CITOMETRIA DE FLUXO NAS IMUNODEFICIÊNCIAS PRIMÁRIAS
Ambulatório de Imunodeficiências Primárias – ADEE 3003
Departamento de Dermatologia – LIM 56
Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da USP
Dr. Dewton de Moraes Vasconcelos
Tipo de Serviço Autor Local % ID geral* % ID 1árias Ano
Hospital Geral Hobbs Reino Unido 2,3 0,3 1966
Hospital
Pediátrico geralOwayed Canadá 14,3 2,1 2000
Hospital de
Infectologia IIERGrumach São Paulo NI 3,8 2007
Ambulatório de
Imunodeficiências
primárias ADEE-
3003
Moraes-Vasconcelos São Paulo 38,7 21,5 2008
NI = Não Informado
* (ID) Diagnóstico de Imunodeficiências em geral
PACIENTES IDENTIFICADOS COMO PORTADORES DE
IMUNODEFICIÊNCIAS (ID) EM DIFERENTES HOSPITAIS / SERVIÇOS
Hospital Geral Hobbs Reino Unido 2,3 1966
Hospital
Pediátrico geralOwayed Canadá 14,3 2000
Ambulatório de
Imunodeficiências
primárias ADEE-
3003 (HC-FMUSP)
Moraes-Vasconcelos São Paulo 38,7 2008
% ID 1árias
0,3
2,1
3,8
21,5
GENES MUTADOS NAS IMUNODEFICIÊNCIAS PRIMÁRIAS
CELULARES E HUMORAIS
Pró B Pré B
SL
mIgM IgD
CD40L AICDA UNG HIGM4
AICDA D CAgamaglobulinemia A.R.
m, Iga, l5, BLNK, LRRC8
ALX
BTK
IgG
IgA
IgE
TIMO
Célula mãe
hematopoética
Progenitor
Linfóide
comum
Disgenesia
reticular
gc (CD132)
JAK-3
CD122
ADA?gc (CD132)
JAK-3
CD127
PNP?
RAG-1,2
Artemis
Lck
RAG-1,2
Artemis
CD45
ZAP 70
TAP 1,2
Periferia
NKPró NK
Pró TCD8
CD4ab
gd gd
CD3 g, d ou e
Células
mielóides
TACI
CD40
Células T, B e NK Disgenesia reticular
Deficiência de ADA
Células T e B NK nl
Deficiência de RAG
Deficiência de Artemis
Deficiência de Cernunnos
Células T e NK B nl Deficiência de gc
Deficiência de JAK3
Células T B e NK nl
Deficiência de IL-7Ra
Deficiência de PNP
Deficiência de CD45
Células T e B nl NK Deficiência de IL-15Ra
Deficiência de CD16
IMUNODEFICIÊNCIAS PRIMÁRIAS
AVALIAÇÃO DAS IMUNODEFICIÊNCIAS
PV, 6 meses de idade, sexo masculino, consanguinidade familiar (pais primos em primeiro grau);
Eczema grave no primeiro mês de vida. Melhora com exclusão de leite e uso de esteróides;
Vacinado com BCG e aos 5 meses de idade apresentou drenagem espontânea de linfonodo axilar;
Monilíase perineal desde a fase neonatal;
Déficit de crescimento (5900g aos 6 meses de vida)
DEFICIÊNCIA DE RAG1
CD
19-P
ECD3-FITC
92%
1,7%
CD
16/5
6-P
E
CD3-FITC
1,5%
1,7%
IMUNODEFICIÊNCIAS COMBINADAS
DEFICIÊNCIA DE RAG1
6m
Células T CD3+ 205/mm3 (9,9%)
Células T CD4+ 164/mm3 (7,9%)
Células T CD8+ 17/mm3 (0,8%)
CD4:CD8 9,8
Células NK 1699/mm3(81,9%)
Células B 31/mm3 (1,5%)
DNA foi analisado e deficiência de RAG1 (deleção de dois
nucleotídeos (AA) na posição 1260) foi evidenciada. O
paciente foi submetido a transplante de células de cordão
não relacionado com boa resposta clínica e imunológica.
DEFICIÊNCIA DE RAG1
TIMO
Célula mãe
hematopoética
Progenitor
Linfóide
comum
Disgenesia
reticular
ADA?
CD127
gc (CD132)
JAK-3
PNP?
RAG-1,2
Artemis
Lck
RAG-1,2
Artemis
CD45
ZAP 70
TAP 1,2
Periferia
NKPró NK
Pró TCD8
CD4ab
gd gd
CD3 g, d ou e
Pró B
DEFICIÊNCIA DE IL-2 Rg (CD132)
gc (CD132)
JAK-3
CD122
IMUNODEFICIÊNCIAS COMBINADAS
SINAIS DE DOENÇA ENXERTO VERSUS HOSPEDEIRO POR
TRANSFUSÃO MATERNO-FETAL OU SANGUE NÃO IRRADIADO
IMUNODEFICIÊNCIAS COMBINADASC
D19-P
E
CD3-FITC
96%
0,7%
CD
16/5
6-P
E
CD3-FITC
2%
0,7%
DEFICIÊNCIA DE IL-2 Rg (g-c OU CD132)
TIMO
Célula mãe
hematopoética
Progenitor
Linfóide
comum
Disgenesia
reticular
gc (CD132)
JAK-3
CD122
ADA?
CD127
gc (CD132)
JAK-3
PNP?
RAG-1,2
Artemis
Lck
RAG-1,2
Artemis
CD45
ZAP 70
TAP 1,2
Periferia
NKPró NK
Pró TCD8
CD4ab
gd gd
CD3 g, d ou e
Pró B
DEFICIÊNCIA DE IL-7 Ra (CD127)
Feminino, 2 anos, internada no
Hospital Darcy Vargas por um ano
com micobacteriose disseminada,
tratada como tuberculose.
Cicatriz de BCGite em axila direita
e lesão osteolítica na tíbia
induzida pelo BCG (osteomielite
pelo BCG).
Encaminhada para excluir
infecção pelo HIV.
DEFICIÊNCIA DE IL-7 Ra (CD127)
HC/FMUSPMoraes-Vasconcelos, Duarte et al. ADEE-3003 – HCFMUSP
R1
0 64 128 192 256SS Lin
0
64
128
192
256
FS
Lin
R8
100 101 102 103 104
CD3PC5 Log
0
62
124
186
249
Counts
R3
100 101 102 103 104
CD4FITC Log
0
63
126
189
253
Counts
R2
100 101 102 103 104
CD8PE Log
0
20
40
60
81
Counts
R8
100 101 102 103 104
CD19PC5 Log
0
16
33
49
66
Counts
Controle
R1
0 64 128 192 256GRANULOSIDADE Lin
0
64
128
192
256
TA
MA
NH
O L
in
R2
100 101 102 103 104
CD19 RD1 Log
0
22
45
67
90
Counts
R2
100 101 102 103 104
CD56 PE Log
0
55
110
165
220
Counts
R8
100 101 102 103 104
CD3 PERCP Log
0
8
17
26
35
Counts
R3
100 101 102 103 104
CD4 FITC Log
0
8
17
26
35
Counts
R2
100 101 102 103 104
CD8 PE Log
0
8
17
26
35
Counts
Paciente
DEFICIÊNCIA DE IL-7 Ra (CD127)
63,8%
41,2%
22,7%
12,6%
17,0%R2
100 101 102 103 104
CD56PE Log
0
8
17
26
35
Counts
0,9%
0,3%
0,4%
38,7%
56,0%
CD3
CD4
CD8
CD19
CD16/56
CD19
CD16/56
CD3
CD4
CD8
LIM56 – HC/FMUSPMoraes-Vasconcelos, Duarte et al. ADEE-3003 – HCFMUSP
R2
100 101 102 103 104
CD127PE Log
0
23
46
69
93
Counts
R8
100 101 102 103 104
CD3 PCY5 Log
0
31
63
95
127
Counts
R1
0 64 128 192 256GRANULOSIDADE Lin
0
64
128
192
256
TA
MA
NH
O L
in
Controle
R2
100 101 102 103 104
CD127PE Log
0
8
17
26
35
Counts
R1
0 64 128 192 256GRANULOSIDADE Lin
0
64
128
192
256
TA
MA
NH
O L
in
R8
100 101 102 103 104
CD3 PCY5 Log
0
23
46
69
93
Counts
Paciente
DEFICIÊNCIA DE IL-7 Ra (CD127)
63,8%
61,6%
0,9%
0,9%
CD3
CD127
CD3
CD127
LIM56 – HC/FMUSPMoraes-Vasconcelos, Duarte et al. ADEE-3003 – HCFMUSP
Células T CD4+
Deficiência de MHC 2
Deficiência de CD25 ou IL-2
Linfop. CD4 idiopática
Células T CD8+
Deficiência de TAP 2
Deficiência de ZAP70
Deficiência de CD8 a
Células T CD3+
Deficiência de CD3 g
Deficiência de CD3 d
Deficiência de CD3 e
Células T e NK nl B Agamaglobulinemias
(BTK, cadeia m e l5, CD79)
IMUNODEFICIÊNCIAS PRIMÁRIAS
AVALIAÇÃO DAS IMUNODEFICIÊNCIAS
DEFICIÊNCIA PRIMÁRIA DE CÉLULAS T CD4
Manifestações apresentadas em nossos pacientes:
Pneumonia por Pneumocystis jiroveci,
Toxoplasmose cerebral, herpes simples e verrugas
vulgares.
Moraes-Vasconcelos, Duarte et al, Clinics 60 (suppl. 1): S51, 2005.
DEFICIÊNCIA PRIMÁRIA DE CÉLULAS T CD4
LOCALIZAÇÃO ONTOGENÉTICA DO DEFEITO
TIMO
Célula mãe
hematopoética
Progenitor
Linfóide
comum
Disgenesia
reticular
gc (CD132)
JAK-3
CD122
ADA?
gc (CD132)
JAK-3
CD127
PNP?
RAG-1,2
Artemis
Lck
RAG-1,2
Artemis
CD45
ZAP 70
TAP 1,2
Periferia
NKPró NK
Pró TCD8
CD4ab
gd gd
CD3 g, d ou e
DEFICIÊNCIA PRIMÁRIA DE CÉLULAS T CD4IMUNOFENOTIPAGEM DIAGNÓSTICA
R2
100 101 102 103 104
ALFA-BETAPE Log
0
14
28
42
57
Counts ALFA-BETA
R2
100 101 102 103 104
CD8PE Log
0
30
60
90
121
Counts CD8
R8
100 101 102 103 104
CD3PC5 Log
0
54
109
164
219
Counts CD3
R3
100 101 102 103 104
RA FITC Log
0
24
49
74
99
Counts CD4/45RA
R2
100 101 102 103 104
RO PE Log
0
23
46
69
93
Counts CD4/45RO
R3
100 101 102 103 104
CD25FITC Log
0
8
17
26
35
Counts CD25
R2
100 101 102 103 104
CITOCINA PE Log
0
107
215
322
430
Counts IL-2
R3
100 101 102 103 104
GAMA-DELTAFITC Log
0
8
17
26
35
Counts GAMA-DELTA
R3
100 101 102 103 104
MHC1 FITC Log
0
77
155
232
310
Counts MHC - I
R2
100 101 102 103 104
MHCII PE Log
0
21
43
65
87
Counts MHC - II
PACIENTE 2
24,21%
28,31%
2,32%
1,02%
5,24%
72,31%
2,03%
100%
7,65% 23,56%
LIM56 – HC/FMUSPMoraes-Vasconcelos, Duarte et al, Clinics 60 (suppl. 1): S51, 2005.
R3
100 101 102 103 104
CD4 FITC Log
0
16
33
49
66
Counts CD4
3,77%
LINFOCITOPENIA T CD4+DOENÇA CLONAL
AUSENTE
IL-2 E RECEPTOR
PARA IL-2
NORMAIS
SÍNDROME DO
LINFÓCITO NÚ
AUSENTE
DEFICIÊNCIA PRIMÁRIA DE CÉLULAS CD4
APOPTOSE DE LINFÓCITOS T CD4 (VIA INTRÍNSECA)
% T
CD
4+
ap
op
tóti
ca
sCultura + citometria de fluxo
LIM56 – HC/FMUSPMoraes-Vasconcelos, Duarte et al, Clinics 60 (suppl. 1): S51, 2005.
- Controles - Pacientes
DEFICIÊNCIA DA CADEIA e DO CD3 (CD3e)
19 anos, masculino, previamente
hígido.
Infecções de repetição
progressivamente mais graves a
partir dos 15 anos
de idade.
Na internação, apresentava:
1.P. jiroveci; 2.C. albicans; 3.CMV;
4.M. kansasii; 5.Verruga vulgar;
6.Onicomicose.
Quadro sugestivo de
imunodeficiência celular .
Imunofenotipagem T, B, NK
(aparentemente normal).
I. I. Emilio RibasMoraes-Vasconcelos, Duarte et al, Clinics 60 (suppl. 1): S62, 2005.
a
b
e
g
d
e
sinalização
ITAMs
TCR
CD3
CD3
MHC II
PEPTÍDEO
DEFICIÊNCIA DA CADEIA g OU e DO CD3
R8
100 101 102 103 104
CD3 TC Log
0
46
93
139
186
Counts
R8
100 101 102 103 104
CD3PC5 Log
0
46
93
140
187
Counts
R8
10 0 10 1 10 2 10 3 10 4
CD3 FITC Log
0
78
156
234
312
Counts
R8
10 0 10 1 10 2 10 3 10 4
CD3 FITC Log
0
70
141
211
282
Cou
nts
R1
0 64 128 192 256SS Lin
0
64
128
192
256
FS
Lin
Paciente CD3 gama
CD3 gama
CD3 epsilon
CD3 epsilonR1
0 64 128 192 256SS Lin
0
64
128
192
256
FS
Lin
Controle
Anti CD3 – epsilon 16,0%+; IMF: 22,4
Anti CD3 – gama 62,7%+; IMF: 62,9
Anti CD3 – epsilon 56,4%+; IMF: 62,2
Anti CD3 – gama 58,2%+; IMF: 82,0
DEFICIÊNCIA DA CADEIA e DO CD3 (CD3e)
AVALIAÇÃO DA EXPRESSÃO DE CD3g E CD3e
LIM56 – HC/FMUSPMoraes-Vasconcelos, Duarte et al, Clinics 60 (suppl. 1): S62, 2005.
R8
10 0 10 1 10 2 10 3 10 4TCR VA24-FITC
0
104
209
313
418
Cou
nts
Paciente – 2%
R8
10 0 10 1 10 2 10 3 10 4
TCR VA24-FITC
0
20
41
61
82
Cou
nts
Irmã – 38%
DEFICIÊNCIA da CADEIA e DO CD3 (CD3e)
CÉLULAS NKT do PACIENTE
LIM56 – HC/FMUSPMoraes-Vasconcelos, Duarte et al, Clinics 60 (suppl. 1): S62.
NKT
NKT
Co
ntr
ole
Pa
cie
nte
CD3 CD3/CD8/CD56 (NKT)CD3 epsilon
DEFICIÊNCIA DA CADEIA e DO CD3 (CD3e)
HISTOPATOLOGIA DO TIMO (IMUNOHISTOQUÍMICA)
Colaboração do Dr. Fabio Tavora, AFIP- Armed Forces Institute of Pathology.
Universidade de São Paulo
Faculdade de Medicina
Departamento de Dermatologia
Laboratório de Investigação Médica - Unidade 56 (LIM56)
e-mail: [email protected]
Tel: (0XX11) 3061- 7457 Fax: (0XX11) 3081-7190