Coprocultura. Identificação de Bacilos Gram-negativos

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de Bacilos Gram-negativos

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As Enterobacteriaceae

Constituem as bactérias isoladas com maiorfreqüência de amostras clínicas;

Salmonella;Salmonella;

Shigella;

Klebsiella pneumoniae;

Escherichia coli;

Proteus;

LPS

As Enterobacteriaceae

Apesar da complexidade desta família, comum total de mais 150 espécies, menos de 20espécies são responsáveis por 95% dasinfecções;

As Enterobacteriaceae

São microrganismos ubiquitários;Encontram-se:

ÁGUA

VEGETAÇÃOSOLO

MICROBIOTA INTESTINAL

Enquanto outros são membros comensais ecausam infecções oportunistas, envolvendopraticamente todas as partes do corpo:

As Enterobacteriaceae

Causam diversas doenças humanas:

Alguns organismos estão sempre associadosa doenças:praticamente todas as partes do corpo:

Klebsiella pneumoniae;

Escherichia coli;

Proteus mirabilis;

MUITAS INFECÇÕES INTESTINAIS30 a 35% DE TODAS

AS SEPSES

Salmonella typhi

Espécies de Shigella

Yersinia pestis

MAIS DE 70% DAS INFECÇÕES DO TRATO URINÁRIO

As EnterobacteriaceaeFisiologia e Estrutura:

São bastonetes Gram-negativos de tamanhomoderado:

A maioria são móveis, se movimentam

Todas as enterobactérias podem crescer demaneira aeróbia ou anaeróbia (anaeróbiosfacultativos), em meios não seletivos (ágarsangue) ou seletivos (ágar MacConkey);

A maioria são móveis, se movimentamatravés de flagelos peritríquios e são nãoesporulados:

As EnterobacteriaceaeFisiologia e Estrutura:

Identificação Presuntiva

Apresentam necessidades nutricionais simples,fermentam glicose, reduzem nitrato e sãocatalase-positivas e oxidase-negativas;

A identificação presuntiva é baseada naA identificação presuntiva é baseada naaparência das colônias em crescimento no meiode isolamento primário e na avaliação dedeterminadas reações bioquímicas. A coloraçãode Gram apresenta bastonetes gram-negativosarredondados e curtos;

Identificação Presuntiva

Na cultura mista mostrando crescimento após24 horas em ágar sangue visualizamos doismorfotipos de bastonetes gram-negativos e umterceiro morfotipo de um microrganismo menorterceiro morfotipo de um microrganismo menorque pode ser suspeito de ser uma espéciegram-positiva;

Colônias rosas, brilhantes, mucóides, grandes,no ágar MacConkey, típicas de muitas espéciesde Klebsiella e Enterobacter;

Identificação Presuntiva

Ágar MacConkey com colônias fermentadorasde lactose e precipitação de sais biliares nomeio que circunda as colônias (ex. E. coli);

Superfície do ágar MacConkey mostrandoSuperfície do ágar MacConkey mostrandocolônias vermelhas de ferment. de lactose ecolônias claras menores de não fermentadoresde lactose;

Placas de ágar EMB mostrando coloraçãoverde brilhante produzida pelos ferment.;

Culturas mistas de E. coli e Shigella spp.; Amaioria das espécies de Shigella não fermentalactose e, portanto, produz colônias

Identificação Presuntiva

lactose e, portanto, produz colôniassemitranslúcidas não-pigmentadas no ágarEMB. Outras espécies não fermentadorasproduzem colônias que parecem semelhantesàquelas ilustradas aqui;

Três tubos de caldo de cultura de coloraçãopúrpura contendo tubos de Durham parademonstrar a formação de gás. Os dois tubos àdireita mostram ácido proveniente da glicose

Identificação Presuntiva

direita mostram ácido proveniente da glicose(cor amarela). O tubo na extrema direita mostraa coleta de gases no tubo de Durham,característica de um microrganismo que produzácido e gás a partir de glicose;

Identificação PresuntivaNo teste de citocromo oxidase que revela umareação de cor púrpura positiva, qualquermicrorganismo que apresente uma reaçãopositiva pode ser excluído da família;

Meios para teste de nitrato contendo tubos deDurham para mostrar a formação de gás N2, otubo à esquerda mostra uma reação positiva(cor vermelha – nitritos que reagem formandop-sulfobenzeno-azo-αααα-naftilamina). O tubo domeio também é positivo (gás nitrogênio);

Identificação PresuntivaAs características das colônias de organismosem diferentes meios são utilizadas paraidentificar os membros comuns da família;

Por exemplo, a capacidade de fermentarlactose é utilizada para diferenciar cepasfermentadoras de lactose (Escherichia,Klebsiella, Enterobacter, Citrobacter e Serratiaspp.) de cepas que não fermentam lactose, ouque o fazem lentamente (Proteus, Salmonella,Shigella e Yersinia spp.);

Ágar Ferro de Kligler (KIA)

Série de tubos de KIA inclinado mostrandovários padrões de reações. O tubo na extremaesquerda mostra uma inclinação ácida (amar.) euma base ácida (amarelo), indicando tanto afermentação da glicose quanto da lactose.Observe também o espaço na base do tubo e adivisão no ágar no meio do tubo, que indicamprodução de gás (CO2) pelo microrganismo.Estas quantidades de CO2, geralmente só sãoproduzidas pela tribo Klebsielleae;

O terceiro tubo mostra inclinação alcalina

Ágar Ferro de Kligler (KIA)

O segundo tubo a partir da esquerda mostrauma reação ácido/ácido, mas sem a presençade gás, típica da reação observada com E. coli;

O quarto tubo mostra inclinação alcalina(vermelho) e base preta indicando produção desulfeto de hidrogênio (H2S);

O terceiro tubo mostra inclinação alcalina(vermelho) e base ácida característica de ummicrorganismo não fermentador de lactose;

Teste com o-nitrofenil-b-D-galactopiranosídio(ONPG). Uma reação positiva indica capacidadede produzir b-galactosidase, enzima necessáriapara a degradação inicial de lactose;

Características Diferenciais de Identificação

para a degradação inicial de lactose;

Tubo com ágar semi-sólido (direita) para testede motilidade, produção de indol e sulfeto (SIM)e ágar inclinado ferro de Kligler (KIA), diferençana sensibilidade em detectar H2S. Em ambostubos temos S. typhi;

A primeira figura mostra as reações para E. coli

Quatro tubos mostrando os testes do indol (I),vermelho metila (VM), Voges-Proskauer (VP) ecitrato (C);

Características Diferenciais de Identificação

A primeira figura mostra as reações para E. coli(++--). A segunda figura mostra as reações paraKlebsiella/Enterobacter (- - + +);

Indol a partir de triptofano; queda no pH(fermentação – ácidos); acetoína a partir depiruvato; citrato de sódio como fonte de C;

Está associado a diversas doenças, incluindosepse, meningite e gastroenterite;

Escherichia coli

Possui uma ampla quantidade de fatores devirulência. Além dos fatores apresentados portodos os membros da família;

Escherichia coli

As cepas de E. coli que causam gastroenteriteestão subdivididas em cinco patótipos:

E. coli é o bastonete Gram-negativo maiscomumente isolado em pacientes com sepse;

Pode colonizar praticamente todos os animais,incluindo aves domésticas, répteis, gado,roedores, animais domésticos, pássaros ehumanos;

Salmonella

Sorotipos como S typhi e S. paratyphi estãoaltamente adaptados a humanos e não causamdoenças em outros hospedeiros;

Outras cepas de Salmonella (S. choleraesuis)estão adaptadas a animais e, quando infectamhumanos, podem causar doenças graves;

Causa doenças através da invasão emultiplicação em células que revestem amucosa do cólon;

Shigella

Mais de 22500 infecções por Shigella foramrelatadas nos Estados Unidos em 2003;relatadas nos Estados Unidos em 2003;entretanto, estima-se que ocorram quase450000 casos a cada ano;

A shiguelose é uma doença essencialmentepediátrica: 70% das infecções ocorrem emcrianças com menos de 15 anos;

É um patógeno altamente virulento que causadoença sistêmica com alta taxa de mortalidade;

Yersinia

Y. Enterocolitica e Y. pseudotuberculosis sãopatógenos essencialmente entéricos raramenteisolados a partir do sangue;isolados a partir do sangue;

Todas as infecções por Yersinia são zoonóticascom humanos como hospedeiros acidentais.Existem duas formas de infecção por Y. pestis,a peste urbana, na qual ratos são o reservatórionatural e a peste silvestre (animais selvagens);

Apresentam uma cápsula proeminente que éresponsável pela aparência mucóide dascolônias isoladas e pela alta virulência dosorganismos in vivo;

Klebsiella

organismos in vivo;

K granulomatis é o agente etiológico dogranuloma inguinal, uma doença que afeta agenitália e a região inguinal. Esta doença échamada donovanose, em referência à origemhistórica do nome do gênero;

A infecção do trato urinário por P. mirabilis é adoença mais comum provocada por estegênero;

Proteus

P. mirabilis produz uma grande quantidade deP. mirabilis produz uma grande quantidade deurease, que degrada a uréia em CO2 e amônia,este processo aumenta o pH da urina e facilitaa formação de cálculos renais;

A alcalinidade aumentada da urina também étóxica ao uroepitélio;

Muito Obrigado!!!