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 562 ISSN 0102-695X Recebido em 13/01/06. Aceito em 20/07/06 * E-mail: [email protected]; [email protected], Tel/Fax + 55-81-32721383 Revista Brasileira de Farmacognosia Brazilian Journal of Pharmacognosy 16(4): 562-567, Out./Dez. 2006      A     r      t      i     g     o Desenvolvimento e validação da metodologia de quanti cação gravimétrica de resina glicosídica em toterápicos contendo Operculina macrocarpa (L.) Urban  Luciana R. Li ma 1  , Haroudo S. Xavier 2  , Juliana L. Meira 3  , Pedro J. Roli m Neto 1 * 1  Laboratório de T ecnologia dos Medicamentos, Departamento de Ciências Farmacêuticas, Univ ersidade Federal de  Pernambuco, Cidade Universitária, 50740-521, Recife, PE, Brasil, 2  Laboratório de Farmacognosia, Departamento de Ciências Farmacêuticas, Universidade Federal de Pernambuco, Cidade Universitária, 50740-521, Recife, PE, Brasil, 3  Núcleo de Controle de Qualidade de Medicamentos e Correlatos, De partamento de Ciências Farmacêuticas, Universidade Federal de Pernambuco, Cidade Universitária, 50740-521, Recife, PE, Brasil RESUMO:  O extrato de tubérculos de Operculina macrocarpa (Jalapa do Brasil) é um produto toterápico, com ecácia no tratamento de constipação, como laxante. A resina quanti cada é extraída com solução hidroalcóolica apresentando constituintes orgânicos e inorgânicos, podendo ser dividida em duas frações principais: uma solúvel em éter, chamada de jalapina e outra, mais  polar, ainda pouco estudada, denominada convolvulina. O interesse principal deste trabalho foi propor uma otimização da metodologia gravimétrica para doseamento da resina descrita na Farmacopéia Brasileira primeira edição e sua validação com o objetivo de diminuir os custos e o tempo de partição das fases. Os resultados obtidos na validação foram tratados estatisticamente  por análise de variância one-way (ANOVA) e teste t  de Student . O método demonstrou atender aos requisitos de boas práticas em laboratórios exigidos pela legislação brasileira em vigor, RE n° 899 de 29 de maio de 2003 da Agência Nacional de Vigilância Sanitária, sendo, portanto, sensível, exato e preciso para o doseamento do extrato de Operculina macrocarpa, conhecida popularmente como Jalapa-do-Brasil. Unitermos: Operculina macrocarpa,  jalapa do Brasil, doseamento, validação, fitoterápico. ABSTRACT : “Development and validation of the gravimetric quantication of the glucoside resin in phytomedicine containing Operculina macrocarpa (L.) Urban“. The tubercle extract of Operculina macrocarpa  (Jalap of Brazil) is a phytomedicine, with effectiveness in the treatment of constipation, as laxative. The quanti ed resin is extracted with hydro-alcoholic solution, presenting organic and inorganic constituents, separable in two main fractions: one soluble in ether, called  jalapina and other, more polar, still little studied, called convolvulina. The main objective of this work was to consider the optimization of the gravimetrical methodology for assay of the resin described in the Brazilian Pharmacopeia, First Edition and its validation, with the objective to diminish the costs and the partition time of the phases. The results achieved in the validation had been statistically treated by one-way Variance Analysis (ANOVA) and t  test of Student . The method demonstrated to attend to the Good Manufacture Practice requirements for laboratories, demanded by actual brazilian law, RE n° 899 of May 29 th  of 2003 from the National Agency of Sanitary V igilance, being therefore, sensible, accurate and precise for the assay of theOperculina macrocarpa extract, known popularly as Jalap of Brazil. Keywords: Operculina macrocarpa, Jalap of Brazil, assay , validation, phytomedicine. INTRODUÇÃO A Operculina macrocarpa (L.) Urban é uma Covolvulaceae anual, com hábitos de trepadeira, distribuída principalmente em regiões tropicais e subtropicais. Fazem parte também desta família as espécies do gênero  Ipomoea, que produzem a conhecida raiz tuberosa de batata doce (Joly, 1975). A jalapa é encontrada em regiões compreendidas entre Antilhas e o Brasil, além de regiões temperadas dos Andes Mexicanos, em regiões lamacentas e de solo  profundo. (Planchon,1937). No Brasil é encontrada em vários estados recebendo assim diversas sinonímias  populares, dentre as mais citadas na literatura estão:  batata-de-purga, xalapa, jalapa-de-São Paulo, purga-do- Amaro Leite, jalapa-do-Brasil (Cruz, 1980; Michelin; Salgado 2004). Dentre as várias utilizações populares, as mais freqüentes são como laxante e purgativo em prisão de ventre e constipação crônica. Emprega-se também como depurativo do sangue e na leucorréia, diarréia, disenteria, fraqueza geral. Esta planta tem também a propriedade

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  • 562ISSN 0102-695X

    Recebido em 13/01/06. Aceito em 20/07/06

    * E-mail: [email protected]; [email protected], Tel/Fax + 55-81-32721383

    Revista Brasileira de FarmacognosiaBrazilian Journal of Pharmacognosy16(4): 562-567, Out./Dez. 2006

    Arti

    goDesenvolvimento e validao da metodologia de quantifi cao gravimtrica de resina glicosdica em fi toterpicos contendo

    Operculina macrocarpa (L.) UrbanLuciana R. Lima1, Haroudo S. Xavier2, Juliana L. Meira3, Pedro J. Rolim Neto1*

    1Laboratrio de Tecnologia dos Medicamentos, Departamento de Cincias Farmacuticas, Universidade Federal de Pernambuco, Cidade Universitria, 50740-521, Recife, PE, Brasil,

    2Laboratrio de Farmacognosia, Departamento de Cincias Farmacuticas, Universidade Federal de Pernambuco, Cidade Universitria, 50740-521, Recife, PE, Brasil,

    3Ncleo de Controle de Qualidade de Medicamentos e Correlatos, Departamento de Cincias Farmacuticas, Universidade Federal de Pernambuco, Cidade Universitria, 50740-521, Recife, PE, Brasil

    RESUMO: O extrato de tubrculos de Operculina macrocarpa (Jalapa do Brasil) um produto fi toterpico, com efi ccia no tratamento de constipao, como laxante. A resina quantifi cada extrada com soluo hidroalcolica apresentando constituintes orgnicos e inorgnicos, podendo ser dividida em duas fraes principais: uma solvel em ter, chamada de jalapina e outra, mais polar, ainda pouco estudada, denominada convolvulina. O interesse principal deste trabalho foi propor uma otimizao da metodologia gravimtrica para doseamento da resina descrita na Farmacopia Brasileira primeira edio e sua validao com o objetivo de diminuir os custos e o tempo de partio das fases. Os resultados obtidos na validao foram tratados estatisticamente por anlise de varincia one-way (ANOVA) e teste t de Student. O mtodo demonstrou atender aos requisitos de boas prticas em laboratrios exigidos pela legislao brasileira em vigor, RE n 899 de 29 de maio de 2003 da Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria, sendo, portanto, sensvel, exato e preciso para o doseamento do extrato de Operculina macrocarpa, conhecida popularmente como Jalapa-do-Brasil.

    Unitermos: Operculina macrocarpa, jalapa do Brasil, doseamento, validao, fi toterpico.

    ABSTRACT: Development and validation of the gravimetric quantifi cation of the glucoside resin in phytomedicine containing Operculina macrocarpa (L.) Urban. The tubercle extract of Operculina macrocarpa (Jalap of Brazil) is a phytomedicine, with effectiveness in the treatment of constipation, as laxative. The quantifi ed resin is extracted with hydro-alcoholic solution, presenting organic and inorganic constituents, separable in two main fractions: one soluble in ether, called jalapina and other, more polar, still little studied, called convolvulina. The main objective of this work was to consider the optimization of the gravimetrical methodology for assay of the resin described in the Brazilian Pharmacopeia, First Edition and its validation, with the objective to diminish the costs and the partition time of the phases. The results achieved in the validation had been statistically treated by one-way Variance Analysis (ANOVA) and t test of Student. The method demonstrated to attend to the Good Manufacture Practice requirements for laboratories, demanded by actual brazilian law, RE n 899 of May 29th of 2003 from the National Agency of Sanitary Vigilance, being therefore, sensible, accurate and precise for the assay of the Operculina macrocarpa extract, known popularly as Jalap of Brazil.

    Keywords: Operculina macrocarpa, Jalap of Brazil, assay, validation, phytomedicine.

    INTRODUO

    A Operculina macrocarpa (L.) Urban uma Covolvulaceae anual, com hbitos de trepadeira, distribuda principalmente em regies tropicais e subtropicais. Fazem parte tambm desta famlia as espcies do gnero Ipomoea, que produzem a conhecida raiz tuberosa de batata doce (Joly, 1975).

    A jalapa encontrada em regies compreendidas entre Antilhas e o Brasil, alm de regies temperadas dos Andes Mexicanos, em regies lamacentas e de solo

    profundo. (Planchon,1937). No Brasil encontrada em vrios estados recebendo assim diversas sinonmias populares, dentre as mais citadas na literatura esto: batata-de-purga, xalapa, jalapa-de-So Paulo, purga-do-Amaro Leite, jalapa-do-Brasil (Cruz, 1980; Michelin; Salgado 2004).

    Dentre as vrias utilizaes populares, as mais freqentes so como laxante e purgativo em priso de ventre e constipao crnica. Emprega-se tambm como depurativo do sangue e na leucorria, diarria, disenteria, fraqueza geral. Esta planta tem tambm a propriedade

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    Desenvolvimento e validao da metodologia de quantifi cao gravimtrica de resina glicosdica em fi toterpicos

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    de regularizar a menstruao (Cruz, 1980; Michelin; Salgado 2004).

    Classicamente a constituio qumica de Convolvulaceae defi nida por dois grupos resinosos principais, um deles solvel em ter, denominado de jalapina e outro, mais polar, ainda pouco estudado, denominado de convolvulina (Noda, 1987). Ainda fazem parte da constituio das resinas outros compostos orgnicos e inorgnicos (Shellard,1961).

    A grande utilizao da Operculina macrocarpa levou sua incluso na primeira e segunda Farmacopia Brasileira (Brando et al., 2006). exigncia da Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria (ANVISA), Resoluo (RDC Nq 48, 2004), que regula os medicamentos fi toterpicos, que para efeito de registro, se faz necessrio a elaborao de um relatrio de controle de qualidade, incluindo anlises qualitativas e quantitativas dos princpios ativos e/ou marcadores, quando conhecidos, ou classes de compostos qumicos caractersticos da espcie.

    Sendo parte integrante da qualidade, a validao segundo normas da ANVISA (Resoluo RE n 899, 2003), tem como objetivo garantir, por meio de estudos experimentais, que o mtodo atenda s exigncias das aplicaes analticas, assegurando a confi abilidade dos resultados. Para tanto, deve apresentar especifi cidade, linearidade, intervalo, preciso, sensibilidade, limite de quantifi cao, exatido, adequados anlise,demonstrando que o mtodo apropriado para a fi nalidade pretendida, ou seja, a determinao qualitativa, semi-quantitativa e/ou quantitativa de frmacos e outras substncias em produtos farmacuticos. O uso de ferramentas estatsticas adequadas, tais como teste T Student e teste F, anlise de varincia, regresso linear entre outras, esto indicadas para demonstrao dessa evidncia objetiva da validade do mtodo (Barros, 2002). O presente trabalho teve como objetivo desenvolver e validar uma metodologia de doseamento para o extrato de Jalapa do Brasil a partir de mtodo gravimtrico.

    MATERIAL E MTODOS

    Material

    Foram coletadas amostras de Operculina Macrocarpa em So Jos de Espinhais no Estado da Paraba, numa vegetao de caatinga, situada nas coordenadas:065050S e 371933W. A responsvel pela identifi cao da espcie foi a prof. Maria Bernadete Costa e Silva, a exsicata se encontra depositada no IPA (Empresa Pernambucana de Pesquisa Agropecuria) sob n de registro 66.300.

    O material utilizado foi o extrato hidroalcolico 50% de Jalapa do Brasil (Operculina macrocarpa),

    clorofrmio (Nuclear), citrato de potssio (Nuclear),gua destilada, acetato de etila (Nuclear), propanol (Merck), metaperiodato de sdio (Merck), benzidina (Merck), placas cromatogrfi cas de gel de slica Merck.

    Preparao do extrato de jalapa

    Foram pesados 400 g de batata de purga secas e trituradas com tamanho de partcula entre 400 840 m e transferidas para um percolador de ao inox onde foi submetida a um processo de macerao por 24 horas utilizando 2000 mL de soluo hidroalcolica 50%.

    Este processo foi defi nido a partir de ensaios em diferentes condies, fazendo variar o tamanho de partculas, o tempo de macerao e a proporo de soluo hidroalcolica.

    O mtodo gravimtrico (Farmacopia Brasileira 1 ed.,1926) determina que sejam tomados 20 mL de extrato e transferidos para um funil de separao, em seguida adiciona-se 10 mL de clorofmio, 12 g de citrato de potssio e 12 mL de gua destilada, agita-se vigorosamente e deixa em repouso por 12 horas. Ocorre uma separao em duas fases: uma clorofrmica (superior) e uma aquosa (inferior). A fase inferior descartada e a fase superior transferida para uma cpsula previamente tarada e concentrada em banho-maria. O resduo seco a 100C at peso constante.

    Foi desenvolvida uma metodologia na qual o citrato de potssio foi retirado e a fase quantifi cada passou a ser a inferior. Tambm foi viabilizada uma reduo no tempo de partio das fases que passou de 12 para 2 horas sem reduo na capacidade de partio das duas fases. Esta avaliao ocorreu a partir da observao da qualidade da partio em diferentes tempos.

    Estudo da validao

    Os parmetros avaliados foram a Robustez, Linearidade, Especifi cidade, Preciso, Limite de Deteco (LD), Limite de Quantifi cao (LQ) e Exatido.

    Linearidade

    A linearidade foi avaliada atravs do tratamento dos dados por regresso linear pelo mtodo dos mnimos quadrados dos pontos mdios de 3 (trs) curvas de calibrao autnticas, contendo cinco concentraes equivalentes a 5; 7,5; 10; 12,5 e 15 mg/mL da resina de Jalapa.

    Limite de deteco (LD) e Limite de quantifi cao (LQ)

    Os limites de deteco e o de quantifi cao foram calculados pela diviso do desvio padro dos coefi cientes

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    Luciana R. Lima, Haroudo S. Xavier, Juliana L. Meira, Pedro J. Rolim Neto

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    lineares das trs curvas de calibrao do ensaio de linearidade pela mdia dos coefi cientes angulares destas respectivas curvas e multiplicado por 3,0 e 10,0 respectivamente. (Resoluo RE n 899, 2003)

    Robustez

    A robustez do mtodo avaliou as seguintes variveis: presena ou ausncia de citrato, presena ou ausncia de luz e tempo de partio das fases. A avaliao

    dos resultados foi realizada atravs da anlise de varincia one-way (ANOVA) e teste t de Student.

    Especifi cidade

    Foi avaliada a partir da anlise do placebo soluo hidroalcolica 50% em cromatografi a de camada delgada, utilizando como fase mvel: acetato de etila/propanol/gua (5,7:3,2:1,3), fase fi xa: placa cromatogrfi ca de gel de slica Merck e substncia reveladora: metaperiodato

    Linearidade y = 1,4867x - 1,2667R2 = 0,9935

    0,000

    5,000

    10,000

    15,000

    20,000

    25,000

    0 5 10 15 20

    Extrato (mg/mL)

    Res

    ina

    (%)

    Figura 1. Curva de regresso linear obtida da mdia das trs curvas de calibrao autnticas.

    Fonte SQ gl MQ F F-crticoModelo 414,4083 1 414,4083 946,52562 4,6672 Residual 5,6917 13 0,4378 Curva linear Falta de ajuste 2,6917 3 0,8972 2,9907 3,7083 Erro puro 3,0000 10 0,3 No h falta de ajuste Total 420,1000 14 30,0071

    Tabela 1. Resultados da anlise de varincia para linearidade

    SQ = Soma Quadrtica; gl = Graus de Liberdade; MQ = Mdia Quadrtica

    Parmetros Variveis Mdia CV% t cal t crt Fcal Fcrt

    Ausncia 13,33 2,17 2,121 Luz Presena 12,83 2,25

    2,776 - -

    Ausncia 13,17 2,19 1,414 Citrato Presena 12,83 2,25

    2,776 - -

    12h 13,5 3,7 6h 12,83 2,25

    3h 13,17 4,38 Tempo

    2h 13,17 2,19

    - - 1,185 4,066

    Tabela 2. Resultados da avaliao da robustez de acordo com ANOVA e teste t de Student

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    de sdio/benzidina

    Preciso

    A preciso foi avaliada nos nveis: repetitividade e preciso intermediria. A repetitividade foi determinada pela anlise de seis amostras individuais (sextuplicata). A preciso intermediria foi determinada em dois dias por dois analistas diferentes.

    A repetitividade foi expressa atravs do coefi ciente de variao entre as amostras (CV) e a preciso intermediria, alm do CV, foi avaliada pelo teste t de Student.

    Exatido

    A exatido do mtodo foi avaliada a partir da anlise de amostras em concentraes conhecidas do extrato de Jalapa equivalentes a 50, 100 e 150% da concentrao terica analisada. Os resultados foram avaliados atravs do teste t de Student pareado,comparando-se os resultados em relao ao valor terico defi nido para cada concentrao analisada.

    Todas as anlises foram realizadas em triplicatas e para cada parmetro avaliado foram preparadas curvas controles dirias com as concentraes de 5, 10 e 15 mg/mL.

    RESULTADOS E DISCUSSO

    A partir do extrato fl uido obtido e otimizado no processo, controlando-se as variveis: tamanho de partcula, tempo de macerao e proporo da soluo extrativa, foi desenvolvida e validada a metodologia analtica de tal maneira que o citrato de potssio, que tinha a funo na metodologia de tornar a fase aquosa mais densa que a clorofrmica, foi retirado e a fase quantifi cada passou a ser a inferior.

    O tempo de partio das fases (clorofrmica e aquosa) foi reduzido de 12 para 2 horas, na ausncia de citrato.

    A cpsula de porcelana e o banho-maria foram substitudos por placa de petri e chapa de aquecimento reduzindo, assim, o tempo de anlise sem com isso prejudicar o teor do analito.

    Com a retirada do citrato de potssio e a reduo do tempo de partio, foram reduzidos os custos analticos tornando a metodologia mais vivel para aplicao na rotina industrial.

    Para o parmetro de linearidade, os resultados apresentados esto ilustrados (Figura 1) e demonstraram que o mtodo linear, tendo regresso linear estatstica signifi cativa, com equao da reta: Y = 1,4867(r0,0521)X 1,2667 (r 1,1073), correlacionando concentrao do extrato (X) e porcentagem de resina obtida (Y), onde R2 = 0,9935, o que sugere que 99,35 % dos valores so

    Concentrao (%) Dias Analistas 1 2 3

    Mdia CV%

    I 13 13,5 13,5 13,33 2,16 1 II 13 13,5 14 13,5 3,70 I 14 14 13,5 13,83 2,09 2 II 13 13 14 13,33 4,33

    t calc t crt

    Analistas 1 e 2 no 1 dia 0,500 Analistas 1 e 2 no 2 dia 1,341 Analista 1 no 1 e 2 dia 2,121 Analista 2 no 1 e 2 dia 0,377

    2,776

    Tabela 3. Resultados da Repetitividade.

    Tabela 4. Resultados da preciso intermediria.

    Tabela 5. Resultados do teste t de Student para preciso intermediria.

    Concentrao (ppm) 1 2 3 4 5 6

    Mdia D.P. CV%

    13 13 14,5 13,5 14 14 13,67 0,61 4,43

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    Luciana R. Lima, Haroudo S. Xavier, Juliana L. Meira, Pedro J. Rolim Neto

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    explicados em torno da mdia, sendo minimizado os resduos.

    A partir da anlise de varincia (Tabela 1) podemos verifi car a linearidade do mtodo e a signifi cncia estatstica da curva ajustada. As anlises de varincia dos dados demonstraram que o mtodo linear, na faixa de concentrao testada (5 15 mg/mL) e que no h falta de ajuste do modelo com 95% de confi ana.

    Os limites de deteco (1,2816 mg/mL) e de quantifi cao (1,9418 mg/mL) obtidos de acordo com o tratamento descrito na RE n 899, ANVISA, mostram que o mtodo bastante sensvel resina.

    Os resultados da avaliao dos parmetros da robustez foram avaliados por teste t de Student e anlise de varincia one-way e esto apresentados na tabela 2.

    Como os valores calculados foram menores que os tabelados comprovou-se que no h diferena estatisticamente signifi cativa entre variveis dos diferentes parmetros analisados, com um intervalo de confi ana de 95%.

    O mtodo apresentou-se preciso nos dois nveis avaliados. A repetitividade realizada em sextuplicata com concentrao a 100%, apresentou um coefi ciente de variao (CV) de 4,43% inferior ao especifi cado pela Resoluo vigente, que de 5 % (Tabela 3).

    Na preciso intermediria, no foram evidenciadas diferenas estatisticamente signifi cativas entre analistas e dias diferentes, empregando-se o teste tde Student, com 95% de confi ana, como observado nas Tabelas 4 e 5, onde o t calculado inferior ao t tabelado.

    Na anlise do placebo (soluo hidroalcolica 50%), no foi detectada a presena de aucares caractersticos da resina da Jalapa comprovando-se a especifi cidade do mtodo (Figura 2). A exatido do mtodo foi comprovada pelo estudo de trs concentraes diferentes (50%, 100%, 150%). Os resultados foram tratados pelo teste t de Student, o qual demonstrou que o tcalculado foi inferior ao ttabelado comprovando que no houve diferena estatisticamente signifi cativa entre os valores mdios obtidos e os esperados das trs concentraes analisadas, com um intervalo de 95% de confi ana (Tabela 6). Para as concentraes de 50%, 100% e 150%, foram encontrados os respectivos percentuais de recuperao: 51,67%, 103,5% e 153,33%.CONCLUSO

    1 2Figura 2. Visualizao de Aucares em Placa Cromatogrfi ca de Gel de Slica, eluda com Acetato de Etila/Propanol/gua (3,7:3,2:1,3) e revelada com Metaperiodato de Sdio/Benzidina.1.Placebo-soluo hidroalcolica 50%2. Extrato hidroalcolico 50% de Operculina macrocarpa

    Concentrao t calc t crt

    50% 1,256 100% 1,732 150% 1,844

    4,303

    Tabela 6. Resultados da exatido do mtodo.

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    O mtodo apresentado foi desenvolvido e validado com a fi nalidade de disponibilizar uma metodologia alternativa para a quantifi cao da resina de Operculina macrocarpa. Os resultados obtidos mostram que o mtodo atende aos requisitos de boas prticas de laboratrio, pois apresenta a confi abilidade requerida para um mtodo analtico.

    Alm de ser uma alternativa rpida, segura e de baixo custo para a rotina de uma indstria farmacutica, evidencia a vital importncia dessa ferramenta de qualidade no desenvolvimento de metodologias analticas voltadas para a realidade de cada empresa no segmento de produtos fi toterpicos.

    AGRADECIMENTOS

    Os autores agradecem pelo fi nanciamento CAPES, PRONEX, CNPq e ao Laboratrio Industrial Farmacutico Sobral.

    REFERNCIAS

    Barros CB 2002. Validao de mtodos analticos, Biolgico64: 175-177.

    Brando MGL, Cosenza GP, Moreira RA, Monte-Mor RLM 2006. Medicinal plants and other botanical products from the Brazilian Offi cial Pharmacopoeia. Rev Bras Farmacogn 16: 408-420.

    Cruz GL 1980. Dicionrio das plantas teis do Brasil. 4 ed. Rio de Janeiro: Bertrand Brasil, p. 104-105.

    Farmacopia Brasileira 1 ed., So Paulo: Companhia Editora Nacional, 1926, p.535-536.

    Joly A 1975. Botnica: introduo taxonomia vegetal. 2 ed. So Paulo: Editora da Universidade de So Paulo, p.574-576.

    Michelin DC, Salgado HRN 2004. Avaliao da atividade laxante de Operculina macrocarpa L. Urban (Convolvulaceae). Rev Bras Farmacogn 14: 105-109.

    Noda NM 1987, Resin glycosides I. Isolation and structure elucidation of orizabin-I, II, III and IV, genuine resin glicosides from the root of Ipomoea orizabensis.Tetrahedron 43: 3889-3902.

    Planchon L, Bretin P 1937. Prcis de matire mdicale. Paris: Librairie Maloine, p.1224-1235.

    RDC Nq 48, ANVISA, Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria, Resoluo, de 16 de Maro de 2004. Dirio Ofi cial da Repblica Federativa do Brasil, Braslia DOU de 18/03/2004.

    Resoluo RE Nq 899, ANVISA, Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria, de 29 de Maio de 2003. Dirio Ofi cial da Repblica Federativa do Brasil, Braslia DOU de 02/06/2003.

    Shellard EJ 1961. The chemistry of some convolvulaceous resins. I. Vera cruz jalap.Chelsea Coll Sci Technol 102-116.