DETERMINAÇÃO DA CONCENTRAÇÃO INIBITÓRIAMÍNIMA (CIM) DE EXTRATOS DA CASCA DE ABACATE(PERSEA AMERICANA) FRENTE A STAPHYLOCOCCUS

AUREUS E SALMONELLA ENTERITIDES

L.V. Becker1, F.M. Libero1, D. Lauermann1, A.L. Oliveira1, P. Schoenberger1

1- Departamento de Ensino Pesquisa e Extensão – Instituto Federal de Santa Catarina, Câmpus São Miguel doOeste – CEP: 89900-000 – São Miguel do Oeste – SC – Brasil, Telefone: 55 (49) 3631-0446 – e-mail:(larissa.becker@ifsc.edu.br)

RESUMO – a obtenção de alimentos seguros e com menores adições de aditivos alimentares oumesmo com a sua ausência são um dos grandes desafios atuais. No presente estudo avaliou-se opotencial antibacteriano do extrato de abacate (Persea americana) extraído com solventes água,etanol e acetonitrila. Os extratos foram testados frente aos microrganismos patogênicosStaphylococcus aureus e Salmonella enteritides através do teste de concentração inibitória mínima(CIM). A partir dos resultados é possível apontar que o extrato aquoso obtido através das extraçõesefetuadas neste experimento não possui ação contra os microrganismos estudados na concentração de10.000µg/µL. Quanto ao extrato etanólico das cascas de abacate houve efeito inibidor frente aoStaphylococcus aureus em uma concentração de 5.000µg/µL, já frente ao microrganismo Salmonellaenteritides verificou-se inibição em uma concentração de 10.000µg/µL. O extrato com solventeacetonitrila apresentou efetividade de inibição dos microrganismos testados em uma concentração de2.500µg/µL.

ABSTRACT – the acquisition of safe food and with smaller additions of food additives or even theirabsence are one of the great challenges today. In the present study the antibacterial potential ofavocado extract (Persea americana) extracted with water, ethanol and acetonitrile solvents wasevaluated. The extracts were tested against the pathogenic microorganisms Staphylococcus aureusand Salmonella enteritides by the minimum inhibitory concentration (MIC) test. From the results it ispossible to point out that the aqueous extract obtained through the extractions carried out in thisexperiment does not have an action against the microorganisms studied in the concentration of10.000μg / μL. As for the ethanolic extract of the avocado peels, there was an inhibitory effect againstStaphylococcus aureus at a concentration of 5,000 μg / μL. In contrast to the microorganismSalmonella enteritides, inhibition was found at a concentration of 10,000 μg / μL. The acetonitrilesolvent extract showed inhibition effectiveness of the tested microorganisms at a concentration of2,500 μg / μL.

PALAVRAS-CHAVE: patogênicos; antimocrobiano; subproduto.

KEYWORDS: pathogenic; antimicrobial; byproduct.

1. INTRODUÇÃO

Alimentos contaminados por agentes biológicos são a maior causa de enfermidades napopulação (AGRA, 2007). A ocorrência de doenças veiculadas por alimentos são uma preocupaçãomundial e despertam há muito tempo a atenção dos pesquisadores com estratégias que permitam o seucontrole e garantam produtos seguros à população (RICKIE , 2005; OUSSALAH, 2007). Osantimicrobianos naturais vêm sendo intensamente estudados, pois mostram-se como uma alternativafrente aos patógenos. Além da ação inibitória denotam relevância significativa quanto à eliminação demicrorganismos patogênicos e constituem cada vez mais uma nova forma de garantir uma alimentaçãosegura mantendo a qualidade dos alimentos. Com o intuito de melhorar a vida de prateleira dosalimentos promovendo uma alimentação com menos aditivos alimentares, como é o caso dos agentesantimicrobianos, a utilização de subprodutos vegetais possibilitam uma nova perspectiva no que tangea produção de alimentos considerados mais saudáveis (SOLOMKOSA, 2008). Ademais, possuemfacilidade de acesso e podem estar envolvidos na diminuição da geração de resíduos e nos impactosambientais (OLIVEIRA, 2011). Sendo assim, objetivou-se obter extratos da casca do abacate (Perseaamericana) com os solventes água, etanol e acetonitrila, e testá-los frente aos microrganismospatogênicos Staphylococcus aureus e Salmonella enteritides.

2. MATERIAL E MÉTODOSA metodologia de trabalho aplicada foi o teste de concentração inibitória mínima (CIM),

método de diluição seriada onde pequenos volumes de inóculo e solução a ser testada (extratos) sãoadicionadas a placas de acrílico estéreis contendo 96 poços dispostos em 12 colunas (1 a 12) e 8 linhas(A a H) (CLSI, 2008).

Foram obtidos extratos a partir das cascas de abacate (Persea americana), usaram-se osseguintes solventes para a extração: água, etanol e acetonitrila. Os extratos foram produzidosconforme a tabela 1. Tais extratos foram testados frente a dois microrganismos patogênicos, um grampositivo (Staphylococcus aureus CCCD S014) e um gram negativo (Salmonella enteritides CCCDS002).Tabela 1 - Parâmetros das extrações das cascas de abacate (Persea americana).

Identificação doExtrato

Quantidade emgramas de cascaCasca de abacate

(Persea americana)

Solvente Quantidadede solvente

(mL)

Tempo deextração (h)

Agitação(rpm)

AG 50 Água 300 6 200

ET 50 Etanol 300 6 200

AC 50 Acetonitrila 300 6 200

Fonte: os autores.

2.1 Preparo dos extratosForam pesados 0,2g de cada extrato obtido após evaporação dos solventes, diluídos em água

destilada estéril e solução de dimetilsulfóxido (DMSO) a 0,5%, ajustado volume em balão de 10mL.

2.2 Preparação dos inóculosPreviamente foram preparados repiques dos microrganismos Staphylococcus aureus e

Salmonella enteritides em tubos de ensaio contendo ágar nutriente inclinado. Uma alçada de cadamicrorganismo foi passada para tubo de ensaio contendo 5 mL de solução salina 0,85% estéril e

agitado por 1 minuto. A concentração e a padronização foram de acordo com o tubo 0,5 da escala deMcFarland, correspondendo à concentração de aproximadamente 108

Unidades Formadoras de

Colônia (UFC.mL1). Destes últimos tubos foram retiradas alíquotas de 200µL de cada bactéria,Staphylococcus aureus e Salmonella enteritides, e adicionadas em tubos contendo 10mL de caldocaseína de soja.

Placa 1 – Utilização do inóculo contendo o microrganismo Staphylococcus aureus e osextratos AG, ET e AC.

Placa 2 – Utilização do inóculo contendo o microrganismo Salmonella enteritides e os extratosAG, ET e AC.

2.3 Realização da microdiluição em placas de micropoçosDas linhas A até F, em cada um dos 12 poços (correspondentes as colunas) foram adicionados

100µL do meio caldo caseína de soja contendo o microrganismo em questão. Nas linhas G e H forampreparados os controles, sendo o controle positivo (meio de cultura contendo inóculo) e controlenegativo (meio de cultura sem inóculo, respectivamente). Em seguida, na linha A a cada três colunasforam adicionados 100µL dos extratos, conforme descrito acima: colunas 1 até 3 – Extrato AG,colunas 4 até 6 – Extrato ET, colunas 7 até 9 – AC, coluna 10 – controle do diluente DMSO.

Para a leitura das placas foram adicionados 16µL de trifeniltetrazólio 5% em cada um dospoços de todas as placas. A solução possui a capacidade de indicar, através da coloração vermelha, apresença de H+. Assim, indicando se houve ou não crescimento microbiano.

3. RESULTADOS E DISCUSSÃOUm resumo dos resultados obtidos é apresentado na Tabela 2 para melhor percepção das

atividades inibitórias dos extratos frente aos microrganismos testados.Tabela 2 – Resultado da atividade dos extratos obtidos frente aos microrganismos testados.

Solventes Água (AG) Etanol (ET) Acetonitrila (AC)MicrorganismoStaphylococcus aureus Sem atividade 5.000µg/µL 2.500µg/µLSalmonella enteritides Sem atividade 10.000µg/µL 2.500µg/µL

Fonte: os autores.

Verificando-se a placa 1, na Figura 2 – Utilização do inóculo contendo o microrganismo Staphylococcus aureus e os extratos AG (água), ET (etanol) e AC (acetonitrila), percebe-se que extrato AG não mostrou-se eficiente frente ao microrganismo Staphylococcus aureus em nenhuma das concentrações testadas. Enquanto que no extrato ET visualiza-se uma inibição do microrganismo em uma concentração de 5.000µg/µL também verifica-se uma inibição na concentração de 2.500µg/µL doextrato AC frente o Staphylococcus aureus.

Ciolfi (2010), em estudo realizado com extratos etanólico e hexânico de folhas e caroços deabacate, não constatou efeito inibitório até a concentração de 2% frente ao Staphylococcus aureus bemcomo à Salmonella enteritides. Provavelmente, essa diferença se dê em função da parte analisada dafruta, uma vez que a composição das estruturas é distinta.Figura 2 – Placa com extratos obtidos com os solventes: água, etanol e acetonitrila frente aomicrorganismo Staphylococcus aureus.

Analisando-se a placa 2, na Figura 3 – utilização do inóculo contendo o microrganismoSalmonella enteritides e os extratos AG (água), ET (etanol) e AC (acetonitrila), percebe-se que nãohouve atividade inibitória do extrato AG frente a Salmonella enteritide. Verificou-se que o extrato ETproporcionou uma inibição do mesmo microrganismo frente a uma concentração de 10.000µg/µL.

Para o extrato AC a inibição foi maior, 2.500µg/µL foram suficientes para inibir o crescimentomicrobiano da Salmonella enteritide.

Também para Leite (2009), houve atividade antimicrobiana nas frações metanólicas ehaxânicas do extrato da semente de abacate.

O resultado encontrado por Almeida (2017) demonstrou que o óleo essencial comercial deabacate não apresentou atividade inibitória nas concentrações determinadas (>1000 µg/mL) para omicrorganismo Candida glabrata. Assim, como para Tarfa (2004) frações hexânica, etanoica emetanóica do óleo de abacate não demosntraram efeito antimicrobiano frente a cepas de Candidaalbicans.Figura 3 – Placa com extratos obtidos com os solventes: água, etanol e acetonitrila frente aomicrorganismo Salmonella enteritide.

4. CONCLUSÕESVerificou-se que o extrato da casca do abacate (Persea americana) obtido com água como

solvente não apresentou ação inibitória nos microrganismos testados. O extrato etanólico apresentouresultados positivos nas concentrações mais altas do experimento. No extrato obtido através dosolvente acetonitrila a ação inibitória atingiu os melhores resultados do experimento. Supõe-se queatravés dos diferentes solventes utilizados para as extrações foram obtidos diferentes compostos, osquais tiveram efeitos diferentes nos microrganismos utilizados neste experimento. Para uma possívelcomplementação do presente trabalho seria indicado fazer a caracterização química dos extratos.

Percebe-se que os estudos referentes ao abacate (Persea americana) são vastos e aindanecessitam maior aprofundamento. Sendo assim, a continuidade das pesquisas com todas as estruturasdo abacate e frente à microrganismos diferentes é oportuna.

5. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICASAgra M.F., Freitas P.F., Barbosa-Filho J.M. (2007). Synopsis of the plants known as medicinal andpoisonous in Northeast of Brazil. Revista Brasileira Farmacognosia, 17, 114-140.Almeida, L.F.D., Paula, J.F., Almeida-Marques, R.V.D., Cavalcanti, Y.W., Hebling, J. (2017).Atividade Inibitória de Óleos Essenciais Vegetais Frente à Candida glabrata, Resistente a Fluconazol.Revista Brasileira de Ciências da Saúde, 21, 133-138.Ciolfi F. (2010). Potencial antimicrobiano de extratos e óleos essenciais vegetais não tradicionais sobrepatógenos de origem alimentar. Universidade Federal de Viçosa. Viçosa.CLSI. (2008). Reference method for broth dilution antifungal susceptibility testing of yeasts, approvedstandard. CLSI Document M27-A3.Leite J.J., Brito E.H., Cordeiro, R.A., Brilhante, R.S., Sidrim, J.J., Bertini, L.M., Morais, S.M., Rocha,M.F. (2009). Chemical composition, toxicity and larvicidal and antifungal activities ofPerseaamericana (avocado) seed extracts. Revista da Sociedade Brasileira de Medicina Tropical, 42,110-3.Oliveira, T. L. C. (2011). Antimicrobial activity of Satureja montana L. essencial oil againstClostridium perfringens type A inoculated in mortadela-type sausages formulated with different levelsof sodium nitrite. International Journal of Food Microbiology, 144, 546-555.Oussalah, M. (2007). Inhibitory effects of selected plant essential oils on the growth of fourpathogenic bacteria: E.coli O157: H7, Salmonella typhimurium, Staphylococcus aureus and Listeriamonocytogenes. Food control, 18, 414-420.Rickie, S. C. (2005). Alternatives to antibiotics: chemical and physical antimicrobial interventions andfood-borne pathogenresponse. Poultry Science, 84, 667-675.Solomakosa, N. (2008). The antimicrobial effect of thyme essencial oil, nisin, and their combinationagainst Listea monocytogenes in minced beef durin refrigerated storage. Food Microbiology, 25, 120-127.Tarfa, F.D., Obodozie, O., Msshelia, E., Ibrahim, K., Temple, V.J. (2004). Evaluation of phytochemicaland antimicrobial proprieties of leaf extract of phytochemical and antimicrobial proprieties of leafextract of Tapinanthuasessifolius (P. Beauv) van Tiegh. Indian Journal of Experimental Biology, 42,326-329.