Padronização do Exame de Urina Rotina (EAS)

PADRONIZAÇÃO DO EXAME DE URINA ROTINA EXAME QUÍMICO

Líquidos Corporais 1065

Profª. Daniela Vaz

PADRONIZAÇÃO EXAME DE URINA ROTINA (EAS)

Análise Química

1. Após a análise Física é processada a análise Química da amostra, que pode ser manual por comparação com a escala de cores da Tira reativa ou automatizada, depende da metodologia usada no Laboratório.

2. A Tira faz uma avaliação qualitativa, cada exame positivo deve ser confirmado e/ou quantificado por outra metodologia.

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Análise Química

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Análise Química - Análise manual

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Análise Química - Automação

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FITA REAGENTE:

A FITA REAGENTE FAZ UMA ANALISE QUALITATIVA, POR ESTAS RAZÕES TODAS AS REAÇÕES POSITIVAS NA FITA REAGENTE, DEVEM SER CONFIRMADAS E/OU QUANTIFICADAS COM UMA REAÇÃO.

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Análise Química - Densidade

Princípio: na presença de cátions, libertam-se prótons através da interferência de um agente complexante e produz-se uma mudança de cor no Azul de Bromotimol (indicador de cor), de azul esverdeado para amarelo.

Valor Referência: 1,015 a 1,025

Obs.: A fita reagente não sofre interferência de temperatura e nem de glicosúria e proteinúria, mas pode sofrer uma variação de mais ou menos cinco em relação a leitura da densidade física.

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Análise Química

Densidade (VR - 1,015 a 1,025)

Obs.: Não tem reação química para confirmação da leitura, mas pode ser feita uma avaliação física, com refratômetro.

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Análise Química - pH

No indivíduo normal a urina é ligeiramente ácida (5,0 a 6,0), seu pH pode variar entre 4,5 e 9,0 dependendo do conteúdo da alimentação em eletrólitos. Medindo o pH urinário determina-se a concentração real de íons de hidrogênio do líquido. Encontra-se urina ácida, na subalimentação, diarréias graves, acidose diabética e após uso de medicamentos acidificantes. Ao contrário encontramos uma urina alcalina, na alcalose respiratória ou metabólica decorrente de hiperventilação ou perda de suco gástrico, como também no uso de medicamentos alcalinizantes, dietas vegetarianas e nas urinas que sofreram fermentação (desdobramento da uréia).

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Análise Química - pH

Fita reagente: Indicadores de cor Vermelho de metila (fração ácida) e Azul de bromotimol (fração alcalina).

Valores de referência: 5,0 a 6,0 (pH ácido)

Obs.: Importante na diferenciação de cristais.

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Análise Química

pH (VR – “ÁCIDO” 5,0 a 6,0 unidades de pH)

Obs.: Não tem reação química, para confirmação.

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Análise Química - Proteína

Princípio: Indicador de cor azul de tetrabromofenol tamponado em pH 3,0; esta área é amarelada, quando na presença de proteínas fica verde escuro, capta apenas albumina. É um método qualitativo apenas para triagem.

Sensibilidade: 5 a 20mg de albumina/dL.

Valor de referência: 30 mg/dL.

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Análise Química

Proteína (VR - < 30 mg/dL ou até 150 mg/24 horas, quando positivo quantificar em mg/dL)

Obs.: Quando positivo, quantificar pelo Sensiprot ou Microprote.

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Análise Química - Proteína, Sensiprot (Labtest)

Princípio: O Vermelho de Pirogalol reage com o Molibdado de Sódio formando um complexo corado que, quando combinado com a proteína em meio ácido desenvolve um cromóforo de cor azul, com o máximo de absorção em 600nm. A absorvância resultante é proporcional à concentração de proteínas na amostra.

Metodologia: Vermelho de Pirogalol

Sensibilidade: 0,2 mg de proteína

Linearidade: 100mg/dL

Valor de referência: < 30mg/dL de Urina

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Análise Química - Proteína, Sensiprot (Labtest)

Técnica:

Obs.: Homogeneizar e incubar por 5 minutos em banho Maria 37ºC. Ler

teste contra branco em λ 600 nm. Reação estável por 30 minutos.

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BRANCO TESTE PADRÃO

AMOSTRA - 0,05 mL -

ÁGUA 0,05 mL - -

PADRÃO - - 0,05 mL

REAGENTE DE COR

1,0 mL 1,0mL 1,0mL


Análise Química - Glicose

A presença de açúcares redutores na urina é denominada glicosúria.

Princípio químico: a detecção está fundamentada na reação Glicose oxidase - peroxidase - cromogênio (indicador de cor). É um método qualitativo apenas para triagem.

Sensibilidade: 50 mg/dL urina.

Valor de referência: 0,0 mg/dL.

Obs.: Altas concentrações de Ácido Ascórbico dão glicosúria falso-negativa.

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Análise Química Glicose (VR - 0,0 mg/dL, quando positivo

quantificar em mg/dL)

Obs.: Quando positivo, quantificar pela metodologia da Glicose Oxidase.

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Análise Química - Glicose (Reação Benedict, semiquantitativa)

Reativo Benedict:

17,3g Sulfato de Cobre 100mL H20 destilada Aquecida.

173g de Citrato de Sódio + 100g de Carbonato de Sódio Anidro + 700mL de H20 destilada e aquecida. Em constante agitação, misturar as duas soluções a frio e elevar o volume à 1000mL com H20 destilada fria.

Obs.: Conservar em frasco âmbar em temperatura ambiente, validade por tempo indeterminado.

Técnica:

5 mL do reativo de Benedict

8 gotas de urina límpida e recente

2 minutos no BMª 100º C

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Análise Química - Glicose (Reação Benedict, semiquantitativa)

Leitura:

Azul ou verde sem precipitado negativo

Verde com precipitado (+/4+)

Verde oliva (++/4+)

Marrom laranja (+++/4+)

Vermelho tijolo (++++/4+)

Princípio da Reação de Benedict: Baseia-se na ação redutora da glicose sobre os sais de cobre em meio alcalino, produzindo um precipitado amarelo ou vermelho de óxido cuproso.

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Análise Química - Corpos Cetônicos

Em condições normais podem-se encontrar vestígios de acetona, ácido acetoacético e ácido beta hidroxibutírico, não reveláveis pelas reações ordinárias. Os valores patológicos situam-se acima de 25 mg/dia, procedentes principalmente do metabolismo graxo, surgindo na urina primeiramente à acetona, nos casos patológicos.

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Análise Química - Corpos Cetônicos

Principais estados cetonúricos (acidósicos) - Síndrome respiratória nervosa, digestiva e hidrogênica, acidose gravídica, infecção, pós-operatório, desidratação, acidose hepática e endócrina, jejuns prolongados e dietas. Constituindo a acidose diabética a de maior significado clínico.

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Princípio químico - O ácido acetoacético reage com o Nitroprussiato de sódio em solução alcalina dando um composto de cor roxa.

Sensibilidade: de 5 a 10 mg/dL urina de ácido acetoacético, reage também com acetona, mas não reage com o ácido beta hidroxibutírico. É um método qualitativo apenas para triagem.

Valor de referência: Negativo.

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Análise Química

Cetonas (VR - Negativo, quando Positivo até +++/3+)

Obs.: Quando positivo, confirmar com a Reação de Rothera.

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Análise Química - Corpos Cetônicos (Reação de Rothera - Imberte modificado)

Reativo:

Nitroprussiato de sódio 1g

Sulfato de Amônia 100g

Pulverizar o nitroprussiato de sódio em um gral, adicionar o sulfato de amônio e misturar até a homogeneização.

Obs.: Reagente conservado em frasco âmbar, temperatura ambiente, com validade por tempo indeterminado.

Técnica: Utilizar o reativo na quantidade suficiente para saturar um pouco de urina (presença de depósito) escorrendo o amoníaco suavemente pelas paredes do tubo inclinado.

Leitura: Anel roxo ao nível de contato do reagente com a urina em presença de acetona.

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Análise Química - Bilirrubina

É um produto da degradação da hemoglobina, formada nas células retículo endotelial do baço e da medula óssea, é transportada no sangue por proteínas (albumina). A bilirrubina livre ou não conjugada não tem capacidade de passar através da barreira glomerular do rim. Quando a bilirrubina livre é conjugada no fígado, com o ácido glicurônico, ela torna-se hidrossolúvel e pode passar através do glomerulo renal. A bilirrubina conjugada é normalmente excretada pela bilis. A bilirrubina na urina indica doença hepática, em geral antes de quais quer sinais clínicos tornar-se evidentes.

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Análise Química - Bilirrubina

Princípio químico - O teste baseia-se na ligação da bilirrubina com a Dicloroanilina diazotizada , em um meio fortemente ácido. É um método qualitativo apenas para triagem.

Sensibilidade: 0,5 mg de bilirrubina/dL urina.

Valor de referência: Negativo.

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Análise Química

Bilirrubina (VR - Negativo, quando Positivo até +++/3+)

Obs.: Quando positivo, confirmar com a Reação de Fouchet.

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Análise Química - Bilirrubina (Reação de Fouchet)

Reagentes:

Cloreto de Bário 10g qsp 100mL H20 destilada

Ac. Tricloroacético 25g qsp 100mL H20 destilada, em outro frasco dissolver 1g de cloreto férrico em 10mL de H20 destilada e adicionar a solução de Tricloracético (Reativo de Fouchet).

Obs.: Os reagentes são conservados em frasco âmbar, temperatura ambiente, com validade por tempo indeterminado.

Técnica: Cloreto de Bário a 10% em partes iguais com a urina, filtrar a mistura em papel de filtro. Sobre o precipitado pingar 2 gotas do reativo de Fouchet.

Leitura: Cor verde ao azul, positivo.

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Análise Química - Urobilinogênio

O urobilinogênio e o estercobilinogênio são formados no intestino pela ação redutora de bactérias sobre a bilirrubina aí lançada pela bilis. É reabsorvida na circulação porta, novamente excretada pelo fígado, sendo uma parte eliminada na urina (cerca de 2mg/24h). A taxa é elevada quando há hemólises, anemia hemolítica ou hepatopatias, também na policitemia, cisto hemorrágico do ovário, eritroblastose fetal, em alguns estágios da malária, insuficiência cardíaca e cirrose hepática. A ausência de urobilinogênio ou diminuição é observada na icterícia obstrutiva completa. É o indicador mais sensível e precoce das disfunções hepato celulares.

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Análise Química - Urobilinogênio

Fita reagente: Considera-se 1 mg/dL o valor normal de excreção. Valores superiores são patológicos. A ausência completa de urobilinogênio na urina não pode ser demonstrada pela tira, apesar de também ser um valor patológico.

Princípio químico: O teste baseia-se na reação de Ehrlich na qual o paradimetilaminobenzaldeído reage com o urobilinogênio. As cores variam do bege até o rosa escuro. É um método qualitativo apenas para triagem.

Valor de referência: ≤1,0 mg/dL ou Normal

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Análise Química

Urobilinogênio (VR - ≤1,0 mg/dL ou Normal, quando Positivo até ++++/4+)

Obs.: Quando positivo, confirmar com Reação de Ehrlich.

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Análise Química - Urobilinogênio (Reação de Ehrlich)

Reativo:

Paradimetilaminobenzaldeído 2g

Ácido Clorídrico 75mL

H2O destilada 75mL

Obs.: Reagente conservado em frasco âmbar, temperatura ambiente, com validade por tempo indeterminado.

Técnica:

5mL de urina recente e límpida

1mL do reativo

Obs.: Agitar energicamente

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Análise Química - Urobilinogênio (Reação de Ehrlich)

Leitura: Após 3 minutos, vermelho cereja, positivo.

Princípio: O paradimetilaminobenzaldeído provoca o aparecimento de coloração vermelha cereja na presença de urobilinogênio.

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Análise Química - Sangue

O teste baseia-se na liberação do peróxido pela atividade do tipo peroxidase, do heme, da hemoglobina livre ou dos eritrócitos lisados, em um espécie de urina bem misturada.

A hematúria é muito frequente, a hemoglobinúria é pouco frequente e a mioglobinúria é rara.

Qualquer espécime de urina de cor rosada, vermelha ou castanha é hemática até que se prove o contrário.

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Indicador de cor: Orto-toluidina.

Sensibilidade: é sensível a hemoglobina e a mioglobina, mas é menos sensível a eritrócitos intactos. Este se completa com a observação microscópica de eritrócitos (0,015mg/dL hemoglobina livre ou 5 a 10 eritrócitos por microlitro de urina). É um método qualitativo apenas para triagem.

Especificidade: hemoglobina, mioglobina e eritrócitos dão reação positiva.

Valor de referência: Negativo

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Análise Química

Sangue (VR - Negativo, quando positivo até ++++/4+)

Obs.: Quando positivo, confirmar: Hemácias com exame microscópico, Hemoglobina com reação da hemossiderina e Mioglobina com anamnese do paciente.

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Hematúria: enfermidades sistêmicas, renais ou infra-renais, podem ser responsáveis pela presença de hemácias livres na urina.

Nos homens acima de 50 anos, a tendência é considerar a origem prostática.

Deve ser confirmado com a presença de hemácias acima de 10.000 hem/mL no exame microscópico. Liberar o resultado em cruzes, pela quantidade de hemácias, observadas.

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Análise Química – Sangue

Mioglobinúria: proteína encontrada no tecido muscular não só reage positivamente com a análise química para detecção de sangue como também produz coloração vermelha na urina transparente. Deve-se suspeitar de sua presença em pacientes com distúrbios decorrentes de destruição muscular, tais como: traumatismo, coma prolongado, convulsões, doenças musculares atrópicas e nos casos de esforço físico intenso.

O diagnóstico de mioglobinúria geralmente se baseia em anamnese e em provas sorológicas para detecção de níveis elevados de enzimas, por destruição muscular.

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Hemoglobinúrias - a destruição de grande quantidade de eritrócitos dentro do organismo, além da destruição normal por envelhecimento, atrito, pressões, mudanças osmóticas e outros fatores.

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Hemoglobinúrias tóxicas - por aspirina, veronal, urotropina, tanino, quinino, venenos de ofídio, toxemia gravídica, etc.

Hemoglobinúrias infecciosas - escarlatina, febre tifóide, tétano, septicemia, gangrena gasosa, etc.

Hemoglobinúrias paroxísticas - após exercícios, hemoglobinúria paroxística noturna, hemoglobinúria paroxística clássica, mioglobinúria, etc.

Outros processos - icterícia hemolítica, subaguda e crônica, estados purpéricos, queimaduras extensas e transfusões sangüíneas.

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Hemoglobinúria: Reação da Hemossiderina (método de Gomori) para pesquisa de hemoglobina.

Reagente:

Solução A: Ferrocianeto de potássio 2%

Solução B: Ácido Clorídico 1%

Obs.: Frascos conta gotas preparar 10 mL de solução, validade por tempo indeterminado em temperatura ambiente.

Técnica: 1gota solução A + 1gota solução B + 1gota do sedimento em lâmina e cobrir com lamínula.

Leitura: Após 3 minutos, precipitado preto, positivo. Liberar resultado em cruzes por comparação com a escala de cores da fita reagente.

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Análise Química - Nitrito

Reação indicadora de bactérias no sistema gênito urinário. Baseia-se na capacidade de que tem os microrganismos de reduzir o nitrato, através de um processo enzimático, em nitrito. Aconselha-se a primeira amostra da manhã, por que permaneceu por mais tempo em contato com a bexiga; uma permanência prolongada da urina na bexiga, é a condição ideal para a pesquisa do nitrito (4 - 8h).

Tratamentos com antibióticos ou quimioterápicos devem ser interrompidos 3 dias antes. O teste está fundamentado no princípio de reativo de Griess.

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Análise Química - Nitrito

Fita reagente: O teste detecta concentrações de 0,03 e 0,1mg de nitrito/dL urina. Qualquer coloração rosada indica uma infecção bacteriana. A intensidade da cor depende somente das concentrações de nitrito, mas não indica a extensão ou amplitude da infecção. Um resultado negativo não elimina a possibilidade de uma infecção urinária que não reduz nitrato em nitrito.

Princípio químico: O teste está baseado na conversão do nitrato (derivado da alimentação) em nitrito pela ação das bactérias gram negativas na urina. No pH ácido da área reagente, o nitrito da urina reage com o Ácido p-arsanílico para formar um composto de diazônico. O composto de diazônico se liga com o N-I-Naftileno Diamina Dihidrocloreto para produzir uma cor rosa.


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Análise Química

Nitrito (VR - Negativo, qualquer tom de rosa nitrito Positivo)

Obs.: Não tem reação confirmatória, presença de flora bacteriana no exame microscópico.

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Análise Química - Leucócito

Este teste é baseado no desenvolvimento de cor variando do bege para leitura negativa ao rosa violáceo para leitura positiva. A reação revela a presença de estearase que ocorre nos granulócitos.

Indicador de cor: Naftol AS - D Cloroacetato (Sal diazônico).

Sensibilidade: 10.000 leucócitos/mL (leitura de 60 a 120 segundos).


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Análise Química

Leucócito (VR - Negativo, quando presente, liberar Positivo)

Obs.: Deve ser confirmado com a presença de leucocitúria acima de 10.000 leuc/mL no exame microscópico.

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Análise Química - Ácido Ascórbico

Uma concentração alta de ácido ascórbico na urina pode ser encontrado em indivíduos que diariamente ingerem vitamina "C", podendo interferir na reação da glicose, sangue, bilirrubina e nitrito, dando resultados falso negativos. Se detectada a presença de ácido ascórbico na urina o teste deverá ser repetido pelo menos 24 horas após a ingestão da vitamina "C".

Indicador de cor: 2.6 - Diclorophenol - indofenol


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Análise Química

Ácido Ascórbico (VR - Negativo, quando Positivo até +++/3+)

Obs.: Não tem reação química, confirmatória.

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BIBLIOGRAFIA:

SUSAN, K. S., MARJORIE, S. L. Urinálise e Fluídos

Corporais. 5a ed. Médica Paulista, 2009.

Tiras reagentes: Combur, Uriscan, Reagent

Strips, Uriteste, Inlab e Self-Stik.

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