UFMSLABORATRIO DE BIOQUMICAAULA PRRICAREAES QUALITATIVAS PARA AMINOCIDOS E PROTENASProfa. Dra. Giovana Cristina GiannesiObjetivo: Identificar e caracterizar diferentes aminocidos e protenas atravs de reaes especficas.

1 REAO COM BIURETOFundamento terico: O Biureto um reagente analtico, composto de Hidrxido de Sdio (NaOH 2,5N) e sulfato de cobre 1% (CuSO4).

A reao do Biureto detectar a presena de ligaes peptdicas, dando positiva para protenas e peptdeos com trs ou mais resduos de aminocidos. A reao tambm positiva para substncias que contm 2 carbonilas (-CONH2) ligadas diretamente ou atravs de um nico tomo de carbono ou nitrognio. Os compostos com duas ou mais ligaes peptdicas atingem uma colorao violeta quando submetidos a uma soluo diluda de sulfato de cobre em meio alcalino. A intensidade da cor varia com a concentrao de protenas. Nesse exerccio, o tubo de ensaio com gua destilada foi utilizado como tubo controle, uma vez que a gua no contm protenas. Umaligao peptdicaocorre entre duasmolculasquando o grupocarboxilode uma molcula reage com o grupoaminade outra molcula, liberando uma molcula degua( H2O ). Isto uma reao de sntese pordesidrataoque ocorre entre molculas deaminocidos.Dependendo da complexidade da protena ou do peptdeo em questo, a cor do produto de reao a presena do Biureto varia substancialmente: protenas do colorao violeta, peptdeos do colorao rosa. Para que a reao ao Biureto seja positiva h necessidade da presena de pelo menos duas ligaes peptdicas na molcula, portanto, aminocidos e dipeptdeos no apresentam reao positiva ao Biureto.

O tubo contendo gua destilada no qual no ocorreu reao (resultado negativo), serve de referncia para os tubos restantes, concluindo-se que os tubos cuja reao foi semelhante do biureto com a gua destilada, e teve resultado final negativo. Por outro lado, nos tubos que ocorreram reaes diferentes da gua destilada quando se adicionou biureto, ou seja, apresentara uma colorao violeta ou bem mais escura que o azul plido apresentado na reao com a gua destilada, considerou-se resultado final positivo.

Objetivo : Esta prtica teve como objetivos detectar a presena de ligaes peptdicas. Reativos: Foram utilizados:- Biureto (1mL de NaOH 2,5 + 1mL de Sulfato de Cobre);- gua destilada;- leite;- clara de ovo;- glicina ;- triptofano e- albumina.

Tcnica : (5 tubos)

Tubo 1: 1mL de gua destilada; Tubo 2: 1mL de glicna 1%; Tubo 3: 1mL de leite; Tubo 4: 1mL de clara de ovo; Tubo 5: 1mL de albumina 1%.Foi adicionado em cada tubo, aproximadamente 1mL do reagente de biureto, agitando-se continuamente.

Resultados: Tubo 1: Resultado NEGATIVO Colorao azul muito plida. A gua no tem componentes de protenas em sua composio.

Tubo 2: Resultado NEGATIVO Colorao azul um pouco mais escura que no tubo 1 Glicina um aminocido portanto, sem ligaes peptdicas.

Tubo 3: Resultado POSITIVO Colorao prpura. O leite apresenta vrias protenas em sua composio.

Tubo 4: Resultado POSITIVO Colorao prpura A Clara de ovo contm protenas (albumina, inclusive) que apresentam ligaes peptdicas.

Tubo 5: Resultado POSITIVO Colorao prpura A albumina uma protena cujos aminocidos formam uma cadeia por ligaes peptdicas.

2 REAO DE NINHIDRINAFundamento terico: A ninhidrina (2,2-diidroxi-hidrindeno-1,3-diona) um poderoso agente oxidante que reage com grupo de amino livres de aminocidos, peptdeos e protenas desde que o pH da soluo esteja entre 4 e 8. A reao dos aminocidos com a ninhidrina origina um composto de cor prpura de Ruherman no geral, e amarelo para a prolina, no apresentando sempre a mesma intensidade de colorao. A ninhidrina comumente usada para detectar impresses digitais, j que, graas a sua reao com os aminogrupos terminais das molculas de lisina incorporadas nas protenas ou peptdeos, suficientemente sensvel para revelar resduos de pele.

Objetivo : Esta prtica teve como objetivos caracterizar a presena de aminas livres.

Reativos: Foram utilizados:- Ninhidrina;- leite;- clara de ovo diluda;- albumina 1%;- prolina 1%;- glicina 1%;- fenilanina 1%.

Tcnica : (6 tubos) Em cada tubo de ensaio foi pipetado 1mL da soluo de ninhidrina e adicionado 1mL de cada um dos reagentes descritos abaixo:

Tubo 1: 1mL de gua destilada; Tubo 2: 1mL de leite; Tubo 3: 1mL de clara de ovo diluda; Tubo 4: 1mL de prolina 1%; Tubo 5: 1mL de glicina 1%; Tubo 6: 1mL de albumina 1%.Foi adicionado em cada tubo, aproximadamente 1mL do reagente de nihidrina, agitando-se continuamente e fervendo em seguida por alguns minutos em banho-maria, at o aparecimento da cor.

Resultados: Tubo 1: Resultado NEGATIVO A gua no apresenta aminocidos em sua composio.

Tubo 2: Resultado POSITIVO Colorao roxo O leite apresenta aminas livres em sua composio proteica. Aquecendo-se uma protena e depois adicionando-se a nihidrina forma-se uma colorao azul por causa da reao desse reagente com os aminocidos presentes na protena.

Tubo 3: Resultado POSITIVO Colorao lilz. Como o leite, a clara de ovo apresenta vrias protenas em sua composio, inclusive albumina.

Tubo 4: Resultado POSITIVO Colorao amarela Aprolina um dosaminocidoscodificados pelocdigo gentico, sendo portanto um dos componentes dasprotenasdos seres vivos. Diferencia-se dos demais aminocidos devido ao fato de possuir uma estrutura quimicamente coesa e rgida, sendo mesmo o aminocido mais rgido dos vinte que so codificados geneticamente. A sua estrutura anelar confere-lhe ainda a classificao de iminocido, j que a sua estrutura resulta da ligao do terminal alfa-amina (NH2) cadeia varivel aliftica e forma um produto amarelo na reao com a ninhidrina.

Tubo 5: Resultado POSITIVO Colorao prpura A Glicina um aminocido portanto apresenta aminas livres.

Tubo 6: Resultado POSITIVO Colorao amarelo escuro No caso da albumina, que uma protena hidrossolvel do tipo globular cuja funo armazenar nutrientes, no reagiu instantaneamente com a ninhidrina. Sendo a albumina uma protena, os aminocidos que a constituem esto unidos por ligaes peptdicas e no no estado livre motivo pelo qual no reagiu imediatamente com a ninhidrina, que esta apenas detecta os aminocidos livres. No entanto, depois de aquecida, a albumina reagiu com a ninhidrina porque suas ligaes peptdicas foram quebradas, devido ao aumento da vibrao das partculas em consequncia do aumento da temperatura, alterando assim a conformao desta protena, expondo os aminocidos livres de sua composio ninhidrina.

3 REAO XANTOPROTEICAFundamento terico: As protenas que possuem grupamento fenil (-C6H5); reagem com HNO3 formando compostos fortemente coloridos.

Objetivo : Esta prtica teve como objetivos identificar aminocidos com grupo aromtico (cadeias laterai).

Bibliografia: http://www.scielo.br/scielo.php?pid=S0100-46702002000200006&script=sci_abstract&tlng=pt

http://www.nupel.uem.br/pasteurizacao.pdf