-2), una de clase 2 (LjGlb2) y dos de clase 3 (LjGlb3-1 y LjGlb3-2). Las cinco proteínas tienen actividad NOD in vitro utilizando dietilamina-NONOato o S-nitrosoglutatión como donadores de NO. La forma Hb3+ de las proteínas no posee actividad NOD ni es capaz de eliminar NO significativamente por S-nitrosilación de las Cys. Hemos producido por mutagenésis dirigida todas las posibles mutantes simples de las proteínas: LjGlb1-1 (C8S, C78S), LjGlb1-2 (C79S), LjGlb2 (C65S), LjGlb3-1 (C159S, C166S) y LjGlb3-2 (C159S). Las proteínas no mutadas y mutadas con Cys libres pueden ser nitrosiladas in vitro y muestran una actividad NOD similar. Estos resultados indican que la actividad NOD es una característica intrínseca de los grupos hemo e independiente del estado de S-nitrosilación de las proteínas. Finalmente, para determinar si el NO puede interaccionar con las Hbs in vivo a través de la actividad NOD y/o por S-nitrosilación, hemos llevado a cabo experimentos con plantas transgénicas de Arabidopsis thaliana deficientes en la única Hb de clase 1 (AtGlb1) de esta planta modelo. Los resultados indican que AtGlb1 puede nitrosilarse y elimina NO en las células de las hojas. Concluimos que las Hbs in vivo pueden regular la concentración de NO por medio de su actividad NOD y proponemos que la S-nitrosilación tiene una función señalizadora, coherente con su localización principal en los núcleos de las células vegetales. Agradecimientos - L.C.-B. es contratada FPI (BES-2012-059174). Este trabajo ha sido financiado por el proyecto AGL2014-53717-R del MINECO, cofinanciado con fondos FEDER.


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CO19

EPR: a tool to characterize Reactive Oxygen Species now made simpler

Manuela Liberi1

1Bruker Italia, Viale lancetti, 43; 20158 Milano, Italy

Autor de contacto: M. Liberi ([email protected])

The huge complexity of the free-radical processes in living systems makes necessary an analysis from a fundamental point of view. Electronic Paramagnetic Resonance (ESR or EPR) is a very valuable tool to characterize, recognize and quantify Reactive Oxygen Species. In the recent years, big efforts have been done in improving the ease of use of EPR systems, to disclose the power of EPR spectroscopy in identifying and monitoring reactions rates of free radical reactions in many fields of study. In particular, new software solutions have been developed, that allow easier and reliable data acquisition and support users in data interpretation. Also researchers with limited EPR experience will appreciate how EPR can now be used effectively for mechanistic studies and kinetic analysis of multiple radicals (ROS and RNS). Properly controlled spin probe or spin trap experiments can verify that the formation of radical adducts is due to free radical production in the reaction system under study. For example, by using the spin trap PTIO, the nitric oxide produced in plants can be monitored and quantified by EPR spectroscopy.



GRANADA

RESÚMENES

Pósters (P1-P37)

XI Reunión del GERILI, Granada Pósters

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P1

Identificación de redoxinas y sus secuencias regulatorias potenciales en los tejidos reproductivos del olivo (Olea europaea L.)

Ana Alcaina1, José Ángel Traverso1,2, Amada Pulido3, Juan de Dios Alché1

1 Departamento de Bioquímica, Biología Celular y Molecular de Plantas, Estación Experimental del Zaidín,

Consejo Superior de Investigaciones Científicas, C/Profesor Albareda 1, 18008 Granada. 2 Departamento de Biología Celular. Universidad de Granada, Facultad de Ciencias, Avda. de Fuentenueva

s/n, 18071 Granada. 3 Departamento de Fisiología Vegetal. Universidad de Granada, Facultad de Ciencias, Avda. de Fuentenueva

s/n, 18071 Granada.

Autor de contacto: Juan de Dios Alché ([email protected]) La tioredoxinas (TRXs) y las glutaredoxinas (GRXs) han sido sugeridas como proteínas clave en la reproducción sexual de las plantas, en particular las TRXs de tipo h y las GRXs del grupo I (Traverso et al., Frontiers Plant Sci 2014, 4(465),222). Una revisión del transcriptoma reproductivo del olivo (http://reprolive.eez.csic.es/) permitió identificar numerosas secuencias de TRXs y GRXs, que se encuentran expresadas en el polen del olivo y sus gineceos a lo largo de diferentes estadios del desarrollo. Cuatro secuencias de TRXs (OeTrxh1, h2, h3, h9) y dos secuencias de GRXs (OeGRXC2_1 y OeGRX2_2) fueron seleccionadas para análisis adicionales. Se llevó a cabo una validación de los datos transcriptómicos disponibles para esas secuencias mediante clonación y secuenciación de productos de RT-PCR, que fueron obtenidos tras el diseño de oligonucleótidos sobre la base del ensamblaje del transcriptoma. Los resultados confirmaron la presencia de los transcritos mencionados en los tejidos reproductivos del olivo. A partir de las secuencias validadas, se generaron árboles filogenéticos de forma conjunta con las secuencias de TRXs y GRXs de Arabidopsis thaliana disponibles en bases de datos públicas. A continuación, se generaron estructuras 3-D de las mencionadas redoxinas, mediante modelado por homología. Finalmente, se utilizó la técnica de “PCR walking” con objeto de obtener secuencias por encima de los extremos 5’codificantes de Oetrxh1 and Oetrxh3. El análisis in silico de dichas secuencias permitió identificar varias cajas reguladoras similares a las descritas para otras proteínas implicadas en funciones redox. This work was supported by ERDF co-funded grants BFU2011-22779 and RTC-2015-4181-2 (MINECO), P2011-CVI-7487 (Junta de Andalucía) and 201540E065 (CSIC).


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P2

Modificaciones de las propiedades antioxidantes del aceite de oliva virgen extra durante el proceso de digestión. Relación con el contenido de clorofilas y carotenoides

Thays H. Borges, Ascensión Rueda, Isabel Seiquer

Departamento de Fisiología y Bioquímica de la Nutrición Animal, Experimental del Zaidín, Consejo Superior de Investigaciones Científicas, Camino del Jueves, 18100, Armilla, Granada

Autor de contacto: Isabel Seiquer ([email protected])

Es de sobra conocido que el aceite de oliva virgen extra (AOVE) se caracteriza por su alto contenido en compuestos bioactivos y por sus propiedades antioxidantes, que suponen un beneficio para la salud. Ahora bien, para que un compuesto bioactivo ejerza una actividad beneficiosa in vivo, es necesario que sea absorbido, lo cual dependerá de su liberación de la matriz alimentaria durante el proceso de digestión, es decir, de su disponibilidad. De igual manera, la capacidad antioxidante de un aceite en el organismo, será proporcional al mantenimiento de sus propiedades durante el proceso de digestión, ya que podrían verse afectadas por el ataque enzimático, los cambios de pH o la temperatura. Dichas propiedades, además, pueden estar relacionadas con la presencia de compuestos como polifenoles, clorofilas o carotenoides. En este trabajo nos propusimos evaluar la capacidad antioxidante, el contenido en polifenoles totales (PFT) y los niveles de pigmentos en AOVE de la variedad Arbequina. Se utilizaron 12 muestras de aceite procedentes de Estepa (Sevilla, España), correspondientes a dos cosechas (años 2014/2015 y 2015/2016,) y a dos etapas de cada una de ellas (inicio y final). Se analizó el contenido en clorofilas y carotenoides en los aceites mediante espectrofotometría; los PFT y las propiedades antioxidantes (ABTS, DPPH y FRAP) se determinaron en el extracto metanólico de los aceites y en la fracción soluble (o bioaccesible) obtenida tras un proceso de digestión in vitro. Los datos se sometieron a un ANOVA multifactorial 2 × 2, con la cosecha y la etapa como factores principales y se evaluaron las relaciones entre las variables mediante el coeficiente de correlación de Pearson. Se observó un efecto positivo del proceso de digestión de los aceites sobre los PFT y a las propiedades antioxidantes, ya que en la fracción bioaccesible se encontraron valores incrementados en 2-7 veces al comparar con el extracto químico. La mayoría de los parámetros evaluados resultaron afectados por el año y la etapa de la cosecha del aceite. Se observaron correlaciones significativas entre los niveles de clorofilas y carotenoides y la actividad antioxidante tras la digestión in vitro.


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P3 Regulation of NOX1 and NOX4 during liver regeneration and hepatocarcinogenesis Daniel Caballero-Díaz1, Judit López-Luque1, , Eva Crosas-Molist1, Esther Bertran1, Adoración Martinez-

Palacián2, César Roncero2, Joaquim Moreno-Càceres1, María García-Bravo3,4,5, Esther Grueso3,4, Almudena Fernández4,5, María García-Álvaro2, Annalisa Addante2, Ángela M. Valverde6,7, Águeda González-

Rodríguez6,7, Blanca Herrera2, Lluis Montoliu4,8, Teresa Serrano9, José-Carlos Segovia3,4,5, Margarita Fernández2, Emilio Ramos10, Aránzazu Sánchez2, Isabel Fabregat1,11

1Bellvitge Biomedical Research Institute (IDIBELL), L’Hospitalet de Llobregat, Barcelona, Spain. 2Dep. of Biochemistry and Molecular Biology II, School of Pharmacy, Complutense University of Madrid and Instituto de Investigación Sanitaria del Hospital Clínico San Carlos, IdISSC, Madrid, Spain. 3Cell Differentiation and

Cytometry Unit. Hematopoietic Innovative Therapies Division, Centro de Investigaciones Energéticas, Medioambientales y Tecnológicas (CIEMAT). 4Centro de Investigación Biomédica en Red de Enfermedades Raras (CIBERER), Madrid, Spain. 5Advanced Therapies Mixed Unit. CIEMAT/IIS Fundación Jiménez Díaz,

Madrid, Spain. 6Instituto de Investigaciones Biomédicas “Alberto Sols” (CSIC/UAM), Madrid, Spain. 7Centro de Investigación Biomédica en Red de Diabetes y Enfermedades Metabólicas Asociadas

(CIBERDEM), ISCIII, Spain. 8Department of Molecular and Cellular Biology, National Centre for Biotechnology (CNB-CSIC) Madrid, Spain. 9Pathological Anatomy Service, University Hospital of Bellvitge,

Barcelona, Spain. 10Department of Surgery, Liver Transplant Unit, University Hospital of Bellvitge, Barcelona, Spain. 11Department of Physiological Sciences II, School of Medicine, University of Barcelona,

Spain Autor de contacto: Daniel Caballero Díaz ([email protected])

NADPH oxidases (NOX) produce Reactive Oxygen Species being involved in the regulation of cell growth, differentiation and death. Hepatocytes and liver tumor cells express NOX1 and NOX4 that play opposite roles in the control of cell proliferation and death in in vitro experiments. NOX4 negatively regulates liver cell proliferation and is up-regulated by TGF-β mediating apoptosis. EGF receptor (EGFR) pathway counteracts TGF-β-induced up-regulation of NOX4, impairing cell death. By contrary, NOX1 is involved in regulating autocrine growth and protecting cells from TGF-β-induced pro-apoptotic signals, since it activates EGFR pathway through up-regulation of EGFR ligands and activation of TACE/ADAM17. Not only that, but also EGFR up-regulates and activates NOX1, creating a loop of co-activation among the two pathways.

Considering these in vitro results, it should be expected that NOX1 and NOX4 expression are finely regulated in vivo under physiological and pathological situations where liver cells proliferate, such as liver regeneration and hepatocarcinogenesis. With the aim of analyzing the potential regulation of NOX1 and NOX4 during liver regeneration, here we performed 2/3 partial hepatectomy (PH) in mice. We found a decrease in the expression of NOX4 and an increase in the expression of NOX1 at short-times after PH in these animals. In order to analyze the specific role of the EGFR in regulating NOX1 and NOX4, we used a transgenic mouse recently generated in our lab, which express, specifically in the hepatocytes, a truncated, inactive, form of the EGFR (ΔEGFR mice). Interestingly, down-regulation of NOX4 was also observed in ΔEGFR animals, indicating that other alternative pathways, not only the EGFR, may contribute to decreasing NOX4 levels. However, up-regulation of NOX1 was fully impaired, which emphasizes the essential role played by the EGFR in vivo on regulating NOX1. To analyze hepatocarcinogenesis, both WT and ΔEGFR mice were treated with diethyl-nitrosamine (DEN) at 15-day-old, which generates tumors at 6-9 months of age. Interestingly, appearance of tumors was significantly delayed in ΔEGFR mice, coincident with higher expression of NOX4. These results validate the relevance of the in vitro findings and corroborate the opposite roles that NOX1 and NOX4 could play in liver physiology and pathology.


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P4

Efecto de polifenoles del olivo sobre mecanismos neurodegenerativos en la enfermedad de Parkinson

Jesús Calahorra1, Ana Cañuelo1

1 Departamento de Biología Experimental, Área de Bioquímica y Biología Molecular, Universidad de Jaén,

Paraje de las lagunillas s/n, 23071, Jaén

Autor de contacto: Ana Cañuelo ([email protected])

Los polifenoles presentes en el fruto del olivo, así como en el aceite de oliva virgen extra, se han relacionado con una menor incidencia de enfermedades crónicas en los consumidores de la dieta mediterránea, gracias a sus propiedades antioxidantes, antiinflamatorias y antibacterianas. La enfermedad de Parkinson se caracteriza por la degeneración selectiva de neuronas dopaminérgicas en la substantia nigra pars compacta. La perdida de función de estas neuronas presenta como marcador común la aparición de agregados proteicos conocidos como cuerpos de Lewy, cuyo principal componente es la α-sinucleína (α-syn), una proteína presináptica con tendencia a formar oligómeros tóxicos intracelulares. La agregación de esta proteína se ha relacionado entre otros factores con elevados niveles de ERO. El empleo de cepas transgénicas de C. elegans que expresan la proteína α-syn humana como modelo experimental para analizar el efecto de los polifenoles del olivo sobre la agregación de la misma aporta numerosas ventajas para elucidar el posible efecto beneficioso de estos compuestos sobre esta enfermedad neurodegenerativa. Mediante el uso de estos modelos, pretendemos esclarecer los mecanismos moleculares responsables de dichos efectos, entre los que se incluyen la modulación de los niveles de ERO intracelulares.


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P5 Ritmicidad circadiana de las defensas antioxidantes en hígado de verrugato (Umbrina

cirrosa). Efecto de la frecuencia de alimentación

Gabriel Cardenete1, M. Carmen Hidalgo1, Marta Arizcun2, M. Ángeles Pedrosa1, Natalia Hernández1, Amalia E. Morales1

1 Departamento de Zoología, Facultad de Ciencias. Universidad de Granada. Campus Fuentenueva s/n.

18071 Granada. Spain 2 Instituto Español de Oceanografía, Planta de Cultivos Marinos. Ctra. De la Azohia, s/n. Puerto de

Mazarrón. Murcia. Spain

Autor de contacto: Gabriel Cardenete ([email protected]) Sobre una especie candidata a la diversificación en piscicultura (Umbrina cirrosa), se inicia la búsqueda de ritmos circadianos de actividad enzimática antioxidante en tejido hepático, así como el estudio de la influencia sobre la misma de la frecuencia de alimentación. Se pretende aportar conocimientos sobre su fisiología que faciliten la propuesta de un método de alimentación adecuado. Verrugatos de 5.2 ± 0.1 g de peso medio se distribuyeron en 9 tanques de 170 L (3 por tratamiento) a razón de 70 peces por tanque. Fotoperiodo de 12L/12O (de 8 a 20 horas) y temperatura de 17-19 ºC. Durante 8 semanas los peces fueron alimentados a saciedad con una dieta comercial para corvina: Tratamiento S2, dos veces al día (9 y 17 horas), Tratamiento S4, cuatro veces al día (9, 13, 16 y 19 horas) y Tratamiento SD, alimentación continua con dispensador durante la fotofase (con la misma cantidad de alimento que el tratamiento S4). Se midió la actividad hepática de las enzimas: Superóxido dismutasa, catalasa, glutatión peroxidasa total, glutatión peroxidasa dependiente de selenio, glutatión reductasa y glucosa-6-fosfato deshidrogenasa, así como el grado de peroxidación lipídica, mediante la concentración de malondialdehído. Los resultados confirman la existencia de ritmos circadianos en la actividad específica de todas las enzimas antioxidantes analizadas, así como en la concentración de malondialdehído. Existe influencia de la frecuencia alimentaria en los ritmos de actividad de las enzimas, con excepción de Glutatión reductasa y Glucosa-6-fosfato deshidrogenasa, posiblemente por su participación en otras vías metabólicas. Así, los ritmos de las enzimas antioxidantes parecen sincronizarse con, al menos, un factor externo: la alimentación. Los valores de malondialdehído son mucho más elevados que los reportados para otras especies de peces cultivadas, aunque las actividades enzimáticas antioxidantes no son muy diferentes de especies próximas como la corvina; aunque sí son coincidentes con los descritos para el bacalao, especie que, como el verrugato, también acumula importantes depósitos lipídicos en hígado. El mejor método de alimentación parece ser el aporte continuo de alimento, ya que el tratamiento SD presentó un grado de peroxidación lipídica significativamente más bajo que los otros dos tratamientos.


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P6

Cambios en la producción de antioxidantes en la simbiosis rizobio- leguminosa inducidos por la salinidad en etapas finales del cultivo

Libertad Cobos-Porras1, Miguel López- Gómez, Javier Hidalgo- Castellanos

Carmen Lluch1

1 Departamento de Fisiología Vegetal, Facultad de Ciencias, Universidad de Granada, Av. Fuentenueva, s/n,

18071 Granada.

Autor de contacto: Carmen Lluch Plá ([email protected]) La salinidad es uno de los factores abióticos limitantes de la productividad agrícola, afectando a la fotosíntesis, al metabolismo nitrogenado y carbonado, al crecimiento y nutrición de la planta. La productividad en las leguminosas se vincula a la eficacia de la fijación de nitrógeno simbiótico proceso afectado por diversos estreses ambientales como la salinidad. Este proceso se asocia con una disminución del crecimiento de la planta, una reducción en el número de nódulos, y consecuentemente, con una menor fijación de nitrógeno. El establecimiento de la simbiosis Rhizobium- leguminosa es muy sensible a la sal, siendo el proceso de desarrollo nodular el más afectado, puesto que provoca un daño osmótico, un desequilibrio nutricional y la generación de especies reactivas de oxígeno (ROS), cuyos mecanismos de tolerancia o adaptación conllevan la homeostais iónica, síntesis de solutos compatibles y la producción de antioxidantes. En este estudio se evalúa la respuesta de dos variedades de Phaseolus vulgaris (cv Coco Blanc y cv Contender) con diferente tolerancia a la salinidad en simbiosis con Rhizobium tropici CIAT 899, determinando la eficacia de la fijación de nitrógeno, el crecimiento vegetal y el metabolismo antioxidante en nódulo y planta, entre otros parámetros. Se evidenció, como consecuencia de la salinidad, un aumento en la producción de ROS que fue consecuente con la mayor actividad de enzimas antioxidantes como la guaicol peroxidasa (GPX), ascorbato peroxidasa (APX) y glutatión reductasa (GR). La variedad sensible, a diferencia de la tolerante, presentó un aumento significativo de la actividad GPX que podría interpretarse como un mayor daño oxidativo. La actividad APX no varió en el cultivar sensible y aumentó significativamente en la tolerante, lo que implica una mayor capacidad de respuesta frente al estrés. Además, la presencia de sal provocó un aumento de osmoprotectores, considerados sustancias no tóxicas, incluso en altas concentraciones, como monosacáridos, disacáridos, polioles y aminoácidos, que contribuyen al ajuste osmótico regulando las altas concentraciones de iones tóxicos inducidos por la sal. Este trabajo ha sido financiado por el grupo AGR-139 (PAIDI) y el Proyecto AGL2013 42778-P (MICINN)


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P7

Arsenic-induced stress activates antioxidant response in different organs of garlic (Allium sativum L.) plants accompanied by a general decline of the

NADPH-generating systems

Rafael Feriche-Linares, Carmelo Ruíz-Torres, Marta Rodríguez-Ruiz, José M. Palma, Francisco J. Corpas*

Group of Antioxidants, Free Radicals and Nitric Oxide in Biotechnology, Food and Agriculture, Department

of Biochemistry, Cell and Molecular Biology of Plants, Estación Experimental del Zaidín, CSIC, Apartado 419, E-18080 Granada, Spain

Autor de contacto: Francisco J. Corpas ([email protected])

Arsenic (As) contamination is a major environmental problem which affects most living organisms from plants to animals. This metalloid poses a health risk for humans through its accumulation in crops and water. Using garlic (Allium sativum L.) plants as model crop and exposed to 200 µM arsenate, a comparative study among thier main organs (roots, bulbs and shoots) were made. The analysis of arsenic, glutathione (GSH) and phytochelatins (PCs) contents, the antioxidant enzymes (catalase, superoxide dismutase, ascorbate-glutathione cycle), the nitric oxide (NO) and hydrogen peroxide contents, and the main components of the NADPH-generating system, including glucose-6-phosphate dehydrogenase (G6PDH), 6-phosphogluconate dehydrogenase (6PGDH), NADP-malic enzyme (NADP-ME) and NADP-isocitrate dehydrogenase (NADP-ICDH) was carried out. Data showed a clear direct correlation between arsenic accumulation in the different organs and the antioxidative response, with a clear general decline of the NADPH-generating systems. Overall, our results demonstrate that there are clear connections between arsenic uptake and the metabolism of ROS whose alteration provokes As-induced oxidative stress.

[Supported by ERDF-cofinanced grant from the MINECO (Recupera 2020-20134R056) and Junta de Andalucía (group BIO 192)]


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P8 Melatonin at high concentration enhances the toxicity of radio- and chemotherapy in

tongue cancer cells

BI. Fernández-Gil1, YQ. Shen1, A. Guerra-Librero1, J. Florido1, M.A. Mendivil-Pérez2, V.M. Soto2, RK. Sayed1, M. González-Díez1, D. Acuña-Castroviejo1, G. Escames1

1Centro de Investigación Biomédica, Parque Tecnológico de Ciencias de la Salud, Universidad de Granada,

Avda. del Conocimiento s/n, 18016 Granada (Spain) 2 Grupo de Neurociencias de Antioquia, Sede de investigación Universitaria. Universidad de Antioquia.

Medellín (Colombia) Background: We reported the first effective treatment for the prevention and healing of oral mucositis consisting in an oral melatonin’s gel. With this therapy, which avoids mucositis development, the life quality of cancer patients would improve significantly, and the radio- and/or chemotherapy could carry on without discontinuation. The objective of this study was to evaluate whether melatonin, which also has oncostatic properties, may synergize with radiotherapy and/or chemotherapeutic agents such as rapamycin, to enhance its cytotoxic effects on cancer cells. Materials and Methods: The dose-dependent effects of melatonin were analyzed in irradiated or rapamycin-treated HNSCC, Cal-27 and SCC-9. Cells were maintained in DMEM medium, supplemented with 10% fetal bovine serum at 37 ºC in a humidified atmosphere of 5% CO2 and 95% air. Cells were treated with melatonin (100, 500 and 1500 µM) alone or in combination with 8 Gy irradiation or 20 nM rapamycin. The clonogenicity capacity of the cells, proliferative potential (MTT), apoptosis, mitochondrial respiration, ROS production, nitrites, LPO, mitochondrial mass, and several western blot were assessed. We also studied the potential synergistic effects of the melatonin with the different treatments in vivo. We induced tumour in nude mice using Cal-27 cells. Mice with tumour were treated with radio-or chemotherapy. We performed immunohistochemical studies to evaluate the tumoural proliferation and metastasis. The results were analyzed with GraphPad Prism 6 software. Results: The in vitro results showed a rise in the treatment toxicity in a melatonin dose dependent manner, potentiating the cytotoxic effects of the radio- and the chemotherapy. Melatonin also acts inhibiting the tumor growth in vivo. Conclusion: The results show a relationship between increased mitochondrial function and free radicals production in HNSC cells induced by high melatonin concentrations and that leads to an enhancement in the cytotoxicity of radiotherapy and the chemotherapeutics in tongue human cancer. Supported in part by grant nº SAF2009-14037 Ortiz F, et al. J Pineal Res 2015; 58: 34-49 Escames G, et al. Hum Genetics 2012; 131:161-173


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P9 Efecto de las condiciones clínicas cardíacas y sistémicas sobre la tolerancia del

miocardio humano al daño isquémico: papel del estado basal del estrés oxidativo y nitroso

G. Ferrer-Curriu1, K. Casos1, M. Pérez1, A. Blasco-Lucas1, E. Permanyer1, MA. Castro1,

JM. Gracia1, J. Barquinero2, M. Galinanes1

1 Hospital Universitario Vall d'Hebron, Grupo de Terapia Reparadora del Corazón. Servicio de Cirugía

Cardiaca. Vall d’Hebron Institut de Recerca (VHIR). Barcelona-España. 2 Hospital Universitario Vall d'Hebron, Grupo de Terapia Celular y. Vall d'Hebron Institut de Recerca

(VHIR). Barcelona-España.

Autor de contacto: Manuel Galiñanes Hernández

Introducción El daño miocárdico isquémico durante la cirugía, aumenta la morbilidad y la mortalidad perioperatoria. El estrés oxidativo y nitroso juega un papel importante en el daño isquémico. El objetivo de este estudio fue investigar la influencia: i) de las condiciones clínicas cardiacas y del tratamiento médico recibido y ii) del estado basal del estrés oxidativo y nitroso en el grado de la tolerancia del miocardio humano a la isquemia. Material y Método El apéndice auricular derecho (n=300) se obtuvo de pacientes que fueron sometidos a cirugía cardiaca antes del bypass cardiopulmonar. Los músculos fueron cortados en secciones de entre 30-50 mg de peso y equilibrados en buffer oxigenado Krebs-Henseleit (KHH) suplementado con glucosa durante 30 min. Los músculos fueron colocados en diferentes grupos: control aeróbico (CA), isquemia/reoxigenación (I/R, isquemia inducida con KHH suplementado con d-oxiglucosa) y precondicionamiento isquémico (IPreC) que se aplica antes del periodo de isquemia que consiste en 5 min de isquemia seguido de 5 min de reoxigenación antes del periodo de isquemia. El perfil de LDH en el eluyente fue utilizado como indicador de daño celular y MTT fue utilizado para determinar la viabilidad celular en tejido. En tejidos (n=90); se midió la generación de anión superóxido, biodisponobilidad NO, producción de nitrotirosina y producción de malondialdehido como marcadores de estrés oxidativo y nitroso. Se determinó la capacidad antioxidante total y la expresión de las enzimas superóxido dismutasa 2 y catalasa. Resultados El IPreC disminuyó el LDH y aumentó los valores de MTT (p < 0.05), con respecto al grupo de I/R alcanzando un 52% de protección en todos los casos. Sin embargo, el IPreC no produjo ningún efecto en los valores de LDH ni MTT en el 26% de los casos y en el 22% de los casos el IPreC indujo más daño que el grupo de I/R (p < 0.05). Los musculos de pacientes con enfermedad valvular mitral, dislipémicos y los pacientes de sexo femenino mostraron más daño isquémico que el resto de pacientes, sin embargo los tratamientos médicos no tuvieron ningún efecto. En cuanto al estudio del estado basal del estrés oxidativo/nitroso no vimos diferencias significativas en ningún parámetro estudiado. Conclusión Ciertas patologías y condiciones clínicas pueden hacer más susceptible al miocardio al daño isquémico. El estado basal del estrés oxidativo y nitroso no tiene influencia en esta respuesta.


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P10

Chronic aspartame intake causes changes in transsulfuration pathway, glutathione depletion and liver damage in mice

Isabela Finamor1, Salvador Pérez1, Carlos E Brenner2, Caroline Bressan2, Gabriele

Cheiran3, Maria I Rocha3, Marcelo da Veiga3, Juan Sastre1, Maria A Pavanato2

1 Department of Physiology, Faculty of Pharmacy, University of Valencia, Av. Vicente Andrés Estellés s/n, 46100 Burjassot, Valencia, Spain, 2Departament of Physiology and Pharmacology, Federal University of

Santa Maria, Av. Roraima, 1000, 97105900 Santa Maria, Rio Grande do Sul, Brazil, 3Departament of Morphology, Federal University of Santa Maria, Av. Roraima, 1000, 97105900 Santa Maria, Rio Grande do

Sul, Brazil.

Autor de contacto: Isabela A. Finamor ([email protected]) Long-term intake of aspartame causes depletion of reduced glutathione (GSH) and produces changes in GSH-related enzymes. However, the redox status of glutathione was not identified after aspartame consumption. Moreover, the transsulfuration pathway, which is involved in the synthesis of cysteine, a precursor of GSH, was not characterized in aspartame-treated mice. Thus, our aim was to investigate the redox status of glutathione, characterize the transsulfuration pathway, and identify the morphological changes induced by chronic aspartame treatment in mice liver. Mice were divided into four groups: control - received both aspartame and N-acetylcysteine vehicles, NAC - received aspartame vehicle and N-acetylcysteine (1 mmol kg-1, i.p.), ASP - received aspartame treatment (80 mg kg-1, v.o.) and N-acetylcysteine vehicle, ASP-NAC - received both aspartame and N-acetylcysteine treatments. Aspartame was administrated for three months, whilst N-acetylcysteine was injected during the last month. GSH, oxidized glutathione (GSSG), γ-glutamylcysteine (γ-GC), cysteine, S-adenosylhomocysteine (SAH) and S-adenosylmethionine (SAM) were determined by high-performance liquid chromatography coupled to tandem mass spectrometry (HPLC-MS/MS). Histological analysis was performed using hematoxylin-eosin staining. GSH, GSSG, γ-GC, cysteine, SAM and SAH levels decreased in liver after aspartame chronic treatment. N-acetylcysteine restored all changes. GSSG and GSH ratio remained unchanged after aspartame consumption. Aspartame caused morphological changes in the hepatocytes as reduction in nuclear volume and degeneration. Leukocyte infiltration was also observed. N-acetylcysteine abrogated such morphological alterations, resulting in a normal histological architecture. In conclusion, the decrease in SAM and SAH levels after aspartame intake seems to be due to diminished cysteine concentration, which leads to a decrease in γ-GC and GSH levels. However, GSH depletion was not related to glutathione oxidation. GSH depletion may contribute to hepatic damage in aspartame-treated mice.


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P11

Implicación del enzima glutatión peroxidasa en el desarrollo de los tejidos reproductivos del olivo

Estefanía García-Quirós, Juan de Dios Alché

Departamento de Bioquímica, Biología Celular y Molecular de Plantas, Estación Experimental del Zaidín, Consejo Superior de Investigaciones Científicas, C/Profesor Albareda 1, 18008 Granada.

Autor de contacto: Juan de Dios Alché ([email protected])

Las GPXs vegetales tienen alta homología con la secuencia aminoacídica de la fosfolípido hidroperóxido glutatión peroxidasa (PHGPX) animal, considerada la principal defensa enzimática contra el daño oxidativo en las membranas celulares. Las GPXs de plantas tienen sin embargo, actividades más bajas que las de animales, ya que contienen en su sitio catalítico cisteína en lugar de selenocisteína, lo cual ha hecho que sea difícil aclarar su papel fisiológico en plantas superiores. Ya ha sido demostrado que las GPXs de Arabidopsis (ATGPX) podrían desempeñar un papel potencial de eliminación de H2O2, usando glutatión reducido (GSH) como agente reductor. Esta familia de enzimas se compone de siete isoformas localizadas específicamente en el citosol, cloroplasto, mitocondria, peroxisoma, y apoplasto. Estos genes se expresan de forma ubicua y son regulados por el estrés abiótico a través de diversas vías de señalización, pero poco se sabe aún de su implicación en el desarrollo vegetal. Con el fin de estudiar el papel de las GPXs en los tejidos reproductivos de plantas superiores, se tomaron muestras de anteras de olivo en distintos estadios de desarrollo, así como de polen maduro y polen a lo largo de la germinación del tubo polínico in vitro. Se utilizó un amplio panel de técnicas para determinar tanto los niveles de glutatión (HPLC, inmunolocalización), como para analizar la expresión y la actividad de estos enzimas (revisión transcriptómica, análisis bioinformático, Western blotting, PCR semicuantitativa, inmunolocalización, cuantificación espectrofotométrica de la actividad). Los niveles de actividad de la glutatión peroxidasa (GPX) fueron significativamente superiores en las etapas de botón blanco, polen maduro y polen germinado al principio de la germinación y tras 6 horas de germinación. De acuerdo con esto, los niveles de glutatión celular también resultaron significativamente superiores en las etapas de polen maduro y a lo largo de la germinación. Nuestros datos sugieren que el tanto el glutatión como este sistema antioxidante poseen un papel clave en el metabolismo y la fisiología del polen, como ya se ha determinado en los tejidos somáticos. Este trabajo ha sido financiado por los proyectos BFU2011-22779 y RTC-2015-4181-2 (MINECO), P2011-CVI-7487 (Junta de Andalucía) y 201540E065 (CSIC), todos ellos parcialmente co-financiados a través de fondos regionales FEDER.


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P12 Estrés oxidativo e inflamatorio en células inmunitarias de dos modelos de ratones con

envejecimiento prematuro

Antonio Garrido1,2, Julia Cruces1,2, Carmen Vida 1,2 , Catalina Hernández-Sánchez3, Flora de Pablo3, Mónica De la Fuente1,2

1 Departamento de Fisiología Animal II, Facultad de Biología. Universidad Complutense de Madrid. Madrid.

2 Instituto de Investigación del Hospital 12 de Octubre. Madrid. 3Lab (Desarrollo, Diferenciación y Degeneración). Centro Nacional de Investigaciones Biológicas (CSIC).

Madrid.

Autor de contacto: Mónica De la Fuente ([email protected])

Al envejecer tiene lugar un estrés oxidativo e inflamatorio crónicos que conlleva el deterioro de los sistemas homeostáticos (nervioso, inmunitario y endocrino). La actividad funcional del sistema inmunitario ha sido propuesta como marcador de salud y recientemente como indicador de la velocidad de envejecimiento y predictor de longevidad. El deterioro del sistema inmunitario al envejecer o inmunosenescencia tiene como base el desequilibrio redox de sus células, y en la teoría de la oxidación-inflamación del envejecimiento se ha sugerido el papel de este sistema en la “oxi-inflamm-aging” del organismo. Nuestro grupo ha desarrollado dos modelos de envejecimiento prematuro: el modelo Prematurely aging mice (PAM) y el de ratones con una haploinsuficiencia (HZ) para la Tirosina Hidroxilasa (TH). El objetivo del trabajo fue valorar el estrés oxidativo e inflamatorio en células inmunitarias (peritoneales, esplénicas y tímicas) de ambos modelos. Se usaron 80 ratones hembra adultas ICR-CD1: 20 PAM, 20 NPAM, 20 TH-HZ y 20 silvestres (controles). A los 11 meses de edad se les extrajeron las células peritoneales y posteriormente se procedió a la obtención y aislamiento de las células esplénicas y tímicas. En los tres tipos de muestras se valoró como compuestos antioxidantes: la actividad catalasa, glutatión reductasa y glutatión peroxidasa así como los niveles de glutatión reducido (GSH); como compuestos prooxidantes: la actividad xantina oxidasa y los niveles de glutatión oxidado (GSSG). También, se calculó el cociente GSSG/GSH. Como compuesto anti-inflamatorio se determinaron los niveles de IL10 y como proinflamatorios lo de IL-1-beta, TNF-alfa, IL-6 e IL-17, en sobrenadantes de cultivo de leucocitos tanto basales como en respuesta a Lipopolisacárido y Concanavalina A. Se mantuvieron 10 animales de cada grupo experimental para determinar la longevidad media. Los animales PAM y TH-HZ mostraron, en general, menores valores en los compuestos antioxidantes y antiinflamatorios y mayores en los compuestos prooxidantes y proinflamatorios, en comparación con sus controles (NPAM y silvestres, respectivamente). Además, tanto los PAM como los TH-HZ tuvieron una menor longevidad que los controles. En conclusión, tanto los PAM como los TH-HZ muestran un estrés oxidativo e inflamatorio en sus células inmunitarias, lo que podría explicar su inmunosenescencia y muerte prematuras. Financiación: RETICEF(RD127004370018), FIS(PI15/01787)-ISCIII-FEDER.


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P13

Sistemas oxidantes y antioxidantes en girasol en respuesta a la toxicidad por Sb

Inmaculada Garrido, Alfonso Ortega, Mª Carmen Álvarez-Tinaut, Francisco Espinosa

Grupo FBCMP, Departamento de Biología Vegetal, Ecología y Ciencias de la Tierra, Facultad de Ciencias, Campus Av. de Elvas, s/n, 06006 Badajoz

Autor de contacto: F. Espinosa ([email protected])

Hemos estudiado la respuesta de plántulas de girasol a la toxicidad por Sb (0, 0.5 y 1.0 mM) en cultivo hidropónico. La toxicidad por Sb produce una disminución del desarrollo radicular y de la parte aérea, disminuyendo la biomasa. En raíz, se observa un incremento en los O2

.- generados, y de las actividades SOD y POX. No se observan cambios en los niveles de ascorbato total, con incremento en la actividad DHAR sólo con 1.0 mM Sb. Se observa disminución de GSH y GSSG, con aumentos en las actividades GR y GSNOR. En hojas, la respuesta es ligeramente diferente: menor producción de O2

., aumento de la actividad SOD; y la actividad POX sólo aumenta con 1.0 mM Sb. El contenido de ascorbato reducido se incrementa con la toxicidad, disminuyendo el DHA. El contenido de GSSG y GSH disminuye en respuesta al Sb. La actividad DHAR disminuye mientras que aumentan las actividades GR (sólo en 1.0 mM Sb) y GSNOR. Tanto en raíces como en hojas se produce un incremento significativo en fenoles, flavonoides y fenilpropanoides. En hojas, se observa una fuerte disminución en el contenido en clorofilas, mientras que los carotenoides se mantienen, consistente con este descenso en clorofilas es la menor tasa fotosíntética que se observa en las plantas sometidas a estrés con Sb. La peroxidación lipídica se incrementa tanto en raíces como en hojas, si bien parece que el sistema de detoxificación de ROS es más eficaz en raíces que en hojas, como muestra los menores niveles de peroxidación lipídica en raíces, a pesar de la gran cantidad de O2

.- producidos. La cantidad total de RNA transcrito sufre un fuerte descenso en las plantas sometidas a 1.0 mM Sb, no observándose alteraciones significativas en las plantas sometidas a 0.5 mM Sb, respecto de las control. El Sb podría interferir en el funcionamiento del ciclo ascorbato/glutatión mediante la formación de complejos con el glutatión por su afinidad a unirse con grupos sulfidrílos, lo que explicaría el descenso de este compuesto a pesar de los incrementos de GR y GSNOR, o bien a nivel de su biosíntesis, produciendo daños oxidativos. Agradecimientos: A la Junta de Extremadura por la Ayuda a Grupos (GR15138).


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P14

Integración del estrés oxidativo y nitrosativo en la señal de muerte celular inducida por Sorafenib en hepatocarcinoma

Raúl González1, María A. Rodríguez-Hernández1, Elena Navarro-Villarán1, C. Alicia Padilla

2, Sheila Pereira1, Carmen Bernal-Bellido3, Gonzalo Suárez-Artacho3, Luís M.

Marín-Gómez3, María T. Ferrer-Ríos4, Juan M. Pascasio-Acevedo4,#, Miguel A. Gómez-Bravo3,#, J. Antonio Bárcena

2, Francisco J. Padillo3,#, Jordi Muntané3,#

1Instituto of Biomedicina de Sevilla (IBiS). Hospital Universitario “Virgen del Rocío”-“Virgen Macarena”/CSIC/Universidad of Sevilla, España

2Dpto. Bioquímica y Biología Molecular e IMIBIC. Universidad de Córdoba, Córdoba, ES, 3Departamento de Cirugía General y Aparato Digestivo, Hospital Universitario “Virgen del Rocío”-


4Servicio de Aparato Digestivo, Hospital Universitario “Virgen del Rocío”-“Virgen Macarena”, Instituto de Biomedicina de Sevilla (IBiS)/CSIC/Universidad de Sevilla, Sevilla, España


Autor de contacto: Raúl González ([email protected])

Introducción: Sorafenib es la terapia recomendada para el tratamiento de los pacientes con hepatocarcinoma (HCC) avanzado. La regulación de los procesos de muerte y proliferación celular por Sorafenib se relaciona con la actividad antitumoral del fármaco. El objetivo del estudio es determinar el efecto de la regulación del estrés oxidativo/nitrosativo en la apoptosis inducida por Sorafenib en células de HCC. Materiales y Métodos: Se valoró el efecto de H2O2 (Catalasa), O2.- (Xantina/Xantina Oxidasa, X/XO) y óxido nítrico (NO) (NONOate y L-NAME) en las actividades caspasa-8, -9, -3 inducidas por Sorafenib (0-10 μM) en células de HCC diferenciadas (HepG2, Hep3B y Huh 7), moderadamente diferenciadas (SNU423) y des-diferenciadas (SNU 475). Resultados: La generación de H2O2 y NO se incrementa durante la desdiferenciación celular en células de HCC. Sorafenib reduce de forma dosis dependiente la generación de NO, O2.- y H2O2 que se asocia a un incremento de la actividad de proteínas con actividad redox (Tioredoxina) y una reducción del patrón de proteínas nitrosiladas, carboniladas y nitradas en células HepG2 tratadas con Sorafenib. La administración de Sorafenib (10 nM) induce caspasa-8, -9 y -3, con exacerbación de la actividad caspasa-3 en detrimento de la caspasa-8 y -9 con dosis elevadas del fármaco (10 μM). La intervención con X/XO y MnTBAP conlleva un aumento de H2O2 que se asocia con un incremento de la actividad caspasa-8 y -3 en células HepG2 control. La actividad caspasa-8 inducida por Sorafenib solo se incrementa con la administración de X/XO en HepG2. Conclusiones: 1) Sorafenib reduce el estrés oxidativo y nitrosativo intracelular con cambios profundos en el patrón de modificaciones postraduccionales redox de las proteínas. Este patrón se relaciona con la reducción de la vía intrínseca, y exacerbación de la señal apoptótica intrínseca en HCC. 2) La regulación del estrés oxidativo y nitrosativo y su repercusión en la actividad caspasa-8 y -3 en células HepG2 parece estar en función del equilibrio intracelular entre O2.- y H2O2. 3) La alteración del patrón de expresión de proteínas con actividad redox atenua la influencia de ROS y RNS en la actividad proapoptótica de Sorafenib.


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P15

Defensas antioxidantes y marcadores de estrés oxidativo en músculo de verrugato (Umbrina cirrosa). Efecto del ayuno prolongado y la realimentación

M. Carmen Hidalgo1, Amalia E. Morales1, Marta Arizcun2, Rosa Galera1, Elena Alabarces1

Gabriel Cardenete1

1 Departamento de Zoología, Facultad de Ciencias. Universidad de Granada. Campus Fuentenueva s/n.

18071 Granada. Spain 2 Instituto Español de Oceanografía, Planta de Cultivos Marinos. Ctra. De la Azohia, s/n. Puerto de

Mazarrón. Murcia. Spain.

Autor de contacto: M. Carmen Hidalgo ([email protected])

El ayuno es una situación experimentada por los peces en su ambiente natural. Este proceso puede llevar a la formación de especies reactivas de oxígeno (ROS), lo que podría provocar un estado de estrés oxidativo en el pez, en el caso de que este aumento no esté contrarrestado por la actividad de las enzimas antioxidantes. En acuicultura se realiza esta práctica, seguida normalmente de un proceso de realimentación en el cual los individuos van a aprovechar mejor el alimento y experimentar un aumento extra de tamaño. En el presente trabajo se pretende determinar el efecto de un ayuno prolongado seguido de un proceso de realimentación (ad libitum y pareada) en músculo blanco de verrugato (Umbrina cirrosa). Para ello, se utilizan muestras de músculo blanco, tanto de la parte anterior como posterior, y se determina la actividad de las enzimas antioxidantes SOD, CAT, GPX, GR y G6PDH, los niveles de peroxidación lipídica mediante la medida de malondialdehido (MDA), así como la actividad de enzimas clave de algunas rutas del metabolismo intermediario. El ayuno induce una depresión metabólica más marcada en aquellas actividades que soportan la natación explosiva, mientras que se mantienen las encargadas de soportar la actividad de rutina, destacando la oxidación de ácidos grasos (mayor actividad HOAD) y la actividad citrato sintasa (CS). Esto contribuye a que, al medir las actividades de enzimas antioxidantes y los niveles de peroxidación lipídica, se observe que existe efecto del ayuno sobre todo en el músculo anterior del pez, mientras que el efecto de la realimentación es más patente en el músculo posterior. Un ayuno prolongado afecta al metabolismo de especies reactivas de oxígeno del músculo blanco de verrugato, ocasionando una situación de estrés oxidativo. Esta situación parece afectar más al músculo blanco anterior que al caudal. La realimentación supondría una reactivación metabólica que tiene como consecuencia niveles altos de peroxidación lipídica en el músculo posterior. Esta reactivación es mayor cuando la alimentación es ad libitum frente a la pareada. Queda patente la diferente funcionalidad del músculo blanco del verrugato en relación con su localización y su papel en la natación.


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P16

Characterization of antioxidtive proteins from pomegranate (Punica granatum L.)

Jessica Iglesias, María J. Campos Ramos, Marta Rodríguez-Ruiz, José M. Palma

1 Grupo de Antioxidantes, Radicales Libres y Óxido Nítrico en Biotecnología y Agroalimentación, Departamento de Bioquímica, Biología Celular y Molecular de Plantas, Estación Experimental del Zaidín,

Consejo Superior de Investigaciones Científicas, C/Profesor Albareda 1, 18008 Granada.

Autor de contacto: José M. Palma ([email protected])

Pomegranate (Punica granatum L.) fruit is characterized by high antioxidant content, and its pharmaceutical properties (anti-inflammatory and anticarcinogenic effects, reduction of cardiovascular risks and the control of kidney troubles), have partially been attributed to substances such as ellagic acid, ellagitannins, punic acid, anthocyanins, flavonols, flavan-3-ols, and flavones. Juice also contains beneficial compounds such as catequines, vitamin C, and phytosterols [1-3]. Few studies have been devoted to investigate pomegranate proteins. Recently, the proteome of pomegranate has been reported, where a list of 1,488 proteins was obtained from seeds, although only six of which belonged to referenced pomegranate species [4]. Most pomegranate proteins identified from seeds are storage proteins such as globulins, albumins, glutelin and prolamin [4]. Regarding to antioxidative proteins from pomegranate, no data are known thus far, and investigation in this issue is of great interest, not only from of a scientific point of view, but also from its repercussion in human diet. In this work, the identification of antioxidative enzymes from pomegranate fruits was achieved.

We set the procedure to extracts proteins from juice, seeds and skin. No proteins were practically detected in skin, whereas, in seeds, at least eight major protein bands were found by SDS-PAGE and silver staining. In juice, only one band was detected of about 28 kDa. The analysis of superoxide dismutase (SOD) activity by native PAGE rendered 4-6 isoenzymes identified as CuZn-SODs and Mn-SODs, only in seeds. The presence of several peroxidase isozymes was also detected in juice and seeds. This is the first report of SOD and peroxidase activity in pomegranate and the results point towards a low but latent metabolism of reactive oxygen species (ROS) in seeds. [1] López-Mejía OA et al (2010) Tem. Select. Ing. Alim. 4: 64-73. [2] Faria A, Calhau C (2011) Crit. Rev. Food Sci. Nutr. 51: 626–634. [3] Lansky E, Newman R (2007) J. Ethnopharmacol. 109: 177–206. [4] Capriotti AL et al (2013) Anal. Bioanal. Chem. 405: 9301–9309.

[Supported by ERDF-cofinanced grant AGL2015-65104-P from MINECO, Spain]


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P17

El contenido fenólico del mosto y de los hollejos procedentes de la variedad de uva Tempranillo pasificada aumenta la supervivencia de levaduras sometidas a estrés

oxidativo

Nieves López de Lerma1, Esther Donoso-Contreras2, José Peinado2 Nieves Abril2, Rafael A. Peinado1

1Departamento de Química Agrícola y Edafología. Edificio Marie Curie.

2Departamento de Bioquímica y Biología Molecular. Edificio Severo Ochoa. 1,2Campus de Rabanales. Universidad de Córdoba.

Autor de contacto: Rafael Peinado ([email protected])

En los primeros estadios de la pasificación al sol de uvas Tempranillo se observa un aumento del contenido en compuestos fenólicos debido por un lado al efecto de la concentración por deshidratación y por otro a la síntesis de los mismos como respuesta al estrés hídrico. Cuando se alcanza aproximadamente un 14 % de deshidratación, los polifenoles de los hollejos difunden hacia la pulpa como consecuencia de la degradación de la estructura celular de los hollejos. El análisis de la actividad antioxidante in vitro de mostos y hollejos a lo largo de la pasificación muestra tendencias opuestas desde el inicio de la misma, aumentando en los primeros y disminuyendo en los segundos. No obstante, la relación actividad antioxidante/concentración de compuestos fenólicos se incrementa tanto en mostos como en hollejos a partir del día 8 de pasificación. Los ensayos in vivo realizados con la cepa MML44 de Saccharomyces cerevisiae sometida a estrés oxidativo con H2O2, ponen de manifiesto que la preincubación de las mismas con mosto y extracto de hollejos aumentan su supervivencia, siendo esta mayor cuando las levaduras son incubadas con polifenoles procedentes de uvas al final de la pasificación. En este sentido, también se observó un menor nivel de oxidación proteica basal especialmente en las levaduras incubadas con la muestra de mosto a los 13 días de pasificación.


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P18

Molecular modeling of plant catalases and docking studies with GSNO

Javier López-Jaramillo1, Marta Rodríguez-Ruiz2, Juan B Barroso3, José M Palma2, Francisco J Corpas2

1Institute of Biotechnology, University of Granada, E-18071 Granada, Spain

2Group of Antioxidants, Free Radicals, and Nitric Oxide in Biotechnology, Food, and Agriculture, Department of Biochemistry, Cellular and Molecular Biology of Plants, Estación Experimental del Zaidín,

Consejo Superior de Investigaciones Científicas, Granada, Spain. 3 Group of Biochemistry and Cell Signaling in Nitric Oxide, Department of Experimental Biology, Center for Advanced Studies in Olive Grove and Olive Oils, Faculty of Experimental Sciences, Campus Universitario

“Las Lagunillas” s/n, University of Jaén, E-23071, Jaén, Spain.

Autor de contacto: Francisco J. Corpas ([email protected])

Catalase (CAT) is one of the first antioxidant lines of defense to regulate H2O2 content. In eukaryotic cells, CAT is exclusively located in peroxisomes [1]. Unlike animal cells where catalase is encoded by a unique gene, in plants it is encoded by a multigene family. Thus, the number and expression of different CAT isozymes change during plant development and under different environmental conditions. For example, in the model plant Arabidopsis thaliana there are three genes (CAT-1, CAT-2 and CAT-3), CAT1 is mainly expressed in pollen and seeds, CAT2 in photosynthetic tissues but also in roots and seeds, while CAT3 is associated with vascular tissues but also leaves [2,3]. Using Arabidopsis leaf and pepper fruit samples, in vitro assays of catalase activity in the presence of different molecules such as S-nitrosoglutathione (GSNO) or glutathione (GSH) among others, indicate that catalase was either positive or negative regulated. To gain deeper insight into the mechanism of modulation of this activity, computational study was carried out by docking GSNO to the quaternary structure of Arabidopsis CAT-1, CAT-2 and CAT-3 computed by homology modeling. Two GSNO binding sites were identified close to Cys residues and compatible with S-nitrosylation and/or glutathionylation. A primary site was shared by the three catalases and a secondary site was particular for each one. The values of ΔG computed for each site allow to estimate the affinity for GSNO. Using the primary site as reference, a relative affinity of the secondary site can be defined as K2/K1. The affinity of the primary site for GSNO is similar for CAT-1 and CAT-3 and higher for CAT-2 and the relative affinities of the secondary site were estimated as 0.68 for CAT-1, 9.17 for CAT-2 and 0.03 for CAT-3. [1] Corpas FJ ( 2015) Plant Biol (Stuttg). 17:1099-103. [2] Mhamdi, et al (2010) J Exp Bot 61:4197–4220, [3] Mhamdi et al (2012) Arch Biochem Biophys 525:181-94.



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P19

El líquido cefalorraquídeo de personas mayores de 74 años muestra un decremento de la actividad de la glutation-S-transferasa

Ángel Martín de Pablos 1, 3, José Manuel García Moreno 1, 2, Emilio Fernández Espejo 1*

1 Laboratorio de Neurofisiología y Neurología Molecular, Departamento de Fisiología Médica y Biofísica,

Universidad de Sevilla, 41009 Sevilla; 2 UGC Neurociencias y Asociación Neuroinvest, Hospital Universitario Macarena, 41009 Sevilla; 3 Departamento de Cirugía, Universidad de Sevilla.

Autor de contacto: Angel Martín de Pablos ([email protected])

Los efectos del envejecimiento sobre el cerebro se intentan explicar, entre otras hipótesis, por alteración del soporte neurotrófico, neuroinflamación, o decaimiento de las defensas antioxidantes. Los cambios bioquímicos en el sistema nervioso central (SNC) se pueden monitorizar bien con el liquido cefalorraquídeo (LCR), buen testigo del acontecer a nivel del SNC. Los objetivos del trabajo fueron analizar en cuatro grupos de edad: 1) los niveles en LCR de los factores neurotróficos BDNF, GDNF, persefina, neurturina, TGFβ1 y TGFβ2; 2) la actividad en LCR de las enzimas antioxidantes catalasa, glutation-peroxidasa, glutation-reductasa, glutation-S-transferasa (GST), peroxirredoxinas, y superóxido-dismutasas; 3) los niveles de ferritina, y 4) la capacidad antioxidante total del fluido. Los grupos de edad fueron: adultos (35-55 años), adultos no envejecidos (56-64 años), vejez temprana (65-74 años), y envejecimiento avanzado (>74 años). Se emplearon tests ELISA y PAO. Todos los sujetos dieron su consentimiento informado, y el protocolo fue aprobado por los comités éticos de la Universidad de Sevilla y del Hospital Macarena. Los resultados indican que el envejecimiento no se acompaña de cambios de GDNF, persefina y neurturina, considerados como factores protectores de neuronas de dopamina, así como TGFβ1 y TGFβ2, considerados como factores proinflamatorios. El BDNF tampoco estaba alterado. El estado redox del SNC, evaluado en LCR por medio de las enzimas antioxidantes mencionadas, los niveles de ferritina y la capacidad antioxidante, no se alteró con la edad. Sólo se detectó un decremento significativo en la actividad de la GST en sujetos mayores de 74 años (p<0,03). Como conclusión, en las personas envejecidas sanas y mayores de 65 años el estado neurotrófico, neuroinflamatorio y oxidativo del LCR parece ser normal, y solo las personas mayores de 74 años muestran un signo de bajo grado de estrés oxidativo, caracterizado por caída de la actividad de GST. Ayudas de la Junta de Andalucia (BIO127) y Sociedad Andaluza de Neurología (SUBAIA2015/006; SAN).


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P20

Cytostatic effect of the lichen microalga Asterochloris erici on the L929 murine fibrosarcoma cell line may be related with high carotenoid lutein content

M. Concepción Matesanz1, Mercedes Villa-Carvajal2, Javier Linares1, Eva Barreno3,

Myriam Catalá4*‡, M. Teresa Portolés1*‡

1 Department of Biochemistry and Molecular Biology I, Faculty of Chemistry, Universidad Complutense, IdISSC, 28040-Madrid, Spain

2 Bioproduction ainia. Engineering and Processes Department. AINIA Parque Tecnológico de Valencia. C/Benjamín Franklin 5-11. E46980 Paterna (Valencia) Spain

3ICBIBE, Dpto. Botánica y Geología, Universitat de València, Facc. CC.Biológicas, C/ Dr. Moliner 50. 46100-Burjassot (Valencia), Spain.

4Environmental Toxicology Area, National Centre of Environmental Health, National Institute of Health Carlos III, Ctra. Majadahonda – Pozuelo E-28220 Majadahonda (Madrid)

Autor de contacto: Myriam Catalá ([email protected])

New resources of food, pharmaceuticals or biotechnological are needed. The huge biodiversity of terrestrial lichen phycobionts remains unexplored despite aquatic microalgae are yielding promising results. Viability of these for human consumption demands the demonstration of the absence of toxic effects. According to ethics in the toxicity testing for the development of new foods and other human/animal aimed products, in vitro biocompatibility of crude homogenates of axenic microalga Asterochloris erici, symbiotic in the lichen Cladonia cristatella, was analyzed using L929 mouse fibroblasts. Cell viability, morphology, proliferation, cell cycle, apoptosis and intracellular content of reactive oxygen species (ROS) were analyzed after treatment of cultured L929 fibroblasts with different doses of microalga homogenates. The results show that crude homogenates of A. erici do not induce fibroblast citotoxicity but seem to have some cytostatic effect inducing slight cell cycle alterations. Carotenoid analysis demonstrates high content of lutein in these microalgae, a xanthophyll with antioxidant and cytostatic properties in vivo. These findings confirm that Asterochloris erici can be considered suitable for the development of both alimentary and pharmaceutical applications and may be tested in living animals. The cytostatic effects should be further investigated for antitumor agents. (PROMETEOII/2013/021 - GVA, MAT2013-43299-R - MINECO)


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P21

Influencia del envejecimiento en la susceptibilidad del hígado de cobayas a la toxicidad del paraquat. Efecto de la administración in vivo de melatonina

Mª del Prado Míguez, Asunción Ramos

Unidad de Toxicología, Facultad de Veterinaria, Universidad de Extremadura, Avda. de la Universidad s/n.

10003 Cáceres.

Autor de contacto: Mª del Prado Míguez ([email protected]) El envejecimiento ha sido asociado con la producción de especies reactivas y con un descenso de los mecanismos antioxidantes celulares. Por otro lado, el paraquat (PQ) es un conocido herbicida bipiridílico que causa estrés oxidativo y la melatonina ha sido propuesta como un buen candidato para paliar las alteraciones asociadas con el envejecimiento y como antioxidante y scavenger de radicales libres. Por ello, en este estudio se ha tratado de investigar si el envejecimiento aumenta la susceptibilidad a la toxicidad in vitro por PQ en cobayas senescentes tratadas in vivo con melatonina. En el estudio se utilizaron 18 cobayas hembras divididas en 3 grupos: adulto (4 meses), senescente (24 meses) y senescente tratado con melatonina (2,5 mg/kg/día durante 28 días, p.o.). Tras el tratamiento con melatonina, los animales fueron sacrificados y el hígado se utilizó para la determinación de MDA, GSH y GST, así como para la determinación de la expresión de las enzimas glutation peroxidasa y citocromo c oxidasa. Otra porción de hígado fue inmediatamente homogeneizado e incubado con PQ a distintas concentraciones (0,01, 0,1 y 1 mM) a 37ºC en agitación durante 1 hora. Se obtuvieron alícuotas a los 0 y 60 minutos para la determinación de GSH y MDA. Los resultados in vivo mostraron un mayor nivel de MDA y GST y un menor nivel de GSH en cobayas senescentes. De igual forma las cobayas senescentes mostraron una menor expresión de las enzimas GPx y citocromo oxidasa. El tratamiento in vivo con melatonina palió en mayor o menor grado estas alteraciones. En cuanto a los resultados del estudio in vitro en los homogeneizados de hígado el PQ aumentó la formación de MDA de forma similar en los 3 grupos. Sin embargo, el PQ no indujo cambios en el GSH en los adultos con respecto al control sin PQ, pero sí una depleción en los senescentes, esta depleción fue menor en los senescentes tratados con melatonina. Esto podría sugerir que el hígado de cobayas senescentes es más vulnerable a la depleción de GSH inducida por PQ que el de los adultos y que la administración de melatonina podría paliar este efecto.


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P22

Zinc protects vimentin from modification by electrophiles and selective cysteine crosslinkers

Andreia Mónico1, Sofia Duarte1, Alma E. Martínez1, Dolores Pérez-Sala1

1 Department of Chemical and Physical Biology, Centro de Investigaciones Biológicas, Consejo Superior de

Investigaciones Científicas (C.S.I.C.), Ramiro de Maeztu, 9, 28040 Madrid, Spain.

Autor de contacto: Dolores Pérez-Sala ([email protected])

Vimentin is an intermediate filament protein involved in the maintenance of cellular architecture, organelle positioning and cell signaling. Vimentin is a target for electrophilic and oxidative modifications that impact on its organization and function. These modifications take place mainly at its single cysteine residue, cys328. We have observed that the cellular availability of zinc is important for protection of vimentin against oxidative damage. To get insight into the zinc-vimentin interaction, we are employing both in vitro and cellular approaches. In vitro, we are assessing the protective effect of zinc on modification of the purified protein by oxidants and electrophiles. We have observed that incubation of vimentin with zinc reduces its modification by 2-hydroxy-4-nonenal, biotinylated-prostaglandin A1, and biotinylated iodoacetamide, as well as its oligomerization in the presence of the oxidant diamide. Other divalent cations, like magnesium, do not display a similar protective effect. Several crosslinking agents can also induce the formation of vimentin oligomers. In particular, cysteine crosslinkers induce the formation of a vimentin dimer. Interestingly, preincubation with micromolar concentrations of zinc selectively protects vimentin from cysteine crosslinking by agents with spacers between 4 and 5 Å, like dibromobimane (DBB), whereas crosslinking by tris(2-maleimidoethyl)amine (TMEA) (10,3 Å) or bismaleimidohexane (BMH) (13.0 Å) is weakly or not affected. Similarly, zinc does not reduce crosslinking by disuccinimidyl tartrate (DST), which reacts with amino groups. Taken together these results suggest that interaction with zinc could protect a region of vimentin where cysteine residues from different subunits are located at a specific distance. Therefore, we are exploring the impact of mutating several residues located in this region on vimentin assembly and response to oxidants and zinc availability in cells. The results obtained so far delineate a complex interplay between redox and zinc-dependent mechanisms in the regulation of vimentin function.

Funding: SAF2015-68590-R/FEDER and EU project 675132 (MASSTRPLAN) H2020-MSCA-ITN-2015


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P23

Antioxidants from two Spanish autochthonous pepper varieties: Piquillo and Padrón

José M. Palma, Francisco J. Corpas, Luis A. del Río, Tamara Molina



Autor de contacto: José M. Palma (josemanuel.palma @eez.csic.es)

Pepper species (Capsicum annuum L.) comprises hundreds of varieties which differ among them by their shape, color, size, taste, ripening patterns, culinary and industrial purposes, etc [1]. In Spain, two autochthonous varieties highlight due to broad consume and special taste features, Piquillo and Padrón. In a recent study, these varieties were reported to contain low Na levels and to be good sources of K, Fe, Mn, Cu and P, for human nutrition [2]. Pepper fruits have been also proved to contain high values of the antioxidative vitamins C and A [1]. However, very little information on the antioxidative metabolism of pepper fruits from Piquillo and Padrón varieties is available so far. In this work, a characterization of the main antioxidative enzymes of Piquillo and Padrón peppers was accomplished. Pepper fruits were provided by the Consejos Reguladores de Denominación de Origen de Piquillo (Lodosa, Navarra, Spain) and Herbón (Padrón variety; Herbón, Coruña, Spain) in two ripening stages: immature green and mature red. In all fruits the endocarp and placenta were separated and analyzed. Ascorbate and glutathione contents, and the profile of superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT), and guaiacol peroxidase (GPX) enzymes were studied. Results provide differential activity patterns between varieties and due to ripening. The analysis of the SOD, CAT and GPX isoenzymes reveal that these systems could be used as markers for identification of varieties and ripening stage. [1] Palma et al. 2015. Ann. Bot. 116: 627-626. [2] Palma et al. 2016. Horticultura 323: 60-64.



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P24

Analysis of protein oxidative modifications in human follicular fluid

Irantzu Pérez1, Susana Meijide1, M. Luisa Hernández1, José Ignacio Ruiz-Sanz1, Mª Begoña Ruiz-Larrea 1

1Department of Physiology, Medicine and Nursing School, University of the Basque Country, UPV/EHU, Leioa

Autor de contacto: Mª Begoña Ruiz-Larrez ([email protected]) Several steps in reproduction are associated with physiological levels of reactive oxygen species (ROS). Thus, these species have a role in different processes, such as the corpus luteum cycle, follicular development, ovulation, oocyte maturation, or blastocyst hatching during the preimplantation phase. However, an excess of ROS results in oxidative stress, triggering obstetric complications. The follicular fluid constitutes the microenvironment for the developing oocyte, and is enriched in proteins. Proteins are the main targets for ROS and reactive carbonyl species attack. The aim of this work was to develop a methodology to analyze biomarkers of non-enzymatic oxidative modifications in proteins from the human follicular fluid. For this purpose, gas liquid chromatography coupled to mass spectrometry (GC/MS) was used, and glutamic semialdehyde (GSA), aminoadipic semialdehyde (AASA), carboxymethyl-lysine (CML), and carboxyethyl-lysine (CEL) were analyzed. Samples from follicular fluid were delipidated; the proteins were precipitated, and carbonyl groups were reduced in the presence of NaBH4. The reduced proteins were chemically hydrolized in the presence of the corresponding deuterated internal standards. The samples were vacuum-evaporated and sequentially derivatized to render the methyl-fluoride amino acid derivatives. The analysis was performed with a capillary gas chromatography column HP-5MS (30 m x 0.25 mm x 0.25 µm) with selective ion monitoring. After chromatographic separation and identification, the products from protein oxidative modifications were quantified from the curves derived from the corresponding standards. The results showed that GSA was the most abundant protein lesion (81%), corresponding to a mean of 3.7 altered residues per 1000 lysines. The levels of the other analysed biomarkers were an order of magnitude lower than GSA, reaching between 0.12 and 0.5 damaged residues per 1000 lysines. The CML levels, a protein oxidation biomarker originated from glycoxidative and lipoxydative processes, amounted 12% of the total lesions, and were higher than those of AASA (4%) and CEL (3%). In conclusion, we have described for the first time products derived from the protein oxidative modifications in human follicular fluid. These findings constitute the bases for further research in order to elucidate their possible relevance in fertility programs.

This work was supported by the “PN de I+D+I” of the Spanish Ministry of Science and Innovation, ISCIII-Subdirección General de Evaluación y Fomento de la Investigación, and FEDER (ref. FIS/FEDER PI11/02559), the Basque Government (Deptartment of Education, Universities and Research, ref. IT687-13 and predoctoral grant to I.P.), University of the Basque Country (CLUMBER UFI11/20) and Fundación Jesús Gangoiti (grant to S.M.).


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P25

Influencia de los contaminantes naturales y sintéticos sobre el estado oxidativo de

organismos acuáticos

Amalia Pérez-Jiménez1-2, Eva E. Rufino Palomares2, Álvaro Nogués1, Miguel Torres1, Ana Sanz1, José A. Lupiáñez2, Cristina Trenzado Romero3

1 Dpto. Zoología, 2 Dpto. Bioquímica y Biología Molecular I, 3Dpto. Biología Celular, Facultad de Ciencias, Universidad de Granada, Campus Fuentenueva s/n, 18071, Granada.

Autor de contacto: Amalia Pérez-Jiménez ([email protected])

Los contaminantes químicos afectan tanto a organismos de vida acuática, como a organismos terrestres, incluido el ser humano. La nicotina es un alcaloide natural de las solanáceas, cuya presencia en el agua se debe principalmente al vertido de aguas residuales. El nitroprusiato sódico (SNP) es un medicamento ampliamente utilizado en patologías cardiacas cuyas principales vía de entrada al medio acuático es la excreción humana y la incorrecta eliminación de productos no utilizados. El objetivo del presente estudio fue evaluar el efecto tóxico de la nicotina y el SNP como contaminantes acuáticos, sobre el estado oxidativo de la Artemia salina. Tras la determinación de la dosis letal (LD) para cada producto, nauplios de artemia fueron incubados durante 24h a las concentraciones de LD0 (control), LD50, LD50/2, LD20 y LD20/4 para la nicotina, y LD0, LD50, LD50/2, LD50/4 y LD50/8 para el SNP. Los resultados obtenidos para la LD50 mostraron que el SNP presentaba una toxicidad 3.5 veces superior a la nicotina. En general, ambos compuestos alteraron el estado oxidativo de los organismos. En el caso de la nicotina, en general, se observó un aumento significativo de las actividades catalasa (CAT), glucosa 6P deshidrogenasa (G6PDH) y glutatión S-transferasa (GST) a todas las dosis empleadas, mientras que dicho aumento sólo fue significativo a las dosis más altas para las actividades superóxido dismutasa (SOD), glutatión peroxidasa (GPX), glutatión reductasa (GR) y DT-diaforasa (DTD). La capacidad antioxidante total (TEAC) fue más elevada en los grupos tratados con nicotina, aunque no todos los tratamientos mostraron diferencias con respecto al grupo control. En el caso del SNP, no se observaron diferencias significativas en las actividades SOD, CAT y DTD con respecto al control. Las actividades de las enzimas GPX, GR, G6PDH y GST, así como los valores de TEAC mostraron un aumento significativo de su actividad en respuesta a la presencia de SNP. Tanto para el tratamiento con nicotina como para el SNP, la respuesta antioxidante de las artemias fue suficiente para evitar la generación de daños oxidativos detectables a lípidos, pese a la confirmación del efecto tóxico de los compuestos ensayados.


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P26

Absence of the yeast Hsp31 proteins of the DJ-1 superfamily implicates metabolic changes by imbalance of cellular redox state

Raquel Requejo-Aguilar1,2, Irene Sanchez de Puerta, José A. Bárcena1,2

1Department of Biochemistry and Molecular Biology, University of Cordoba,

2Institute Maimonides of Biomedical Investigation of Cordoba (IMIBIC)

Autor de contacto: Raquel Requejo-Aguilar ([email protected])

The Saccharomyces cerevisiae proteins Hsp31, Hsp32, Hsp33 y Hsp34 are the yeast members of a superfamily in which is included the human protein DJ-1 (PARK 7). DJ-1 acts protecting against oxidative stress and mitochondrial dysfunction and mutations of DJ-1 gene are linked to Parkinson´s disease. We show that Hsp31 proteins deficiency produces a metabolic shift maintaining a fermentative metabolism even at glucose-limiting conditions. This results in increased cell proliferation in the short term but leads to cell death if it´s sustained over time. However, without glucose limitation the higher rate of proliferation is kept until the stationary phase is reached. The maintaining in glucose limiting conditions of glycolysis instead of respiration is due to mitochondrial damage. Thus, increasing levels of oxidative stress produce by glucose deprivation activates several antioxidants pathways including those involving Hsp31 that acts as a redox sensor but this activation it´s not possible in the mutant. However, the mutant has less reactive oxygen species production, which is due to dysfunctional mitochondria by early damage. The mitochondrial damage may be produced, at least in part, by the accumulation of the toxic glycolytic intermediate methylglyoxal observed in mutants for Hsp31 family. Methylglyoxal exert its toxicity producing glycation of lipids, nucleic acids and proteins. Hsp31 is part of the glyoxalase system responsible for methylglyoxal detoxification. Thereby, a vicious circle between production of methylglyoxal from glycolysis and increased mitochondrial damage would occur due to deficiency of Hsp31. Therefore, methylglyoxal detoxification may be a potential therapeutic route for treatment or prevention of Parkinson´s disease.


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P27 Mecanismos de inducción de la muerte celular por Sorafenib en hepatocarcinom

María A. Rodríguez-Hernández1, Elena Navarro-Villarán1, Raúl González1, José L. Mauriz2, Sheila

Pereira1, Carmen Bernal-Bellido3, Gonzalo Suárez-Artacho3, Luís M. Marín-Gómez3, María T. Ferrer-Ríos4, Juan M. Pascasio-Acevedo4,#, Miguel A. Gómez-Bravo3,#, Javier González-Gallego2,

Francisco J. Padillo3,#, Jordi Muntané3,#

1Instituto de Biomedicina de Sevilla (IBiS). Hospital Universitario “Virgen del Rocío”-“Virgen Macarena”/CSIC/Universidad de Sevilla, España

2Instituto de Biomedicina (IBIOMED), Universidad de León, León, España 3Departamento de Cirugía General y Aparato Digestivo, Hospital Universitario “Virgen del Rocío”-


4Servicio Digestivo, Hospital Universitario “Virgen del Rocío”-“Virgen Macarena”, Instituto de Biomedicina de Sevilla (IBiS)/CSIC/Universidad de Sevilla, Sevilla, España


Autor de contacto: María A. Rodríguez-Hernández ([email protected]) Introducción: El hepatocarcinoma (HCC) constituye la tercera causa de fallecimiento por cáncer. El retraso en el diagnóstico y la recurrencia tumoral promueven su progresión hasta estadios avanzados en los que el único tratamiento es Sorafenib. El objetivo de este estudio es identificar la regulación de las rutas de estrés celular, supervivencia y muerte celular por Sorafenib. Materiales y Métodos: Se utilizaron líneas celulares de HCC con distinto perfil genético de p53 (HepG2, nativo; Hep3B, sin expresión; y Huh7, mutado). Se realizó un estudio cinético dosis/respuesta de Sorafenib (0-100μM) valorando diversos parámetros relacionados con estrés de retículo endoplásmico, autofagia, proliferación y apoptosis celular, evaluándose además el efecto del tratamiento en la muerte celular tras la interferencia de las vías de estrés del retículo. Resultados: Sorafenib (10-100μM) indujo una respuesta rápida del estrés del retículo endoplásmico (3-6 horas) caracterizada por un aumento de Ser51eIFα/eIFα y CHOP, descenso de la expresión de ATF6 e incremento de IRE1α y XBP1s, coincidiendo temporalmente con la reducción de Ser2481mTOR e incremento de autofagia (LC3I/LC3II), independientemente de cambios en Ser473Akt/Akt y Thr308Akt/Akt. Esta regulación fue seguida (12-24horas) de un incremento Thr183JNK/JNK, reducción de la proliferación celular e incremento de caspasa-3 y TUNEL. La susceptibilidad a la actividad pro-apoptótica de Sorafenib dependió del tipo celular (HepG2>Hep3B=Huh7). La interferencia de las rutas PERK e IRE1α incrementó la actividad caspasa-3 por Sorafenib incluso a dosis inferiores (10nM) a la equivalente terapéutica (10µM), asociándose además en el caso de IRE1α a una reducción de actividad caspasa-8. La interferencia de ATF6 redujo la actividad caspasa-3 inducida por Sorafenib (10μM). Conclusiones: 1) La inducción de muerte celular por Sorafenib (≥10μM-100μM) se asocia con el incremento del estrés del retículo endoplásmico, reducción de la ruta mTOR, e incremento de la autofagia y apoptosis celular en células de HCC. 2) El silenciamiento de las rutas PERK e IRE1 aumenta la susceptibilidad celular a la ruta intrínseca apoptótica inducida por Sorafenib. 3) La mayor susceptibilidad de las células HepG2 vs Hep3B y Huh7 a la apoptosis inducida por Sorafenib indica un potencial papel relevante de p53 en la supervivencia y muerte celular en células de HCC.


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P28

Modulation of ascorbate biosynthesis in pepper fruits by nitric oxide (NO)

Marta Rodríguez-Ruiz, Rosa M. Mateos, Francisco J. Corpas, José M. Palma



Autor de contacto: Marta Rodríguez-Ruiz ([email protected])

Nitric oxide (NO) has been reported to prolong the lifespan of certain vegetables [1] and to delay flower and leaf senescence as well as fruit ripening [2,3]. Recently, it has been shown that ripening of pepper fruits is also delayed by NO and is characterized by an enhancement of protein tyrosine nitration [4]. Pepper (Capsicum annuum L.) fruits are one of the main plant sources of vitamin C (ascorbate), what make them greatly appropriate for human diet. The synthesis of ascorbate in plants occurs through several pathways, with the most important one involving the oxidation of galactono-γ-lactone to ascorbate by the galactono-γ-lactone dehydrogenase (GalLDH). Thus, the molecular and immunological characterization of GalLDH was accomplished and its involvement in the pepper physiology was studied.

On the other hand, pepper fruits from California type were treated with exogenous NO according to [5], these fruits displaying a longer lifespan and higher fresh weight than those untreated. Besides, treatment with NO promoted an increase of ascorbate levels in fruits concomitant with greater galactono-γ-lactone dehydrogenase activity. Obtained results in in vitro assays showed that GalLDH did not undergo either nitrosylation or nitration, as post-translational modifications. Overall our data indicate that during ripening of pepper fruits interplay among reactive nitrogen species (RNS) and antioxidants seems to occur. Thus, treatment with NO at low concentrations may help improving the quality of fruits, and search of natural sources of this gas could contribute to impact the agricultural sector.

[1] Wills RB et al. 2007. Nitric Oxide: Biol. Chem. 17: 44-49. [2] Leshem YY, Pinchasov Y. 2000. J. Exp. Bot. 51: 1471-1473. [3] Corpas FJ et al. 2004. Plant Physiol. 136:2722-2733. [4] Chaki M et al. 2015. Ann. Bot. 116: 637-647.



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P29

Daño oxidativo molecular en la enfermedad de Niemann-Pick tipo C

Víctor Rodríguez-Sureda1, Olga Sánchez1, Jorge J. Cebolla2, Pilar Irún2, Miguel Pocoví3, Carmen Domínguez1

1Centro de Investigaciones en Bioquímica y Biología Molecular-Nanomedicina, Institut de Recerca Hospital Vall

d’Hebrón, CIBER de Enfermedades Raras. 08035 Barcelona. 2Unidad de Investigación Traslacional. Hospital Miguel Servet. Zaragoza. 3Departamento de Bioquímica y Biología Molecular y Celular, Universidad de Zaragoza

Autor de contacto: Carmen Domínguez ([email protected])

La enfermedad de Niemann-Pick tipo C (NPC) es una patología de depósito lisosomal de herencia autosómica recesiva causada por mutaciones en los genes NPC1 (95%) o NPC2 (5%) que regulan el transporte intracelular de lípidos. El defecto bioquímico primario ocasiona la acumulación intracelular de colesterol no esterificado y esfingolípidos en el cerebro, hígado y/o bazo. La expresión clínica resultante es la afectación neurovisceral, aunque la neurodegeneración domina el curso clínico de la enfermedad. Se trata de una enfermedad rara cuya incidencia estimada es de 1/120.000 nacidos vivos. Los mecanismos patogénicos que vinculan la acumulación intracelular de colesterol con la muerte celular en NPC, se conocen parcialmente. El objetivo de este estudio fue profundizar en los mecanismos patogénicos de enfermedad y su relación con las vías de estrés oxidativo. Se incluyeron 20 pacientes diagnosticados de NPC mediante el análisis del DNA genómico que confirmó la presencia de una o dos mutaciones en el gen NPC1. Los marcadores indicativos de oxidación de lípidos (MDA), de proteínas (grupos carbonilo de proteínas) y óxidos de colesterol (7-cetocolesterol) se midieron en el plasma de los pacientes con NPC. La generación intracelular de especies reactivas de oxígeno (ROS) fue evaluada con la sonda 2',7'-diclorodihidrofluoresceína en cultivo de fibroblastos. La detección citoquímica del colesterol no esterificado perinuclear se realizó en fibroblastos cultivados utilizando la tinción fluorescente del filipin que se une específicamente al colesterol libre. Las células con acumulación positiva de colesterol se visualizan y cuantifican bajo el microscopio de fluorescencia. Nuestro estudio mostró una elevación significativa de MDA, el principal producto de la peroxidación lipídica (0,85 frente a 0,32 nmol/ml, p<0,0001) de proteínas carboniladas (1,8 vs 0,95 nmol/mg prot, p=0,007). Los niveles plasmáticos de 7-cetocolesterol fueron más altos que los valores de corte de controles en todos los pacientes con dos mutaciones NPC1 y en la mayoría de los pacientes de una sola mutación. La producción intracelular de ROS por los fibroblastos de pacientes NPC fue significativamente superior a la de los fibroblastos control. Nuestros resultados demuestran que las modificaciones oxidativas moleculares pueden estar implicados en la patogénesis de la enfermedad de Niemann-Pick tipo C.


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P30

Papel de la proproteína convertasa subtilisina/kexina de tipo 9 (PCSK9) en el macrófago

César Eduardo Rosales-Mendoza1,2, Marina Mojena1, Silvia González-Ramos1, Marta Paz-

García1, Emilio Acosta-Medina3, Paloma Martín-Sanz1, Lisardo Boscá1

1 Instituto de Investigaciones Biomédicas ‘Alberto Sols’ (CSIC-UAM), Madrid, España. 2Departamento de Bioquímica y Medicina Molecular, Universidad Autónoma de Nuevo León, Monterrey, México. 3Centro de

Estudios Avanzados de Cuba, La Habana, Cuba.

Autor de contacto: César Eduardo Rosales ([email protected]) PCSK9 es una serín proteasa perteneciente a la familia de las proproteínas convertasas que se libera principalmente por el hepatocito. Su función es regular la degradación del receptor de colesterol LDL (LDL-R), uniéndose a este receptor e impidiendo su reciclaje e induciendo su degradación lisosomal así como la disminución de su expresión en la superficie de los hepatocitos. Esto impide el aclaramiento hepático del colesterol LDL (LDL-C) sérico, aumentando sus niveles, lo que supone un importante factor de riesgo cardiovascular. PCSK9 se ha convertido en una proteína de interés relevante desde la identificación de su papel en el metabolismo lipídico. A su vez, PCSK9 ha sido implicada en la inflamación. Se ha documentado que los niveles de PCSK9 correlacionan con los de LDL-C en condiciones patológicas como la sepsis. Los macrófagos, que son participantes activos de la respuesta inflamatoria, así como en los procesos anti-inflamatorios y de pro-resolución de la inflamación, son de gran interés en el desarrollo de aterosclerosis. El proceso inflamatorio de la aterosclerosis parece estar más vinculado a PCSK9 que en sólo la regulación del LDL-R. En el presente trabajo presentamos que tanto macrófagos humanos como murinos no expresan PCSK9. Sin embargo, su presencia modula la activación y fenotipo de estas células inmunes, tanto a nivel transcripcional como funcional, entre ellos la disminución del LDL-R, así como la expresión de genes inflamatorios y la generación de radicales libres. Por tanto, además de su papel en el metabolismo lipídico, PCSK9 ejerce cambios en el macrófago que pueden contribuir al desarrollo de aterosclerosis.


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P31

Estudio de microRNAs en suero como predictores y marcadores de envejecimiento y fragilidad en humanos

Iryna Rusanova1, Ramy KA Sayed1, Marisol Fernández-Ortiz1,2,

Darío Acuña-Castroviejo1,2

1Centro de Investigación Biomédica, Parque Tecnológico de Ciencias de la Salud, Universidad de Granada,

Avda. del Conocimiento s/n, 18100 Armilla, Granada, Spain. 2Departamento de Fisiología, Facultad de Medicina, Universidad de Granada, Avenida de Madrid 11, 18012

Granada, Spain.

Autor de contacto: Iryna Rusanova ([email protected])

La causa de la sarcopenia no está clara, aunque se ha relacionado con procesos inflamatorios asociados a la edad. Los microRNA circulantes pueden modular la expresión de los genes y afectar a la respuesta del sistema inmunitario. El objetivo del estudio es determinar aquellos miRs que pueden servir como biomarcadores de sarcopenia, para lo cual valoramos tres miRs relacionados con el control de la inmunidad innata, miR-21, miR-146a, y miR-223, y el miR-483, que participa en la ruta del ciclo celular y la regulación de la síntesis de la melatonina. pare este estudio se usaron muestras de suero de jóvenes sanos (n=22) y de adultos mayores de 60 años sin (n=35) y con (n=39) fragilidad, que se obtuvieron de la cohorte de Toledo. Analizamos la expresión de los miRs seleccionados utilizando RT-PCR, así como los residuos de oxidación de proteínas (AOPP) y de oxidación de lípidos (LPO). Comparado con el grupo control, el grupo de mayores sin fragilidad presentan una mayor expresión de miR-223 y miR-483 (p<0.01), mientars que el grupo de mayores con fragilidad tienen elevada expresión de miR-21, miR-223 y miR-483 (p<0.01). Las mujeres tienen mayor nivel de AOPP y mayor expresión de miR-483 que los hombres. Existe una correlación positiva entre la expresión de miR-21 con miR-146a y miR-223, entre miR-146a con miR-223 y miR-483, y entre miR-223 y miR-483. Además, encontramos una correlación positiva entre presencia de ragilidad y expresión de miR-21 (ρ2=0.075, p =0.008), y miR-223 (ρ2=0.060, p=0.02). Los elevados niveles de miR-21 y miR-223 en adultos mayores con sarcopenia indican que hay una activación de la inmunidad innata asociada a la edad lo que apunta que estos miRs pueden considerarse como un biomarcadores de la fragilidad muscular en humanos. El aumento de la expresión de miR-483 circulante en el grupo experimental puede reflejar los cambios sistémicos propios relacionados con envejecimiento y pueden estar relacionados con una menor producción de la melatonina debido a la edad. Las mujeres tienen una mayor oxidación de las proteínas sistémicas y un aumento en la expresión de miR-483 en comparación con los hombres. Grants nº CEI2014-MPBS31, PI13-00981, y RD12/0043/0005


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P32 La expresión génica de HO-1 no está restringida epigeneticamente y requiere factores

de transcripción relacionados a estrés en plantas de soja sometidas a radiación ultravioleta-B

Diego Santa Cruz1, Natalia Pacienza1, Carla Zilli2, Eduardo Pagano2, Karina Balestrasse2,

Gustavo Yannarelli1

1Laboratorio de Regulación Génica y Células Madre, Instituto de Medicina Traslacional, Trasplante y Bioingeniería (IMeTTyB), Universidad Favaloro-CONICET, Solís 453, C1078AAI Buenos Aires,

Argentina 2 Universidad de Buenos Aires, Dpto. de Biología Aplicada y Alimentos;Cátedra de Bioquímica Argentina. Instituto de Investigación en Biociencias Agrícolas Ambientales CONICET. Av. San Martín 4453, C1417DS,

Buenos Aires, Argentina

Autor de contacto: Gustavo Yannarelli ([email protected]); Eduardo Pagano ([email protected])

La enzima Hemooxigenasa-1 (HO-1) juega un rol protector frente al estrés oxidativo en plantas. Sin embargo, los mecanismos que regulan su expresión génica han sido poco estudiados. En el presente trabajo investigamos el estado de metilación de una región rica en CG del promotor de HO-1 y la expresión de factores de transcripción (TFs) en plantas de soja sometidas a estrés por radiación ultravioleta-B (UV-B). El ADN genómico y el ARN total fue aislado de hojas de plantas irradiadas con 7.5 y 15 kJ.m-2 UV-B. El ADN fue tratado con bisulfito de sodio y una región promotora de 304 pares de bases fue amplificada mediante PCR, clonada en un vector plasmídico pGEM-T y analizada por secuenciación de ADN. El análisis de la secuenciación mostró niveles de metilación del promotor de HO-1 similares en plantas control y tratadas con las diferentes dosis de UV-B (C: 3.0±0.6%; 7.5: 3.14±0.5%; 15: 2.9±0.5%). Es interesante notar que el promotor de HO-1 se encontró fuertemente demetilado en el grupo control. Posteriormente, se estudió mediante RT-PCR cuantitativa la expresión génica de un grupo de TFs relacionados a estrés por calor, sequía y salinidad pero no habían sido estudiados frente a estrés por radiación UV-B (GmMYB177, GmMYBJ6, GmWRKY21 y GmWRK13). Se observó que los tres primeros responden a estrés por UV-B y mediarían la sobre-expresión de HO-1. En conjunto, estos resultados demuestran que la HO-1 no estaría regulada de una manera epigenética. Más aun, los bajos niveles de metilación del promotor sugieren que esta enzima puede responder rápidamente a fin de paliar el estrés ambiental. Finalmente, este trabajo permitió identificar algunos TFs involucrados en la sobre-expresión de HO-1 en respuesta a la radiación UV-B.


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P33

Especificidad funcional de las tiorredoxinas plastidiales f y m en la defensa frente al estrés oxidativo

Antonio J. Serrato1, Juan Fernández-Trijueque1, Antonio Cantalejo2, Mariam Sahrawy1

1 Departamento de Bioquímica, Biología Celular y Molecular de Plantas, Estación Experimental del Zaidín,

Consejo Superior de Investigaciones Científicas, C/Profesor Albareda 1, 18008 Granada. 2 Facultad de Ciencias, UGR, Fuente nueva s/n, 18071, Granada, Spain

Autor de contacto: Mariam Sahrawy ([email protected])

Las plantas son organismos sésiles expuestos a condiciones ambientales en continuo cambio que, en situaciones extremas, provocan la aparición de estrés oxidativo. La activación de los sistemas antioxidantes depende, en gran parte, de proteínas de la familia de las tiorredoxinas (TRXs), que son enzimas de pequeño tamaño (12-14 kDa) con un sitio activo constituido por dos residuos de Cys capaces de formar un puente disulfuro durante el mecanismo catalítico de reducción. Las TRXs f y m, localizadas en los plastidios, fueron las primeras isoformas del cloroplasto en describirse como activadores rédox de la fructosa-1,6-bisfosfatasa y la malato deshidrogenasa, respectivamente, aunque desde entonces, el número de procesos conocidos regulados por estas isoformas se ha incrementado notablemente. En Arabidopsis thaliana existen 2 TRXs de tipo f y 4 de tipo m. Basándonos en resultados previos en guisante (Fernández-Trijueque et al., 2012), hemos analizado el papel de cada isoforma m o f en la defensa frente al estrés oxidativo. Con este motivo, hemos sometido a mutantes de inserción de pérdida de función para cada isoforma de TRX f o m a diferentes situaciones de estrés provocado por la salinidad o por el agente oxidante metil viológeno (MV) y hemos analizado la respuesta de las distintas líneas mutantes de Arabidopsis. Aunque nuestros resultados mostraron una clara inducción de todas las isoformas analizadas en respuesta a la salinidad, sólo los mutantes trxf tenían afectada la capacidad germinativa en presencia de NaCl. Cuando se analizó el contenido en antocianinas como marcador de estrés oxidativo, pudimos observar un mayor incremento en los mutantes trxf, especialmente en el doble mutante trxf1 trxf2. Sin embargo, sólo el mutante trxm4 mostró una mayor acumulación en respuesta a MV. Sorprendentemente, a pesar de no acumular más antocianina que la línea silvestre, el fenotipo observado en el mutante trxm3 sugiere una probable función de TRX m3 en la defensa frente al estrés oxidativo en Arabidopsis. • Fernández-Trijueque et al. (2012). Plant Sci., 188-189: Page 82-8 Financiación: Proyectos BIO2012-33292, BIO2015-65272-C2-1-P del Ministerio de Economía y Competitividad, y Fondos Europeos para el Desarrollo Regional (Feder).


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P34 Involvement of the reactive oxygen species (ROS) metabolism in the response of rice

(Oryza sativa L.) plants to arsenic stress

Ernertina Solórzano1,2, Francisco J. Corpas1, José M. Palma1

1Group of Antioxidants, Free Radicals and Nitric Oxide in Biotechnology, Food and Agriculture, Department

of Biochemistry, Cell and Molecular Biology of Plants, Estación Experimental del Zaidín, CSIC, Apartado 419, E-18080 Granada, Spain

2Dpto Medio Ambiente, Instituto de Ciencias y Tecnologías Aplicadas (INSTEC), La Habana, Cuba

Autor de contacto: José M. Palma ([email protected])

Arsenic (As) is a highly toxic metalloid for all forms of life including plants [1]. It enters to organisms by different ways, so plants tissues and metabolisms are adversely affected. As-contaminated groundwater and food are serious health risks [1]. Rice is a principal food source for different countries worldwide. It is well known that there are high As concentrations in rice plants and grains [2]. Agronomic species not tolerant to arsenic show toxic patterns such as decrease in plant growth and crop yield. The induction of oxidative stress is the main process underlying arsenic toxicity in plants. Accordingly, plants respond to oxidative stress by increasing the production of antioxidant enzymes. In this work, some physiological and biochemical parameters in roots and shoots from rice (Oryza sativa L.) were studied under arsenic (50 µM) stress, and the involvement of the main antioxidative enzymes in the response of plants to those conditions was investigated. A decrease in root length as well as plant biomass was observed with 50 µM arsenic treatment, as compared to control plants. The results on the superoxide dismutase (SOD, EC 1.15.1.1) isozyme pattern, ascorbate peroxidase (APX, EC 1.11.1.11), guaiacol peroxidase (POD, EC 1.11.1.7), and glutathione reductase (GR, 1.6.4.2) showed that arsenic accumulation triggered a general imbalance of these protecting enzymes, with an overall increase in the activity of most of them. Lipid peroxidation was visualized in full roots and shoots with the Shift reagent, displaying highest staining in roots and leaves from As-treated plants. The H2O2 content was also analysed and it was found that this ROS was enhanced in roots and leaves against arsenic stress. The results indicate that shoots and roots are significantly affected by As treatment. In spite of the increased activities of the antioxidative enzymes, an oxidative stress situation appears to be overall consolidated since the parameters of oxidative damage could not be counteracted. [1] Zhao FJ et al (2010) Annu. Rev. Plant Biol. 61: 535-559. [2] Dave R et al. (2013) Arch Environ Contam Toxicol. 64: 235-242. [This work was supported by an ERDF-cofinanced grant from the Ministry of Science and Competitiveness (Recupera 2020-20134R056), Junta de Andalucía (group BIO 192), and CSIC (COOPB20171), Spain]


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P35

Compuestos bioactivos del sofrito modulan la producción de especies oxigenadas reactivas, óxido nítrico y eicosanoides

Carolina Storniolo1,3, Ignasi Sacanella1,3, María T. Mitjavila2,3, Rosa M. Lamuela-

Raventos1,3, Juan J. Moreno1,3 1Departamento Nutrición, Ciencias de la Alimentación y Gastronomia, Facultad de Farmacia, Universidad

de Barcelona, 2Departamento de Biología Celular, Fisiología e Inmunología, Facultad de Biología, Universidad de Barcelona, 3Instituto de Nutrición y Seguridad Alimentaria, Universidad de Barcelona

Autor de contacto: María Teresa Mitjavila ([email protected]; [email protected])

El consumo mundial de tomate se ha incrementado mucho debido a la demanda de productos como el sofrito que también contiene cebolla, ajo y aceite de oliva. El consumo regular de estos alimentos se ha asociado con una reducción en la incidencia de diversas enfermedades crónicas. Este efecto protector se ha atribuido al licopeno y otros carotenoides aunque el sofrito contiene además naringenina com principal flavonoide presente en el tomate e hidroxitirosol procedente del acete de oliva virgen. El objetivo de este trabajo fue determinar el efecto de estos compuestos bioactivos (1-50 µM) sobre la producción de especies oxigenadas reactivas (EOR) y eicosanoides por parte de macrófagos TPH-1 incubados en presencia de lipoproteinas oxidadas. La presencia de la naringenina disminuyó la producción de EOR y óxido nítrico (NO) así como la síntesis de prostaglandina E2 y leucotrieno B4 estimuladas por las lipoproteinas oxidadas. Estos efectos de la naringenina fueron concentración dependiente, presentando una IC50 entre 1-10 µM para estos parámetros. El efecto del licopeno y β-caroteno sobre estos parámetros fue menor (IC50 superiores a 25 µM), mientras que el hidroxitirosol tuvo un efecto superior a la naringenina (IC50 < 1 µM). La naringenina es rápidamente metabolizada tras su absorción principalmente por glucuronidación. En este estudio observamos que la naringenina 7-O-β-glucuronido, unos de sus principales metabolitos, mantiene la capacidad de inhibir la producción de EOR/NO y eicosanoides estimulada por lipoproteinas oxidadas de forma similar a la naringenina. Estos resultados sugieren que la naringenina, así como la naringenina 7-O-β-glucuronido, a concentraciones que se pueden alcanzar tras un consumo moderado de sofrito pueden ser capaces de modular el estrés oxidativo y la producción de eicosanoides que se encuentran implicados en la patogénesis de enfermedades crónicas de alta prevalencia como son las enfermedades cardiovasculares. Este trabajo ha sido financiado por el Ministerio Español de Economia e Innovación (AGL2013-49083-C3-1-R).


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P36

Role of p38 signaling pathway in Vismia baccifera-induced cytotoxicity in HepG2

Jenifer Trepiana1, Mª Puy Ancín1, Mª Begoña Ruiz-Larrea1, José Ignacio Ruiz-Sanz1 1Department of Physiology, Medicine and Nursing School, University of the Basque Country, UPV/EHU,

Leioa

Autor de contacto: José Ignacio Ruiz-Sanz ([email protected])

Vismia baccifera is a plant species of the Hypericaceae family, typical from the Amazonian rainforest. It is commonly used in the traditional healing in indigenous populations. Interestingly, the leaves of V. baccifera are recommended for a variety of inflammatory conditions. In a previous work we described the phenolic composition of aqueous leaf extracts of V. baccifera. The extract was rich in flavanols, particularly epicatechins and epicatechin dimers (Lizcano et al., Food Chem 2012). The plant infusion induced toxicity to the human hepatoma HepG2 cell line, increasing at early times the intracellular ROS levels (Lizcano et al., Nutrients 2014). In the present work we have investigated the possible involvement of p38 in the cytotoxicity elicited by the plant extract in HepG2. For this purpose, the p38 activation state was analyzed by western blot after the incubation of cells with V. baccifera. The extract induced a sharp increase in p38 phosphorylation, not affecting its expression. The pharmacological inhibition of the kinase did not rescue the cells from death. The treatment with the extract triggered cell cycle deregulation, reflected in the accumulation of p21 that resulted in the cell cycle blockage at G2/M phase. All these alterations were not restored by p38 inhibition. From these results we conclude that p38 signaling in response to V. baccifera is not a death signal in HepG2.

This work was supported by research grants from the Basque Government (Department of Education, Universities and Research, ref. IT687-13), and University of the Basque Country, UPV/EHU (CLUMBER UFI11/20 and pre-doctoral grant to J. Trepiana). Technical and human support provided by SGIKer (UPV/EHU, MICINN, GV/EJ, ESF) is gratefully acknowledged.


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P37

Los macrófagos, principales contribuyentes a la oxidación en la inmunosenescencia

Carmen Vida1,2, Julia Cruces1,2, Antonio Garrido 1,2, Irene Martínez De Toda 1,2, Mónica González3, Mónica De la Fuente1,2

1 Departamento de Fisiología Animal II, Facultad de Biología, Universidad Complutense de Madrid, C/José

Antonio Novais 12, 28040, Madrid. 2 Instituto de Investigación del Hospital 12 de Octubre, Avda. de Córdoba s/n, Madrid.

3 Departamento de Genética, Facultad de Biología, Universidad Complutense de Madrid, C/José Antonio Novais 12, 28040, Madrid.

Autor de contacto: Carmen Vida ([email protected])

Los cambios en la funcionalidad de las células inmunitarias con el proceso de envejecimiento (inmunosenescencia) se deben al “estrés oxidativo” que estas experimentan con el paso del tiempo. Aunque se ha propuesto, en la teoría de la oxidación-inflamación del envejecimiento, que son las células fagocíticas las que más contribuyen al aumento de la oxidación y del daño oxidativo asociado a este proceso, son muy escasos los estudios realizados al respecto. En este trabajo se han analizado en leucocitos peritoneales de ratones de hembra ICR-CD1 adultas, maduras, viejas y longevas (7, 13, 18 y 30 meses de edad, respectivamente), los cambios en una serie de compuestos oxidantes y de acúmulo de daño (lipofuscina), tanto en población de leucocitos totales (LT) como en macrófagos (MФ) aislados. Tras la extracción, identificación y recuento de los leucocitos peritoneales, se obtuvieron muestras de LT y de MФ aislados mediante adherencia al plástico, en las que se valoró la actividad/expresión de la enzima pro-oxidante xantina oxidasa (XO), así como los niveles de producción basal de anión superóxido (O2

.-) y de ROS intracelulares, mediante técnicas colorimétricas y western-blot. La autofluorescencia característica de la lipofuscina se detectó mediante un microscopio de epifluorescencia (λemisión>520 nm) y se cuantificó con el software Image-J. Al avanzar la edad se observó una mayor actividad/expresión de la XO, así como de la producción de O2

., de ROS y de acumulo de lipofuscina, tanto en LT como en MФ aislados, pero con valores significativamente mayores en los MФ, siendo los más elevados los de ratones viejos (XO/ROS:P<0,01; O2

.-: P<0,001 en comparación con los adultos). Sin embargo, en longevos los resultados obtenidos fueron similares a los de adultos. En conclusión, los macrófagos peritoneales de ratón presentan unos mayores niveles de oxidación y de acúmulo de daño en la vejez, hecho que no ocurre en los animales longevos. Esto apoyaría el hecho de que los fagocitos son las células inmunitarias que más podrían contribuir al aumento de la oxidación del organismo al envejecer y a que aquellos animales que alcanzan gran longevidad son los que tienen una mejor regulación redox de estas células. Financiación: FIS-(PI15/01787)-ISCIII-FEDER; RETICEF-(RD12/0043/0018)-ISCIII-FEDER.

XI Reunión del GERILI, Granada Participantes

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PARTICIPANTE

PÁGINAACUÑA, Darío Centro de Investigación Biomédica, Universidad de Granada, Granada [email protected]

22, 63, 86

ALCHÉ, Juan de Dios Estación Experimental del Zaidín, CSIC, Granada [email protected]

36, 56, 66

ÁLVAREZ TINAUT, Mª Carmen Departamento de Biología Vegetal, Ecología y Ciencias de la Tierra, Universidad de Extremadura, Badajoz [email protected]

68

BARROSO, Juan B. Departamento de Biología Experimental, Universidad de Jaén, Jaén [email protected]

31, 73

BECANA, Manuel Estación Experimental Aula Dei, CSIC, Zaragoza [email protected]

53

BORT MISOL, Carlos Manuel Merck Chemicals and Life Science, Madrid [email protected] BOSCÁ, Lisardo Instituto de Investigaciones Biomédicas Alberto Sols, CSIC UAM, Madrid [email protected]

33, 85

CABALLERO-DÍAZ, Daniel Bellvitge Biomedical Research Institute (IDIBELL), L’Hospitalet de Llobregat, Barcelona [email protected]

58

CALAHORRA, Jesús Departamento de Biología Experimental, Área de Bioquímica y Biología Molecular, Universidad de Jaén, Jaén [email protected]

59

CARBONELL, Teresa Departamento de Biología Celular, Fisiología e Inmunología, Facultad de Biología, Universidad de Barcelona, Barcelona [email protected]

43

CASÓS VÁSQUEZ, Kelly Hospital Universitario Vall d'Hebron, Barcelona [email protected]

64

CATALÀ, Myriam Environmental Toxicology Area, National Centre of Environmental Health, National Institute of Health Carlos III, Madrid [email protected]

75


94

CEJUDO, Fco. Javier Instituto de Bioquímica Vegetal y Fotosíntesis, Universidad de Sevilla, CSIC, Sevilla [email protected]

48

CORPAS, Francisco Javier Estación Experimental del Zaidín, CSIC, Granada [email protected]

32, 62, 73, 78, 83, 89

CUADRADO, Antonio Departamento de Bioquímica, Universidad Autónoma de Madrid, Madrid [email protected]

20

DE LA FUENTE, Mónica Departamento de Fisiología Animal II, Universidad Complutense de Madrid. Instituto de Investigación del Hospital 12 de Octubre, Madrid [email protected]

21, 67, 92

DEL RÍO, Luis Alfonso Estación Experimental del Zaidín, CSIC, Granada [email protected]

78

DÍAZ MORALES, Noelia University Hospital Doctor Peset, Foundation for the Promotion of Health and Biomedical Research in the Valencian Region (FISABIO), Valencia [email protected]

51

DOMÍNGUEZ, Mª Carmen Centro de Investigaciones en Bioquímica y Biología Molecular-Nanomedicina, Barcelona [email protected]

84

DUARTE, Sofía Centro de Investigaciones Biológicas, CSIC, Madrid [email protected]

77

ENRÍQUEZ, José Antonio Centro Nacional de Investigaciones Cardiovasculares Madrid [email protected]

30

ESPINOSA, Francisco Departamento de Biología Vegetal, Ecología y Ciencias de la Tierra, Universidad de Extremadura. Badajoz [email protected]

68

FABREGAT, Isabel Bellvitge Biomedical Research Institute (IDIBELL), L’Hospitalet de Llobregat, Barcelona [email protected]

17, 58


95

FERICHE-LINARES, Rafael Estación Experimental del Zaidín, CSIC Granada [email protected]

62

FERNÁNDEZ-GIL, Beatriz Centro de Investigación Biomédica, Universidad de Granada, Granada [email protected]

63

FINAMOR, Isabela Department of Physiology, University of Valencia, Valencia [email protected]

65

GARCÍA-QUIRÓS, Estefanía Estación Experimental del Zaidín, CSIC, Granada [email protected]

66

GILLSBRO, Karl Anders Merck Chemicals and Life Science, Madrid [email protected] GÓMEZ-BARDALLO, Raquel Departamento de Biología Celular, Fisiología e Inmunología, Universidad de Barcelona, Barcelona [email protected]

43

GONZÁLEZ, Raúl Instituto de Biomedicina de Sevilla (IBIS), CSIC, Sevilla [email protected]

37, 47, 52, 69, 82

HIDALGO, Elena Departamento Ciencias Experimentales y de la Salud, Universidad Pompeu Fabra, Barcelona [email protected]

28

HIDALGO, Mª Carmen Departamento de Zoología, Universidad de Granada, Granada [email protected]

60, 70

IGLESIAS, Jessica Estación Experimental del Zaidín, CSIC, Granada [email protected] LAMAS, Santiago Centro de Biología Molecular “Severo Ochoa”, CSIC- UAM, Madrid [email protected]

71

23

LIBERI, Manuela Bruker, Milano, Italia [email protected]

54

LIMA, Elena Estación Experimental del Zaidín, CSIC, Granada [email protected]

36


96

LÓPEZ DE LERMA, Mª Nieves Departamento de Química Agrícola y Edafología, Universidad de Córdoba, Córdoba [email protected]

45, 72

LÓPEZ-GRUESO, Mª José Departamento Bioquímica y Biología Molecular e IMIBIC, Universidad de Córdoba, Córdoba [email protected]

52

LÓPEZ-HUERTAS, Eduardo Estación Experimental del Zaidín, CSIC, Granada [email protected]

25

LLUCH, Carmen Departamento de Fisiología Vegetal, Universidad de Granada, Granada [email protected]

61

MARTÍN DE PABLOS, Ángel Departamento de Fisiología Médica y Biofísica, Universidad de Sevilla, Sevilla [email protected]

74

MARTÍNEZ-RUIZ, Antonio Hospital Universitario de La Princesa, Instituto de Investigación Sanitaria Princesa (IP), Madrid [email protected]

42

MÍGUEZ, Mª Prado Unidad de Toxicología, Universidad de Extremadura, Cáceres [email protected]

76

MIRANDA, Antonio Instituto de Biomedicina de Sevilla (IBIS), CSIC, Universidad de Sevilla Sevilla [email protected]

41, 47

MITJAVILA, María Teresa Departamento de Biología Celular, Fisiología e Inmunología, Universidad de Barcelona, Barcelona [email protected]

34, 90

MÓNICO, Andreia Centro de Investigaciones Biológicas, CSIC, Madrid [email protected]

77

MONSALVE, María Instituto de Investigaciones Biomédicas Alberto Sols, CSIC-UAM, Madrid [email protected]

50

MORENO, Juan J. Instituto de Nutrición y Seguridad Alimentaria, Universidad de Barcelona Barcelona [email protected]

90


97

MUNTANÉ, Jordi Instituto de Biomedicina de Sevilla (IBiS), CSIC, Sevilla [email protected]

37, 52, 69, 82

NAVARRO, Elena Instituto de Biomedicina de Sevilla (IBiS), CSIC, Sevilla [email protected]

37, 69, 82

PADILLA, Carmen Alicia Universidad de Córdoba, e Instituto Maimónides de Investigación Biomédica de Córdoba (IMIBIC), Córdoba [email protected] PAGANO, Eduardo Facultad de Agronomía, Universidad de Buenos Aires Argentina [email protected] PALMA, José Manuel Estación Experimental del Zaidín, CSIC, Granada [email protected] PALOMERO, Jesús Departamento de Fisiología y Farmacología, Universidad de Salamanca Salamanca [email protected] PALLARDÓ, Federico Departamento de Fisiología, Universidad de Valencia, Valencia [email protected] PAMPLONA, Reinald Universitat de Lleida-Institut de Recerca Biomèdica de Lleida, Lleida [email protected] PAVANATO, Maria Amalia Department of Physiology and Pharmacology, Federal University of SantaSanta Maria, Brasil [email protected] PEDRAJAS, José Rafael Departamento Biología Experimental, Universidad de Jaén, Jaén [email protected] PEINADO, Rafael Departamento de Química Agrícola y Edafología, Universidad de Córdoba, Córdoba [email protected] PEINADO, José Departamento de Bioquímica y Biología Molecular, Universidad de Córdoba, Córdoba [email protected]

47, 52, 69

38, 87

62, 71,73, 78, 83, 89

49

16, 18

26

46, 65

47

45, 72

45, 72


98

PÉREZ JIMÉNEZ, Amalia Departamento Zoología, Universidad de Granada, Granada [email protected] PÉREZ RUIZ, Irantzu Departamento de Fisiología, Universidad del País Vasco, Leioa, Vizcaya [email protected] PÉREZ-SALA, Dolores Centro de Investigaciones Biológicas, CSIC, Madrid [email protected] REQUEJO, Raquel Departamento de Bioquímica y Biología Molecular, Universidad de Córdoba, Córdoba [email protected] RIUS PÉREZ, Sergio Departamento de Fisiología, Universidad de Valencia, Valencia [email protected] RODRÍGUEZ, Marta Estación Experimental del Zaidín, CSIC, Granada [email protected] RODRÍGUEZ-HERNÁNDEZ, Mª Ángeles Instituto de Biomedicina de Sevilla, CSIC, Universidad de Sevilla Sevilla [email protected] ROS, Joaquim Departamento de Ciencias Médicas Básicas, Universidad de Lleida Lleida [email protected] ROSALES, César Eduardo Instituto de Investigaciones Biomédicas Alberto Sols, CSIC, Madrid [email protected] ROVIRA, Susana University Hospital Doctor Peset, Foundation for the Promotion of Health and Biomedical Research in the Valencian Region (FISABIO), Valencia [email protected] RUIZ SANZ, José Ignacio Departamento de Fisiología, Universidad del País Vasco, Leioa, Vizcaya [email protected] RUIZ-LARREA, Mª Begoña Departamento de Fisiología, Universidad del País Vasco, Leioa, Vizcaya [email protected]

80

79

40, 77

81

44

62, 71, 73, 83

37, 69, 82

29

33, 85

51

39, 79, 91

39, 79, 91


99

SÁEZ, Guillermo Departamento de Bioquímica y Biología Molecular, INCLIVA, Valencia [email protected] SAHRAWY, Mariam Estación Experimental del Zaidín, CSIC, Granada [email protected] SASTRE, Juan Departamento de Fisiología, Universidad de Valencia, Valencia [email protected] SEIQUER, Isabel Estación Experimental del Zaidín, CSIC, Granada [email protected] SEVILLA, Francisca Centro de Edafología y Biología Aplicada del Segura, CSIC, Murcia [email protected] SIES, Helmut Institute of Biochemistry and Molecular Biology I, Heinrich Heine University Düsseldorf, Düsseldorf, Alemania [email protected] TREPIANA, Jenifer Departamento de Fisiología, Universidad del País Vasco, Leioa, Vizcaya [email protected] VÍCTOR, Víctor M. University Hospital Doctor Peset, Foundation for the Promotion of Health and Biomedical Research in the Valencian Region (FISABIO), Valencia [email protected] VIDA, Carmen Departamento de Fisiología Animall II, Universidad Complutense de Madrid, Madrid [email protected] VIEDMA, Álvaro Centro de Investigaciones Biológicas, CSIC, Madrid [email protected] VIÑA, José Departamento de Fisiología, Universidad de Valencia, Valencia [email protected]

19

88

44, 65

57

18

27

39, 91

51

67, 92

40

24

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