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Interações Antígeno-Anticorpo. Ana Cláudia Carvalho Gouveia. Interações Ag - Ac. Ligações não covalentes Reversíveis. Características das interações Ag-Ac. Afinidade Força de interação entre um único sítio de ligação Ag-Ac (em um único epítopo). Características das interações Ag-Ac. - PowerPoint PPT Presentation
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Interações Antígeno-Anticorpo
Ana Cláudia Carvalho Gouveia
Interações Ag - Ac
Ligações não covalentesLigações não covalentes ReversíveisReversíveis
Características das interações Ag-AcAfinidade
Força de interação entre um único sítio de ligação Ag-Ac (em um único epítopo).
Características das interações Ag-Ac
Avidez
- Força de interações total entre Ac e Ag. - Soma das afinidades de todos epítopos envolvidos
Especificidade
- Capacidade do Ac distinguir seu imunógeno de outros Ags.
Características das interações Ag-Ac
Reação cruzada- Dois Ag diferentes apresentam epítopos estruturalmente semelhantes
- Ac específicos para um epítopo se ligam a um epítopo não relacionado, mas com propriedades químicas similares.
MétodosReagentes não marcados(A ligação do Ac altera o estado físico do Ag)
Reação de aglutinação Reação de precipitação
Reagentes marcados RIA ELISA IF, citometria de fluxo Western Blotting
Reação de aglutinação
Direta eritrócitos (hemaglutinação), bactérias, fungosPassiva látex
(Ag insolúvel)
Qualitativos
Semi-quantitativos
Ex.: classificação sanguinea Ex.: detectar infecções
Inibição da Aglutinação
- Quantidades de Ag solúvel são adicionadas a uma quantidade fixa de soro contendo o Ac.
Precipitado visível
Reação de precipitação
- A medida que a quantidade de Ag aumenta, a quantidade de precipitado também aumenta até um máximo, para depois diminuir.
Precipitação em solução
Precipitação em gelImunodifusão Radial
Precipitação em gelImunodifusão Dupla
Reagentes marcados
- Enzimas, fluorocromos, isótopos- Tipos:
RIA ELISA IF, citometria de fluxo Western Blotting
Radioimunoensaios Utilizam Ac conjugados com
radioisótopos para quantificar os ensaios. • Vantagens:– Alta sensibilidade– Permite medidas rápidas e precisas
• Desvantagens:– Custo– Vida média dos reagentes– Risco operacional (radiação)
ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay)- Baseia-se na quantificação de uma reação enzimática associada com complexos imunes.
Imunofluorescência- Utilizam-se Ac ou Ag conjugados a moléculas reveladoraschamadas fluorocromos.
- Visualização em microscópio de fluorescência
Isotiocianato de fluoresceína (FITC) VERDE Ficoeritrina (FE) VERMELHA
Imunofluorescência DiretaAplicações:- Detecção direta de microrganismos (secreções, urina, cortes de tecidos); - Identificação de subpopulações de linfócitos;- Fenotipagem de células tumoraisEx.: Detecção de Chlamydia trachomatis em secreção uretral
Ex.: Detecção de Ac anti- T. cruzi
Aplicações:- Detecção de anticorpos específicos contra diversos microrganismos; - Diagnóstico de doenças auto-imunes;
Detecção de Ac anti-nuclear
Imunofluorescência Indireta
Citometria de fluxo- Detecta, separa e quantifica células contendo um antígeno particular, marcadas com um fluorocromo; - Cada anticorpo é marcado com um fluorocromo diferente; - As células são então analizadas no citômetro de fluxo.
- As células saem de uma célula de fluxo e são iluminadas por um raio laser;
Citometria de fluxo
- A quantidade de raios laser que é dispersa para fora das células durante a passagem das mesmas pelo laser pode ser medida, o que proporciona informação a respeito do tamanho das células.
- O laser pode também excitar o fluorocromo nas células e a luz fluorescente emitida pode ser medida por um ou mais detectores.
Aplicações:
-Caracterização de populações celulares;
- Contagem de microrganismos;
- Separação de populações celulares de acordo com a densidade dos antígenos, tamanho e granulosidade das células;
- Análise de proliferação celular.
CD4 CD8
CD19
Western Blot
Ensaios imunocromatográficos
Teste rápido de HIV(Ac anti-HIV)
Diagnóstico de gravidez( detecção de beta HCG)
Técnicas de Biologia Molecular
Reação da Polimerase em Cadeia
Amostra + Reagentes
RT-PCR (Reverse Transcriptase – Polymerase Chain
Reaction)
Termociclador
Detecção da Amplificação
Produto (PCR ou RT-PCR)
Eletroforese em gel de
poliacrilamida
1. Qual a principal diferença entre os métodos de ELISA e imunofluorescência?
2. Em uma tipagem sanguínea houve aglutinação ao se misturar o sangue pesquisado e os soros anti-AB e anti-Rh. Determine o tipo sanguíneo e faça um esquema explicando a reação ocorrida.
3. Quais as características do anticorpo que podem influenciar a sua ligação ao antígeno?
4. Ao realizar os exames pré-natais, a gestante J.A.C, 26 anos, apresentou teste ELISA positivo para HIV. Como você interpreta este resultado? Descreva suscintamente a reação ocorrida.
5. Qual imunoensaio você escolheria para o acompanhar o prognóstico de um paciente com linfoma? Justifique sua resposta.
Relatório
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