Citometria de fluxo nas IDPs - gbcflux.com.br · CITOMETRIA DE FLUXO NAS IMUNODEFICIÊNCIAS PRIMÁRIAS Ambulatório de Imunodeficiências Primárias ... ADA? gc (CD132) JAK-3 CD127

CITOMETRIA DE FLUXO NAS IMUNODEFICIÊNCIAS PRIMÁRIAS

Ambulatório de Imunodeficiências Primárias – ADEE 3003

Departamento de Dermatologia – LIM 56

Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da USP

Dr. Dewton de Moraes Vasconcelos

Tipo de Serviço Autor Local % ID geral* % ID 1árias Ano

Hospital Geral Hobbs Reino Unido 2,3 0,3 1966

Hospital

Pediátrico geralOwayed Canadá 14,3 2,1 2000

Hospital de

Infectologia IIERGrumach São Paulo NI 3,8 2007

Ambulatório de

Imunodeficiências

primárias ADEE-

3003

Moraes-Vasconcelos São Paulo 38,7 21,5 2008

NI = Não Informado

* (ID) Diagnóstico de Imunodeficiências em geral

PACIENTES IDENTIFICADOS COMO PORTADORES DE

IMUNODEFICIÊNCIAS (ID) EM DIFERENTES HOSPITAIS / SERVIÇOS

Hospital Geral Hobbs Reino Unido 2,3 1966

Hospital

Pediátrico geralOwayed Canadá 14,3 2000

Ambulatório de

Imunodeficiências

primárias ADEE-

3003 (HC-FMUSP)

Moraes-Vasconcelos São Paulo 38,7 2008

% ID 1árias

0,3

2,1

3,8

21,5

GENES MUTADOS NAS IMUNODEFICIÊNCIAS PRIMÁRIAS

CELULARES E HUMORAIS

Pró B Pré B

SL

mIgM IgD

CD40L AICDA UNG HIGM4

AICDA D CAgamaglobulinemia A.R.

m, Iga, l5, BLNK, LRRC8

ALX

BTK

IgG

IgA

IgE

TIMO

Célula mãe

hematopoética

Progenitor

Linfóide

comum

Disgenesia

reticular

gc (CD132)

JAK-3

CD122

ADA?gc (CD132)

JAK-3

CD127

PNP?

RAG-1,2

Artemis

Lck

RAG-1,2

Artemis

CD45

ZAP 70

TAP 1,2

Periferia

NKPró NK

Pró TCD8

CD4ab

gd gd

CD3 g, d ou e

Células

mielóides

TACI

CD40

Células T, B e NK Disgenesia reticular

Deficiência de ADA

Células T e B NK nl

Deficiência de RAG

Deficiência de Artemis

Deficiência de Cernunnos

Células T e NK B nl Deficiência de gc

Deficiência de JAK3

Células T B e NK nl

Deficiência de IL-7Ra

Deficiência de PNP

Deficiência de CD45

Células T e B nl NK Deficiência de IL-15Ra

Deficiência de CD16

IMUNODEFICIÊNCIAS PRIMÁRIAS

AVALIAÇÃO DAS IMUNODEFICIÊNCIAS

PV, 6 meses de idade, sexo masculino, consanguinidade familiar (pais primos em primeiro grau);

Eczema grave no primeiro mês de vida. Melhora com exclusão de leite e uso de esteróides;

Vacinado com BCG e aos 5 meses de idade apresentou drenagem espontânea de linfonodo axilar;

Monilíase perineal desde a fase neonatal;

Déficit de crescimento (5900g aos 6 meses de vida)

DEFICIÊNCIA DE RAG1

CD

19-P

ECD3-FITC

92%

1,7%

CD

16/5

6-P

E

CD3-FITC

1,5%

1,7%

IMUNODEFICIÊNCIAS COMBINADAS


6m

Células T CD3+ 205/mm3 (9,9%)



CD4:CD8 9,8

Células NK 1699/mm3(81,9%)

Células B 31/mm3 (1,5%)

DNA foi analisado e deficiência de RAG1 (deleção de dois

nucleotídeos (AA) na posição 1260) foi evidenciada. O

paciente foi submetido a transplante de células de cordão

não relacionado com boa resposta clínica e imunológica.


TIMO

Célula mãe

hematopoética

Progenitor

Linfóide

comum

Disgenesia

reticular

ADA?

CD127

gc (CD132)

JAK-3

PNP?

RAG-1,2

Artemis

Lck

RAG-1,2

Artemis

CD45

ZAP 70

TAP 1,2

Periferia

NKPró NK

Pró TCD8

CD4ab

gd gd

CD3 g, d ou e

Pró B

DEFICIÊNCIA DE IL-2 Rg (CD132)

gc (CD132)

JAK-3

CD122

IMUNODEFICIÊNCIAS COMBINADAS

SINAIS DE DOENÇA ENXERTO VERSUS HOSPEDEIRO POR

TRANSFUSÃO MATERNO-FETAL OU SANGUE NÃO IRRADIADO

IMUNODEFICIÊNCIAS COMBINADASC

D19-P

E

CD3-FITC

96%

0,7%

CD

16/5

6-P

E

CD3-FITC

2%

0,7%

DEFICIÊNCIA DE IL-2 Rg (g-c OU CD132)

TIMO

Célula mãe

hematopoética

Progenitor

Linfóide

comum

Disgenesia

reticular

gc (CD132)

JAK-3

CD122

ADA?

CD127

gc (CD132)

JAK-3

PNP?

RAG-1,2

Artemis

Lck

RAG-1,2

Artemis

CD45

ZAP 70

TAP 1,2

Periferia

NKPró NK

Pró TCD8

CD4ab

gd gd

CD3 g, d ou e

Pró B

DEFICIÊNCIA DE IL-7 Ra (CD127)

Feminino, 2 anos, internada no

Hospital Darcy Vargas por um ano

com micobacteriose disseminada,

tratada como tuberculose.

Cicatriz de BCGite em axila direita

e lesão osteolítica na tíbia

induzida pelo BCG (osteomielite

pelo BCG).

Encaminhada para excluir

infecção pelo HIV.


HC/FMUSPMoraes-Vasconcelos, Duarte et al. ADEE-3003 – HCFMUSP

R1

0 64 128 192 256SS Lin

0

64

128

192

256

FS

Lin

R8

100 101 102 103 104

CD3PC5 Log

0

62

124

186

249

Counts

R3

100 101 102 103 104

CD4FITC Log

0

63

126

189

253

Counts

R2

100 101 102 103 104

CD8PE Log

0

20

40

60

81

Counts

R8

100 101 102 103 104

CD19PC5 Log

0

16

33

49

66

Counts

Controle

R1

0 64 128 192 256GRANULOSIDADE Lin

0

64

128

192

256

TA

MA

NH

O L

in

R2

100 101 102 103 104

CD19 RD1 Log

0

22

45

67

90

Counts

R2

100 101 102 103 104

CD56 PE Log

0

55

110

165

220

Counts

R8

100 101 102 103 104

CD3 PERCP Log

0

8

17

26

35

Counts

R3

100 101 102 103 104

CD4 FITC Log

0

8

17

26

35

Counts

R2

100 101 102 103 104

CD8 PE Log

0

8

17

26

35

Counts

Paciente


63,8%

41,2%

22,7%

12,6%

17,0%R2

100 101 102 103 104

CD56PE Log

0

8

17

26

35

Counts

0,9%

0,3%

0,4%

38,7%

56,0%

CD3

CD4

CD8

CD19

CD16/56

CD19

CD16/56

CD3

CD4

CD8

LIM56 – HC/FMUSPMoraes-Vasconcelos, Duarte et al. ADEE-3003 – HCFMUSP

R2

100 101 102 103 104

CD127PE Log

0

23

46

69

93

Counts

R8

100 101 102 103 104

CD3 PCY5 Log

0

31

63

95

127

Counts

R1


0

64

128

192

256

TA

MA

NH

O L

in

Controle

R2

100 101 102 103 104

CD127PE Log

0

8

17

26

35

Counts

R1


0

64

128

192

256

TA

MA

NH

O L

in

R8

100 101 102 103 104

CD3 PCY5 Log

0

23

46

69

93

Counts

Paciente


63,8%

61,6%

0,9%

0,9%

CD3

CD127

CD3

CD127

LIM56 – HC/FMUSPMoraes-Vasconcelos, Duarte et al. ADEE-3003 – HCFMUSP

Células T CD4+

Deficiência de MHC 2

Deficiência de CD25 ou IL-2

Linfop. CD4 idiopática

Células T CD8+

Deficiência de TAP 2

Deficiência de ZAP70

Deficiência de CD8 a

Células T CD3+

Deficiência de CD3 g

Deficiência de CD3 d

Deficiência de CD3 e

Células T e NK nl B Agamaglobulinemias

(BTK, cadeia m e l5, CD79)

IMUNODEFICIÊNCIAS PRIMÁRIAS

AVALIAÇÃO DAS IMUNODEFICIÊNCIAS

DEFICIÊNCIA PRIMÁRIA DE CÉLULAS T CD4

Manifestações apresentadas em nossos pacientes:

Pneumonia por Pneumocystis jiroveci,

Toxoplasmose cerebral, herpes simples e verrugas

vulgares.

Moraes-Vasconcelos, Duarte et al, Clinics 60 (suppl. 1): S51, 2005.

DEFICIÊNCIA PRIMÁRIA DE CÉLULAS T CD4

LOCALIZAÇÃO ONTOGENÉTICA DO DEFEITO

TIMO

Célula mãe

hematopoética

Progenitor

Linfóide

comum

Disgenesia

reticular

gc (CD132)

JAK-3

CD122

ADA?

gc (CD132)

JAK-3

CD127

PNP?

RAG-1,2

Artemis

Lck

RAG-1,2

Artemis

CD45

ZAP 70

TAP 1,2

Periferia

NKPró NK

Pró TCD8

CD4ab

gd gd

CD3 g, d ou e

DEFICIÊNCIA PRIMÁRIA DE CÉLULAS T CD4IMUNOFENOTIPAGEM DIAGNÓSTICA

R2

100 101 102 103 104

ALFA-BETAPE Log

0

14

28

42

57

Counts ALFA-BETA

R2

100 101 102 103 104

CD8PE Log

0

30

60

90

121

Counts CD8

R8

100 101 102 103 104

CD3PC5 Log

0

54

109

164

219

Counts CD3

R3

100 101 102 103 104

RA FITC Log

0

24

49

74

99

Counts CD4/45RA

R2

100 101 102 103 104

RO PE Log

0

23

46

69

93

Counts CD4/45RO

R3

100 101 102 103 104

CD25FITC Log

0

8

17

26

35

Counts CD25

R2

100 101 102 103 104

CITOCINA PE Log

0

107

215

322

430

Counts IL-2

R3

100 101 102 103 104

GAMA-DELTAFITC Log

0

8

17

26

35

Counts GAMA-DELTA

R3

100 101 102 103 104

MHC1 FITC Log

0

77

155

232

310

Counts MHC - I

R2

100 101 102 103 104

MHCII PE Log

0

21

43

65

87

Counts MHC - II

PACIENTE 2

24,21%

28,31%

2,32%

1,02%

5,24%

72,31%

2,03%

100%

7,65% 23,56%

LIM56 – HC/FMUSPMoraes-Vasconcelos, Duarte et al, Clinics 60 (suppl. 1): S51, 2005.

R3

100 101 102 103 104

CD4 FITC Log

0

16

33

49

66

Counts CD4

3,77%

LINFOCITOPENIA T CD4+DOENÇA CLONAL

AUSENTE

IL-2 E RECEPTOR

PARA IL-2

NORMAIS

SÍNDROME DO

LINFÓCITO NÚ

AUSENTE

DEFICIÊNCIA PRIMÁRIA DE CÉLULAS CD4

APOPTOSE DE LINFÓCITOS T CD4 (VIA INTRÍNSECA)

% T

CD

4+

ap

op

tóti

ca

sCultura + citometria de fluxo


- Controles - Pacientes

DEFICIÊNCIA DA CADEIA e DO CD3 (CD3e)

19 anos, masculino, previamente

hígido.

Infecções de repetição

progressivamente mais graves a

partir dos 15 anos

de idade.

Na internação, apresentava:

1.P. jiroveci; 2.C. albicans; 3.CMV;

4.M. kansasii; 5.Verruga vulgar;

6.Onicomicose.

Quadro sugestivo de

imunodeficiência celular .

Imunofenotipagem T, B, NK

(aparentemente normal).

I. I. Emilio RibasMoraes-Vasconcelos, Duarte et al, Clinics 60 (suppl. 1): S62, 2005.

a

b

e

g

d

e

sinalização

ITAMs

TCR

CD3

CD3

MHC II

PEPTÍDEO

DEFICIÊNCIA DA CADEIA g OU e DO CD3

R8

100 101 102 103 104

CD3 TC Log

0

46

93

139

186

Counts

R8

100 101 102 103 104

CD3PC5 Log

0

46

93

140

187

Counts

R8

10 0 10 1 10 2 10 3 10 4

CD3 FITC Log

0

78

156

234

312

Counts

R8

10 0 10 1 10 2 10 3 10 4

CD3 FITC Log

0

70

141

211

282

Cou

nts

R1

0 64 128 192 256SS Lin

0

64

128

192

256

FS

Lin

Paciente CD3 gama

CD3 gama

CD3 epsilon

CD3 epsilonR1

0 64 128 192 256SS Lin

0

64

128

192

256

FS

Lin

Controle

Anti CD3 – epsilon 16,0%+; IMF: 22,4

Anti CD3 – gama 62,7%+; IMF: 62,9

Anti CD3 – epsilon 56,4%+; IMF: 62,2

Anti CD3 – gama 58,2%+; IMF: 82,0


AVALIAÇÃO DA EXPRESSÃO DE CD3g E CD3e


R8

10 0 10 1 10 2 10 3 10 4TCR VA24-FITC

0

104

209

313

418

Cou

nts

Paciente – 2%

R8

10 0 10 1 10 2 10 3 10 4

TCR VA24-FITC

0

20

41

61

82

Cou

nts

Irmã – 38%

DEFICIÊNCIA da CADEIA e DO CD3 (CD3e)

CÉLULAS NKT do PACIENTE

LIM56 – HC/FMUSPMoraes-Vasconcelos, Duarte et al, Clinics 60 (suppl. 1): S62.

NKT

NKT

Co

ntr

ole

Pa

cie

nte

CD3 CD3/CD8/CD56 (NKT)CD3 epsilon


HISTOPATOLOGIA DO TIMO (IMUNOHISTOQUÍMICA)

Colaboração do Dr. Fabio Tavora, AFIP- Armed Forces Institute of Pathology.

Universidade de São Paulo

Faculdade de Medicina

Departamento de Dermatologia

Laboratório de Investigação Médica - Unidade 56 (LIM56)

e-mail: [email protected]

Tel: (0XX11) 3061- 7457 Fax: (0XX11) 3081-7190

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