7/12/2019 Análise de THC-COOH em urina

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Fundamentos de Toxicologia Experimental

DETERMINAÇÃO DO 11-NOR-9-CARBOXI-TETRAIDROCANABINOL EM URINA POR

CROMATOGRAFIA EM CAMADA DELGADA

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1. Finalidade

A finalidade da análise é comprovar o uso recente de preparações á base

de Cannabis. Essa análise é usualmente solicitada na esfera da toxicologia

forense, mas pode ser requerida na reabilitação de farmacodependentes comoreforço para manutenção da abstinência ou para verificar a quebra do acordo

de abstinência. Outra área de aplicação é a vigilância toxicológica,

procedimento adotado por algumas empresas como parte de programas de

prevenção ao abuso do álcool ou drogas e que se dedica á monitorização de

indivíduos que ocupam posições sensíveis á segurança.

2. Fundamentos dos Métodos

O principal constituinte ativo da planta Cannabis sativa   é Δ9-

tetraidrocanabinol (Δ9-THC), que no organismo é rapidamente transformado

por reações de hidroxilação que formam compostos mais polares, alguns ainda

ativos. Reações que ocorrem principalmente pela ação do citocromo P-450.

Dentre esses produtos gerados está o ácido 11-nor-9 Δtetraidrocanabinol-9-

carboxílico (Δ9-THC-COOH) que pode ser identificado a pela técnica de

cromatografia em camada delgada, onde a coleta da amostra pode ser feita

através da urina do indivíduo.

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Figura 1 - Principais vias de biotransformação do  Δ9 -THC 

O Δ9-THC-COOH extraído da urina é separado de outros constituintes da

matriz por meio de desenvolvimento da placa cromatográfica, que é

posteriormente revelada pela reação com o reagente Fast Blue B, podendo-se

observar uma banda cor de rosa.

3. Fluxograma dos Métodos

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4. Resultados e Discussão

Na cromatografia em camada delgada, obtivemos os seguintes valores:

Distância percorrida pelo solvente: 8,8 cm

Distância percorrida pelo padrão: 4,3 cm

Distância percorrida pela amostra: 0,0 cm (ausente)

Calculando o fator de retenção, Rf, temos:

Para o padrão, Rf = 0,48

Para a amostra, Rf = 0,0 (ausente)

5. Laudo frente ao resultado

Para a amostra 3 não foi observado numa banda que após a revelação da

placa correspondesse ao padrão, portanto podemos concluir que a amostra

três não continha o composto Δ

9

-THC-COOH. Portanto pode-se afirmar que o

5 mL de urina (amostra

3) em tubo de centrífugaAdicionado 0,5 mL de

NaOH 1N

Aquecer em banho de

água a 50-60⁰c (15min) 

Resfriar em águaAdicionado gotas de HCl

até pH 2-3

Adicionado 5 mL de n-

hexano (agitação 20 min)Centrifuga (5

min)

Transferir fase orgânica para

béquer afunilado (secar em

Banho Maria 90⁰c 

Ressuspender (3 gotas de

clorofórmio:metanol (3:1))Transferir o extrato para a

placa cromatográfica

Deixar a placa secar em

temperatura ambiente e

eluir em tolueno: hexano

Nebulizar o revelador

fast blue b 0,2%

Observar a banda cor de

rosa

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indivíduo de qual pertence a amostra, não fez uso de Cannabis sativa que

possui o canabinóide Δ9-THC nas 72 horas antes da coleta.

6. Referências Bibliográficas

MEATHERALL, R.C; GARRIOT, J.C. A sensitive thin-layer chromatographic

procedura for the detection of urinary 11-nor-9 Δ tetrahydrocannabinol-9-

carboxylic acid. J. Anal. Toxicol., v. 12, p. 136-140, 1988.

SPINELLI, E; SILVA, O. A. Identificação de usuários de Cannabis porcromatografia em camada delgada de alta eficiência. Ver. Bras. Toxicol., v. 8,

p. 21-28, 1995.