Citometria de Fluxo

Detecção de Múltiplos Clones

Glicínia Pimenta

Serviço de Hematologia/UFRJ

Laboratório Sergio Franco/DASA

Caso 1

LSP, 85 anos , branca, empresário aposentado, natural RJ

QP: Fraqueza e Astenia

- Hemograma

•Hb:11,0g/d , VCM: 80, Ht: 32,5% ,WBC: 9,9 mil/mm3

•Neutrófilos: 59% , Linfócitos: 27% Monócitos: 7%

•Plaquetas: 258 mil/mm³

Foi avaliado por um hematologista que iniciou a investigação de

Anemia normocítica e normocrômica

- Exames complementares:

Bioquímica : Função renal, Hepática, Hormônios tireoidianos,

cinética de ferro e dosagem de Vitamina B12 e Folato, cálcio

Normais

Caso 1

PROTEINAS TOTAIS: 6,8 g/dL

ALBUMINA: 57,4 %

ALFA 1 GLOBULINA: 4,8 %

ALFA 2 GLOBULINA: 7,8 %

BETA GLOBULINA: 11,0 %

GAMA GLOBULINA : 19,0 %

PICO MONOCLONAL NA FRAÇÃO

GAMA AGREGANDO A FRACAO 14,2%

Caso 1 Proteinograma

Cadeias Leves: Kappa:321.00

Lambda:68,4

Imunofixação urina: Ausência de bandas

monoclonais

MIELOGRAMA E BMO- sem

infiltração por plasmócitos

Medula óssea normal

Plasma cells

CD45 X SSC MEDULA

ÓSSEA

Caso 1

Eritróide

Estatística

Neutrofilos Monócito

Eosinófilo

Linfócitos

Plasmócitos

MO Caso 1

Maturação Neutrofílica MO Caso 1

Maturação de célula B MO Caso 1

Maturação Monocítica MO Caso 1

CD19+/CD5+ MO Caso 1

12% de linfócitos

CD19+/CD23+ MO Caso 1

CD79b-/FMC7- MO Caso 1

CD11c-/CD25- MO Caso 1

CD22+ MO Caso 1

CD20+ MO Caso 1

CD19+/KAPPA+/LAMBDA- MO Caso 1

CD38+/CD45- 1,0% MO Caso 1

1% de plasmócitos

CD38+/CD56+ MO Caso 1

CD38+/KAPPA+/LAMBDA- MO Caso 1

CD19+/CD138+= 0,2% CD19-/CD138+=0,8%

CASO 1

MO Caso 1

SANGUE

PERIFÉRICO

Caso 1 16% de linfócitos

CD19+/CD23+

CD19+/CD20+

SP Caso 1

CD19+/CD22- SP Caso 1

CD19+/CD5+ SP Caso 1

CD19+/FMC7- CD19+/CD79-B -

SP Caso 1

SP Caso 1 CD19+/KAPPA+/LAMBDA-

Quais critérios são recomendados para o

diagnóstico e classificação de uma Gamopatia

Monoclonal?

I- ( ) Aspirado de MO/Mielograma

II- ( ) Presença de componente monoclonal

III- ( ) Clínicos

IV- ( ) Todos

Pergunta 1

Quais critérios são recomendados para o

diagnóstico e classificação de uma Gamopatia

Monoclonal?

I- ( ) Aspirado de MO/Mielograma

II- ( ) Presença de componente monoclonal

III- ( ) Clínicos

IV- ( X ) Todos

Pergunta 1

I- ( ) Permite identificar e caracterizar os plasmócitos (PCs)

Plasmocitose reativa (Pcs normais)

II- ( ) É capaz de discriminar entre uma população de PCs

normal vs. Clonal GMSI

III- ( ) Auxilia no diagnóstico diferencial entre GMSI & Mieloma

Pcs com fenótipo patológico e clonal Mieloma

IV- ( ) Todos

Qual informação adicional a citometria de fluxo

pode oferecer na Gamopatia Monoclonal?

Pergunta 2

I- ( ) Permite identificar e caracterizar os plasmócitos (PCs)

Plasmocitose reativa (Pcs normais)

II- ( ) É capaz de discriminar entre uma população de PCs

normal vs. clonal GMSI

III- ( ) Auxilia no diagnóstico diferencial entre GMSI & Mieloma

Pcs com fenótipo patológico e clonal Mieloma

IV- ( X ) Todos

Qual informação adicional a citometria de fluxo

pode oferecer na Gamopatia Monoclonal?

Pergunta 2

Componente Monoclonal Plasmócitos (%) MO Dano em orgão alvo a

< 3 g/dl soro

&

< 10%

&

Ausente

3 g/dl soro

&/ou

10%

&

Ausente

Presente (soro/urina)

&

> 10%*

&

Presente

Gamopatia Monoclonal de significado indeterminado

(GMSI)

Mieloma Múltiplo Assintomático

(MMA)

MM Sintomático

Critérios Diagnósticos do Mieloma Múltiplo

-Cálcio níveis elevados: CA soro >11 mg/dl

-Insuficiência renal: creatinina > 2mg/dl

-Anemia: hemoglobina 2 g/dl abaixo do limite normal ou hemoglobina <10 g/dl

-Lesões ósseas: lesões ósseas ou osteoporose com fraturas compressivas

BJH 2003, 121:74

O que o estudo de citometria de fluxo revelou…

Uma população de plasmócitos com imunofenótipo

patológico (CD38+++/CD19-/CD45-/CD56+)

Uma população de plasmócitos com clonalidade Kappa

Mas também encontrou…..

Uma população de linfócitos B clonais ( achado

inesperado! )

I- ( ) Linfocitose B policlonal

II- ( ) Linfocitose B clonal

III- ( ) Leucemia Linfocítica crônica

IV- ( ) Doença linfoproliferativa B

Qual o provável diagnóstico da população B que

demonstrou clonalidade?

(CD19+CD20+CD5+CD23+Kappa+)

Pergunta 4

I- ( ) Linfocitose B policlonal

II- ( X ) Linfocitose B clonal

III- ( ) Leucemia Linfocítica crônica

IV- ( ) Doença linfoproliferativa B

Qual o provável diagnóstico da população B que

demonstrou clonalidade?

(CD19+CD20+CD5+CD23+Kappa+)

Pergunta 4

Laudo

• Perfil fenotípico sugestivo de Doença

Linfoproliferativa B

(CD5+/CD20+/CD23+K+). Aumento % de

células B clonais apresentando fenótipo

de LLC-B. População anômala com

fenótipo sugestivo de discrasia

plasmática-tipo Mieloma Múltiplo.

Correlacionar com a Clinica.

Conclusões

- Apesar do diagnóstico das gamopatias permanecer com

base na citomorfologia, proteinograma e sintomas clínicos…

- A citometria de fluxo é uma ferramenta útil no estudo da

população de plasmócitos fazendo o diagnóstico diferencial

entre plasmocitose reativa, GMSI e Mieloma

- É uma excelente ferramenta no diagnóstico das doenças

linfoproliferativas sendo usada em associação com

histopatologia.

- Diferentes doenças clonais podem associar-se, e a

citometria é capaz de detectar simultaneamente alterações

fenotípicas e clonalidade diagnosticando essas situações.

NOSSA EQUIPE:

Lucia Monteiro L. Netto;

Marise Príncipe G. Coelho;

Roberto Magalhães;

Luciene C. Lázaro;

Anna Beatriz Salgado;

Priscila F dos Santos;

Juliana Veppo;

Rodrigo Gonçalves;

Lourdes Vieira.