Avaliação de anticorpos Avaliação de anticorpos antiplaquetários por antiplaquetários por citometriacitometria de fluxode fluxo

Beatriz M. Martinelli, Beatriz M. Martinelli, BScBScVagner de Castro Vagner de Castro -- MD, PhDMD, PhD

Laboratório de Laboratório de ImunologiaImunologia PlaquetáriaPlaquetáriaHemocentro da UNICAMPHemocentro da UNICAMP

•• PlaquetaPlaqueta•• Função plaquetáriaFunção plaquetária•• ImunologiaImunologia plaquetáriaplaquetária•• Pesquisa de anticorpos antiplaquetáriosPesquisa de anticorpos antiplaquetários•• Pesquisa de anticorpos antiplaquetáriosPesquisa de anticorpos antiplaquetários–– utilização da CFutilização da CF–– caso clínicocaso clínico

•• Considerações finaisConsiderações finais

Fator von Willebrand

GpIb-IX GpIa-IIa

Colágeno

GpIIb-IIIa

Adhesion Molecules -- Part I.Frenette, Paul; Wagner, Denisa

New England Journal of Medicine.

Owned, published, and © copyrighted, 1996, by the MASSACHUSETTS MEDICAL SOCIETY. Published by Massachusetts Medical Society.

2

New England Journal of Medicine. 334(23):1526-1529, June 6, 1996.

GpIIb-IIIa ativadaFibrinogênio

http://www.platelet.bham.ac.uk/

Antígenos Antígenos eritrocieritrocitáriostários

(ABO, Rh, (ABO, Rh, KellKell,,DuffyDuffy, , etc..)etc..)

HNAsHNAs

HLAHLAss

http://home.comcast.net/~itpaware/platelets.html

•• ABO ABO –– variação de até 20Xvariação de até 20X•• HLA HLA –– 5050--120.000120.000•• GpIIbGpIIb//IIIaIIIa –– 5050--80.00080.000•• GpIaGpIa//IIaIIa –– 22--4.0004.000•• GpIaGpIa//IIaIIa –– 22--4.0004.000•• GpIbGpIb/IX /IX –– ≈≈ 60.00060.000

•• TipagemTipagem–– GenotipagemGenotipagem ( biologia molecular)( biologia molecular)–– FenotipagemFenotipagem

•• Pesquisa de anticorpos antiplaquetários Pesquisa de anticorpos antiplaquetários -- PAPPAP•• Pesquisa de anticorpos antiplaquetários Pesquisa de anticorpos antiplaquetários -- PAPPAP–– PIFT PIFT -- microscopia fluorescênciamicroscopia fluorescência–– PIFT PIFT -- CFCF–– ELISAELISA

•• Identificação de anticorpos antiplaquetáriosIdentificação de anticorpos antiplaquetários–– ELISA ELISA -- MAIPAMAIPA

BrayBray etet al., 1994al., 1994

­­ ­­ ­­

A B C

Soro paciente ­­

Kohler, M., J. Kohler, M., J. DittmannDittmann, et al. (1996) Transfusion , et al. (1996) Transfusion 3636(3): 250(3): 250--5.5.McFarlandMcFarland, J. G. (2003) , J. G. (2003) TransfusTransfus ApheresisApheresis SciSci 2828(3): 297(3): 297--305.305.

•• CurvaCurva 50 50 indivíduosindivíduos––��saudáveissaudáveis–– ∅∅ transfusãotransfusão–– calculadacalculada medianamediana–– calculadacalculada medianamediana

•• LeituraLeitura–– razãorazão dada leituraleitura ≥ 2DP ≥ 2DP →→ testeteste ++–– razãorazão dada leituraleitura 11--2DP 2DP →→ testeteste ??

•• AtualmenteAtualmente–– ≥≥ 1,13 <1,26 1,13 <1,26 →→ ??–– ≥ 1,26 ≥ 1,26 →→ ++

•• ControleControle ++–– PoolPool–– SoroSoro AntiAnti--HPAHPA--1a1a

•• AtualmenteAtualmente–– ≥≥ 1,13 <1,26 1,13 <1,26 →→ ??–– ≥ 1,26 ≥ 1,26 →→ ++

•• ControleControle ++–– PoolPool–– SoroSoro AntiAnti--HPAHPA--1a1a

•• LimitaçõesLimitações–– Pool de Pool de doadoresdoadores

•• doadoresdoadores �� regularesregulares GS OGS O•• plaquetasplaquetas frescasfrescas –– genotipagemgenotipagem geralgeral/e /e desconhecidadesconhecida

–– ausênciaausência do Ag do Ag →→ testeteste falsofalso ΘΘ•• pool pool →→↓↓ esseesse riscorisco•• pool pool →→↓↓ esseesse riscorisco

–– Define Define presençapresença Ac; Ac; nãonão define define especificidadeespecificidade* * IdentificaçãoIdentificação ((especificidadeespecificidade) ) →→ MAIPA/MACEMAIPA/MACE

•• VantagensVantagens–– ReconheceReconhece anticorposanticorpos ligadosligados à à plaquetaplaqueta (HPA, (HPA,

HLA,…)HLA,…)–– RapidezRapidez, , versatilidadeversatilidade

•• UtilizaçõesUtilizações–– pesquisa de anticorpos antiplaquetáriospesquisa de anticorpos antiplaquetários

•• teste direto teste direto (análogo ao TAD/ ”(análogo ao TAD/ ”CoombsCoombs Direto” Direto” eritrocitário)eritrocitário)

•• teste indireto teste indireto (análogo ao PAI/”(análogo ao PAI/”CoombsCoombs Indireto” Indireto” eritrocitário)eritrocitário)

•• anticorpos associados a drogasanticorpos associados a drogas

–– prova de compatibilidade plaquetáriaprova de compatibilidade plaquetária

­­ ­­ ­­

A B C

Soro paciente ­­

Teste positivoTeste positivo

A B C

Soro paciente ­­

Teste negativoTeste negativo

­­ ­­ ­­

A B C

­­Soro paciente

DrogaDroga

Teste positivoTeste positivo

­­ ­­ ­­

A B

­­

Teste positivoTeste positivo

­­ ­­ ­­

A B C

Soro paciente ­­

Teste positivoTeste positivo(incompatível)(incompatível)

•• JWG, JWG, ♂♂,, 45a, LMA45a, LMA--M2M2–– Diagnóstico RP set’09Diagnóstico RP set’09–– História de História de txtx prévias infânciaprévias infância--18a (causa 18a (causa

???)???)???)???)–– PIFT: +PIFT: +–– PRA: + (reatividade 94%)PRA: + (reatividade 94%)–– 2 doadores compatíveis (3match)2 doadores compatíveis (3match)

•• 1ddr: não localizável1ddr: não localizável

–– Nov’09 Nov’09 →→ TMOTMO

R=8,4R=8,4

R=3,6R=3,6

R=0,3R=0,3

R=8,6R=8,6

R=8,6R=8,6

43

33 33

46

38.2

28

38

43

36

3130

35

40

45

50

plqtplqt↓↓↓↓↓↓↓↓

CCI 1=15.9

TMOTMO

plqtplqt↓↓↓↓↓↓↓↓

plqtplqt↓↓↓↓↓↓↓↓

plqtplqt↓↓↓↓↓↓↓↓

plqtplqt↓↓↓↓↓↓↓↓

plqtplqt↓↓↓↓↓↓↓↓

plqtplqt↓↓↓↓↓↓↓↓

plqtplqt↓↓↓↓↓↓↓↓

CCI 1=8.8 CCI 1=25 CCI 1=31.2 CCI 24=25

63

23 22

14

2

108

22

26

10

2

28

19

24 23

14

22

16

9

0

5

10

15

20

25

30

9/28/2009

9/29/2009

9/30/2009

10/2/2009

10/5/2009

10/6/2009

10/7/2009

10/9/2009

10/13/2009

1510/09

10/16/2009

10/19/2010

10/22/2009

10/27/2009

10/29/2009

10/31/2009

11/3/2009

11/4/2009

11/5/2009

11/6/2009

11/7/2009

11/8/2009

11/9/2009

11/13/2009

11/14/2009

11/15/2009

11/16/2009

11/17/2009

11/18/2009

Contagem

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•• CF CF →→ Ferramenta útil e importante na Ferramenta útil e importante na avaliação e suporte de pacientes avaliação e suporte de pacientes hematológicos / hematológicos / imunologiaimunologia plaquetáriaplaquetária

•• LaboratóriosLaboratórios•• LaboratóriosLaboratórios–– CF CF →→ várias regiões do paísvárias regiões do país–– ImunologiaImunologia plaquetária no Brasil plaquetária no Brasil →→

escassosescassos

•• Necessidade de ampliação da rede de Necessidade de ampliação da rede de laboratórios especializados no paíslaboratórios especializados no país

• Fernanda C Rossi– Pós-graduanda

• Thayná Mendonça Avelino– Estagiária Biologia

• Beatriz M Martinelli– Farmacêutica-Bioquímicabeatrizm@unicamp.brbeatrizm@unicamp.br

• Vagner Castro– Médico Hematologista e

Hemoterapêutavagner@unicamp.brvagner@unicamp.br

Obrigado !Obrigado !Obrigado !Obrigado !Obrigado !Obrigado !Obrigado !Obrigado !Obrigado !Obrigado !Obrigado !Obrigado !Obrigado !Obrigado !Obrigado !Obrigado !