Boas Práticas no Manuseio de Animais de Laboratório:

Cuidado com os Animais Experimentais

Marcella M. Terra

Biomédica 2013

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Pesquisa Pré-Cliníca - Importância

Melhorar a Qualidade de Vida

Buscar a cura e tratamento de doenças

Aumentar a Expectativa de Vida

Dependem do uso de animais de

experimentação

Faltam sistemas alternativos que

permitam a substituição (in vitro)

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Espécies mais utilizadas

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ESTUDOS EXPERIMENTAIS Princípios de Russel e Burch – 3 R’s

"REPLACEMENT” - SUBSTITUIÇÃO (REPOSIÇÃO) "REDUCTION” - REDUÇÃO "REFINEMENT” - REFINAMENTO

Ética

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Lei 11.794

Regulamentação do Uso de Animais para fins didáticos e científicos

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Legislação

CEUA´s 6

SEGURANÇA NA PESQUISA

COMPROMISSO DO PESQUISADOR : CIENTÍFICO ÉTICO

NA INVESTIGAÇÃO CIENTÍFICA:

O FIM NUNCA JUSTIFICA OS MEIOS: Há necessidade do uso correto dos animais

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SEGURANÇA NA PESQUISA - Conhecimento

Instrumentos de trabalho

Padrão de qualidade animal

Padrão microbiológico e parasitológico

Padrão genético

Destreza técnica 8

Biossegurança em Biotério de Experimentação

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Ítens a serem observados

Instalações Planejamento na construção (espécie animal a ser utilizada,

manutenção de patógenos...)

Sistema de ventilação adequado (renovação de 100% do ar, 15 a 20 trocas de ar/hora)

Fluxos operacionais – áreas limpas/sujas Monitoramento de temperatura, umidade, gases e

poluentes (CO2 e amônia)

Barreira para controle de contaminações

Bem estar animal

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Animais de laboratório:

• Risco para quem os maneja • Doentes ou não • Podem carrear agentes patogênicos (Zoonóticos) • Todas as pessoas que estão envolvidas no manejo

devem ter consciência deste risco.

RISCOS

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A higiene pessoal constitui uma importante barreira contra infecções. Lavar as mãos antes e após manipular qualquer animal reduz o risco de

disseminar doenças, bem como o de auto-infecção. É obrigatório o uso de luvas para qualquer procedimento com animais Uniforme (Jaleco, calça , máscara) – retirados antes de sair

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BEM-ESTAR

Refere-se a uma satisfatória qualidade de vida que envolve determinados aspectos referentes a saúde

física e mental (Dor e Estresse) 13

ESTRESSE E DOR

DIFICILMENTE RECONHECIDOS POR OBSERVADORES NÃO TREINADOS ESTÍMULO DOLOROSO / ESTRESSE

ESTRESSE / MODIFICAÇÕES FISIOLÓGICAS

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ESTRESSE

LIBERAÇÃO DE CORTISOL RESPOSTAS ORGÂNICAS

METABÓLICAS

IMUNES

NEUROVEGETATIVAS

LIBERAÇÃO DE ADRENALINA

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RESPOSTAS ORGANICAS ELEVAÇÃO DA PRESSÃO ARTERIAL HIPERGLICEMIA ↑ DA CONTRATILIDADE DO MÚSCULO

ESQUELÉTICO CATABOLISMO DE CREATININA ↑ ÁCIDO LACTICO

HIPERVENTILAÇÃO

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CAUSAS DE ESTRESSE

ERROS DE MANEJO

– Ambientes mal ventilados – Má organização de tarefas – Presença de estranhos – Ruídos fortes ou estranhos – Aplicação de novos procedimentos

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Porfirina- sinal de estresse

18 Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratório do Biotério de Produção e Experimentação da FCF-IQ/USP

COMO EVITAR O ESTRESSE

INSTALAÇÕES ADEQUADAS NÚMERO ADEQUADO DE ANIMAIS PLANEJAMENTO DE ATIVIDADES (POPs) Possíveis de serem: APLICADAS CONTROLADAS!!

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DOR RECONHECER A DOR

DIFERENCIAR DOR E NOCICEPÇÃO

CONHECER A ESPÉCIE EM QUESTÃO NIVEL DE ORGANIZAÇÃO SOCIAL CUIDADO COM OS PADRÕES DE COMPARAÇÃO

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DOR

ACEITAR QUE OS ANIMAIS SOFREM DOR Analgésicos vs Antinociceptivos

ACEITAR O USO DE ANALGÉSICOS NOS

ESTUDOS EXPERIMENTAIS Muitos pesquisadores se negam !!! 21

Vias de Administração e Coleta de amostras biológicas

www.lachesisbrasil.blogspot.com 22

VIAS DE ADMINISTRAÇÃO

Escolha da via de administração: - Agente a ser administrado, - Espécie animal, - Proporção entre o volume administrado e o local.

23 andreaarpinto.blogspot.com

VIAS DE ADMINISTRAÇÃO

• Cada técnica: vantagens e desvantagens. • Administração de substâncias/coleta. (ESTRESSE) • Procedimento Pessoa qualificada.

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VIAS DE ADMINISTRAÇÃO Via Oral:

Mistura da substância na dieta ou dissolução na água.

ferrazmaquinas.com.br

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VIAS DE ADMINISTRAÇÃO

Administração por gavage (intra-gástrica)

Uma cânula de aço com esfera na extremidade é cuidadosamente introduzida na boca do animal passando pelo esôfago e

chegando ao estômago onde o material é dispensado.

www.fcfar.unesp.br

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VIAS DE ADMINISTRAÇÃO

VIA ORAL (VO) - GAVAGE

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VIAS DE ADMINISTRAÇÃO

Gavage:

• Vantagem: dosagem exata , com intervalos de tempo bem controlados.

• Desvantagem: administração incorreta - perda

do animal.

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VIAS DE ADMINISTRAÇÃO

Via subcutânea: • Áreas de escolha: áreas dorsolaterais do pescoço, ombro. • Raramente induz dor e realizada com animais conscientes.

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VIAS DE ADMINISTRAÇÃO

Via intraperitoneal: • Realizada no quadrante inferior do abdômen do animal. • A absorção é variável. • Cuidado: não puncionar o trato intestinal. • Materiais irritantes podem causar peritonite.

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VIAS DE

ADMINISTRAÇÃO Via intramuscular:

• Músculo esquelético. • Evitar áreas próximas a estruturas ósseas, nervos e vasos

sanguíneos. • Administração dolorosa. • Múltiplas doses - locais diferentes.

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VIAS DE ADMINISTRAÇÃO

Via intravenosa:

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VIAS DE ADMINISTRAÇÃO

Espécie

VIAS DE ADMINISTRAÇÃO

Subcutânea (ml/ sítio)

Intramuscular (ml/ sítio)

Intraperitoneal (ml)

Intravenosa (ml)

Intranasal (ml)

Oral (ml/ kg)

Camundongo 0,5 0,05 2,0-3,0 Veia caudal- 0,2 0,05 20

Rato 1,0-2,0 0,1 5,0-10,0 Veia caudal e peniana- 0,5

0,05-0,1 10

Hamster 3,0 0,1 3,0-4,0 Veia femural ou jugular- 0,3

Não aplica 20

Cobaia 5,0 0,5-1,0 10,0-15,0 Veia do pavilhão auricular e safena- 0,5

Não aplica 20

Coelho 30,0 1,0 50,0-100,0 Veia marginal- 1,0-5,0

Não aplica 5

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COLETA DE AMOSTRAS BIOLÓGICAS

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Coleta de amostras biológicas

- Coleta não- invasiva de urina e fezes necessita

de gaiola metabólica.

http://www.instrulab.com.br/detalhes.php?id=32 35

Coleta de amostras biológicas

Coleta de sangue: - Roedores: sinus retro orbital; veia jugular; veia maxilar; veia safena e coração. - Hamster: veia cefálica - Coelhos: veia marginal da orelha.

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LOCAL DE COLETA DE SANGUE

Espécie

Veia safena

Veia da orelha

Coração (A)

Veia jugular

Plexo orbital (A)*

Veia/ artéria

da cauda

Secção da cauda

(A) Camundongo X X X X X

Rato X X X X X X

Cobaia X X X X X

Coelho X X X X

Hamster X X X X X

(A): Sob anestesia geral. * Opcional

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Coleta de amostras biológicas

Escolha da técnica: • Depende: Espécie animal. Volume – tipo de análise. Frequência de coleta.

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Coleta de amostras biológicas

Volume de sangue: • Volume sanguíneo total do camundongo é de 6 a 8%

do seu peso corporal, ou 6 a 8 mL de sangue por 100g de peso.

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Vias de coleta de sangue

SEM anestesia: - Veia dorsal da pata - Veia Submandibular - Veia Safena

VEIA DORSAL DA PATA.

Fonte: HOFF,Janet. Methods of Blood Collection in the Mouse. Technique – Lab Animal 29:47-53, 2000. 40

Vias de coleta de sangue SEM anestesia: Veia safena: - Superfície externa da coxa do animal.

- Pode ser repetida algumas vezes para coleta de pequenos volumes.

VEIA SAFENA

41 Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratório do Biotério de Produção e Experimentação da FCF-IQ/USP

VEIA FACIAL

•

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SEM ANESTESIA

Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratório do Biotério de Produção e Experimentação da FCF-IQ/USP

Vias de coleta de sangue COM anestesia: Veia da cauda: • Ratos, mergulhe a cauda do animal por 10 seg. em água com temperatura < 40ºC (vasodilatação). • Não esfregar a cauda da base ao ápice - leucocitose.

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Vias de coleta de sangue

COM anestesia: Sinus orbital: • Deitar de lado o camundongo anestesiado na mesa.

• Risco de cegueira ou ulceração ocular- procedimento incorreto.

www.lookfordiagnosis.com 44

Vias de coleta de sangue

COM anestesia: Punção Cardíaca: • Grande volume de sangue.

45 Manual de Cuidados e Procedimentos com Animais de Laboratório do Biotério de Produção e Experimentação da FCF-IQ/USP

BEM ESTAR ANIMAL

AMADORISMO PROFISSIONALISMO

BOAS PRÁTICAS

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Referências: LAPCHIK, V. B. V.; MATTARAIA, V. G. de M.; KO, G. M. Cuidados e Manejo de Animais de Laboratório. Rio de Janeiro, Atheneu 1ºed.,2009. http://www.procedureswithcare.org.uk/ http://www.jove.com

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Obrigado

marcellaterra@yahoo.com.br

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