ESTUDO DE ASPECTOS MORFOLÓGICOS E FUNCIONAIS DO …Celina Tizuko Fujiyama Oshima, Professora Pesquisadora Assistente do Departamento de Patologia Molecular do Departamento de Patologia

ROBERTO TERUYA

ESTUDO DE ASPECTOS MORFOLOacuteGICOS E FUNCIONAIS DO RIM

DE RATOS SUBMETIDOS Agrave ISQUEMIA E REPERFUSAtildeO DE

MUacuteSCULO ESQUELEacuteTICO SOB A ACcedilAtildeO DA PENTOXIFILINA

Tese apresentada agrave Universidade Federal de Satildeo Paulo ndash Escola Paulista de Medicina para obtenccedilatildeo do Tiacutetulo de Mestre em Ciecircncias

SAtildeO PAULO 2006

ROBERTO TERUYA





ORIENTADOR Prof Dr Djalma Joseacute Fagundes CO-ORIENTADOR Prof Dr Celso Massachi Inouye

SAtildeO PAULO 2006

Teruya Roberto Estudo de aspectos morfoloacutegicos e funcionais do rim de ratos

submetidos agrave isquemia e reperfusatildeo de muacutesculo esqueleacutetico sob a accedilatildeo da pentoxifilinaRoberto Teruya ndash Satildeo Paulo 2006

xviii70f Tese (Mestrado) ndash Universidade Federal de Satildeo Paulo Escola Paulista de

Medicina Programa de Poacutes-Graduaccedilatildeo em Cirurgia e Experimentaccedilatildeo The effects of skeletal muscle ischemiareperfusion and pentoxifylline on

morphological and functional aspects of kidneys of rats 1 Isquemia 2 Ratos 3 Apoptose 4 Rim 5 Pentoxifilina 6 Caspases

UNIVERSIDADE FEDERAL DE SAtildeO PAULO

ESCOLA PAULISTA DE MEDICINA UNIFESP-EPM

PROGRAMA DE POacuteS-GRADUACcedilAtildeO EM

CIRURGIA E EXPERIMENTACcedilAtildeO COORDENADOR Prof Dr Djalma Joseacute Fagundes

TESE DE MESTRADO

AUTOR Roberto Teruya ORIENTADOR Prof Dr Djalma Joseacute Fagundes CO-ORIENTADOR Prof Dr Celso Massachi Inouye TIacuteTULO Estudo de aspectos morfoloacutegicos e funcionais do rim de ratos submetidos agrave isquemia e reperfusatildeo de muacutesculo esqueleacutetico sob a accedilatildeo da pentoxifilina BANCA EXAMINADORA 1- Presidente Prof DrDjalma Joseacute Fagundes Professor Adjunto da Disciplina de Teacutecnica Operatoacuteria e Cirurgia Experimental da Universidade Federal de Satildeo Paulo UNIFESP-EPM MEMBROS EFETIVOS 2 ndash Prof Dr Celso Vieira de Souza Leite Professor Adjunto do Departamento de Cirurgia da Faculdade de Medicina de Botucatu-Universidade Estadual de Satildeo Paulo (UNESP) 3 ndash Prof DrRicardo Dutra Aydos Coordenador do Programa de Poacutes-Graduaccedilatildeo em Sauacutede e Desenvolvimento na Regiatildeo Centro-Oeste e Professor Adjunto do Departamento de Cliacutenica Ciruacutergica da Universidade Federal de Mato Grosso do Sul 4 ndash Prof Dr Manuel de Jesus Simotildees Professor Livre Docente da Disciplina de Histologia e Biologia Estrutural da Universidade Federal de Satildeo Paulo ndash UNIFESP-EPM MEMBRO SUPLENTE 1- Prof Dr Murched Omar Taha Professor Livre Docente do Departamento de Cirurgia da UNIFESP-EPM

DEDICATOacuteRIA

Aos meus pais

Kentaro e Emiko

pela minha formaccedilatildeo moral eacutetica filosoacutefica e profissional

Agrave minha esposa

Lenir Kiyomi

e aos meus filhos

Seiji e Key pelo companheirismo carinho compreensatildeo e constante apoio nesta jornada

HOMENAGEM

Ao Prof Dr Djalma Joseacute Fagundes Coordenador do Programa de Poacutes-Graduaccedilatildeo

em Cirurgia e Experimentaccedilatildeo da Universidade Federal de Satildeo Paulo ndash Escola Paulista de

Medicina co-orientador deste trabalho pela demonstraccedilatildeo de competecircncia sinceridade

dedicaccedilatildeo e apoio para a realizaccedilatildeo desta pesquisa e em minha formaccedilatildeo

AGRADECIMENTO ESPECIAL

Ao Prof Dr Celso Massaschi Inouye Professor Titular da Disciplina de Ortopedia e

Traumatologia da Universidade Federal de Mato Grosso do Sul pelo entusiasmo e dedicaccedilatildeo

que o fizeram imprescindiacutevel agrave continuidade do ensino de poacutes-graduaccedilatildeo no Estado do Mato

Grosso do Sul e pelo incentivo para a finalizaccedilatildeo deste trabalho

AGRADECIMENTOS

Agrave UNIVERSIDADE FEDERAL DO MATO GROSSO DO SUL - UFMS por ter

criado condiccedilotildees para seus Professores terem acesso ao Programa de Poacutes-Graduaccedilatildeo em

Cirurgia e Experimentaccedilatildeo da UNIFESP-EPM

Agrave UNIVERSIDADE FEDERAL DE SAtildeO PAULO ndash ESCOLA PAULISTA DE

MEDICINA ndash UNIFESP-EPM por ter me recebido como aluno do Programa de Poacutes-

Graduaccedilatildeo em Cirurgia e Experimentaccedilatildeo possibilitando minha titulaccedilatildeo

A Profa Dra Celina Tizuko Fujiyama Oshima Professora Pesquisadora Assistente

do Departamento de Patologia Molecular do Departamento de Patologia da Universidade

Federal de Satildeo Paulo ndash Escola Paulista de Medicina pela criteriosa realizaccedilatildeo da

imunocoloraccedilatildeo para anaacutelise desta pesquisa

Agrave meacutedica Maacutercia Maria da Silva Professora do Curso de Medicina da Universidade

para o Desenvolvimento do Pantanal (UNIDERP) e patologista da Cliacutenica de Diagnoacutesticos

Ultramedical pela responsabilidade e competecircncia dispensadas ao estudo histoloacutegico deste

trabalho

Ao Prof Dr Joatildeo Ricardo Tognini Professor Titular do Departamento de Cliacutenica

Ciruacutergica da Universidade Federal de Mato Grosso do Sul cirurgiatildeo dedicado na arte de

ensinar e servir que muito contribuiu para a realizaccedilatildeo deste trabalho corrigindo-o e

incentivando o seu prosseguimento

A Profa Mestra Maria Helena Junqueira Caldeira Professora da Disciplina de

Probabilidade e Estatiacutestica da Universidade Catoacutelica Dom Bosco ndash Campo Grande-MS pela

criteriosa anaacutelise estatiacutestica sugestotildees e ensinamentos na elaboraccedilatildeo desta tese

Ao Prof Mestre Guido Marks Professor Adjunto do Departamento de Cliacutenica

Ciruacutergica da Universidade Federal de Mato Grosso do Sul pelos ensinamentos na

interpretaccedilatildeo das lacircminas da imunocoloraccedilatildeo pelo programa ImageLABreg

Aos Profs Drs Olavo de Oliveira Rodrigues Edna Frasson de Souza Montero

Murched Omar Taha e Mirian Ghiraldini pelos conhecimentos transmitidos atraveacutes das

aulas ministradas

A meacutedica Rosacircngela da Silva Rigo Nefrologista do Hospital Universitaacuterio da UFMS

pela colaboraccedilatildeo neste trabalho com orientaccedilotildees em sua especialidade

Ao meacutedico Joseacute Lacerda Brasileiro pelo companheirismo para que este experimento

tornasse uma realidade e por sua dedicaccedilatildeo agrave pesquisa

A Prof Dra Maria Teixeira da Silva Meacutedica Veterinaacuteria Chefe do Bioteacuterio da

Universidade Federal de Mato Grosso do Sul por permitir que pudesse ser realizada a etapa

praacutetica desta pesquisa

A Profa Mestra Telma Bazzano da Silva Carvalho Bioacuteloga e Coordenadora do

Bioteacuterio da Universidade Federal de Mato Grosso do Sul por permitir que pudesse ser

realizada a etapa praacutetica desta pesquisa

Ao Bioquiacutemico Paulo Cesar de Lourenzo Bioquiacutemico do Hospital Universitaacuterio da

Universidade Federal de Mato Grosso do Sul pela colaboraccedilatildeo na avaliaccedilatildeo bioquiacutemica das

amostras sanguumliacuteneas

A Sra Rosely de Faacutetima Pellizzon Bibliotecaacuteria responsaacutevel pela BIREME da

Universidade Federal de Satildeo Paulo ndash Escola Paulista de Medicina pelos ensinamentos de

como realizar o levantamento bibliograacutefico nas principais base de dados pesquisadas

Ao Sr Francisco Teixeira Da Silva e as Sras Tamy Ingrid Restel e Maria Donizete

Feacutelix Rocha funcionaacuterios do Bioteacuterio da Universidade Federal de Mato Grosso do Sul pelo

zelo e cuidados dispensados aos animais utilizados nesta pesquisa

Agraves secretaacuterias do Programa de Poacutes-Graduaccedilatildeo em Cirurgia e Experimentaccedilatildeo da

UNIFESP-EPM Elaine Maria Alves Bazzi Dantas e Valdelice Justiniano Soares pela

colaboraccedilatildeo durante a confecccedilatildeo do presente trabalho

LISTA DE FIGURAS

Figura 1 - Esquema da distribuiccedilatildeo dos animais nos diversos grupos de estudo 7

Figura 2 - Fotografia mostrando o isolamento e clampeamento da arteacuteria iliacuteaca

comum esquerda do rato

9

Figura 3 - Fotografia mostrando a pata isquecircmica apoacutes a aplicaccedilatildeo do mini-

clampe na arteacuteria iliacuteaca comum esquerda durante o periacuteodo de

isquemia

9

Figura 4 - Fotografia mostrando o rim em corte frontal para o processamento

histoloacutegico e posterior coloraccedilatildeo pela HE e imuno-histoquiacutemica

12

Figura 5 - Fotomicrografia caracteriacutestica mostrando glomeacuterulos normal (A) com

espessamento de grau leve do mesacircngio (B) com espessamento de grau

moderado (C) e com espessamento de grau acentuado (D) (HE -

400x)

13

Figura 6 - Fotomicrografia caracteriacutestica dos tuacutebulos renais do grupo simulado

(normal) agrave direita e do grupo A1 agrave esquerda demonstrando tuacutebulos com

necrose tubular e presenccedila de sedimentos em sua luz() (HE -

400x)

14

Figura 7 - Foto da tela do monitor com o tratamento da imagem com filtro RGB

para quantificaccedilatildeo da expressatildeo da caspase-3

16

Figura 8 - Fotomicrografia do glomeacuterulo (400x) antes (A) e apoacutes (B) do

tratamento da imagem com o programa ImageLABreg

16

Figura 9 - Foto da tela do monitor mostrando a planilha com um resultado da

quantificaccedilatildeo da caspase-3 pelo programa ImageLABreg

17

Figura 10 - Fotomicrografia de um glomeacuterulo com lesatildeo caracteriacutestica de grau

ausente (0) onde se nota o mesacircngio sem edema ausente e ceacutelulas de

caracteriacutesticas conservadas (HE ndash 400x)

36

Figura 11 - Fotomicrografia de um glomeacuterulo com lesatildeo caracteriacutestica de grau leve

(1) onde nota-se o espessamento do mesacircngio edema discreto e ceacutelulas

de caracteriacutesticas intumescidas (HE ndash 400x)

36


moderado (2) onde nota-se o espessamento do mesacircngio edema

discreto e ceacutelulas de caracteriacutesticas intumescidas (HE ndash

400x)

37


acentuado (3) onde nota-se o espessamento do mesacircngio edema

discreto e ceacutelulas de caracteriacutesticas intumescidas (HE ndash 400x)

37

Figura 14 - Fotomicrografia de um tuacutebulo renal de um animal do grupo simulado

onde pode-se notar as caracteriacutesticas normais do tuacutebulo (HE ndash

400x)

38

Figura 15 - Fotomicrografia de um tuacutebulo renal de um animal com intenso

sofrimento mostrando a necrose tubular e presenccedila de sedimentos na

luz tubular(HE ndash 400x)

38

LISTA DE TABELAS

Tabela 1 - Meacutedia e desvio-padratildeo das medidas dos niacuteveis seacutericos de CPK

(UL-1) nos animais dos grupos S (sem isquemia e reperfusatildeo) A

(isquemia de seis horas e reperfusatildeo de quatro horas) e B

(isquemia de seis horas e reperfusatildeo de vinte e quatro horas) nos

tempos 1 (sem PTX) 2 (PTX no iniacutecio da isquemia) e 3 ( PTX

no iniacutecio da isquemia e da reperfusatildeo)

20

Tabela 2 - Meacutedia e desvio-padratildeo das medidas dos niacuteveis seacutericos de ureacuteia

(mgdL-1) nos animais dos grupos S (sem isquemia e reperfusatildeo)

A (isquemia de seis horas e reperfusatildeo de quatro horas) e B




22

Tabela 3 - Meacutedia e desvio-padratildeo das medidas dos niacuteveis seacutericos de

creatinina (mgdL-1) nos animais dos grupos S (sem isquemia e

reperfusatildeo) A (isquemia de seis horas e reperfusatildeo de quatro

horas) e B (isquemia de seis horas e reperfusatildeo de vinte e quatro

horas) nos tempos 1 (sem PTX) 2 (PTX no iniacutecio da isquemia)

e 3 ( PTX no iniacutecio da isquemia e da reperfusatildeo)

24

Tabela 4 - Meacutedia e desvio-padratildeo das medidas dos niacuteveis seacutericos de soacutedio

(mmoldL-1) nos animais dos grupos S (sem isquemia e





26


potaacutessio (mmoldL-1) nos animais dos grupos S (sem isquemia e





28

Tabela 6 - Meacutedia e desvio-padratildeo da somatoacuteria dos escores [ausente (0)

leve (1) moderado (2) e acentuado (3)] calculados em dez

campos por lacircmina do paracircmetro histoloacutegico de espessamento

do mesacircngio dos rins dos animais dos grupos A (isquemia de

seis horas e reperfusatildeo de quatro horas) e B (isquemia de seis

horas e reperfusatildeo de vinte e quatro horas) nos tempos 1 (sem

PTX) 2 (PTX no iniacutecio da isquemia) e 3 ( PTX no iniacutecio da

isquemia e da reperfusatildeo)

30

Tabela 7 - Meacutedia e desvio-padratildeo da somatoacuteria dos valores absolutos

encontrados em dez campos por lacircmina do paracircmetro

histoloacutegico de tuacutebulos renal comprometido dos rins dos animais

dos grupos A (isquemia de seis horas e reperfusatildeo de quatro




32

Tabela 8 - Meacutedia e desvio-padratildeo do porcentual da expressatildeo da caspase 3

(apoptose) encontrados em dez campos por lacircmina na

preparaccedilatildeo por imunohistoquiacutemica do glomeacuterulos renais dos

animais dos grupos S (sem isquemia e reperfusatildeo) A (isquemia

de seis horas e reperfusatildeo de quatro horas) e B (isquemia de seis




34

LISTA DE GRAacuteFICOS

Graacutefico 1 - Representaccedilatildeo graacutefica da meacutedia e desvio-padratildeo das medidas

dos niacuteveis seacutericos de CPK (UL-1) nos animais dos grupos S

(sem isquemia e reperfusatildeo) A (isquemia de seis horas e

reperfusatildeo de quatro horas) e B (isquemia de seis horas e

reperfusatildeo de vinte e quatro horas) nos tempos 1 (sem PTX) 2

(PTX no iniacutecio da isquemia) e 3 ( PTX no iniacutecio da isquemia e

da reperfusatildeo)

21


dos niacuteveis seacutericos de ureacuteia (mgdL-1) nos animais dos grupos S





da reperfusatildeo)

23


dos niacuteveis seacutericos de creatinina (mgdL-1) nos animais dos

grupos S (sem isquemia e reperfusatildeo) A (isquemia de seis horas

e reperfusatildeo de quatro horas) e B (isquemia de seis horas e



da reperfusatildeo)

25

Graacutefico 4 - Representaccedilatildeo graacutefica ndash Meacutedia e desvio-padratildeo das medidas dos

niacuteveis seacutericos de potaacutessio (mmoldL-1) nos animais dos grupos S





da reperfusatildeo)

27

Graacutefico 5 - Representaccedilatildeo graacutefica da Meacutedia e desvio-padratildeo das medidas

dos niacuteveis seacutericos de potaacutessio (mmoldL-1) nos animais dos





da reperfusatildeo)

29

Graacutefico 6 - Representaccedilatildeo graacutefica da meacutedia e desvio-padratildeo da somatoacuteria

dos escores [ausente (0) leve (1) moderado (2) e acentuado

(3)] calculados em dez campos por lacircmina do paracircmetro

histoloacutegico de espessamento do mesacircngio dos rins dos animais





31

Graacutefico 7 - Representaccedilatildeo graacutefica da Meacutedia e desvio-padratildeo da somatoacuteria

dos valores absolutos encontrados em dez campos por lacircmina

do paracircmetro histoloacutegico de tuacutebulos renal comprometido dos

rins dos animais dos grupos A (isquemia de seis horas e




da reperfusatildeo)

33

Graacutefico 8 - Representaccedilatildeo graacutefica da meacutedia e desvio-padratildeo do porcentual

da expressatildeo da caspase 3 (apoptose) encontrados em dez

campos por lacircmina na preparaccedilatildeo por imunohistoquiacutemica dos

glomeacuterulos renais dos animais dos grupos S (sem isquemia e





35

LISTA DE ABREVIATURAS E SIacuteMBOLOS = porcentagem

ABC = complexo avidina-biotina-peroxidade

ATP = Adenosina Trifosfato

Ca++ = Caacutelcio

cm = centiacutemetro

CPK= creatinofosfoquinase

DAB = (3-3)-tetrahidrocloreto de diaminabenzina

dL = decilitro

EROs= Espeacutecies Reativas de Oxigecircnio

FIA= Fator Indutor da Apoptose

g = grama

H= Teste de Kruskal-Wallis

HE = Hematoxilina e Eosina

K+ = Potaacutessio

Kg = quilograma

L = litro

mg = miligrama

mL = mililitros

mm = miliacutemetros

Na+= Soacutedio

PTX = Pentoxifilina

SD = desvio padratildeo

SSt = soluccedilatildeo salina tamponada

UFMS = Universidade Federal de Mato Grosso do Sul

UNIFESP - EPM = Universidade Federal de Satildeo Paulo - Escola Paulista de Medicina

RESUMO

Objetivos estudar os aspectos morfoloacutegicos e funcionais do rim de ratos relacionados com a

isquemia e reperfusatildeo de musculatura esqueleacutetica e o uso da pentoxifilina Meacutetodos Ratos

Wistar EPM-1 (n=60) foram submetidos agrave isquemia do membro posterior pelo clampeamento

da arteacuteria iliacuteaca comum esquerda por um periacuteodo de seis horas e observados por quatro (GA)

ou vinte e quatro horas (GB) apoacutes a reperfusatildeo Outro grupo GS(n=6) foi submetido a

anestesia e procedimentos operatoacuterios sem a obstruccedilatildeo arterial A pentoxifilina (PTX -

40mgKg-1) natildeo foi aplicada (GA1 e GB1) ou foi aplicada no iniacutecio da reperfusatildeo (GA2 e

GB2) ou no iniacutecio da isquemia e iniacutecio da reperfusatildeo (GA3 e GB3) A eutanaacutesia ocorreu ao

teacutermino do periacuteodo de reperfusatildeo correspondente em cada grupo de animais quando foram

coletadas amostras de sangue para anaacutelise bioquiacutemica da creatinofosfoquinase ureacuteia

creatinina soacutedio e potaacutessio seacutericos Na sequumlecircncia foi realizada a nefrectomia esquerda para

estudo histoloacutegico das alteraccedilotildees morfoloacutegicas dos nefrons e tuacutebulos renais assim como a

imuno-histoquiacutemica para apoptose pela expressatildeo da caspase-3 Foram aplicados os testes de

Mann-Whitney e Kruskal-Wallis (p le 005) Resultados Ocorreu aumento significativo da

ureacuteia (905 plusmn 3096 mgsdotdL-1) creatinina (228 plusmn 054 mgsdotdL-1) e potaacutessio (16 plusmn 366 mmolsdotdL-

1) no grupo B3 onde o mesacircngio tambeacutem mostrou-se significativamente espessado (097 plusmn

042) Houve diminuiccedilatildeo do nuacutemero de tuacutebulos renais comprometidos (070 plusmn 014) no grupo

B2 A expressatildeo de caspase-3 foi maior nos grupos B2 (1635 plusmn 165) e B3 (1557 plusmn 254)

que em GS (98 plusmn 198) Conclusatildeo A isquemia e reperfusatildeo de muacutesculo esqueleacutetico de

ratos produzem lesotildees agrave distacircncia em tecido renal e a pentoxifilina tem algum efeito protetor

sobre estas lesotildees na fase precoce de observaccedilatildeo (ateacute quatro horas) Na fase tardia (ateacute vinte e

quatro horas) esta proteccedilatildeo natildeo se faz evidente e ateacute exerce papel antagocircnico agravando as

lesotildees quando aplicada nos periacuteodos de isquemia e reperfusatildeo e dependente da dose usada

ABSTRACT

Objectives to study morphologic and functional aspects of the kidney of rats related with the

ischemia and reperfusion of skeletal musculature and pentoxifylline Methods Wistar EPM-1

rats (n=60) were submitted to the ischemia of the posterior limb by clamping the left

common iliac artery for a period of six hours and observed by four (GA) or twenty-four hours

(GB) after the reperfusion Another group GS(n=6) was submitted to the anesthesia and

surgical procedures without the arterial obstruction The pentoxifylline (PTX - 40mgKg-1) it

was not applied (GA1 and GB1) or it was applied in the beginning of the reperfusion (GA2

and GB2) or in the beginning of the ischemia and in the beginning of the reperfusion (GA3

and GB3) The euthanasia was done at the end of the period of corresponding reperfusion in

each group of animals when samples of blood were collected for biochemistry analysis of the

creatinofosfoquinase urea creatinine sodium and potassium In the sequence the left

nefrectomy was accomplished for histological study of the morphologic alterations of the

nefrons and renal tubules as well as the imuno-histochemistry test for apoptose by the

expression of the caspase-3 They were applied the tests of Mann-Whitney and Kruskal-

Wallis (ple 005) Results it were significant increase of the urea (905 plusmn 3096 mgdL-1)

creatinine (228 plusmn 054 mgdL-1) and potassium (16 plusmn 366 mmoldL-1) in the group B3 where

the mesangium was also shown significantly thickened (097 plusmn 042) There was decrease of

the number of renal tubules injured (070 plusmn 014) in the group B2 The caspase-3 expression

was larger in the groups B2 (1635 plusmn 165) and B3 (1557 plusmn 254) that in GS (98 plusmn

198) Conclusions the ischemia and reperfusion of skeletal muscle of rats produce long

distance lesions in renal tissue and the pentoxifylline has some protecting effect on these

lesions in the precocious phase of observation (up to four hours) In the late phase (up to

twenty-four hours) this protection is not made evident and until it exercises antagonistic dose-

dependent effects worsening the lesions when applied in the ischemia and reperfusion

periods

SUMAacuteRIO

1 INTRODUCcedilAtildeO 1

2 OBJETIVOS 4

3 MEacuteTODOS 5

4 RESULTADOS 19

5 DISCUSSAtildeO 39

6 CONCLUSOtildeES 52

7 REFEREcircNCIAS 53

8 NORMAS ADOTADAS 58

APEcircNDICE 59

1 INTRODUCcedilAtildeO

A isquemia eacute conceituada como o desequiliacutebrio maior ou menor entre a oferta e

demanda de sangue para um determinado oacutergatildeo ou tecido1-2 A consequumlente hipoacutexia tecidual

acarreta etapas patoloacutegicas diversas de acordo com a intensidade e duraccedilatildeo do periacuteodo

isquecircmico3-8

Quando o fluxo sanguumliacuteneo eacute interrompido diferentes processos metaboacutelicos e

enzimaacuteticos satildeo afetados ocorrendo raacutepida depleccedilatildeo das reservas de adenosina trifosfato

(ATP) acuacutemulo de lactato acidificaccedilatildeo das ceacutelulas e ativaccedilatildeo de proteases intracelulares8

As principais alteraccedilotildees da isquemia ocorrem no territoacuterio arteriacuteolo-capilar sendo a toleracircncia

agrave isquemia tecidual variaacutevel e multifatorial dependendo do tempo de isquemia das

necessidades metaboacutelicas dos tecidos do aporte da circulaccedilatildeo colateral e de fatores humorais8-

10 A conjunccedilatildeo destes fatores natildeo permite estabelecer com precisatildeo o tempo de isquemia

aleacutem do qual se instala o processo de necrose tornando o processo irreversiacutevel5-8

Contudo aleacutem da necrose tecidual nos uacuteltimos anos tecircm-se tambeacutem estudado os

aspectos de morte celular programada conhecida como apoptose A interrupccedilatildeo da corrente

sanguumliacutenea e consequumlente hipoacutexia desencadeia processos metaboacutelicos celulares que induzem a

ceacutelula a sua autodestruiccedilatildeo sem a caracteriacutestica reaccedilatildeo inflamatoacuteria encontrada na necrose

celular8-10

Eacute atribuiacutedo agrave liberaccedilatildeo de radicais livres de oxigecircnio no periacuteodo de reperfusatildeo como

um dos mecanismos paradoxal do aumento na lesatildeo com a restituiccedilatildeo da oxigenaccedilatildeo e afluxo

de nutrientes vitais agraves ceacutelulas e que se constitui no aspecto principal da complexa siacutendrome

de isquemia-reperfusatildeo5-10

Deste modo associadas diretamente agrave restriccedilatildeo da circulaccedilatildeo sanguumliacutenea a necrose e

apoptose celular podem ser utilizadas como indicadores das alteraccedilotildees de tecidos submetidos

agrave isquemia5-10

O muacutesculo esqueleacutetico tem sido alvo de pesquisas no tocante ao fenocircmeno de

isquemia e reperfusatildeo11-18 Determinados procedimentos operatoacuterios (operaccedilotildees de membros

submetidos ao uso de faixas compressivas de Esmarch reimplante de membros) e

traumatismos (soterramentos esmagamentos de extremidades aprisionamento nas ferragens

de um acidente automobiliacutestico na siacutendrome compartimental na embolia arterial aguda)

2

podem comprometer os muacutesculos com repercussotildees locais ou sistecircmicas desencadeadas por

processos metaboacutelicos que agravam a lesatildeo11-16

O tecido muscular esqueleacutetico em particular tolera uma hora e trinta minutos de

isquemia sem alteraccedilotildees morfoloacutegicas ou funcionais16-18 Ocorrendo alongamento do periacuteodo

para cerca de duas horas ocorre um miacutenimo dano estrutural e completa recuperaccedilatildeo das

funccedilotildees metaboacutelicas Com este tempo de isquemia prevalece o metabolismo anaeroacutebico

contudo com o aumento do lactato e fosfato inorgacircnico com a reduccedilatildeo do pH e do ATP aleacutem

da reduccedilatildeo da creatina em 40 do normal Apoacutes trecircs horas de isquemia a concentraccedilatildeo do

ATP reduz drasticamente e haacute piora da acidose mas com o restabelecimento da perfusatildeo

tecidual os niacuteveis de ATP satildeo restabelecidos sem gerar lesotildees teciduais Poreacutem se a

isquemia persiste por mais de sete horas podem ocorrer lesotildees graves e irreversiacuteveis

predominando o processo de necrose Considera-se o muacutesculo esqueleacutetico como de resistecircncia

intermediaacuteria agrave isquemia16-18 Os nervos ou tecido nervoso que satildeo os mais sensiacuteveis e os

tendotildees ossos e pele satildeo os mais resistentes16

A isquemia dos muacutesculos esqueleacuteticos da pata posterior de ratos eacute referida na literatura

como um bom modelo experimental Para provocar a isquemia do muacutesculo esqueleacutetico eacute

preciso considerar que vascularizaccedilatildeo do membro posterior do rato apresenta uma exuberante

presenccedila de circulaccedilatildeo colateral no territoacuterio da arteacuteria iliacuteaca externa e arteacuteria femoral comum

assim estes aspectos devem ser considerados na escolha do modelo a ser utilizado para

provocar a isquemia19 No modelo de isquemia induzido pelo clampeamento arterial isolado

evita-se a compressatildeo direta do leito venoso assim como o trauma muscular direto provocado

pelo modelo que utiliza o torniquete permitindo dessa forma uma preservaccedilatildeo da resposta

vasomotora e venosa durante a reperfusatildeo Estes fatores satildeo importantes moduladores da

extensatildeo e qualidade da lesatildeo muscular resultante34 1920

Com a utilizaccedilatildeo deste modelo tecircm sido estudadas diversas drogas com accedilatildeo anti-

oxidante varredores de radicais livres (ldquoscavengersrdquo) e manobras de preacute-condicionamento

isquecircmico Em que pesem os resultados conflitantes e controversos pela ausecircncia de uma

padronizaccedilatildeo metodoloacutegica16-18 de certa forma esses estudos permitiram uma melhor

compreensatildeo da fisiopatologia das lesotildees de isquemia e reperfusatildeo bem como a possibilidade

de diferentes drogas com finalidade terapecircutica1520

Apesar da capacidade de resistecircncia do muacutesculo esqueleacutetico agrave isquemia outros oacutergatildeos

e tecidos podem ser afetados pelos metaboacutelitos liberados na corrente sanguumliacutenea apoacutes a

3

reperfusatildeo em especial as espeacutecies reativas de oxigecircnio (EROs) produzidas durante a

isquemia e reperfusatildeo de muacutesculo esqueleacutetico21 A insuficiecircncia renal aguda eacute de haacute muito

tempo associada agraves lesotildees musculares extensas2223

Entre as drogas que estatildeo sob investigaccedilatildeo para o tratamento da insuficiecircncia renal e a

lesotildees atribuiacuteveis agrave presenccedila de radicais livres de oxigecircnio estaacute a pentoxifilina24-28 A

pentoxifilina (PTX) eacute uma metilxantina estudada em modelos experimentais na proteccedilatildeo na

IRA induzida com a aplicaccedilatildeo intramuscular de glicerol29-31 O mecanismo primaacuterio da accedilatildeo

protetora das metilxantinas eacute devido agrave accedilatildeo antagonista do receptor de adenosina que eacute um

potente vasoconstritor liberado na corrente sanguumliacutenea nas lesotildees de muacutesculos esqueleacuteticos

mas outras accedilotildees tecircm sido consideradas32-42 Sua propriedade hemorreoloacutegica leva ao aumento

da deformabilidade das hemaacutecias com isso melhorando a microcirculaccedilatildeo sendo estudada na

prevenccedilatildeo das doenccedilas isquecircmicas crocircnicas e tambeacutem na IRA induzida experimentalmente27-

31 Ela exerce efeitos beneacuteficos atraveacutes de vaacuterios mecanismos tais como na reduccedilatildeo da

produccedilatildeo de citocinas e superoacutexidos alteraccedilatildeo na quimiotaxia de neutroacutefilos diminuiccedilatildeo na

ativaccedilatildeo e adesividade plaquetaacuteria aumento da flexibilidade das hemaacutecias e com isto atenua

a lesatildeo endotelial e tecidual que ocorre no fenocircmeno da isquemia e reperfusatildeo Alguns

estudos sugerem a parada da progressatildeo da lesatildeo renal no choque seacuteptico e melhora o fluxo

sanguumliacuteneo renal durante a bacteremia devido agrave vasodilataccedilatildeo poacutes-glomerular2728

Considerando o contexto e o fato que o Programa de Poacutes-Graduaccedilatildeo em Cirurgia e

Experimentaccedilatildeo dentro da aacuterea de concentraccedilatildeo em Isquemia e Reperfusatildeo desenvolve linha

de pesquisa voltada para o estudo do fenocircmeno de isquemia e reperfusatildeo em muacutesculo

esqueleacutetico43-45 procura-se agora expandir sua atuaccedilatildeo para a investigaccedilatildeo da associaccedilatildeo do

modelo de isquemia e reperfusatildeo em muacutesculo esqueleacutetico de ratos sob a accedilatildeo da pentoxifilina

e suas repercussotildees sobre o tecido renal avaliadas pelas alteraccedilotildees morfoloacutegicas e da

apoptose

2 OBJETIVOS

Geral

Estudar o fenocircmeno de isquemia e reperfusatildeo em muacutesculo esqueleacutetico e a sua repercussatildeo no

rim de ratos

Especiacutefico

Estudar os aspectos morfoloacutegicos e funcionais do rim de ratos submetidos agrave isquemia e

reperfusatildeo de muacutesculo esqueleacutetico sob a accedilatildeo da pentoxifilina

3 MEacuteTODOS

O projeto de pesquisa foi aprovado pelo Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa da Universidade

Federal de Mato Grosso do Sul (UFMS) e da Universidade Federal de Satildeo Paulo - Escola

Paulista de Medicina (UNIFESP-EPM) conforme os protocolos de pesquisa com os

respectivos nuacutemeros 392003 e 033504 Todos os animais foram manipulados de acordo

com ldquoOs Princiacutepios Eacuteticos da Experimentaccedilatildeo Animal da Uniatildeo Internacional Protetora dos

Animaisrdquo e da lei Federal 663 de 8 de maio de 1979

Amostra

Foram utilizados sessenta e seis ratos (Rattus norvegicus albinus) da linhagem Wistar

EPM-1 machos adultos peso meacutedio de 343plusmn31 gramas originaacuterios do Bioteacuterio da

Universidade Federal de Mato Grosso do Sul

Os animais foram alojados em salas exclusivas com ambiente adaptado agraves

necessidades da espeacutecie e os procedimentos experimentais realizados no Laboratoacuterio da

Disciplina de Cirurgia Experimental da UFMS

Os animais foram mantidos no Bioteacuterio Setorial da Disciplina por sete dias preacutevios

aos procedimentos para observaccedilatildeo e adaptaccedilatildeo Receberam raccedilatildeo balanceada proacutepria para

espeacutecie e aacutegua agrave vontade ficaram alojados em gaiolas de metal com dimensotildees de

(40x30x25cm) com no maacuteximo cinco animais por gaiola sob condiccedilotildees de iluminaccedilatildeo

controlada (323 lumes por metro quadrado) com luz das 6 agraves 18 horas e escuridatildeo das 18

agraves 6 horas aleacutem de temperatura ambiente e higienizaccedilatildeo diaacuteria

Aleatoriamente os animais foram distribuiacutedos em Grupo S (n=6) Grupo A (n=30)

e Grupo B (n=30) segundo os tipos de procedimento experimental (Figura 1)

Grupo simulado ndash GS (n=6) animais que foram submetidos agrave anestesia

laparotomia sem isquemia de membro posterior e coleta de rim esquerdo apoacutes 4horas

(n=3) e 24 horas (n=3) de observaccedilatildeo

6

Grupo A ndash GA (n=30) animais que foram submetidos aacute anestesia laparotomia

isquemia de seis horas do membro posterior e coleta de rim esquerdo apoacutes quatro horas de

reperfusatildeo

Grupo B (n-30) animais que foram submetidos agrave anestesia laparotomia isquemia

de seis horas do membro posterior e coleta de rim esquerdo apoacutes vinte e quatro horas de

reperfusatildeo

Os animais dos grupos A e B foram redistribuiacutedos em subgrupos 1 (n=10) 2

(n=10) e 3 (n=10) de acordo com a aplicaccedilatildeo da pentoxifilina

Grupos A1 e B1 animais que natildeo receberam a droga quer no periacuteodo de isquemia

quer no periacuteodo de reperfusatildeo

Grupos A2 e B2 animais que receberam a droga somente no momento

imediatamente (3 minutos) antes iniacutecio da reperfusatildeo

Grupos A3 e B3 animais que receberam a droga tanto no momento imediatamente

(3 minutos) antes inicio da isquemia quanto no momento imediatamente (3minutos) antes

de iniciar a reperfusatildeo

Procedimentos

Anestesia e analgesia

Os animais foram pesados e anestesiados com injeccedilatildeo intraperitoneal de soluccedilatildeo de

21 de cloridrato de quetamina (50mgmL-1) e xilazina (20mgmL-1) respectivamente na dose

de (01mL100g-1) Os ratos foram considerados anestesiados apoacutes ter sido constatada a

perda de reaccedilatildeo aos estiacutemulos mecacircnicos com a perda dos reflexos de endireitamento

retirada do membro apoacutes estiacutemulo doloroso provocado por preensatildeo e perda do reflexo

palpebral

Nalbufina (Nubainreg) foi administrada na dose 2mgKg-1 por via subcutacircnea para

analgesia durante o tempo que os animais ficaram em observaccedilatildeo nos periacuteodos de isquemia

ou de reperfusatildeo

7

Figu

ra 1 ndash Esquema da distribuiccedilatildeo dos animais nos diversos grupos de estudo

Ratos N-66

GRUPO A n=30

Isquemia 6 horas Reperfusatildeo 4 horas

Simulado n=6

GRUPO B n=30


A1 n=10

Isquemia sPTX Reperfusatildeo sPTX

A2 n=10

Isquemia s PTX Reperfusatildeo cPTX

B3 n=10

Isquemia cPTX Reperfusatildeo cPTX

B2 n=10

Isquemia sPTX Reperfusatildeo cPTX

B1 n=10


A 3 n=10

Isquemia cPTX Reperfusatildeo c PTX

Procedimento operatoacuterio de isquemia

bull Animal sob anestesia posicionado em decuacutebito dorsal e imobilizado pelas patas com

tiras de fita adesiva agrave mesa operatoacuteria

bull Tricotomia da parede abdominal

bull Anti-sepsia com polivinilpirrolidona (PVPI - Povidinereg)

bull Colocaccedilatildeo dos panos operatoacuterios esterilizados isolando-se o campo operatoacuterio

bull Incisatildeo infra-umbilical mediana com bisturi de lacircmina 15 com 20 mm de extensatildeo

interessando a pele a tela subcutacircnea a linha alba e o peritocircnio parietal abrindo a

cavidade abdominal

8

bull Afastamento das alccedilas intestinais e exposiccedilatildeo do retroperitocircnio que foi incisado e

dissecado liberando os vasos retroperitoniais

bull Identificaccedilatildeo e exposiccedilatildeo da aorta abdominal infrarrenal e arteacuterias iliacuteacas comuns

bull Exposiccedilatildeo e isolamento da arteacuteria iliacuteaca comum esquerda

bull Colocaccedilatildeo de mini-clampe vascular produzindo interrupccedilatildeo do fluxo sanguumliacuteneo da

arteacuteria iliacuteaca comum agrave jusante (Figura 2)

bull Acomodaccedilatildeo do mini-clampe e reposiccedilatildeo das alccedilas intestinais na cavidade abdominal

bull Sutura da parede abdominal com fio de poliamida 40 em chuleio contiacutenuo

bull Verificaccedilatildeo da eficaacutecia do clampeamento pela comparaccedilatildeo entre as duas patas

posteriores verificando a cianose e edema (Figura 3)

bull Colocaccedilatildeo dos animais em gaiolas individuais sob calor de lacircmpadas incandescentes

ateacute a recuperaccedilatildeo da anestesia

bull Observaccedilatildeo pelo periacuteodo de seis horas com aacutegua de dieta agrave vontade

Procedimento operatoacuterio de reperfusatildeo

bull Animal sob anestesia posicionado em decuacutebito dorsal imobilizado pelas patas com




bull Seccionado o fio de poliamida desfeita a sutura e aberta a cavidade abdominal

bull Afastamento das alccedilas intestinais e identificaccedilatildeo do mini-clampe vascular que foi

aberto e retirado

bull Acomodaccedilatildeo das alccedilas intestinais na cavidade abdominal




bull Observaccedilatildeo pelo periacuteodo de quatro horas ou vinte e quatro horas de acordo com o

grupo de estudo com aacutegua de dieta agrave vontade

9

Figura 2 - Fotografia mostrando o isolamento e clampeamento da arteacuteria iliacuteaca comum esquerda do rato

Figura 3 - Fotografia mostrando a pata isquecircmica apoacutes a

aplicaccedilatildeo do mini-clampe na arteacuteria iliacuteaca comum esquerda durante o periacuteodo de isquemia

10

Procedimento de aplicaccedilatildeo da droga

A pentoxifilina (Trentalreg) na dose de 40mgKg-1 foi aplicada por via intraperitoneal

em um volume de dois mililitros A aplicaccedilatildeo foi com seringa de 3ml com aponta dirigida

sempre ao hipococircndrio esquerdo do animal fazendo com que o liacutequido ficasse alojado na aacuterea

subdiafragmaacutetica junto ao recesso do estocircmago e baccedilo do animal evitando seu

extravasamento quando da siacutentese da parede abdominal

A aplicaccedilatildeo nos animais dos grupos A2 e B2 se deu trecircs minutos antes da colocaccedilatildeo

do mini-clampe vascular e correspondeu ao tempo necessaacuterio para a colocaccedilatildeo do mini-

clampe reposiccedilatildeo das alccedilas intestinais e sutura da parede abdominal

A aplicaccedilatildeo nos grupos A3 e B3 se deu trecircs minutos antes da retirada do mini-clampe

vascular e correspondeu ao tempo necessaacuterio para a retirada do mini-clampe reposiccedilatildeo das

alccedilas intestinais e siacutentese da parede abdominal

Procedimento operatoacuterio de coleta do rim esquerdo e de sangue para anaacutelise bioquiacutemica

bull Apoacutes o periacuteodo de reperfusatildeo o animal sob anestesia foi posicionado em decuacutebito

dorsal imobilizado pelas patas com tiras de fita adesiva agrave mesa operatoacuteria

bull Anti-sepsia da parede abdominal com polivinilpirrolidona (PVPI - Povidinereg)


bull A incisatildeo abdominal foi aberta pela secccedilatildeo do fio de poliamida

bull Afastamento das alccedilas intestinais e identificaccedilatildeo do rim esquerdo

bull Dissecccedilatildeo do pediacuteculo renal esquerdo

bull Ligadura dos vasos renais com fio de poliamida 30 e secccedilatildeo do pediacuteculo renal

bull Descolamento e nefrectomia esquerda

bull Punccedilatildeo transtoraacutecica do ventriacuteculo esquerdo e coleta de amostras de sangue em

seringa heparinizada para exame bioquiacutemico

bull Secccedilatildeo da veia cava inferior

bull Aguardada a exanguumlinaccedilatildeo total do animal com morte por hipovolemia

11

Procedimentos bioquiacutemicos

O sangue foi coletado por punccedilatildeo cardiacuteaca para as dosagens bioquiacutemicas da

concentraccedilatildeo de creatinofosfoquinase (CPK) ureacuteia creatinina soacutedio e potaacutessio

Foram aspirados de 3 a 5mL de sangue e colocados em tubo coletor A anaacutelise

bioquiacutemica foi realizada utilizando equipamento automatizado DADE Behring Dimension

AR do Laboratoacuterio de Anaacutelises Cliacutenicas do Hospital Universitaacuterio da UFMS

Processamento histoloacutegico para coloraccedilatildeo em HE

O rim esquerdo foi seccionado no plano frontal (Figura 4) e submerso em formol

tamponado 10 (para cada litro de formol adicionou-se quatro gramas de fosfato monobaacutesico

anidro e 65 gramas de fosfato de soacutedio dibaacutesico anidro) em um volume 10 vezes superior ao

da peccedila operatoacuteria

No processamento histoloacutegico foi realizada a desidrataccedilatildeo sucessiva em aacutelcoois

etiacutelicos em concentraccedilotildees crescentes ateacute o aacutelcool absoluto diafanizaccedilatildeo com xilol e

impregnaccedilatildeo com parafina histoloacutegica para emblocamento

Utilizou-se o microacutetomo rotativo para realizar cortes finos de cerca de 4microm que foram

montados sobre lacircmina de vidro com extremidade fosca devidamente identificada Os cortes

montados foram a seguir desparafinizados em estufa a 56ordmC

Apoacutes nova desparafinizaccedilatildeo com xilol hidrataccedilatildeo com aacutelcoois sucessivos em

concentraccedilotildees decrescentes o material foi lavado aacutegua corrente e corado com hematoxilina

por cinco a dez minutos O excedente do corante foi retirado com banhos em aacutegua comum Apoacutes raacutepida desidrataccedilatildeo em aacutelcool absoluto os cortes foram corados pelo corante eosina por

oito minutos diferenciados em sucessivos aacutelcoois em concentraccedilotildees crescentes diafanizados

em xilol e montados com lamiacutenula e baacutelsamo de Canadaacute e Etela

12

Figura 4 - Fotografia mostrando o rim em corte frontal para o processamento histoloacutegico e

posterior coloraccedilatildeo pela HE e imuno-histoquiacutemica

Criteacuterios para anaacutelise histoloacutegica em HE

As lacircminas foram analisadas agrave microscopia oacuteptica (microscoacutepio Nikon E 200) pelo

patologista sem preacutevio conhecimento sobre o grupo a que pertencia cada rato sendo

observados os seguintes aspectos espessamento do mesacircngio (Figura 5) realizado escore

entre ausente (zero) grau leve (+) grau moderado (++) e acentuado (+++) e realizado a meacutedia

de observaccedilatildeo de 10 glomeacuterulos de cada lacircmina O espessamento de grau leve foi considerado

quando a expansatildeo do espaccedilo mesangial entre os capilares adjacentes exceder o de uma ceacutelula

mesangial o espessamento de grau moderado a expansatildeo do espaccedilo mesangial foi de duas

ceacutelulas e no grau acentuado este espaccedilo excedeu a trecircs ceacutelulas mesangiais Para fins de

caacutelculo estatiacutestico foi determinado valores de 0 (ausente) 1 (leve) 2 (moderado) e 3

(acentuado) e nos tuacutebulos calculou-se o nuacutemero de tuacutebulos com sedimento eou ceacutelulas

degeneradas (Figura 6) para cada campo no aumento de 400x e realizado a meacutedia do nuacutemero

de tuacutebulos comprometidos em 10 campos aleatoacuterios

13

A

Figura 5 ndash Fotomicrografia caracteriacutestica de grau leve do mesacircngio (Bespessamento de grau acentuado

C mostrando glomeacuterulos normal (A) com espessa) com espessamento de grau moderado (C) (D) (HE - 400x)

B

D mento e com

14

Figura 6 - Fotomicrografia caracteriacutestica dos tuacutebdireita e do grupo A1 agrave esquerda dempresenccedila de sedimentos em sua luz()

Processamento para a coloraccedilatildeo imuno-histoqu

As peccedilas incluiacutedas em parafina foram en

Molecular do Departamento de Patologia da Un

Paulista de Medicina para o processamento de imu

Apoacutes o procedimento de inclusatildeo submeteu

espessura e aderidas em lacircminas tratadas com 3-am

A 3648) deixou-se em estufa a 56ordmC por 12 hora

banhos de xilol por quinze minutos e posterior hid

um banho de etanol a 95 um banho de etano

Realizou-se a recuperaccedilatildeo antigecircnica para o antico

de microondas em tampatildeo citrato pH 60 em p

procedimento deixou-se esfriar agrave temperatura amb

lavagem com aacutegua realizou-se o bloqueio da pe

oxigenada dez volumes quatro vezes por cinco m

corrente e tampatildeo PBS pH 74

ulos renais do grupo simulado (normal) agrave onstrando tuacutebulos com necrose tubular e (HE - 400x)

iacutemica

caminhadas para o Serviccedilo de Patologia

iversidade Federal de Satildeo Paulo - Escola

no-histoquiacutemica

-se agrave microtomia (Leicareg 2025) de 3microm de

inopropiltrietoxisilano (Sigma Coreg-USA-

s Realizou-se a desparafinizaccedilatildeo em dois

rataccedilatildeo em dois banhos de etanol absoluto

l a 70 e um banho em aacutegua corrente

rpo caspase-3 clivada com o uso de forno

otecircncia alta por vinte minutos e apoacutes este

iente por pelo menos vinte minutos Apoacutes a

roxidase endoacutegena pela aplicaccedilatildeo de aacutegua

inutos cada e lavou-se em seguida em aacutegua

15

Realizou-se a incubaccedilatildeo com o anticorpo policlonal de coelho anti-caspase-3 clivada46

Cell Sinaling tiacutetulo 1100 em soluccedilatildeo de BSA 1 em tampatildeo PBS 1 em tampatildeo PBS em

cacircmara uacutemida a 4ordmC de dezesseis a dezoito horas Apoacutes trecircs lavagens em tampatildeo PBS

realizou-se a incubaccedilatildeo com o anticorpo secundaacuterio biotinilado do kit DAKO LSAB-HRP

(Dako AS-Denarkreg ndash K492) por quinze minutos cacircmara uacutemida a temperatura ambiente trecircs

lavagens em tampatildeo PBS pH 74 e incubaccedilatildeo com o conjugado streptoavidina-peroxidase do

kit DAKO LSAB-HRPreg por quinze minutos em cacircmara uacutemida e trecircs lavagens com tampatildeo

PBS pH 74

Realizou-se a revelaccedilatildeo com o uso do agente cromogecircnico (33rsquo-diaminobenzidina-

Sigma Coreg-USA-D5637) e aacutegua oxigenada vinte volumes 1 em tampatildeo PBS pH 74 por

cinco minutos a 37ordmC e lavagem extensiva em aacutegua corrente

Utilizou-se a hematoxilina de Harris para a contra coloraccedilatildeo e a desidrataccedilatildeo foi com

um banho em etanol 70 um banho em etanol 80 um banho em etanol 95 trecircs banhos

em etanol absoluto e diafanizaccedilatildeo com trecircs banhos de xilol Posteriormente as secccedilotildees foram

montadas com lamiacutenula e resina Etellan Sigmareg e identificados

O padratildeo de positividade da caspase-3 clivada foi o aparecimento de uma coloraccedilatildeo

marrom-acastanhada no citoplasma da ceacutelula

Procedimento de capturas de imagens

Realizou-se a captura de dez imagens por lacircmina (animal) com a utilizaccedilatildeo de

microscoacutepio oacuteptico Nikonreg modelo E200 com lente binocular com 10x de aumento e a

objetiva com 40x de aumento acoplada agrave cacircmera de viacutedeo da marca Samsungreg modelo SHC-

410NAD conectado via placa de captura de viacutedeo externa da marca Pinaclereg modelo Dazzle

DVC 80 acoplado ao microcomputador com processador Celeronreg 20 Mhz 256 Mb de

memoacuteria Ram e HD de 30 Gigabytes com sistema operacional Microsoft Windows 98SEreg

Com as imagens capturadas com resoluccedilatildeo de 640 pontos na horizontal e 480 pontos na

vertical em formato digital ldquobmprdquo efetuou-se o processamento de otimizaccedilatildeo das mesmas

com a utilizaccedilatildeo do software Adobe Photoshop 70reg

Realizou-se a quantificaccedilatildeo da expressatildeo da caspase-3 atraveacutes do processamento de

imagem assistida por computador com a utilizaccedilatildeo do software ImageLABreg em dez imagens

de glomeacuterulo capturadas de cada lacircmina (cada animal) sendo armazenadas no

16

microcomputador para documentaccedilatildeo seguindo a codificaccedilatildeo preacute-estabelecida para cada

animal de cada grupo estudado A quantificaccedilatildeo da densidade marrom foi efetuada utilizando-

se o filtro R (red) G (green) e B (blue) cor de fundo azul em intervalo de cor de zero a cento

e quarenta e sete (figura 7) que corresponde ao espectro da cor azul selecionado-se a aacuterea em

torno do glomeacuterulo (T1) O computador faz a varredura de toda a imagem demarcada

comparando o valor da cor de cada pixel com a tabela de padrotildees previamente selecionados47

O resultado eacute expresso em fraccedilatildeo de aacuterea demarcada-T2 com a expressatildeo da caspase-3 pela

aacuterea total capturada-T1 (figura 8)

Figura 7 - Foto da tela do monitor com o tratamento da imagem com filtro RGB para quantificaccedilatildeo da

expressatildeo da caspase-3

17

B

Figura 8 - Fotomicrografia do glomprograma ImageLABreg

Procedimento de avaliaccedilatildeo qua

A anaacutelise computadoriza

Processamento e Anaacutelise de Ima

se o caacutelculo de paracircmetros na im

em resultados que confirmam a c

computador (Figura 9)

Figura 9 ndash Foto da tela do moncaspase-3 pelo program

A

eacuterulo (400x) antes (A) e apoacutes (B) do tratamento da imagem com o

ntitativa da expressatildeo da caspase-3

da da imagem foi realizada utilizando-se o Sistema de

gem ImageLABreg atraveacutes da coloraccedilatildeo marrom utilizando-

agemdensidade do software47 Tal avaliaccedilatildeo estaacute respaldada

orrelaccedilatildeo do valor semiquantitativo de imagem assistida por

itor mostrando a planilha com um resultado da quantificaccedilatildeo da

a ImageLABreg

18

Estudo estatiacutestico

Foi realizado estudo estatiacutestico com a finalidade de comparar os valores dos

paracircmetros componentes deste estudo entre os animais do grupo A entre os animais do grupo

B entre os animais dos grupos A e B entre os animais dos grupos A B e S

Aos resultados foi aplicado o teste de variacircncia de Kruskal-Wallis para variaacuteveis

independentes avaliando-se as relaccedilotildees entre os grupos com quatro (A) e vinte e quatro horas

comparando entre os mesmos fixou-se em 005 ou 5 (plt005) o niacutevel de rejeiccedilatildeo da

hipoacutetese de nulidade assinalando com asterisco os valores significantes e aplicou-se o teste de

Mann-Withney para varaacuteveis dependentes e avaliando-se os subgrupos estudados e fixou-se

em 005 ou 5 (plt005) o niacutevel de rejeiccedilatildeo para a hipoacutetese de nulidade

4 RESULTADOS

Ocorreu perda de um animal pertencente ao grupo B1 (isquemia de seis horas e

reperfusatildeo de quatro horas sem aplicaccedilatildeo de PTX) nas primeiras dezoito horas de observaccedilatildeo

e na necropsia natildeo foi identificada a causa do oacutebito Natildeo foi evidenciada nenhuma relaccedilatildeo

direta entre o oacutebito ocorrido e os procedimentos O animal natildeo foi substituiacutedo permanecendo

o grupo com nove animais

Todos os animais submetidos ao periacuteodo de isquemia apresentaram niacuteveis elevados de

CPK quando comparados ao grupo simulado sendo considerados tais niacuteveis como expressatildeo

de lesatildeo muscular (Tabela 1)

Os animais dos grupos A (isquemia de seis horas e reperfusatildeo de quatro horas) e B

(isquemia de seis horas e reperfusatildeo de vinte e quatro horas) apresentaram altas dosagens

seacutericas CPK com grande variaccedilatildeo nas dosagens expressas pelo alto desvio-padratildeo mas todos

apresentando diferenccedilas estatisticamente significantes em relaccedilatildeo aos animais do grupo

simulado onde natildeo ocorreu o fenocircmeno de isquemia e reperfusatildeo (Graacutefico 1)

Os resultados das meacutedias e respectivos desvios-padrotildees das dosagens seacutericas de ureacuteia

(mgdL-1) e creatinina (mgdL-1) que procuram expressar a avaliaccedilatildeo da funccedilatildeo renal estatildeo

representadas nas tabelas 2 e 3 e graacuteficos 2 e 3

Os resultados das meacutedias e respectivos desvios-padrotildees das dosagens seacutericas de soacutedio

(mmoldL-1) e potaacutessio (mmoldL-1) que procuram expressar a avaliaccedilatildeo da funccedilatildeo renal estatildeo


Os resultados das meacutedias e respectivos desvios-padrotildees da somatoacuteria dos escores

[ausente (0) leve (1) moderado (2) e acentuado (3)] calculados em dez campos por lacircmina

do paracircmetro histoloacutegico de espessamento do mesacircngio dos rins estatildeo representados na tabela

6 e graacutefico 6

Os resultados das meacutedias e desvios-padrotildees da somatoacuteria dos valores absolutos

encontrados em dez campos por lacircmina do paracircmetro histoloacutegico de tuacutebulos renal

comprometido dos rins estatildeo representados na tabela 7 e graacutefico 7

20

Os resultados das meacutedias e desvios-padrotildees do porcentual da expressatildeo da caspase-3

(apoptose) encontrados em dez campos por lacircmina na preparaccedilatildeo por imuno-histoquiacutemica

dos glomeacuterulos renais estatildeo representados na tabela 8 e graacutefico 8

Tabela 1 ndash Meacutedia e desvio-padratildeo das medidas dos niacuteveis seacutericos de CPK (UL-1) nos animais

dos grupos S (sem isquemia e reperfusatildeo) A (isquemia de seis horas e reperfusatildeo

de quatro horas) e B (isquemia de seis horas e reperfusatildeo de vinte e quatro horas)

nos tempos 1 (sem PTX) 2 (PTX no iniacutecio da isquemia) e 3 ( PTX no iniacutecio da


Grupo S

Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

Meacutedia

DP

75100

13079

333230

238439

314360

160457

201070

70543

221500

182314

207410

100432

245120

183187

Anaacutelise de Variacircncia por postos de Kruskal-Wallis

P lt 005 H gt 599

A1=A2=A3 B1=B2=B3

Teste de Mann-Whitney

Plt005

A1 =A2 A1=A3 A2gtA3

B1=B2 B1=B3 B2=B3

A1=B1 A2gtB2 A3=B3

SltA1 A2 A3 B1 B2 e B3

21

CPK

6000 6000

5000 5000

3UL 4000

000

4000

3000

2000 2000

1000 1000

0 0Simulado A1 A2 A3 B1 B2 B3

GRUPOS

Graacutefico 1 ndash Representaccedilatildeo graacutefica da meacutedia e desvio-padratildeo das medidas dos niacuteveis seacutericos de CPK (UL-1) nos

animais dos grupos S (sem isquemia e reperfusatildeo) A (isquemia de seis horas e reperfusatildeo de

quatro horas) e B (isquemia de seis horas e reperfusatildeo de vinte e quatro horas) nos tempos 1 (sem

PTX) 2 (PTX no iniacutecio da isquemia) e 3 ( PTX no iniacutecio da isquemia e da reperfusatildeo)

22

Tabela 2 ndash Meacutedia e desvio-padratildeo das medidas dos niacuteveis seacutericos de ureacuteia (mgdL-1) nos

animais dos grupos S (sem isquemia e reperfusatildeo) A (isquemia de seis horas e

reperfusatildeo de quatro horas) e B (isquemia de seis horas e reperfusatildeo de vinte e

quatro horas) nos tempos 1 (sem PTX) 2 (PTX no iniacutecio da isquemia) e 3 (

PTX no iniacutecio da isquemia e da reperfusatildeo)

Grupo S

Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

Meacutedia

DP

5323

468

6530

2225

6840

2019

5710

934

5556

1323

6230

1972

9050

3096


P lt 005 H gt 599

A1=A2=A3 B1ltB2ltB3


Plt005

A1=A2 A1=A3 A2=A3

B1=B2 B1lt B3 B2ltB3

A1=B1 A2=B2 A3ltB3

S=A1 A3 B1 e B2 SltA2 e B3

23

UREacuteIA

140 140

120 120

100 100

80 80mgdL

60 6040 40

20 20

0 0

A1 A2 A3 B1 B2 B3Simulado

GRUPOS

Graacutefico 2 ndash Representaccedilatildeo graacutefica da meacutedia e desvio-padratildeo das medidas dos niacuteveis seacutericos de ureacuteia (mgdL-1)

nos animais dos grupos S (sem isquemia e reperfusatildeo) A (isquemia de seis horas e reperfusatildeo de



24

Tabela 3 ndash Meacutedia e desvio-padratildeo das medidas dos niacuteveis seacutericos de creatinina (mgdL-1) nos



quatro horas) nos tempos 1 (sem PTX) 2 (PTX no iniacutecio da isquemia) e 3 ( PTX


Grupo S

Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

Meacutedia

DP

073

014

096

042

106

019

079

009

122

025

097

043

228

054


P lt 005 H gt 599

A1ltA2gtA3 B1gtB2ltB3


Plt005

A1=A2 A1=A3 A2ltA3

B1gtB2 B1ltB3 B2ltB3

A1=B1 A2=B2 A3ltB3

S=A1 A2 e B2 SltA2 B1 e B3

25

CREATININA

3 3

25 25

2

15

2mgdLL

15

1 1

05 05

0 0

Simulado A1 A2 A3 B1 B2 B3

GRUPOS

Graacutefico 3 ndash Representaccedilatildeo graacutefica da meacutedia e desvio-padratildeo das medidas dos niacuteveis seacutericos de creatinina

(mgdL-1) nos animais dos grupos S (sem isquemia e reperfusatildeo) A (isquemia de seis horas e

reperfusatildeo de quatro horas) e B (isquemia de seis horas e reperfusatildeo de vinte e quatro horas) nos

tempos 1 (sem PTX) 2 (PTX no iniacutecio da isquemia) e 3 ( PTX no iniacutecio da isquemia e da

reperfusatildeo)

26

Tabela 4 ndash Meacutedia e desvio-padratildeo das medidas dos niacuteveis seacutericos de soacutedio (mmoldL-1) nos





Grupo S

Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

Meacutedia

DP

14117

223

15160

700

14760

590

15000

420

15400

230

15520

660

16000

323


P lt 005 H gt 599

A1=A2=A3 B1ltB2ltB3


plt 005

A1=A2 A1=A3 A2=A3

B1=B2 B1ltB3 B2=B3

A1=B1 A2ltB2 A3ltB3

SltA1 A2 A3 B1 B2 E B3

27

SOacuteDIO

170170

160160

150

140mmolL150

140

130130

120120

110110

100100A1 A2 A3 B1 B2 B3Simulado

GRUPOS

Graacutefico 4 ndash Representaccedilatildeo graacutefica ndash Meacutedia e desvio-padratildeo das medidas dos niacuteveis seacutericos de potaacutessio

(mmoldL-1) nos animais dos grupos S (sem isquemia e reperfusatildeo) A (isquemia de seis horas e



reperfusatildeo)

28

Tabela 5 ndash Meacutedia e desvio-padratildeo das medidas dos niacuteveis seacutericos de potaacutessio (mmoldL-1) nos





Grupo S

Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

Meacutedia

DP

508

066

101

205

122

338

60

077

87

380

103

512

160

366


P lt 005 H gt 599

A1ltA2gtA3 B1ltB2ltB3


Plt005

A1=A2 A1gtA3 A2gtA3

B1=B2 B1ltB3 B2ltB3

A1=B1 A2=B2 A3ltB3


29

POTAacuteSSIO

20 20

15 15

10mmolLL

10

5 5

0 0A1 A2 A3 B1 B2 B3Simulado

GRUPOS

Graacutefico 5 ndash Representaccedilatildeo graacutefica da Meacutedia e desvio-padratildeo das medidas dos niacuteveis seacutericos de potaacutessio




reperfusatildeo)

30

Tabela 6 ndash Meacutedia e desvio-padratildeo da somatoacuteria dos escores [ausente (0) leve (1) moderado

(2) e acentuado (3)] calculados em dez campos por lacircmina do paracircmetro

histoloacutegico de espessamento do mesacircngio dos rins dos animais dos grupos A

(isquemia de seis horas e reperfusatildeo de quatro horas) e B (isquemia de seis horas e

reperfusatildeo de vinte e quatro horas) nos tempos 1 (sem PTX) 2 (PTX no iniacutecio da

isquemia) e 3 ( PTX no iniacutecio da isquemia e da reperfusatildeo)

Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

Meacutedia

DP

074

007

064

021

088

007

059

007

085

033

097

042


P lt 005 H gt 599

A1=A2=A3 B1ltB2ltB3


plt005

A1=A2 A1=A3 A2ltA3

B1ltB2 B1ltB3 B2=B3

A1gtB1 A2=B2 B3=B3

31

ESPESSAMENTO DO MESAcircNGIO

12 12

1 1

08 08

06 06

04 04

02 02

0 0 A1 A2 A3 B2 B3B1

GRUPOS

Graacutefico 6 ndash Representaccedilatildeo graacutefica da meacutedia e desvio-padratildeo da somatoacuteria dos escores [ausente (0) leve (1)

moderado (2) e acentuado (3)] calculados em dez campos por lacircmina do paracircmetro histoloacutegico de

espessamento do mesacircngio dos rins dos animais dos grupos A (isquemia de seis horas e reperfusatildeo

de quatro horas) e B (isquemia de seis horas e reperfusatildeo de vinte e quatro horas) nos tempos 1

(sem PTX) 2 (PTX no iniacutecio da isquemia) e 3 ( PTX no iniacutecio da isquemia e da reperfusatildeo)

32

Tabela 7 ndash Meacutedia e desvio-padratildeo da somatoacuteria dos valores absolutos encontrados em dez

campos por lacircmina do paracircmetro histoloacutegico de tuacutebulos renal comprometido dos

rins dos animais dos grupos A (isquemia de seis horas e reperfusatildeo de quatro

horas) e B (isquemia de seis horas e reperfusatildeo de vinte e quatro horas) nos

tempos 1 (sem PTX) 2 (PTX no iniacutecio da isquemia) e 3 ( PTX no iniacutecio da


Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

Meacutedia

DP

084

014

115

007

120

021

103

049

070

014

087

007


P lt 005 H gt 599

A1=A2=A3 B1 gtB2ltB3


plt005

A1=A2 A1=A3 A2=A3

B1gtB2 B1=B3 B2=B3

A1=B1 A2gtB2 A3=B3

33

NUacuteMERO DE TUacuteBULOS COM SEDIMENTO EOU NECROSE

16 1614 1412 12

1 1

08 0806 0604 0402 02

0 0 A1 A2 A3 B1 B2 B3

GRUPOS

Graacutefico 7 ndash Representaccedilatildeo graacutefica da Meacutedia e desvio-padratildeo da somatoacuteria dos valores absolutos encontrados em

dez campos por lacircmina do paracircmetro histoloacutegico de tuacutebulos renal comprometido dos rins dos

animais dos grupos A (isquemia de seis horas e reperfusatildeo de quatro horas) e B (isquemia de seis

horas e reperfusatildeo de vinte e quatro horas) nos tempos 1 (sem PTX) 2 (PTX no iniacutecio da isquemia)


34

Tabela 8 ndash Meacutedia e desvio-padratildeo do porcentual da expressatildeo da caspase 3 (apoptose)

encontrados em dez campos por lacircmina na preparaccedilatildeo por imunohistoquiacutemica do

glomeacuterulos renais dos animais dos grupos S (sem isquemia e reperfusatildeo) A




Grupo S

Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

MD

DP

98

198

1186

240

1416

455

1038

154

1419

372

1635

165

1557

254


P lt 005 H gt 599

A1ltA2gtA3 B1=B2=B3


plt005

A1=A2 A1=A3 A2gtA3

B1=B2 B1=B3 B2=B3

A1=B1 A2=B2 A3ltB3


35

EXPRESSAtildeO DA CASPASE-3

02468

101214161820

02468101214161820


CASPASE-3

Graacutefico 8 ndash Representaccedilatildeo graacutefica da meacutedia e desvio-padratildeo do porcentual da expressatildeo da caspase 3 (apoptose) encontrados em dez campos por lacircmina na preparaccedilatildeo por imunohistoquiacutemica dos glomeacuterulos renais dos animais dos grupos S (sem isquemia e reperfusatildeo) A (isquemia de seis horas e reperfusatildeo de quatro horas) e B (isquemia de seis horas e reperfusatildeo de vinte e quatro horas) nos tempos 1 (sem PTX) 2 (PTX no iniacutecio da isquemia) e 3 ( PTX no iniacutecio da isquemia e da reperfusatildeo)

36

Figura 10 - Fotomicrografia caracteriacutestica de um glomeacuterulo normal portanto com grau de lesatildeo ausente

(0) onde se notam o mesacircngio sem edema o espaccedilo mesangial conservado (setas) e as ceacutelulas de caracteriacutesticas normais preservadas (HE ndash 400x)

Figura 11 - Fotomicrografia de um glomeacuterulo com lesatildeo caracteriacutestica de grau leve (1) onde se nota o

espessamento do mesacircngio com diminuiccedilatildeo do espaccedilo mesangial (seta amarela) edema discreto e ceacutelulas de caracteriacutesticas intumescidas (seta laranja) (HE ndash 400x)

37

Figura 12 - Fotomicrografia de um glomeacuterulo com lesatildeo caracteriacutestica de grau moderado (2) onde se nota

o espessamento mais acentuado do mesacircngio (seta amarela) edema discreto e ceacutelulas de caracteriacutesticas mais intumescidas (seta laranja) (HE ndash 400x)

Figura 13 - Fotomicrografia de um glomeacuterulo com lesatildeo caracteriacutestica de grau acentuado (3) onde se nota

o espessamento quase total do mesacircngio (seta amarela) edema das estruturas vizinhas e ceacutelulas muito intumescidas (seta laranja) (HE ndash 400x)

38

Figura 14 - Fotomicrografia de um tuacutebulo renal de um animal do grupo simulado onde se podem notar

as caracteriacutesticas normais do tuacutebulo (HE ndash 400x)

Figura 15 - Fotomicrografia de um tuacutebulo renal de um animal com intenso sofrimento mostrando a

necrose tubular (seta amarela) e presenccedila de sedimentos na luz tubular (seta laranja) (HE ndash 400x)

5 DISCUSSAtildeO

O tecido muscular esqueleacutetico representa cerca de 40 do peso corporal do indiviacuteduo

e as lesotildees isquecircmicas deste tecido podem acarretar importantes alteraccedilotildees locais e

sistecircmicas2-8 O restabelecimento do fluxo sanguumliacuteneo necessaacuterio para a reversatildeo do processo

de isquemia paradoxalmente agrava estas lesotildees57 A reintroduccedilatildeo de sangue oxigenado aos

tecidos isquecircmicos pode desencadear lesotildees teciduais locais e agrave distacircncia mais intensas que as

provocadas pela proacutepria isquemia5-8 Os membros inferiores onde se concentra grande parte

da massa muscular estatildeo frequumlentemente sujeitos agrave quadros relevantes de isquemia tecidual

devidos ao trauma agraves doenccedilas vasculares agudas e aos procedimentos operatoacuterios21113-15

Diante de um quadro isquecircmico dos membros inferiores a prioridade eacute restabelecer o fluxo

sanguiacuteneo1113 A extensatildeo e gravidade das alteraccedilotildees morfoloacutegicas e funcionais teciduais

dependem fundamentalmente do periacuteodo de oclusatildeo do fluxo sanguumliacuteneo57111315

Modelos em animais de experimentaccedilatildeo tentam reproduzir as condiccedilotildees de isquemia

encontradas em seres humanos e com isso proporcionar um melhor entendimento da

fisiopatologia da doenccedila e das suas alternativas de tratamento2311-18

Um dos animais mais frequumlentemente citado na literatura em modelos de isquemia e

reperfusatildeo inclusive em membros inferiores eacute o rato48 Tem a vantagem de faacutecil obtenccedilatildeo e

manipulaccedilatildeo com custos baixos Nesta pesquisa em particular a facilidade de manutenccedilatildeo

em ambiente controlado propiciou a elaboraccedilatildeo de uma amostra homogecircnea de ratos machos

com idade e peso similares

Os diferentes modelos de isquemia muscular procuram simular as condiccedilotildees existentes

na praacutetica meacutedica e cada um tem princiacutepios racionais para investigar situaccedilotildees especiacuteficas743-

45

Um modelo de isquemia de muacutesculo esqueleacutetico realiza a secccedilatildeo circunferencial da

pele tela subcutacircnea e musculatura da coxa ao redor da articulaccedilatildeo do quadril preservando-

se o osso nervo arteacuteria e veia femorais A isquemia eacute produzida pela oclusatildeo sob lupa da

arteacuteria femoral Justifica-se o modelo como ideal para eliminar toda a circulaccedilatildeo colateral

poreacutem eacute mais traumaacutetico e exige uso de microscoacutepio ciruacutergico para sua execuccedilatildeo743

40

Um outro modelo utiliza um torniquete elaacutestico aplicado externamente na raiz da coxa

do animal que compromete a irrigaccedilatildeo arterial e drenagem venosa simultaneamente

Argumenta-se que este modelo estaria privilegiando tambeacutem a lesatildeo vascular pelo trauma da

aplicaccedilatildeo do torniquete e impedindo a resposta vasomotora e venosa durante a reperfusatildeo

Argumentam os adeptos deste procedimento que seria o mais adequado para simular um

trauma compressivo ou o procedimento operatoacuterio de garroteamento usado em operaccedilotildees

ortopeacutedicas1316444950

Por outro lado haacute um modelo que preconiza a obstruccedilatildeo da arteacuteria iliacuteaca comum

unilateral sendo considerado mais apropriado para simular uma embolia arterial uma vez que

compromete somente a irrigaccedilatildeo arterial deixando livre a drenagem venosa A consideraccedilatildeo

teoacuterica relevante estaacute no fato de que a circulaccedilatildeo colateral ficaraacute disponiacutevel para suprir o

territoacuterio isquecircmico o que tambeacutem ocorre no caso da embolia arterial45

Deste modo entre os diversos modelos optou-se pela obstruccedilatildeo isolada da arteacuteria

iliacuteaca comum por atender aos objetivos de tentar simular a ocorrecircncia de isquemia resultante

de obstruccedilotildees arteriais agudas que ocorrem com frequumlecircncia na praacutetica meacutedica 211-15 Os testes

do projeto piloto mostraram que o edema e cianose apresentada pela pata do animal apoacutes a

obstruccedilatildeo arterial foi um paracircmetro confiaacutevel para comprovar a isquemia do membro inferior

O procedimento anesteacutesico padronizado pelo Programa de Poacutes-graduaccedilatildeo em

experimentos envolvendo ratos preconiza o uso intraperitoneal da associaccedilatildeo de quetamina e

xilazina e que foi suficiente para manter os animais em plano anesteacutesico durante todos os

procedimentos operatoacuterios Nos periacuteodos entre a realizaccedilatildeo da isquemia e da reperfusatildeo a

analgesia proporcionada pela nalbufina foi adequada pois os animais se locomoveram

espontaneamente e natildeo apresentaram sinais objetivos de sofrimento observado pela procura

de aacutegua e alimento

O muacutesculo esqueleacutetico tem se mostrado nos diversos modelos experimentais

resistente agraves lesotildees isquecircmicas 1316-18 A literatura constata que o muacutesculo esqueleacutetico resiste

agrave isquemia por periacuteodos de ateacute quatro horas apesar de discretas repercussotildees locais e

sistecircmicas Considerando que a lesatildeo eacute tempo dependente18 e que a maioria dos modelos

utiliza isquemia de quatro horas neste modelo procurou-se ampliar o periacuteodo de oclusatildeo

arterial para seis horas e assim produzir lesotildees mais graves que pudessem ser bem

caracterizadas e que permitissem avaliar um eventual efeito sistecircmico do fenocircmeno de

isquemia e reperfusatildeo e tambeacutem a eventual accedilatildeo terapecircutica de drogas

41

As avaliaccedilotildees das lesotildees satildeo referidas com maior frequumlecircncia pela literatura apoacutes um

periacuteodo de reperfusatildeo de quatro e vinte e quatro horas Assim puderam-se caracterizar as

alteraccedilotildees tidas como precoces (quatro horas) e tardias (vinte e quatro horas) Periacuteodos

anteriores a quatro horas trazem resultados irrelevantes e periacuteodos posteriores a vinte e quatro

horas os resultados haacute uma tendecircncia agrave diminuiccedilatildeo das lesotildees15-1845

Para caracterizar a lesatildeo muscular foi avaliado o niacutevel seacuterico de creatinofosfoquinase

(CPK) que expressa a liberaccedilatildeo desta enzima intracelular abundante em muacutesculo esqueleacutetico

na corrente sanguumliacutenea e representa uma medida indireta de sofrimento e morte celular por

necrose111314

As lesotildees provocadas pela isquemia e reperfusatildeo em muacutesculo esqueleacutetico e

parecircnquima renal foram avaliadas pela microscopia oacuteptica em coloraccedilatildeo pela hematoxilina e

eosina agrave partir de elementos simples confiaacuteveis e representativos de sofrimento tecidual

Estabeleceu-se um grupo de paracircmetros histoloacutegicos relacionados com os fenocircmenos de

resposta inflamatoacuteria que foram expressos de modo semiquantitativo a partir de um quadro

de escores (ausente leve moderado acentuado) e examinados em nuacutemero de campos

estatisticamente representativos para cada animal O histologista que realizou a leitura das

lacircminas natildeo teve conhecimento preacutevio dos grupos a que elas pertenciam

A ocorrecircncia mais precoce apoacutes a obstruccedilatildeo arterial eacute representada pelo edema

intersticial O extravasamento de liacutequido intravascular para o interstiacutecio eacute ocasionado por

alteraccedilotildees biofiacutesicas e posteriormente bioquiacutemicas que resultam em acuacutemulo de liacutequidos

entre as fibras musculares levando agrave dissociaccedilatildeo destas fibras No muacutesculo esqueleacutetico quanto

maior o edema maior a dissociaccedilatildeo das fibras havendo uma relaccedilatildeo temporal quanto maior

o periacuteodo de isquemia maior o edema No parecircnquima renal a accedilatildeo de substacircncias

nefrotoacutexicas tambeacutem pode ocasionar o edema e com isto levar agrave diminuiccedilatildeo do espaccedilo

mesangial revelando um comprometimento progressivo que foi caracterizado pela expansatildeo

entre o espaccedilo mesangial e os capilares adjacentes no glomeacuterulo21

Outro paracircmetro morfoloacutegico que pocircde ser investigado foi a expressatildeo da apoptose

que eacute o ponto final de uma cascata dependente de energia de eventos moleculares

desencadeadas por certos estiacutemulos e consiste em quatro componentes distinguiacuteveis mas

superpostos vias sinalizadoras (que desencadeiam a apoptose) controle e integraccedilatildeo

(moleacuteculas reguladoras que inibem estimulam ou antecipam a apoptose e assim determinam

o prognoacutestico) fase de execuccedilatildeo comum (onde estatildeo envolvidas as proteases do grupo das

42

caspases) e remoccedilatildeo das ceacutelulas mortas A remoccedilatildeo das ceacutelulas mortas se faz por fagocitose

de modo eficiente sem deixar vestiacutegios e praticamente natildeo haacute inflamaccedilatildeo5-10 A expressatildeo da

caspase 3 pode ser utilizada como um marcador de apoptose Efetuadores pertencentes agrave

famiacutelia das proteases as caspases satildeo proteases cisteiacutenas ativadas por fatores liberados pela

mitococircndria no processo de desencadeamento de morte celular e podem ser identificadas por

processo imuno-histoquiacutemico5-104546

No periacuteodo de isquemia os desencadeadores da cascata bioquiacutemica da apoptose satildeo as

espeacutecies reativas de oxigecircnio que agravam o quadro de lesatildeo celular na reperfusatildeo dos

tecidos O oxigecircnio eacute o elemento essencial na reaccedilatildeo de oxidaccedilatildeo para a produccedilatildeo de energia

no organismo armazenado em uacuteltima instacircncia nos complexos de adenosina trifosfato (ATP)

Estas reaccedilotildees de oxidaccedilatildeo a partir de substratos oxidaacuteveis em especial a glicose satildeo

realizadas em sua maior parte nas mitococircndrias e dependem de uma inter-relaccedilatildeo de

substratos enzimas vitaminas eletroacutelitos e aacutegua5-10

A xantina desidrogenase eacute uma das enzimas responsaacuteveis pelo mecanismo de

fornecimento de um eleacutetron altamente energeacutetico para a nicotinamida adenina difostato (ADP)

que sendo receptora deste eleacutetron se transforma no ATP armazenando a energia de modo

estaacutevel e transportaacutevel dentro da proacutepria ceacutelula ou para outros tecidos e oacutergatildeos A supressatildeo

do oxigecircnio determina a conversatildeo da xantina desidrogenase (XD) em xantina oxigenase

(XO)91044455152 Esta enzima utiliza o oxigecircnio como receptor de eleacutetrons numa ligaccedilatildeo

instaacutevel e altamente energeacutetica formando os conhecidos radicais livres de oxigecircnio (RLO) ou

espeacutecies reativas de oxigecircnio (EROs) como o superoacutexidos (O2-) e peroacutexido de hidrogecircnio

(H2O2-) 91044455152 Os radicais livres de oxigecircnio determinam a destruiccedilatildeo das camadas

lipoproteacuteicas das membranas celulares do nuacutecleo mitococircndrias e do citossol levando a morte

celular imediata por necrose ou desencadeando processos bioquiacutemicos que apoacutes um

determinado tempo levaraacute agrave morte celular por apoptose5-10

Partindo do princiacutepio teoacuterico de que estas substacircncias possam cair na corrente

sanguumliacutenea e agir agrave distacircncia em outros tecidos ou oacutergatildeos susceptiacuteveis foi tambeacutem avaliada a

expressatildeo da caspase-3 nos rins esquerdos dos animais do experimento

Tecircm-se buscado formas de abolir ou minimizar os efeitos destas espeacutecies reativas de

oxigecircnio ou radicais livres51315204445 Para isto usa-se substacircncias inibidoras da formaccedilatildeo dos

radicais livres conhecidas como antioxidantes (vitamina E20395354 a deferoxamina55 a

estreptoquinase56 o alopurinol56 os sais de magneacutesio57 os aminoesteroacuteides57 os quelantes do

43

ferro55 e os antiinflamatoacuterios natildeo esteroacuteides58) substacircncias varredoras destas substacircncias

(scavengers)545505960 processos de preacute-condicionamento fiacutesico ou quiacutemico onde supressotildees

parciais e progressivas de oxigenaccedilatildeo antecedem uma supressatildeo sustentada mais

prolongada5184350 Cada uma destas proposiccedilotildees tem mostrado vantagens e desvantagens na

dependecircncia dos modelos para a provocaccedilatildeo de isquemiareperfusatildeo nas doses das

substacircncias utilizadas nos periacuteodos em que satildeo empregadas nos paracircmetros que satildeo usados

para avaliaccedilatildeo dos resultados entre outras variaacuteveis2-10

A procura de uma droga que possa atuar reduzindo a liberaccedilatildeo das espeacutecies reativas de

oxigecircnio bem como limitar a resposta inflamatoacuteria mediada por neutroacutefilos e a liberaccedilatildeo do

fator de necrose tumoral constitui uma opccedilatildeo vaacutelida para o controle das lesotildees de isquemia e

reperfusatildeo em muacutesculo esqueleacutetico e tecido renal 44455152

A pentoxifilina (PTX) eacute uma metilxantina estudada na proteccedilatildeo na insuficiecircncia renal

aguda (IRA) induzida pelo glicerol29-31 O mecanismo primaacuterio da accedilatildeo protetora das

metilxantinas eacute atribuiacuteda agrave accedilatildeo antagonista do receptor da adenosina que eacute um potente

vasoconstritor6163 Outra substacircncia vasoconstritora onde as metilxantinas tecircm accedilatildeo inibitoacuteria

eacute a endotelina que estaacute presente nas lesotildees musculares2359 o que pode atuar diminuindo as

lesotildees causadas pela isquemia e reperfusatildeo musculares embora outras accedilotildees tecircm sido

consideradas A pentoxifilina com suas propriedades hemorreoloacutegicas melhorando a

microcirculaccedilatildeo eacute estudada na prevenccedilatildeo e tratamento de doenccedilas isquecircmicas crocircnicas e

utilizada em estudos na insuficiecircncia renal aguda induzida experimentalmente24-28 Ela exerce

efeitos beneacuteficos atraveacutes de vaacuterios mecanismos tais como a reduccedilatildeo na produccedilatildeo de citocinas

e superoacutexidos alteraccedilatildeo na quimiotaxia de neutroacutefilos diminuiccedilatildeo na ativaccedilatildeo e adesividade

plaquetaacuteria aumento da flexibilidade das hemaacutecias podendo atenuar a lesatildeo endotelial e

tecidual no fenocircmeno da isquemia e reperfusatildeo32-42 Haacute estudos sugerindo a parada da

progressatildeo da lesatildeo renal no choque seacuteptico27 e a melhora do fluxo sanguumliacuteneo renal durante a

bacteremia devido agrave vasodilataccedilatildeo poacutes-glomerular28

Levando em conta estes embasamentos teoacutericos propocircs-se a utilizaccedilatildeo da pentoxifilina

para testar sua atuaccedilatildeo em isquemia e reperfusatildeo de muacutesculo esqueleacutetico e na sua repercussatildeo

agrave distacircncia sobre o parecircnquima renal

A anaacutelise e a interpretaccedilatildeo dos resultados permitiram algumas conclusotildees e suposiccedilotildees

relevantes para o entendimento dos fenocircmenos envolvidos neste modelo experimental

44

O grupo simulado mostrou que o trauma anesteacutesico e operatoacuterio natildeo trouxe influecircncias

significativas sobre o tecido muscular e pode ser utilizado como ponto de comparaccedilatildeo com os

outros dois grupos de estudo Consideraram-se os achados obtidos como padratildeo de

normalidade Os niacuteveis seacutericos de CPK no grupo simulado ficaram muito abaixo dos animais

que foram submetidos agrave isquemia e semelhantes aos niacuteveis de normalidade para a

espeacutecie486465 Por outro lado a avaliaccedilatildeo histoloacutegica pela coloraccedilatildeo em hematoxilina e eosina

do tecido renal natildeo evidenciou lesatildeo glomerular ou de tuacutebulos renais

Em estudo paralelo a este em muacutesculo soacuteleo de ratos45 foi significativa a ausecircncia de

alteraccedilotildees morfoloacutegicas tiacutepicas da necrose tecidual muscular Nos animais submetidos a seis

horas de isquemia natildeo foram evidenciadas reaccedilotildees necroacuteticas agraves quatro horas ou vinte e

quatro horas apoacutes a perfusatildeo tecidual O fato pode demonstrar a resistecircncia do tecido

muscular agrave agressatildeo isquecircmica mas deve estar associada tambeacutem a capacidade ou

peculiaridade da circulaccedilatildeo arterial colateral dos membros posteriores dos ratos e o natildeo

comprometimento do retorno venoso

Alguns trabalhos referidos na literatura usando o mesmo tempo de obstruccedilatildeo arterial

em ratos tambeacutem natildeo lograram identificar aacutereas de necrose de fibras musculares131552

embora tenham ocorrido outras alteraccedilotildees morfoloacutegicas e aumento da creatinofosfoquinase

(CPK) paracircmetro indireto de necrose6465

Na fase precoce de observaccedilatildeo (quatro horas de isquemia) a meacutedia da dosagem seacuterica

da CPK teve uma reduccedilatildeo significante quando aplicada no iniacutecio da isquemia e no iniacutecio da

reperfusatildeo (A3=201070plusmn70543) em relaccedilatildeo ao grupo que a recebeu apenas no iniacutecio da

reperfusatildeo (A2= 314360plusmn160457) e principalmente ao grupo que natildeo recebeu a PTX

(A1=333230plusmn238439) Todos os grupos tiveram valores meacutedios superiores aos valores

meacutedios do grupo simulado (S=75100plusmn13079)

Na fase tardia de observaccedilatildeo (vinte e quatro horas) a meacutedia da dosagem seacuterica da CPK

natildeo teve uma reduccedilatildeo significante quando a droga foi aplicada no iniacutecio da isquemia e no

iniacutecio da reperfusatildeo (B3=245120plusmn183187) em relaccedilatildeo ao grupo que a recebeu apenas no

iniacutecio da reperfusatildeo (B2= 207410plusmn100432) Tambeacutem natildeo teve diferenccedila com o grupo que

natildeo recebeu a droga (B1=221500plusmn182314) Todos os grupos tiveram valores meacutedios

superiores aos valores meacutedios do grupo simulado (S=75100plusmn13079)

Apesar da grande variabilidade dos valores maacuteximos e miacutenimos das dosagens seacutericas

da CPK traduzido pela grande variaccedilatildeo do desvio-padratildeo pocircde-se notar que a isquemia e

45

reperfusatildeo causam alteraccedilotildees consideraacuteveis quando se compara com o grupo simulado e

considerado como padratildeo de normalidade Tambeacutem se pocircde inferir que a PTX tem uma accedilatildeo

favoraacutevel sobre a necrose celular muscular somente na fase precoce e quando aplicada no

iniacutecio da isquemia e no iniacutecio da reperfusatildeo Na fase tardia os niacuteveis de CPK natildeo mostraram

diferenccedilas significantes

A necrose muscular eacute referida na literatura como um achado raro do ponto de vista

morfoloacutegico12-1843-45 e somente detectaacutevel pela dosagem enzimaacutetica da CPK6465 A

interpretaccedilatildeo razoaacutevel para estes achados deve estar na capacidade alta que tem o muacutesculo

esqueleacutetico em resistir agrave agressatildeo pela isquemia mostrando que as alteraccedilotildees enzimaacuteticas de

CPK apoacutes uma elevaccedilatildeo inicial se mantecircm por periacuteodo prolongado e com tendecircncia de queda

com o passar do tempo Assim o efeito protetor da PTX soacute pode ser detectado na fase precoce

quando a accedilatildeo da droga pode ter alguma influecircncia nos mecanismos envolvidos na morte

celular por necrose Outros meacutetodos mais sensiacuteveis de dosagem da CPK ou aumento do

nuacutemero de animais na amostra talvez possam tornar esta tendecircncia mais evidente

O modelo de isquemia e reperfusatildeo mostrou-se eficaz em produzir alteraccedilotildees

morfoloacutegicas em muacutesculo esqueleacutetico traduzido pelas alteraccedilotildees morfoloacutegicas e de niacuteveis

seacutericos de CPK Deste modo eacute racional a hipoacutetese que substacircncias liberadas na circulaccedilatildeo

sanguumliacutenea possam afetar tecido ou oacutergatildeos agrave distacircncia em particular o parecircnquima renal em

suas estruturas mais nobres como o neacutefron e tuacutebulos renais

Uma tentativa de avaliar a funccedilatildeo renal neste modelo foi por meio das dosagens da

ureacuteia e da creatinina O clearance da inulina6667 eacute o meacutetodo mais confiaacutevel para avaliaccedilatildeo da

funccedilatildeo renal contudo a sua execuccedilatildeo poderia em si agravar as lesotildees de isquemia e

reperfusatildeo que se pretendia estudar Considerando a complexidade da tarefa e por se tratar de

um trabalho inicial de pesquisa optou-se pela avaliaccedilatildeo de paracircmetros mais viaacuteveis

A concentraccedilatildeo seacuterica de ureacuteia e creatinina satildeo dependentes de variaccedilatildeo da aacutegua

corporal Um aumento de suas concentraccedilotildees pode natildeo traduzir um aumento real mas sim um

aumento relativo de hemoconcentraccedilatildeo Uma diminuiccedilatildeo da concentraccedilatildeo seacuterica pode

tambeacutem traduzir uma hemodiluiccedilatildeo e natildeo uma diminuiccedilatildeo real

Assim na fase aguda (quatro horas) natildeo ocorreu alteraccedilatildeo significante da concentraccedilatildeo

de ureacuteia em nenhum dos grupos estudos Todos os animais apresentaram niacuteveis semelhantes

entre si (A1=6530plusmn2225 A2=6840plusmn2019 A3=5710plusmn934) e natildeo diferiram do grupo

simulado (S=5323plusmn468)

46

Na fase tardia (vinte e quatro horas) o grupo que recebeu a droga no iniacutecio da

isquemia e no iniacutecio da reperfusatildeo (B3=9050plusmn3096) teve um aumento significante em

relaccedilatildeo ao grupo que soacute recebeu a droga no iniacutecio da reperfusatildeo (B2=6230plusmn1972) ou do

grupo que natildeo recebeu a droga (B1=5556plusmn1323) e principalmente em relaccedilatildeo ao grupo


Pode-se interpretar que na fase precoce a movimentaccedilatildeo de aacutegua corporal e a funccedilatildeo

renal estiveram estaacuteveis contudo na fase tardia pode ter ocorrido uma perda de aacutegua corporal

ou deterioraccedilatildeo da funccedilatildeo renal Como o grupo B3 apresentou a diferenccedila mais significativa

pode-se pensar que a dose dupla de PTX possa ter algum efeito deleteacuterio sobre a funccedilatildeo renal

Em funccedilatildeo da falta de especificidade da dosagem e natildeo ter-se controlado a variaccedilatildeo ponderal

do animal a interpretaccedilatildeo fica prejudicada mas fica o alerta para um controle mais efetivo

destes paracircmetros na sequumlecircncia desta linha de pesquisa

Os resultados da dosagem seacuterica da creatinina seguiu o mesmo perfil das medidas da

ureacuteia Na fase precoce natildeo houve alteraccedilotildees significantes e na fase tardia o grupo B3

(228plusmn054) mostrou elevaccedilatildeo destacada em relaccedilatildeo aos demais grupos (B1=122plusmn025

B2=097plusmn043) e principalmente ao grupo simulado (S=073plusmn014) Como a creatinina eacute um

paracircmetro mais sensiacutevel de alteraccedilatildeo de funccedilatildeo renal e menos susceptiacutevel agraves variaccedilotildees de

aacutegua corporal pode-se considerar com mais ecircnfase a possiacutevel accedilatildeo deleteacuteria da dose dupla da

PTX

A dosagem de eletroacutelitos como o soacutedio e o potaacutessio classicamente associados agrave

funccedilatildeo renal e ao equiliacutebrio hidro-eletroliacutetico tambeacutem foi utilizado na tentativa de estabelecer

uma eventual relaccedilatildeo entre a funccedilatildeo renal e suas variaccedilotildees seacutericas

Na fase precoce a dosagem de soacutedio quer com aplicaccedilatildeo da PTX somente em um

periacuteodo ou em dois periacuteodos natildeo houve alteraccedilatildeo significante entre os grupos

(A1=15160plusmn70 A2=14769plusmn60 A2=15000plusmn420) e todos semelhantes ao grupo simulado

(14117plusmn223) No entanto na fase tardia o grupo que recebeu a droga nos dois periacuteodos

(B3=16000plusmn323) teve um aumento significativo em relaccedilatildeo ao grupo que recebeu somente

uma dose de PTX (B2=15520plusmn660) ou natildeo recebeu dose alguma (B1=15400plusmn230) e

tambeacutem significante em relaccedilatildeo ao controle (S=14117plusmn223)

A dosagem seacuterica do potaacutessio na fase tardia mostrou tambeacutem um aumento

significativo nos animais do grupo B3 (160plusmn366) em relaccedilatildeo aos dos grupos B1 (87plusmn38) e

B2 (103plusmn512) e superior significativamente em relaccedilatildeo ao grupo controle (S=508plusmn066) Na

47

fase precoce o grupo A3 (60plusmn077) foi significantemente menor que os animais dos grupos

A1 (101plusmn205) e A2 (122plusmn338) e semelhante ao grupo simulado (S=508plusmn066)

O potaacutessio eacute um iacuteon fundamental na funccedilatildeo contraacutetil do miocaacuterdio Nas lesotildees

musculares extensas por traumas diretos sobre grandes grupos musculares (soterramentos e

traumatismos por acidentes automobiliacutesticos) como as que ocorreram nos terremotos onde os

sobreviventes imediatos de soterramentos evoluiacuteam para oacutebito por parada cardiacuteaca devido agrave

hiperpotassemia222368 e achados semelhantes foram encontrados em trabalhos com animal de

experimentaccedilatildeo22236869

Uma vez que natildeo houve controle da pressatildeo arterial meacutedia do hematoacutecrito da

variaccedilatildeo ponderal ou da diurese fica apenas a hipoacutetese de que a dose dupla de PTX possa ter

algum tipo de influecircncia desfavoraacutevel sobre a funccedilatildeo renal na fase tardia De qualquer modo eacute

um fato a ser considerado devido agrave coincidecircncia da variaccedilatildeo dos eletroacutelitos (soacutedio e potaacutessio)

com os paracircmetros anteriores de ureacuteia e creatinina Este efeito desfavoraacutevel pode estar

associado a outras variaacuteveis natildeo consideradas no estudo como a variaccedilatildeo hiacutedrica

No entanto na fase precoce a dose dupla de PTX (A3) mostrou efeitos favoraacuteveis

quando analisada sob o prisma das dosagens de ureacuteia creatinina e potaacutessio quando comparada

com os demais grupos do mesmo periacuteodo de quatro horas de observaccedilatildeo (A1 e A2) Mais uma

vez a consideraccedilatildeo da variaccedilatildeo da aacutegua corporal deve ser considerada pois nesta fase a

desidrataccedilatildeo do animal deve ter sido pouco importante

A avaliaccedilatildeo morfoloacutegica dos glomeacuterulos renais mostrou que a meacutedia dos escores de

comprometimento do mesacircngio na fase precoce para os animais do grupo A3 (088plusmn007) foi

significantemente maior que nos animais dos grupos A2 (064plusmn021) e A1 (074plusmn007) Deste

modo a PTX aplicada nos dois periacuteodos teve efeito desfavoraacutevel na fase precoce (quatro

horas) e tambeacutem na fase tardia (vinte e quatro horas) onde o grupo B3 (097plusmn042) foi

significantemente maior que os grupos B2 (085plusmn033) e B1 (059plusmn007) Como ocorreu com

os paracircmetros bioquiacutemicos tambeacutem ocorreu a associaccedilatildeo da dose dupla de PTX com um

maior comprometimento do parecircnquima renal

Quanto agrave lesatildeo tubular natildeo ocorreu diferenccedila significante entre os trecircs grupos na fase

precoce mas na fase tardia o grupo que natildeo recebeu a droga (B1=103plusmn049) teve uma

diferenccedila significativa com os grupos que receberam a droga na reperfusatildeo (B2=070plusmn014) e

na isquemia e reperfusatildeo (B3=087plusmn007) A PTX de ofereceu alguma proteccedilatildeo aos tuacutebulos

renais na fase tardia quer aplicada na reperfusatildeo ou na isquemia e reperfusatildeo

48

Pela avaliaccedilatildeo destes resultados morfoloacutegicos constata-se que a droga foi desfavoraacutevel

na fase tardia quando aplicada no iniacutecio da isquemia e iniacutecio da reperfusatildeo portanto em dose

dupla revelando uma possiacutevel accedilatildeo deleteacuteria sobre o glomeacuterulo renal No entanto parece ter

uma accedilatildeo favoraacutevel na proteccedilatildeo da necrose tubular aguda na fase tardia independente do

periacuteodo de aplicaccedilatildeo

Pode-se identificar a insuficiecircncia renal aguda nos processos de isquemia e reperfusatildeo

do tecido muscular diretamente pela accedilatildeo de endotoxinas pela accedilatildeo toacutexica da mioglobina

nefrotoxinas e outras causas onde ocorre a morte das ceacutelulas tubulares renais caracterizando a

necrose tubular aguda (NTA) Nesta forma de morte celular ocorre edema celular com perda

de integridade da membrana citoplasmaacutetica e atraveacutes da facilitaccedilatildeo de uma variedade de

mediadores inflamatoacuterios que podem levar a ruptura das ceacutelulas caracterizando o processo

de necrose57 A PTX mostrou um efeito favoraacutevel sobre os tuacutebulos renais provavelmente pela

sua capacidade de neutralizar a accedilatildeo das espeacutecies reativas de oxigecircnio provenientes da lesatildeo

muscular

A isquemia tecidual concorre para a produccedilatildeo de espeacutecies reativas de oxigecircnio que

agravam na reperfusatildeo tanto nos tecidos diretamente envolvidos como em tecidos agrave distacircncia

Essas moleacuteculas instaacuteveis ou fragmentos de moleacuteculas sem um par de eleacutetrons em suas oacuterbitas

exteriores atuam sobre os lipiacutedeos carboidratos proteiacutenas e aacutecidos nucleacuteicos sendo potentes

agentes oxidantes e causam graves lesotildees em moleacuteculas intra e extracelulares nas membranas

lipiacutedicas no aacutecido hialurocircnico e no aacutecido desoxirribonucleacuteico constituindo um dos princiacutepios

da lesatildeo celular podendo levar a morte celular8-10

Um dos grandes avanccedilos do entendimento das doenccedilas onde ocorre a morte celular

tem sido o reconhecimento da via de apoptose como forma de agressatildeo celular associado ou

natildeo ao processo de necrose8-10 Eacute provaacutevel que muitas caracteriacutesticas do processo de

sinalizaccedilatildeo celular para o processo de morte celular satildeo compartilhadas com a necrose e se o

processo de apoptose eacute grave pode tambeacutem evoluir para necrose8-10 A apoptose eacute

considerada um mecanismo regulador de suiciacutedio celular caracterizado pela segmentaccedilatildeo do

nuacutecleo que possuem marcadores especiacuteficos para este fenocircmeno8-10 O processo inicia-se

quando ocorrem modificaccedilotildees na permeabilidade mitocondrial permitindo o extravasamento

do citocromo C que juntamente com o fator indutor da apoptose (FIA) promovem a ativaccedilatildeo

da cascata das caspases8-10 Como a caspase-3 eacute considerada a efetuadora central dessa cascata

de eventos uma vez ativada torna o processo irreversiacutevel e a sua presenccedila confirma a

49

apoptose celular A utilizaccedilatildeo de anticorpos atraveacutes da imuno-histoquiacutemica representa um

meacutetodo especiacutefico para a marcaccedilatildeo da caspase-3 por imunocoloraccedilatildeo e que pocircde ser

quantificada pelo programa ImageLAB47

Na literatura haacute referecircncias de induccedilatildeo da apoptose expressa pela caspase-3 em rim

de animais de experimentaccedilatildeo pela aplicaccedilatildeo de substacircncias nefrotoacutexicas tais como a

cisplatina70 arsecircnico71 adriamicina72 Estes estudos avaliam a participaccedilatildeo da apoptose no

desencadeamento da insuficiecircncia renal aguda favorecendo um melhor entendimento da

fisiopatologia e tratamento desta siacutendrome principalmente pela accedilatildeo de espeacutecies reativas de

oxigecircnio e a utilizaccedilatildeo de drogas antioxidantes Estaacute descrita a importante participaccedilatildeo das

espeacutecies reativas de oxigecircnio3410-15 no comprometimento muscular e quando liberadas na

corrente sanguumliacutenea promovem lesotildees locais e em oacutergatildeos agrave distacircncia particularmente nos

rins21-2868

As metilxantinas tecircm sido utilizadas nos experimentos em que haacute a induccedilatildeo de

insuficiecircncia renal aguda mioglobinuacuterica sendo o modelo mais frequumlente o utilizado pela

injeccedilatildeo intramuscular de glicerol O efeito protetor das metilxantinas eacute atribuiacutedo agrave sua accedilatildeo

antagonista do receptor do adenosina e endotelina que por sua vez tem importante accedilatildeo

vasoconstritora nestas condiccedilotildees patoloacutegicas Poreacutem outros efeitos devem ser considerados

pois a PTX tem sido utilizado nas doenccedilas isquecircmicas crocircnicas e sua accedilatildeo antioxidante deve

ser considerada

A imuno-histoquiacutemica46 para caracterizar a apoptose pela expressatildeo da caspase-3 foi

o meacutetodo escolhido devido a possibilidade de sua identificaccedilatildeo nos glomeacuterulos renais onde a

accedilatildeo das substacircncias oriundas da isquemia muscular principalmente as espeacutecies reativas de

oxigecircnio podem desencadear lesotildees que levam agrave insuficiecircncia renal aguda

A apoptose em glomeacuterulos renais expressa pela imunocoloraccedilatildeo da caspase-3 nos

animais do grupo simulado (S=98plusmn198) mostrou-se significantemente inferior aos valores

dos animais do grupo da fase tardia poreacutem sem diferenccedila na fase precoce Tambeacutem na fase

precoce natildeo houve diferenccedila significante entre os animais que natildeo receberam a PTX

(A1=1186plusmn240) ou receberam nos dois periacuteodos (A3=1038plusmn154) Os animais que

receberam apenas na reperfusatildeo (A2 = 1416plusmn455) apresentaram valores superiores aos dois

outros grupos Na fase tardia os animais que natildeo receberam a PTX (B1=1419plusmn372) tiveram

valores semelhantes aos que receberam no periacuteodo de reperfusatildeo (B2=1635plusmn165) e ao grupo

50

que recebeu a PTX nos dois periacuteodos (B3=1557plusmn254) poreacutem todos com valores superiores

ao grupo simulado (S=98plusmn198)

A droga parece natildeo oferecer proteccedilatildeo ao processo de apoptose expressa pela caspase-

3 neste modelo experimental na fase precoce de ateacute quatro horas de reperfusatildeo Na fase tardia

de ateacute vinte e quatro horas de reperfusatildeo ocorreu um aumento da expressatildeo da caspase-3 em

relaccedilatildeo ao grupo controle poreacutem sem relaccedilatildeo de proteccedilatildeo com a aplicaccedilatildeo da pentoxifilina

em qualquer dos dois periacuteodos estudados

Apesar de a literatura biomeacutedica referir que a PTX melhora a perfusatildeo de muacutesculo

esqueleacutetico33-3840 protege contra as mudanccedilas morfoloacutegicas e funcionais dos rins submetidos

agrave insuficiecircncia renal aguda mioglobinuacuterica induzida pelo glicerol29-31 neste modelo conclui-

se que pode tambeacutem agravar as lesotildees renais causadas pela isquemia e reperfusatildeo de muacutesculo

esqueleacutetico na dependecircncia da dose usada e na dependecircncia de um maior tempo de

observaccedilatildeo

Consideraccedilotildees finais

O modelo de isquemia de muacutesculo esqueleacutetico realizado pela obstruccedilatildeo da arteacuteria

iliacuteaca comum por um periacuteodo de seis foi satisfatoacuterio para produzir lesatildeo do muacutesculo soacuteleo de

rato e que pocircde ser comprovada pelo aumento da creatinofosfoquinase seacuterica que eacute um

indicador bioquiacutemico de necrose celular

A lesatildeo muscular isquecircmica e o agravamento posterior causado pela reperfusatildeo e a

liberaccedilatildeo de espeacutecies reativas de oxigecircnio pode ser associada agrave lesatildeo do parecircnquima renal A

liberaccedilatildeo destas substacircncias na corrente sanguumliacutenea pode estar associada aos processos de lesatildeo

de tecidos agrave distacircncia susceptiacuteveis a elas A lesatildeo renal neste modelo pocircde ser avaliada de

modo indireto pelas alteraccedilotildees bioquiacutemicas das dosagens seacutericas da ureacuteia e creatinina bem

como pela dosagem seacuterica dos eletroacutelitos soacutedio e potaacutessio

Alteraccedilotildees morfoloacutegicas dos glomeacuterulos renais e dos tuacutebulos renais foram avaliaccedilotildees

objetivas de lesatildeo renal que puderam ser surpreendidas neste modelo

A pentoxifilina uma metilxantina com propriedades diversas na proteccedilatildeo a tecidos

isquecircmicos em particular pela sua accedilatildeo antioxidante que eacute tida na literatura como eficaz na

51

proteccedilatildeo de lesotildees do fenocircmeno de isquemia e reperfusatildeo muscular e renal mostrou um

comportamento variaacutevel dependente da fase de observaccedilatildeo e da dose usada

Observaccedilatildeo numa fase precoce de ateacute quatro horas de observaccedilatildeo permitiu analisando

os diversos paracircmetros enumerados acima verificar que a droga tem efeito favoraacutevel na

necrose celular quando aplicada no iniacutecio da isquemia e no iniacutecio da reperfusatildeo (Grupo A3)

assim como teve efeito favoraacutevel na expressatildeo da ureacuteia creatinina e potaacutessio

As observaccedilotildees numa fase tardia de ateacute vinte e quatro horas mostraram que os animais

de todos os subgrupos natildeo se beneficiaram com o uso da droga no tocante a expressatildeo da

necrose pela dosagem da CPK Os animais do grupo que recebeu a droga no iniacutecio da

isquemia e no iniacutecio da reperfusatildeo (B3) tiveram um comprometimento com aumento das

dosagens de ureacuteia creatinina e potaacutessio levando agrave hipoacutetese que a dose dupla da droga possa

ter sido a responsaacutevel por este evento deleteacuterio

A avaliaccedilatildeo histoloacutegica da lesatildeo glomerular e tuacutebulos renais mostrou que a droga estaacute

associada a maior lesatildeo glomerular na fase tardia e no grupo de recebeu dose dupla de PTX

poreacutem tem efeito contraacuterio sobre os tuacutebulos renais na mesma fase e periacuteodo Na fase aguda

natildeo mostrou sinais de proteccedilatildeo ou agravamento das lesotildees

A apoptose em glomeacuterulos expressa pela imunocoloraccedilatildeo da caspase-3 natildeo mostrou

proteccedilatildeo na fase precoce e na fase tardia houve maior expressatildeo que na fase precoce e grupo

controle e sem relaccedilatildeo com os periacuteodos de aplicaccedilatildeo da droga

A isquemia e reperfusatildeo de muacutesculo esqueleacutetico de ratos produzem lesotildees agrave distacircncia

em tecido renal e a pentoxifilina tem algum efeito protetor sobre estas lesotildees na fase precoce

de observaccedilatildeo (ateacute quatro horas) Na fase tardia (ateacute vinte e quatro horas) esta proteccedilatildeo natildeo se

faz evidente e ateacute exerce papel antagocircnico agravando as lesotildees quando aplicada nos periacuteodos

de isquemia e reperfusatildeo e provavelmente dependente da dose usada

A linha de pesquisa deveraacute ser ampliada pela avaliaccedilatildeo mais aprimorada das variaccedilotildees

hiacutedricas e de meacutetodos que possam avaliar a funccedilatildeo renal de modo mais sensiacutevel e confiaacutevel

As doses de pentoxifilina devem ser ajustadas para tentar estabelecer sua dose terapecircutica e

sua dose toacutexica

6 CONCLUSOtildeES 1

2

3

A isquemia e reperfusatildeo de muacutesculo soacuteleo de ratos liberou substacircncias na circulaccedilatildeo

sanguumliacutenea que tiveram efeitos deleteacuterios sobre o parecircnquima renal

A pentoxifilina aplicada no iniacutecio do periacuteodo de reperfusatildeo e com ateacute quatro horas de

observaccedilatildeo natildeo apresentou efeitos favoraacuteveis sobre as lesotildees renais em glomeacuterulo e

tuacutebulos renais provocadas por substacircncias resultantes da isquemia e reperfusatildeo de

muacutesculo esqueleacutetico

A pentoxifilina aplicada no iniacutecio do periacuteodo de isquemia e no iniacutecio do periacuteodo de

reperfusatildeo natildeo apresentou efeitos favoraacuteveis e dependendo da dose ocorreu agravamento

das lesotildees resultantes de isquemia e reperfusatildeo de muacutesculo esqueleacutetico

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55

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8 NORMAS ADOTADAS ASSOCIACcedilAtildeO BRASILEIRA DE NORMAS TEacuteCNICAS Apresentaccedilatildeo de originaisNB-1139 Rio de Janeiro 2000

CONSELHO NACIONAL DE SAUacuteDE - ndeg 0188 Normas de pesquisas em sauacutede Bioeacutetica 1955 3137-54

DeCS ndash Descritores em Ciecircncias de Sauacutede 3ordf ed Satildeo Paulo Bireme 1992

FAGUNDES DJ NORMAS PARA ELABORACcedilAtildeO DE RELATOacuteRIO DE PESQUISA

Satildeo Paulo UNIFESP-EPM-TOCE 2001 Disponiacutevel em httpwwwunifespbrdcirtocepg

FAGUNDES DJ NORMAS PARA CITACcedilOtildeES E REFEREcircNCIAS Satildeo Paulo Unifesp-EPM-TOCE 2001 Disponiacutevel em httpwwwunifespbrdcirtocepg

UNIFORM REQUIREMENTS FOR MANUSCRIPTS SBMITTED TO BIOMEDICAL

JOURNALS INTERNATIONAL COMMITTEE OF MEDICAL EDITORS Ann Intern

Med 1997 12636-47

APEcircNDICE

PROTOCOLO

Data __________ Grupo_____ Nuacutemero ____

Sexo_____ Peso_______ g Idade____ meses

Anesteacutesico e tipo ______________ Volume_____mL Dose ________ mL100g-1

Analgeacutesico____________Volume________mL Dose_____mgKg-1

pentoxifilina_______ Volume ________ Dose 40 mgKg-1

Decriccedilatildeo do ato operatoacuterio_______________________________________________

______________________________________________________________________

Coleta de dadosCPK_____ UL-1 ALT __ UL-1 AST___UL-1 SOacuteDIO__ mmolL-1

UREacuteIA __ mgdL-1 CREATININA __ mgdL-1 POTAacuteSSIO___ mmolL-1

Microscopia oacuteptica_____________________________________________________

______________________________________________________________________

Resultado da imunohistoquiacutemica__________________________________________

______________________________________________________________________

______________________________________________________________________

Observaccedilatildeo

____________________________________________________________

____________________________________________________________

____________________________________________________________

60

Tabela 1 ndash Meacutedia e desvio-padratildeo das medidas dos niacuteveis seacutericos de CPK (UL-1) nos

animais dos grupos S (sem isquemia e reperfusatildeo) A (isquemia de seis

horas e reperfusatildeo de quatro horas) e B (isquemia de seis horas e reperfusatildeo

de vinte e quatro horas) nos tempos 1 (sem PTX) 2 (PTX no iniacutecio da


Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3

680 709 668 828 982 639

6383 7458 2234 2111 1433 1109 1644 1977 6253 2721

2726 7638 2987 2304 3018 2579 2561 2476 2960 2187

1058 1982 1547 1954 2497 2777 2852 1272 1289 2879

- 1510 1331 2948 6835 1118 1828 1402 1069 1894

1729 1391 1482 1251 2724 1288 3402 2146 4071 1257

1637 1971 2631 1158 1728 7512 2586 1832 1622 1835

MD DP

75100 13079

333230 238439

314360 160457

201070 70543

221500 182314

207410 100432

245120 183187


P lt 005 H gt 599 A1=A2=A3 B1=B2=B3

Teste de Mann-Whitney Plt005

A1 =A2 A1=A3 A2gtA3 B1=B2 B1=B3 B2=B3 A1=B1 A2gtB2 A3=B3


61


animais dos grupos S (sem isquemia e reperfusatildeo) A (isquemia de seis horas

e reperfusatildeo de quatro horas) e B (isquemia de seis horas e reperfusatildeo de

vinte e quatro horas) nos tempos 1 (sem PTX) 2 (PTX no iniacutecio da


Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3 53

52 55 57 45 58

67 65 62 51 53 66 42 80

120 47

65 45 54 42

119 74 60 66 69 61

45 72 78 54 66 55 56 58 55 47

- 72 53 83 47 45 56 46 51 47

53 58 47 59 45 50 77 69

111 54

81 88

118 67 66

162 101 93 69 60

MD DP

5323 468

6530 2225

6840 2019

5710 934

5556 1323

6230 1972

9050 3096


P lt 005 H gt 599 A1=A2=A3 B1ltB2ltB3


A1=A2 A1=A3 A2=A3 A1=B1 A2=B2 A3ltB3


62

Tabela 3 ndash Meacutedia e desvio-padratildeo das medidas dos niacuteveis seacutericos de creatinina (mgdL1)

nos animais dos grupos S (sem isquemia e reperfusatildeo) A (isquemia de seis




Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3 07

10 07 07 06 07

15 16 14 07 08 05 07 06 12 06

11 09 10 12 09 10 13 10 08 14

09 09 08 08 08 08 07 08 08 06

- 11 13 14 11 18 12 10 11 10

09 09 10 10 02 08 07 13 10 19

24 23 23 23 21 27 31 27 12 17

MD DP

073 014

096 042

106 019

079 009

122 025

097 043

228 054


P lt 005 H gt 599 A1ltA2gtA3 B1gtB2ltB3


Plt005 A1=A2 A1=A3 A2ltA3 B1gtB2 B1ltB3 B2ltB3 A1=B1 A2=B2 A3ltB3


63

Tabela 4 ndash Meacutedia e desvio-padratildeo das medidas dos niacuteveis seacutericos de soacutedio (mmoldL-1)





Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3

142 144 142 139 142 138

158 158 162 158 152 143 150 145 143 147

149 151 132 147 146 150 147 153 150 151

152 156 151 152 152 153 147 141 148 148

- 159 151 152 152 154 155 155 154 154

155 154 156 152 164 155 147 162 163 144

164 161 158 158 165 154 160 158 160 162

MD DP

14117 223

15160 700

14760 590

15000 420

15400 230

15520 660

16000 323


P lt 005 H gt 599

A1=A2=A3 B1ltB2ltB3


plt 005

A1=A2 A1=A3 A2=A3

B1=B2 B1ltB3 B2=B3

A1=B1 A2ltB2 A3ltB3


64

Tabela 5 ndash Meacutedia e desvio-padratildeo das medidas dos niacuteveis seacutericos de potaacutessio

(mmoldL ) nos animais dos grupos S (sem isquemia e reperfusatildeo) A

(isquemia de seis horas e reperfusatildeo de quatro horas) e B (isquemia de

seis horas e reperfusatildeo de vinte e quatro horas) nos tempos 1 (sem PTX)

2 (PTX no iniacutecio da isquemia) e 3 ( PTX no iniacutecio da isquemia e da

reperfusatildeo)

-1

Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3

54 51 53 46 41 60

129 141 108 93 81 78 91 85

104 100

119 111 103 73

109 128 203 118 110 144

56 52 72 51 60 65 53 57 67 70

- 77

174 108 77 88 94 56 53 53

53 57 62 98

151 70 48

159 160 170

207 172 152 179 136 228 148 142 120 115

MD DP

508 066

101 205

122 338

60 077

87 380

103 512

160 366


P lt 005 H gt 599



Plt005

A1=A2 A1gtA3 A2gtA3

B1=B2 B1ltB3 B2ltB3

A1=B1 A2=B2 A3ltB3


65

Tabela 6 ndash Meacutedia e desvio-padratildeo da somatoacuteria dos escores [ausente (0) leve (1)

moderado (2) e acentuado (3)] calculados em dez campos por lacircmina do

paracircmetro histoloacutegico de espessamento do mesacircngio dos rins dos animais

dos grupos A (isquemia de seis horas e reperfusatildeo de quatro horas) e B

(isquemia de seis horas e reperfusatildeo de vinte e quatro horas) nos tempos 1

(sem PTX) 2 (PTX no iniacutecio da isquemia) e 3 ( PTX no iniacutecio da isquemia

e da reperfusatildeo)

Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3

- 06 09 07 08 11 06 07 08 07 05

07 09 04 06 09 07 04 07 07 04

08 07 09 08 06 13 10 12 06 09

- 05 07 06 06 06 04 06 07 06

06 06 07 10 10 07 14 05 14 06

06 08 12 11 06 06 12 11 13 12

MD DP

- -

074 007

064 021

088 007

059 007

085 033

097 042


P lt 005 H gt 599

A1=A2=A3 B1ltB2ltB3


plt005

A1=A2 A1=A3 A2ltA3

B1ltB2 B1ltB3 B2=B3

A1gtB1 A2=B2 B3=B3

66

Tabela 7 ndash Meacutedia e desvio-padratildeo da somatoacuteria dos valores absolutos encontrados em

dez campos por lacircmina do paracircmetro histoloacutegico de tuacutebulos renal

comprometido dos rins dos animais dos grupos A (isquemia de seis horas e

reperfusatildeo de quatro horas) e B (isquemia de seis horas e reperfusatildeo de



Grupo S

A

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3

- 05 07 10 06 09 05 11 14 10 07

07 14 18 14 08 07 14 17 10 06

07 15 07 25 21 09 08 09 19 10

- 16 11 08 08 16 08 08 08 09

05 06 04 04 06 08 08 14 09 07

06 08 12 12 06 11 12 06 09 05

MD DP

- -

084 014

115 007

120 021

103 049

070 014

087 007


P lt 005 H gt 599


Teste de Mann-Whitney plt005

A1=A2 A1=A3 A2=A3 B1gtB2 B1=B3 B2=B3

A1=B1 A2gtB2 A3=B3

67


encontrados em dez campos por lacircmina na preparaccedilatildeo por

imunohistoquiacutemica do glomeacuterulos renais dos animais dos grupos S (sem

isquemia e reperfusatildeo) A (isquemia de seis horas e reperfusatildeo de quatro




Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3

824 803 951 777

1140 1254

1247 940

1273 1283 1054 1670 809

1364 1104 1116

1891 2430 979

1231 1193 1044 1329 1371 1644 1049

1274 1173 737

1129 1039 879

1136 970

1016 1029

- 1673 1494 1527 1297 1816 1189 1924 763

1084

1526 1606 1453 1576 1759 1344 1757 1874 1779 1679

1853 1620 1673 1720 1269 1749 1794 1123 1316 1449

MD DP

98 198

1186 240

1416 455

1038 154

1419 372

1635 165

1557 254


P lt 005 H gt 599

A1ltA2gtA3 B1=B2=B3


A1=A2 A1=A3 A2gtA3 B1=B2 B1=B3 B2=B3 A1=B1 A2=B2 A3ltB3


68

Tabela 9 ndash Meacutedia e desvio-padratildeo das medidas dos niacuteveis seacutericos de AST (UdL-1) nos





Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3 486

184 154 100 96 275

522 694 385 379 431 640 456

1206 1237 1368

405 582 225 206 285 458 367 394 391 402

281 429 403 340 489 756 245 218 308 392

- 538 319 884 401 130 372 283 276 417

261 268 220 741 812 379 422 344 837 349

29 13 25 10 13 15 35 37

289 125

MD DP

21583 14772

73180 38730

37150 11110

38610 15530

40222 21297

46320 23868

5910 8752


P lt 005 H gt 599

A1gtA2ltA3 B1ltB2gtB3


A1gtA2 A1gtA3 A2=A3 B1=B2 B1gtB3 B2gtB3

A1gtB1 A2=B2 A3gtB3 Simulado lt A1 A2 A3 B1 e B2 Simulado gt B3

69

Tabela 10 ndash Meacutedia e desvio-padratildeo das medidas dos niacuteveis seacutericos de ALT (UdL-1) nos


horas e reperfusatildeo de quatro horas) e B (isquemia de seis horas e

reperfusatildeo de vinte e quatro horas) nos tempos 1 (sem PTX) 2 (PTX no

iniacutecio da isquemia) e 3 ( PTX no iniacutecio da isquemia e da reperfusatildeo)

Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3 65

56 72 56 50 60

193 235 112 70

103 120 75

200 253 286

94 240 60 64 71

203 77 81

100 163

66 104 80 99

130 218 64 70

150 180

- 83 67

288 152 69 53 47 65 74

47 40 50

138 135 90 98 53

200 180

80 10 25 10 20 97 63 82 48 84

MD DP

5983 776

16470 7824

11530 6368

11610 5260

9980 7990

10310 5792

5190 3358


P lt 005 H gt 599

A1=A2=A3 B1=B2=B3


A1=A2 A1=A2 A2=A3 B1=B2 B1=B3 B2gtB3 A1gtB1 A2=B2 A3gtB3

Simulado lt A1 A2 e A3 Simulado = B1 B2 e B3

ROBERTO TERUYA





ORIENTADOR Prof Dr Djalma Joseacute Fagundes CO-ORIENTADOR Prof Dr Celso Massachi Inouye

SAtildeO PAULO 2006










TESE DE MESTRADO


DEDICATOacuteRIA

Aos meus pais

Kentaro e Emiko


Agrave minha esposa

Lenir Kiyomi

e aos meus filhos


HOMENAGEM










AGRADECIMENTOS














trabalho













aulas ministradas























LISTA DE FIGURAS




9



isquemia

9



12




400x)

13




400x)

14



16



16



17




36




36




400x)

37




37



400x)

38




38

LISTA DE TABELAS







20







22







24







26







28









30








32









34








da reperfusatildeo)

21







da reperfusatildeo)

23







da reperfusatildeo)

25







da reperfusatildeo)

27







da reperfusatildeo)

29









31








da reperfusatildeo)

33









35




Ca++ = Caacutelcio




dL = decilitro



g = grama



K+ = Potaacutessio

Kg = quilograma

L = litro

mg = miligrama

mL = mililitros


Na+= Soacutedio

PTX = Pentoxifilina





RESUMO
























ABSTRACT

























periods

SUMAacuteRIO


2 OBJETIVOS 4

3 MEacuteTODOS 5

4 RESULTADOS 19

5 DISCUSSAtildeO 39




APEcircNDICE 59





isquecircmico3-8













celular8-10







agrave isquemia5-10






2

































3

























apoptose

2 OBJETIVOS

Geral


rim de ratos

Especiacutefico



3 MEacuteTODOS







Amostra


















6



reperfusatildeo



reperfusatildeo










Procedimentos







palpebral




7

Figu


Ratos N-66

GRUPO A n=30


Simulado n=6

GRUPO B n=30


A1 n=10


A2 n=10


B3 n=10


B2 n=10


B1 n=10


A 3 n=10










cavidade abdominal

8





















aberto e retirado







9




10



























11























12
















13

A



B

D mento e com

14


















iacutemica














15








PBS pH 74























16











17

B









A








a ImageLABreg

18











4 RESULTADOS























6 e graacutefico 6




20









Grupo S

Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

Meacutedia

DP

75100

13079

333230

238439

314360

160457

201070

70543

221500

182314

207410

100432

245120

183187


P lt 005 H gt 599

A1=A2=A3 B1=B2=B3


Plt005

A1 =A2 A1=A3 A2gtA3

B1=B2 B1=B3 B2=B3

A1=B1 A2gtB2 A3=B3


21

CPK

6000 6000

5000 5000

3UL 4000

000

4000

3000

2000 2000

1000 1000


GRUPOS





22






Grupo S

Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

Meacutedia

DP

5323

468

6530

2225

6840

2019

5710

934

5556

1323

6230

1972

9050

3096


P lt 005 H gt 599

A1=A2=A3 B1ltB2ltB3


Plt005

A1=A2 A1=A3 A2=A3


A1=B1 A2=B2 A3ltB3


23

UREacuteIA

140 140

120 120

100 100

80 80mgdL

60 6040 40

20 20

0 0


GRUPOS





24






Grupo S

Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

Meacutedia

DP

073

014

096

042

106

019

079

009

122

025

097

043

228

054


P lt 005 H gt 599



Plt005

A1=A2 A1=A3 A2ltA3


A1=B1 A2=B2 A3ltB3


25

CREATININA

3 3

25 25

2

15

2mgdLL

15

1 1

05 05

0 0


GRUPOS





reperfusatildeo)

26






Grupo S

Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

Meacutedia

DP

14117

223

15160

700

14760

590

15000

420

15400

230

15520

660

16000

323


P lt 005 H gt 599

A1=A2=A3 B1ltB2ltB3


plt 005

A1=A2 A1=A3 A2=A3

B1=B2 B1ltB3 B2=B3

A1=B1 A2ltB2 A3ltB3


27

SOacuteDIO

170170

160160

150

140mmolL150

140

130130

120120

110110


GRUPOS





reperfusatildeo)

28






Grupo S

Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

Meacutedia

DP

508

066

101

205

122

338

60

077

87

380

103

512

160

366


P lt 005 H gt 599



Plt005

A1=A2 A1gtA3 A2gtA3

B1=B2 B1ltB3 B2ltB3

A1=B1 A2=B2 A3ltB3


29

POTAacuteSSIO

20 20

15 15

10mmolLL

10

5 5


GRUPOS





reperfusatildeo)

30







Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

Meacutedia

DP

074

007

064

021

088

007

059

007

085

033

097

042


P lt 005 H gt 599

A1=A2=A3 B1ltB2ltB3


plt005

A1=A2 A1=A3 A2ltA3

B1ltB2 B1ltB3 B2=B3

A1gtB1 A2=B2 B3=B3

31


12 12

1 1

08 08

06 06

04 04

02 02

0 0 A1 A2 A3 B2 B3B1

GRUPOS






32







Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

Meacutedia

DP

084

014

115

007

120

021

103

049

070

014

087

007


P lt 005 H gt 599



plt005

A1=A2 A1=A3 A2=A3

B1gtB2 B1=B3 B2=B3

A1=B1 A2gtB2 A3=B3

33


16 1614 1412 12

1 1

08 0806 0604 0402 02

0 0 A1 A2 A3 B1 B2 B3

GRUPOS






34







Grupo S

Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

MD

DP

98

198

1186

240

1416

455

1038

154

1419

372

1635

165

1557

254


P lt 005 H gt 599

A1ltA2gtA3 B1=B2=B3


plt005

A1=A2 A1=A3 A2gtA3

B1=B2 B1=B3 B2=B3

A1=B1 A2=B2 A3ltB3


35


02468

101214161820

02468101214161820


CASPASE-3


36





37





38





5 DISCUSSAtildeO






















45






40

































41









necrose111314
























42

































43
































44

































45

































46



















PTX














47

































48














muscular



















49












rins21-2868







ser considerada













50





























51





























6 CONCLUSOtildeES 1

2

3











667















54
















55















56















57























Med 1997 12636-47

APEcircNDICE

PROTOCOLO







______________________________________________________________________




______________________________________________________________________


______________________________________________________________________

______________________________________________________________________


____________________________________________________________

____________________________________________________________

____________________________________________________________

60






Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3

680 709 668 828 982 639

6383 7458 2234 2111 1433 1109 1644 1977 6253 2721

2726 7638 2987 2304 3018 2579 2561 2476 2960 2187

1058 1982 1547 1954 2497 2777 2852 1272 1289 2879

- 1510 1331 2948 6835 1118 1828 1402 1069 1894

1729 1391 1482 1251 2724 1288 3402 2146 4071 1257

1637 1971 2631 1158 1728 7512 2586 1832 1622 1835

MD DP

75100 13079

333230 238439

314360 160457

201070 70543

221500 182314

207410 100432

245120 183187


P lt 005 H gt 599 A1=A2=A3 B1=B2=B3




61






Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3 53

52 55 57 45 58

67 65 62 51 53 66 42 80

120 47

65 45 54 42

119 74 60 66 69 61

45 72 78 54 66 55 56 58 55 47

- 72 53 83 47 45 56 46 51 47

53 58 47 59 45 50 77 69

111 54

81 88

118 67 66

162 101 93 69 60

MD DP

5323 468

6530 2225

6840 2019

5710 934

5556 1323

6230 1972

9050 3096




A1=A2 A1=A3 A2=A3 A1=B1 A2=B2 A3ltB3


62






Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3 07

10 07 07 06 07

15 16 14 07 08 05 07 06 12 06

11 09 10 12 09 10 13 10 08 14

09 09 08 08 08 08 07 08 08 06

- 11 13 14 11 18 12 10 11 10

09 09 10 10 02 08 07 13 10 19

24 23 23 23 21 27 31 27 12 17

MD DP

073 014

096 042

106 019

079 009

122 025

097 043

228 054






63






Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3

142 144 142 139 142 138

158 158 162 158 152 143 150 145 143 147

149 151 132 147 146 150 147 153 150 151

152 156 151 152 152 153 147 141 148 148

- 159 151 152 152 154 155 155 154 154

155 154 156 152 164 155 147 162 163 144

164 161 158 158 165 154 160 158 160 162

MD DP

14117 223

15160 700

14760 590

15000 420

15400 230

15520 660

16000 323


P lt 005 H gt 599

A1=A2=A3 B1ltB2ltB3


plt 005

A1=A2 A1=A3 A2=A3

B1=B2 B1ltB3 B2=B3

A1=B1 A2ltB2 A3ltB3


64






reperfusatildeo)

-1

Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3

54 51 53 46 41 60

129 141 108 93 81 78 91 85

104 100

119 111 103 73

109 128 203 118 110 144

56 52 72 51 60 65 53 57 67 70

- 77

174 108 77 88 94 56 53 53

53 57 62 98

151 70 48

159 160 170

207 172 152 179 136 228 148 142 120 115

MD DP

508 066

101 205

122 338

60 077

87 380

103 512

160 366


P lt 005 H gt 599



Plt005

A1=A2 A1gtA3 A2gtA3

B1=B2 B1ltB3 B2ltB3

A1=B1 A2=B2 A3ltB3


65








Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3

- 06 09 07 08 11 06 07 08 07 05

07 09 04 06 09 07 04 07 07 04

08 07 09 08 06 13 10 12 06 09

- 05 07 06 06 06 04 06 07 06

06 06 07 10 10 07 14 05 14 06

06 08 12 11 06 06 12 11 13 12

MD DP

- -

074 007

064 021

088 007

059 007

085 033

097 042


P lt 005 H gt 599

A1=A2=A3 B1ltB2ltB3


plt005

A1=A2 A1=A3 A2ltA3

B1ltB2 B1ltB3 B2=B3

A1gtB1 A2=B2 B3=B3

66







Grupo S

A

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3

- 05 07 10 06 09 05 11 14 10 07

07 14 18 14 08 07 14 17 10 06

07 15 07 25 21 09 08 09 19 10

- 16 11 08 08 16 08 08 08 09

05 06 04 04 06 08 08 14 09 07

06 08 12 12 06 11 12 06 09 05

MD DP

- -

084 014

115 007

120 021

103 049

070 014

087 007


P lt 005 H gt 599



A1=A2 A1=A3 A2=A3 B1gtB2 B1=B3 B2=B3

A1=B1 A2gtB2 A3=B3

67








Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3

824 803 951 777

1140 1254

1247 940

1273 1283 1054 1670 809

1364 1104 1116

1891 2430 979

1231 1193 1044 1329 1371 1644 1049

1274 1173 737

1129 1039 879

1136 970

1016 1029

- 1673 1494 1527 1297 1816 1189 1924 763

1084

1526 1606 1453 1576 1759 1344 1757 1874 1779 1679

1853 1620 1673 1720 1269 1749 1794 1123 1316 1449

MD DP

98 198

1186 240

1416 455

1038 154

1419 372

1635 165

1557 254


P lt 005 H gt 599

A1ltA2gtA3 B1=B2=B3




68






Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3 486

184 154 100 96 275

522 694 385 379 431 640 456

1206 1237 1368

405 582 225 206 285 458 367 394 391 402

281 429 403 340 489 756 245 218 308 392

- 538 319 884 401 130 372 283 276 417

261 268 220 741 812 379 422 344 837 349

29 13 25 10 13 15 35 37

289 125

MD DP

21583 14772

73180 38730

37150 11110

38610 15530

40222 21297

46320 23868

5910 8752


P lt 005 H gt 599





69






Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3 65

56 72 56 50 60

193 235 112 70

103 120 75

200 253 286

94 240 60 64 71

203 77 81

100 163

66 104 80 99

130 218 64 70

150 180

- 83 67

288 152 69 53 47 65 74

47 40 50

138 135 90 98 53

200 180

80 10 25 10 20 97 63 82 48 84

MD DP

5983 776

16470 7824

11530 6368

11610 5260

9980 7990

10310 5792

5190 3358


P lt 005 H gt 599

A1=A2=A3 B1=B2=B3













TESE DE MESTRADO


DEDICATOacuteRIA

Aos meus pais

Kentaro e Emiko


Agrave minha esposa

Lenir Kiyomi

e aos meus filhos


HOMENAGEM










AGRADECIMENTOS














trabalho













aulas ministradas























LISTA DE FIGURAS




9



isquemia

9



12




400x)

13




400x)

14



16



16



17




36




36




400x)

37




37



400x)

38




38

LISTA DE TABELAS







20







22







24







26







28









30








32









34








da reperfusatildeo)

21







da reperfusatildeo)

23







da reperfusatildeo)

25







da reperfusatildeo)

27







da reperfusatildeo)

29









31








da reperfusatildeo)

33









35




Ca++ = Caacutelcio




dL = decilitro



g = grama



K+ = Potaacutessio

Kg = quilograma

L = litro

mg = miligrama

mL = mililitros


Na+= Soacutedio

PTX = Pentoxifilina





RESUMO
























ABSTRACT

























periods

SUMAacuteRIO


2 OBJETIVOS 4

3 MEacuteTODOS 5

4 RESULTADOS 19

5 DISCUSSAtildeO 39




APEcircNDICE 59





isquecircmico3-8













celular8-10







agrave isquemia5-10






2

































3

























apoptose

2 OBJETIVOS

Geral


rim de ratos

Especiacutefico



3 MEacuteTODOS







Amostra


















6



reperfusatildeo



reperfusatildeo










Procedimentos







palpebral




7

Figu


Ratos N-66

GRUPO A n=30


Simulado n=6

GRUPO B n=30


A1 n=10


A2 n=10


B3 n=10


B2 n=10


B1 n=10


A 3 n=10










cavidade abdominal

8





















aberto e retirado







9




10



























11























12
















13

A



B

D mento e com

14


















iacutemica














15








PBS pH 74























16











17

B









A








a ImageLABreg

18











4 RESULTADOS























6 e graacutefico 6




20









Grupo S

Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

Meacutedia

DP

75100

13079

333230

238439

314360

160457

201070

70543

221500

182314

207410

100432

245120

183187


P lt 005 H gt 599

A1=A2=A3 B1=B2=B3


Plt005

A1 =A2 A1=A3 A2gtA3

B1=B2 B1=B3 B2=B3

A1=B1 A2gtB2 A3=B3


21

CPK

6000 6000

5000 5000

3UL 4000

000

4000

3000

2000 2000

1000 1000


GRUPOS





22






Grupo S

Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

Meacutedia

DP

5323

468

6530

2225

6840

2019

5710

934

5556

1323

6230

1972

9050

3096


P lt 005 H gt 599

A1=A2=A3 B1ltB2ltB3


Plt005

A1=A2 A1=A3 A2=A3


A1=B1 A2=B2 A3ltB3


23

UREacuteIA

140 140

120 120

100 100

80 80mgdL

60 6040 40

20 20

0 0


GRUPOS





24






Grupo S

Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

Meacutedia

DP

073

014

096

042

106

019

079

009

122

025

097

043

228

054


P lt 005 H gt 599



Plt005

A1=A2 A1=A3 A2ltA3


A1=B1 A2=B2 A3ltB3


25

CREATININA

3 3

25 25

2

15

2mgdLL

15

1 1

05 05

0 0


GRUPOS





reperfusatildeo)

26






Grupo S

Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

Meacutedia

DP

14117

223

15160

700

14760

590

15000

420

15400

230

15520

660

16000

323


P lt 005 H gt 599

A1=A2=A3 B1ltB2ltB3


plt 005

A1=A2 A1=A3 A2=A3

B1=B2 B1ltB3 B2=B3

A1=B1 A2ltB2 A3ltB3


27

SOacuteDIO

170170

160160

150

140mmolL150

140

130130

120120

110110


GRUPOS





reperfusatildeo)

28






Grupo S

Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

Meacutedia

DP

508

066

101

205

122

338

60

077

87

380

103

512

160

366


P lt 005 H gt 599



Plt005

A1=A2 A1gtA3 A2gtA3

B1=B2 B1ltB3 B2ltB3

A1=B1 A2=B2 A3ltB3


29

POTAacuteSSIO

20 20

15 15

10mmolLL

10

5 5


GRUPOS





reperfusatildeo)

30







Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

Meacutedia

DP

074

007

064

021

088

007

059

007

085

033

097

042


P lt 005 H gt 599

A1=A2=A3 B1ltB2ltB3


plt005

A1=A2 A1=A3 A2ltA3

B1ltB2 B1ltB3 B2=B3

A1gtB1 A2=B2 B3=B3

31


12 12

1 1

08 08

06 06

04 04

02 02

0 0 A1 A2 A3 B2 B3B1

GRUPOS






32







Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

Meacutedia

DP

084

014

115

007

120

021

103

049

070

014

087

007


P lt 005 H gt 599



plt005

A1=A2 A1=A3 A2=A3

B1gtB2 B1=B3 B2=B3

A1=B1 A2gtB2 A3=B3

33


16 1614 1412 12

1 1

08 0806 0604 0402 02

0 0 A1 A2 A3 B1 B2 B3

GRUPOS






34







Grupo S

Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

MD

DP

98

198

1186

240

1416

455

1038

154

1419

372

1635

165

1557

254


P lt 005 H gt 599

A1ltA2gtA3 B1=B2=B3


plt005

A1=A2 A1=A3 A2gtA3

B1=B2 B1=B3 B2=B3

A1=B1 A2=B2 A3ltB3


35


02468

101214161820

02468101214161820


CASPASE-3


36





37





38





5 DISCUSSAtildeO






















45






40

































41









necrose111314
























42

































43
































44

































45

































46



















PTX














47

































48














muscular



















49












rins21-2868







ser considerada













50





























51





























6 CONCLUSOtildeES 1

2

3











667















54
















55















56















57























Med 1997 12636-47

APEcircNDICE

PROTOCOLO







______________________________________________________________________




______________________________________________________________________


______________________________________________________________________

______________________________________________________________________


____________________________________________________________

____________________________________________________________

____________________________________________________________

60






Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3

680 709 668 828 982 639

6383 7458 2234 2111 1433 1109 1644 1977 6253 2721

2726 7638 2987 2304 3018 2579 2561 2476 2960 2187

1058 1982 1547 1954 2497 2777 2852 1272 1289 2879

- 1510 1331 2948 6835 1118 1828 1402 1069 1894

1729 1391 1482 1251 2724 1288 3402 2146 4071 1257

1637 1971 2631 1158 1728 7512 2586 1832 1622 1835

MD DP

75100 13079

333230 238439

314360 160457

201070 70543

221500 182314

207410 100432

245120 183187


P lt 005 H gt 599 A1=A2=A3 B1=B2=B3




61






Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3 53

52 55 57 45 58

67 65 62 51 53 66 42 80

120 47

65 45 54 42

119 74 60 66 69 61

45 72 78 54 66 55 56 58 55 47

- 72 53 83 47 45 56 46 51 47

53 58 47 59 45 50 77 69

111 54

81 88

118 67 66

162 101 93 69 60

MD DP

5323 468

6530 2225

6840 2019

5710 934

5556 1323

6230 1972

9050 3096




A1=A2 A1=A3 A2=A3 A1=B1 A2=B2 A3ltB3


62






Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3 07

10 07 07 06 07

15 16 14 07 08 05 07 06 12 06

11 09 10 12 09 10 13 10 08 14

09 09 08 08 08 08 07 08 08 06

- 11 13 14 11 18 12 10 11 10

09 09 10 10 02 08 07 13 10 19

24 23 23 23 21 27 31 27 12 17

MD DP

073 014

096 042

106 019

079 009

122 025

097 043

228 054






63






Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3

142 144 142 139 142 138

158 158 162 158 152 143 150 145 143 147

149 151 132 147 146 150 147 153 150 151

152 156 151 152 152 153 147 141 148 148

- 159 151 152 152 154 155 155 154 154

155 154 156 152 164 155 147 162 163 144

164 161 158 158 165 154 160 158 160 162

MD DP

14117 223

15160 700

14760 590

15000 420

15400 230

15520 660

16000 323


P lt 005 H gt 599

A1=A2=A3 B1ltB2ltB3


plt 005

A1=A2 A1=A3 A2=A3

B1=B2 B1ltB3 B2=B3

A1=B1 A2ltB2 A3ltB3


64






reperfusatildeo)

-1

Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3

54 51 53 46 41 60

129 141 108 93 81 78 91 85

104 100

119 111 103 73

109 128 203 118 110 144

56 52 72 51 60 65 53 57 67 70

- 77

174 108 77 88 94 56 53 53

53 57 62 98

151 70 48

159 160 170

207 172 152 179 136 228 148 142 120 115

MD DP

508 066

101 205

122 338

60 077

87 380

103 512

160 366


P lt 005 H gt 599



Plt005

A1=A2 A1gtA3 A2gtA3

B1=B2 B1ltB3 B2ltB3

A1=B1 A2=B2 A3ltB3


65








Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3

- 06 09 07 08 11 06 07 08 07 05

07 09 04 06 09 07 04 07 07 04

08 07 09 08 06 13 10 12 06 09

- 05 07 06 06 06 04 06 07 06

06 06 07 10 10 07 14 05 14 06

06 08 12 11 06 06 12 11 13 12

MD DP

- -

074 007

064 021

088 007

059 007

085 033

097 042


P lt 005 H gt 599

A1=A2=A3 B1ltB2ltB3


plt005

A1=A2 A1=A3 A2ltA3

B1ltB2 B1ltB3 B2=B3

A1gtB1 A2=B2 B3=B3

66







Grupo S

A

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3

- 05 07 10 06 09 05 11 14 10 07

07 14 18 14 08 07 14 17 10 06

07 15 07 25 21 09 08 09 19 10

- 16 11 08 08 16 08 08 08 09

05 06 04 04 06 08 08 14 09 07

06 08 12 12 06 11 12 06 09 05

MD DP

- -

084 014

115 007

120 021

103 049

070 014

087 007


P lt 005 H gt 599



A1=A2 A1=A3 A2=A3 B1gtB2 B1=B3 B2=B3

A1=B1 A2gtB2 A3=B3

67








Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3

824 803 951 777

1140 1254

1247 940

1273 1283 1054 1670 809

1364 1104 1116

1891 2430 979

1231 1193 1044 1329 1371 1644 1049

1274 1173 737

1129 1039 879

1136 970

1016 1029

- 1673 1494 1527 1297 1816 1189 1924 763

1084

1526 1606 1453 1576 1759 1344 1757 1874 1779 1679

1853 1620 1673 1720 1269 1749 1794 1123 1316 1449

MD DP

98 198

1186 240

1416 455

1038 154

1419 372

1635 165

1557 254


P lt 005 H gt 599

A1ltA2gtA3 B1=B2=B3




68






Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3 486

184 154 100 96 275

522 694 385 379 431 640 456

1206 1237 1368

405 582 225 206 285 458 367 394 391 402

281 429 403 340 489 756 245 218 308 392

- 538 319 884 401 130 372 283 276 417

261 268 220 741 812 379 422 344 837 349

29 13 25 10 13 15 35 37

289 125

MD DP

21583 14772

73180 38730

37150 11110

38610 15530

40222 21297

46320 23868

5910 8752


P lt 005 H gt 599





69






Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3 65

56 72 56 50 60

193 235 112 70

103 120 75

200 253 286

94 240 60 64 71

203 77 81

100 163

66 104 80 99

130 218 64 70

150 180

- 83 67

288 152 69 53 47 65 74

47 40 50

138 135 90 98 53

200 180

80 10 25 10 20 97 63 82 48 84

MD DP

5983 776

16470 7824

11530 6368

11610 5260

9980 7990

10310 5792

5190 3358


P lt 005 H gt 599

A1=A2=A3 B1=B2=B3








TESE DE MESTRADO


DEDICATOacuteRIA

Aos meus pais

Kentaro e Emiko


Agrave minha esposa

Lenir Kiyomi

e aos meus filhos


HOMENAGEM










AGRADECIMENTOS














trabalho













aulas ministradas























LISTA DE FIGURAS




9



isquemia

9



12




400x)

13




400x)

14



16



16



17




36




36




400x)

37




37



400x)

38




38

LISTA DE TABELAS







20







22







24







26







28









30








32









34








da reperfusatildeo)

21







da reperfusatildeo)

23







da reperfusatildeo)

25







da reperfusatildeo)

27







da reperfusatildeo)

29









31








da reperfusatildeo)

33









35




Ca++ = Caacutelcio




dL = decilitro



g = grama



K+ = Potaacutessio

Kg = quilograma

L = litro

mg = miligrama

mL = mililitros


Na+= Soacutedio

PTX = Pentoxifilina





RESUMO
























ABSTRACT

























periods

SUMAacuteRIO


2 OBJETIVOS 4

3 MEacuteTODOS 5

4 RESULTADOS 19

5 DISCUSSAtildeO 39




APEcircNDICE 59





isquecircmico3-8













celular8-10







agrave isquemia5-10






2

































3

























apoptose

2 OBJETIVOS

Geral


rim de ratos

Especiacutefico



3 MEacuteTODOS







Amostra


















6



reperfusatildeo



reperfusatildeo










Procedimentos







palpebral




7

Figu


Ratos N-66

GRUPO A n=30


Simulado n=6

GRUPO B n=30


A1 n=10


A2 n=10


B3 n=10


B2 n=10


B1 n=10


A 3 n=10










cavidade abdominal

8





















aberto e retirado







9




10



























11























12
















13

A



B

D mento e com

14


















iacutemica














15








PBS pH 74























16











17

B









A








a ImageLABreg

18











4 RESULTADOS























6 e graacutefico 6




20









Grupo S

Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

Meacutedia

DP

75100

13079

333230

238439

314360

160457

201070

70543

221500

182314

207410

100432

245120

183187


P lt 005 H gt 599

A1=A2=A3 B1=B2=B3


Plt005

A1 =A2 A1=A3 A2gtA3

B1=B2 B1=B3 B2=B3

A1=B1 A2gtB2 A3=B3


21

CPK

6000 6000

5000 5000

3UL 4000

000

4000

3000

2000 2000

1000 1000


GRUPOS





22






Grupo S

Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

Meacutedia

DP

5323

468

6530

2225

6840

2019

5710

934

5556

1323

6230

1972

9050

3096


P lt 005 H gt 599

A1=A2=A3 B1ltB2ltB3


Plt005

A1=A2 A1=A3 A2=A3


A1=B1 A2=B2 A3ltB3


23

UREacuteIA

140 140

120 120

100 100

80 80mgdL

60 6040 40

20 20

0 0


GRUPOS





24






Grupo S

Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

Meacutedia

DP

073

014

096

042

106

019

079

009

122

025

097

043

228

054


P lt 005 H gt 599



Plt005

A1=A2 A1=A3 A2ltA3


A1=B1 A2=B2 A3ltB3


25

CREATININA

3 3

25 25

2

15

2mgdLL

15

1 1

05 05

0 0


GRUPOS





reperfusatildeo)

26






Grupo S

Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

Meacutedia

DP

14117

223

15160

700

14760

590

15000

420

15400

230

15520

660

16000

323


P lt 005 H gt 599

A1=A2=A3 B1ltB2ltB3


plt 005

A1=A2 A1=A3 A2=A3

B1=B2 B1ltB3 B2=B3

A1=B1 A2ltB2 A3ltB3


27

SOacuteDIO

170170

160160

150

140mmolL150

140

130130

120120

110110


GRUPOS





reperfusatildeo)

28






Grupo S

Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

Meacutedia

DP

508

066

101

205

122

338

60

077

87

380

103

512

160

366


P lt 005 H gt 599



Plt005

A1=A2 A1gtA3 A2gtA3

B1=B2 B1ltB3 B2ltB3

A1=B1 A2=B2 A3ltB3


29

POTAacuteSSIO

20 20

15 15

10mmolLL

10

5 5


GRUPOS





reperfusatildeo)

30







Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

Meacutedia

DP

074

007

064

021

088

007

059

007

085

033

097

042


P lt 005 H gt 599

A1=A2=A3 B1ltB2ltB3


plt005

A1=A2 A1=A3 A2ltA3

B1ltB2 B1ltB3 B2=B3

A1gtB1 A2=B2 B3=B3

31


12 12

1 1

08 08

06 06

04 04

02 02

0 0 A1 A2 A3 B2 B3B1

GRUPOS






32







Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

Meacutedia

DP

084

014

115

007

120

021

103

049

070

014

087

007


P lt 005 H gt 599



plt005

A1=A2 A1=A3 A2=A3

B1gtB2 B1=B3 B2=B3

A1=B1 A2gtB2 A3=B3

33


16 1614 1412 12

1 1

08 0806 0604 0402 02

0 0 A1 A2 A3 B1 B2 B3

GRUPOS






34







Grupo S

Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

MD

DP

98

198

1186

240

1416

455

1038

154

1419

372

1635

165

1557

254


P lt 005 H gt 599

A1ltA2gtA3 B1=B2=B3


plt005

A1=A2 A1=A3 A2gtA3

B1=B2 B1=B3 B2=B3

A1=B1 A2=B2 A3ltB3


35


02468

101214161820

02468101214161820


CASPASE-3


36





37





38





5 DISCUSSAtildeO






















45






40

































41









necrose111314
























42

































43
































44

































45

































46



















PTX














47

































48














muscular



















49












rins21-2868







ser considerada













50





























51





























6 CONCLUSOtildeES 1

2

3











667















54
















55















56















57























Med 1997 12636-47

APEcircNDICE

PROTOCOLO







______________________________________________________________________




______________________________________________________________________


______________________________________________________________________

______________________________________________________________________


____________________________________________________________

____________________________________________________________

____________________________________________________________

60






Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3

680 709 668 828 982 639

6383 7458 2234 2111 1433 1109 1644 1977 6253 2721

2726 7638 2987 2304 3018 2579 2561 2476 2960 2187

1058 1982 1547 1954 2497 2777 2852 1272 1289 2879

- 1510 1331 2948 6835 1118 1828 1402 1069 1894

1729 1391 1482 1251 2724 1288 3402 2146 4071 1257

1637 1971 2631 1158 1728 7512 2586 1832 1622 1835

MD DP

75100 13079

333230 238439

314360 160457

201070 70543

221500 182314

207410 100432

245120 183187


P lt 005 H gt 599 A1=A2=A3 B1=B2=B3




61






Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3 53

52 55 57 45 58

67 65 62 51 53 66 42 80

120 47

65 45 54 42

119 74 60 66 69 61

45 72 78 54 66 55 56 58 55 47

- 72 53 83 47 45 56 46 51 47

53 58 47 59 45 50 77 69

111 54

81 88

118 67 66

162 101 93 69 60

MD DP

5323 468

6530 2225

6840 2019

5710 934

5556 1323

6230 1972

9050 3096




A1=A2 A1=A3 A2=A3 A1=B1 A2=B2 A3ltB3


62






Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3 07

10 07 07 06 07

15 16 14 07 08 05 07 06 12 06

11 09 10 12 09 10 13 10 08 14

09 09 08 08 08 08 07 08 08 06

- 11 13 14 11 18 12 10 11 10

09 09 10 10 02 08 07 13 10 19

24 23 23 23 21 27 31 27 12 17

MD DP

073 014

096 042

106 019

079 009

122 025

097 043

228 054






63






Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3

142 144 142 139 142 138

158 158 162 158 152 143 150 145 143 147

149 151 132 147 146 150 147 153 150 151

152 156 151 152 152 153 147 141 148 148

- 159 151 152 152 154 155 155 154 154

155 154 156 152 164 155 147 162 163 144

164 161 158 158 165 154 160 158 160 162

MD DP

14117 223

15160 700

14760 590

15000 420

15400 230

15520 660

16000 323


P lt 005 H gt 599

A1=A2=A3 B1ltB2ltB3


plt 005

A1=A2 A1=A3 A2=A3

B1=B2 B1ltB3 B2=B3

A1=B1 A2ltB2 A3ltB3


64






reperfusatildeo)

-1

Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3

54 51 53 46 41 60

129 141 108 93 81 78 91 85

104 100

119 111 103 73

109 128 203 118 110 144

56 52 72 51 60 65 53 57 67 70

- 77

174 108 77 88 94 56 53 53

53 57 62 98

151 70 48

159 160 170

207 172 152 179 136 228 148 142 120 115

MD DP

508 066

101 205

122 338

60 077

87 380

103 512

160 366


P lt 005 H gt 599



Plt005

A1=A2 A1gtA3 A2gtA3

B1=B2 B1ltB3 B2ltB3

A1=B1 A2=B2 A3ltB3


65








Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3

- 06 09 07 08 11 06 07 08 07 05

07 09 04 06 09 07 04 07 07 04

08 07 09 08 06 13 10 12 06 09

- 05 07 06 06 06 04 06 07 06

06 06 07 10 10 07 14 05 14 06

06 08 12 11 06 06 12 11 13 12

MD DP

- -

074 007

064 021

088 007

059 007

085 033

097 042


P lt 005 H gt 599

A1=A2=A3 B1ltB2ltB3


plt005

A1=A2 A1=A3 A2ltA3

B1ltB2 B1ltB3 B2=B3

A1gtB1 A2=B2 B3=B3

66







Grupo S

A

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3

- 05 07 10 06 09 05 11 14 10 07

07 14 18 14 08 07 14 17 10 06

07 15 07 25 21 09 08 09 19 10

- 16 11 08 08 16 08 08 08 09

05 06 04 04 06 08 08 14 09 07

06 08 12 12 06 11 12 06 09 05

MD DP

- -

084 014

115 007

120 021

103 049

070 014

087 007


P lt 005 H gt 599



A1=A2 A1=A3 A2=A3 B1gtB2 B1=B3 B2=B3

A1=B1 A2gtB2 A3=B3

67








Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3

824 803 951 777

1140 1254

1247 940

1273 1283 1054 1670 809

1364 1104 1116

1891 2430 979

1231 1193 1044 1329 1371 1644 1049

1274 1173 737

1129 1039 879

1136 970

1016 1029

- 1673 1494 1527 1297 1816 1189 1924 763

1084

1526 1606 1453 1576 1759 1344 1757 1874 1779 1679

1853 1620 1673 1720 1269 1749 1794 1123 1316 1449

MD DP

98 198

1186 240

1416 455

1038 154

1419 372

1635 165

1557 254


P lt 005 H gt 599

A1ltA2gtA3 B1=B2=B3




68






Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3 486

184 154 100 96 275

522 694 385 379 431 640 456

1206 1237 1368

405 582 225 206 285 458 367 394 391 402

281 429 403 340 489 756 245 218 308 392

- 538 319 884 401 130 372 283 276 417

261 268 220 741 812 379 422 344 837 349

29 13 25 10 13 15 35 37

289 125

MD DP

21583 14772

73180 38730

37150 11110

38610 15530

40222 21297

46320 23868

5910 8752


P lt 005 H gt 599





69






Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3 65

56 72 56 50 60

193 235 112 70

103 120 75

200 253 286

94 240 60 64 71

203 77 81

100 163

66 104 80 99

130 218 64 70

150 180

- 83 67

288 152 69 53 47 65 74

47 40 50

138 135 90 98 53

200 180

80 10 25 10 20 97 63 82 48 84

MD DP

5983 776

16470 7824

11530 6368

11610 5260

9980 7990

10310 5792

5190 3358


P lt 005 H gt 599

A1=A2=A3 B1=B2=B3




DEDICATOacuteRIA

Aos meus pais

Kentaro e Emiko


Agrave minha esposa

Lenir Kiyomi

e aos meus filhos


HOMENAGEM










AGRADECIMENTOS














trabalho













aulas ministradas























LISTA DE FIGURAS




9



isquemia

9



12




400x)

13




400x)

14



16



16



17




36




36




400x)

37




37



400x)

38




38

LISTA DE TABELAS







20







22







24







26







28









30








32









34








da reperfusatildeo)

21







da reperfusatildeo)

23







da reperfusatildeo)

25







da reperfusatildeo)

27







da reperfusatildeo)

29









31








da reperfusatildeo)

33









35




Ca++ = Caacutelcio




dL = decilitro



g = grama



K+ = Potaacutessio

Kg = quilograma

L = litro

mg = miligrama

mL = mililitros


Na+= Soacutedio

PTX = Pentoxifilina





RESUMO
























ABSTRACT

























periods

SUMAacuteRIO


2 OBJETIVOS 4

3 MEacuteTODOS 5

4 RESULTADOS 19

5 DISCUSSAtildeO 39




APEcircNDICE 59





isquecircmico3-8













celular8-10







agrave isquemia5-10






2

































3

























apoptose

2 OBJETIVOS

Geral


rim de ratos

Especiacutefico



3 MEacuteTODOS







Amostra


















6



reperfusatildeo



reperfusatildeo










Procedimentos







palpebral




7

Figu


Ratos N-66

GRUPO A n=30


Simulado n=6

GRUPO B n=30


A1 n=10


A2 n=10


B3 n=10


B2 n=10


B1 n=10


A 3 n=10










cavidade abdominal

8





















aberto e retirado







9




10



























11























12
















13

A



B

D mento e com

14


















iacutemica














15








PBS pH 74























16











17

B









A








a ImageLABreg

18











4 RESULTADOS























6 e graacutefico 6




20









Grupo S

Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

Meacutedia

DP

75100

13079

333230

238439

314360

160457

201070

70543

221500

182314

207410

100432

245120

183187


P lt 005 H gt 599

A1=A2=A3 B1=B2=B3


Plt005

A1 =A2 A1=A3 A2gtA3

B1=B2 B1=B3 B2=B3

A1=B1 A2gtB2 A3=B3


21

CPK

6000 6000

5000 5000

3UL 4000

000

4000

3000

2000 2000

1000 1000


GRUPOS





22






Grupo S

Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

Meacutedia

DP

5323

468

6530

2225

6840

2019

5710

934

5556

1323

6230

1972

9050

3096


P lt 005 H gt 599

A1=A2=A3 B1ltB2ltB3


Plt005

A1=A2 A1=A3 A2=A3


A1=B1 A2=B2 A3ltB3


23

UREacuteIA

140 140

120 120

100 100

80 80mgdL

60 6040 40

20 20

0 0


GRUPOS





24






Grupo S

Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

Meacutedia

DP

073

014

096

042

106

019

079

009

122

025

097

043

228

054


P lt 005 H gt 599



Plt005

A1=A2 A1=A3 A2ltA3


A1=B1 A2=B2 A3ltB3


25

CREATININA

3 3

25 25

2

15

2mgdLL

15

1 1

05 05

0 0


GRUPOS





reperfusatildeo)

26






Grupo S

Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

Meacutedia

DP

14117

223

15160

700

14760

590

15000

420

15400

230

15520

660

16000

323


P lt 005 H gt 599

A1=A2=A3 B1ltB2ltB3


plt 005

A1=A2 A1=A3 A2=A3

B1=B2 B1ltB3 B2=B3

A1=B1 A2ltB2 A3ltB3


27

SOacuteDIO

170170

160160

150

140mmolL150

140

130130

120120

110110


GRUPOS





reperfusatildeo)

28






Grupo S

Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

Meacutedia

DP

508

066

101

205

122

338

60

077

87

380

103

512

160

366


P lt 005 H gt 599



Plt005

A1=A2 A1gtA3 A2gtA3

B1=B2 B1ltB3 B2ltB3

A1=B1 A2=B2 A3ltB3


29

POTAacuteSSIO

20 20

15 15

10mmolLL

10

5 5


GRUPOS





reperfusatildeo)

30







Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

Meacutedia

DP

074

007

064

021

088

007

059

007

085

033

097

042


P lt 005 H gt 599

A1=A2=A3 B1ltB2ltB3


plt005

A1=A2 A1=A3 A2ltA3

B1ltB2 B1ltB3 B2=B3

A1gtB1 A2=B2 B3=B3

31


12 12

1 1

08 08

06 06

04 04

02 02

0 0 A1 A2 A3 B2 B3B1

GRUPOS






32







Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

Meacutedia

DP

084

014

115

007

120

021

103

049

070

014

087

007


P lt 005 H gt 599



plt005

A1=A2 A1=A3 A2=A3

B1gtB2 B1=B3 B2=B3

A1=B1 A2gtB2 A3=B3

33


16 1614 1412 12

1 1

08 0806 0604 0402 02

0 0 A1 A2 A3 B1 B2 B3

GRUPOS






34







Grupo S

Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

MD

DP

98

198

1186

240

1416

455

1038

154

1419

372

1635

165

1557

254


P lt 005 H gt 599

A1ltA2gtA3 B1=B2=B3


plt005

A1=A2 A1=A3 A2gtA3

B1=B2 B1=B3 B2=B3

A1=B1 A2=B2 A3ltB3


35


02468

101214161820

02468101214161820


CASPASE-3


36





37





38





5 DISCUSSAtildeO






















45






40

































41









necrose111314
























42

































43
































44

































45

































46



















PTX














47

































48














muscular



















49












rins21-2868







ser considerada













50





























51





























6 CONCLUSOtildeES 1

2

3











667















54
















55















56















57























Med 1997 12636-47

APEcircNDICE

PROTOCOLO







______________________________________________________________________




______________________________________________________________________


______________________________________________________________________

______________________________________________________________________


____________________________________________________________

____________________________________________________________

____________________________________________________________

60






Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3

680 709 668 828 982 639

6383 7458 2234 2111 1433 1109 1644 1977 6253 2721

2726 7638 2987 2304 3018 2579 2561 2476 2960 2187

1058 1982 1547 1954 2497 2777 2852 1272 1289 2879

- 1510 1331 2948 6835 1118 1828 1402 1069 1894

1729 1391 1482 1251 2724 1288 3402 2146 4071 1257

1637 1971 2631 1158 1728 7512 2586 1832 1622 1835

MD DP

75100 13079

333230 238439

314360 160457

201070 70543

221500 182314

207410 100432

245120 183187


P lt 005 H gt 599 A1=A2=A3 B1=B2=B3




61






Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3 53

52 55 57 45 58

67 65 62 51 53 66 42 80

120 47

65 45 54 42

119 74 60 66 69 61

45 72 78 54 66 55 56 58 55 47

- 72 53 83 47 45 56 46 51 47

53 58 47 59 45 50 77 69

111 54

81 88

118 67 66

162 101 93 69 60

MD DP

5323 468

6530 2225

6840 2019

5710 934

5556 1323

6230 1972

9050 3096




A1=A2 A1=A3 A2=A3 A1=B1 A2=B2 A3ltB3


62






Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3 07

10 07 07 06 07

15 16 14 07 08 05 07 06 12 06

11 09 10 12 09 10 13 10 08 14

09 09 08 08 08 08 07 08 08 06

- 11 13 14 11 18 12 10 11 10

09 09 10 10 02 08 07 13 10 19

24 23 23 23 21 27 31 27 12 17

MD DP

073 014

096 042

106 019

079 009

122 025

097 043

228 054






63






Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3

142 144 142 139 142 138

158 158 162 158 152 143 150 145 143 147

149 151 132 147 146 150 147 153 150 151

152 156 151 152 152 153 147 141 148 148

- 159 151 152 152 154 155 155 154 154

155 154 156 152 164 155 147 162 163 144

164 161 158 158 165 154 160 158 160 162

MD DP

14117 223

15160 700

14760 590

15000 420

15400 230

15520 660

16000 323


P lt 005 H gt 599

A1=A2=A3 B1ltB2ltB3


plt 005

A1=A2 A1=A3 A2=A3

B1=B2 B1ltB3 B2=B3

A1=B1 A2ltB2 A3ltB3


64






reperfusatildeo)

-1

Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3

54 51 53 46 41 60

129 141 108 93 81 78 91 85

104 100

119 111 103 73

109 128 203 118 110 144

56 52 72 51 60 65 53 57 67 70

- 77

174 108 77 88 94 56 53 53

53 57 62 98

151 70 48

159 160 170

207 172 152 179 136 228 148 142 120 115

MD DP

508 066

101 205

122 338

60 077

87 380

103 512

160 366


P lt 005 H gt 599



Plt005

A1=A2 A1gtA3 A2gtA3

B1=B2 B1ltB3 B2ltB3

A1=B1 A2=B2 A3ltB3


65








Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3

- 06 09 07 08 11 06 07 08 07 05

07 09 04 06 09 07 04 07 07 04

08 07 09 08 06 13 10 12 06 09

- 05 07 06 06 06 04 06 07 06

06 06 07 10 10 07 14 05 14 06

06 08 12 11 06 06 12 11 13 12

MD DP

- -

074 007

064 021

088 007

059 007

085 033

097 042


P lt 005 H gt 599

A1=A2=A3 B1ltB2ltB3


plt005

A1=A2 A1=A3 A2ltA3

B1ltB2 B1ltB3 B2=B3

A1gtB1 A2=B2 B3=B3

66







Grupo S

A

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3

- 05 07 10 06 09 05 11 14 10 07

07 14 18 14 08 07 14 17 10 06

07 15 07 25 21 09 08 09 19 10

- 16 11 08 08 16 08 08 08 09

05 06 04 04 06 08 08 14 09 07

06 08 12 12 06 11 12 06 09 05

MD DP

- -

084 014

115 007

120 021

103 049

070 014

087 007


P lt 005 H gt 599



A1=A2 A1=A3 A2=A3 B1gtB2 B1=B3 B2=B3

A1=B1 A2gtB2 A3=B3

67








Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3

824 803 951 777

1140 1254

1247 940

1273 1283 1054 1670 809

1364 1104 1116

1891 2430 979

1231 1193 1044 1329 1371 1644 1049

1274 1173 737

1129 1039 879

1136 970

1016 1029

- 1673 1494 1527 1297 1816 1189 1924 763

1084

1526 1606 1453 1576 1759 1344 1757 1874 1779 1679

1853 1620 1673 1720 1269 1749 1794 1123 1316 1449

MD DP

98 198

1186 240

1416 455

1038 154

1419 372

1635 165

1557 254


P lt 005 H gt 599

A1ltA2gtA3 B1=B2=B3




68






Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3 486

184 154 100 96 275

522 694 385 379 431 640 456

1206 1237 1368

405 582 225 206 285 458 367 394 391 402

281 429 403 340 489 756 245 218 308 392

- 538 319 884 401 130 372 283 276 417

261 268 220 741 812 379 422 344 837 349

29 13 25 10 13 15 35 37

289 125

MD DP

21583 14772

73180 38730

37150 11110

38610 15530

40222 21297

46320 23868

5910 8752


P lt 005 H gt 599





69






Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3 65

56 72 56 50 60

193 235 112 70

103 120 75

200 253 286

94 240 60 64 71

203 77 81

100 163

66 104 80 99

130 218 64 70

150 180

- 83 67

288 152 69 53 47 65 74

47 40 50

138 135 90 98 53

200 180

80 10 25 10 20 97 63 82 48 84

MD DP

5983 776

16470 7824

11530 6368

11610 5260

9980 7990

10310 5792

5190 3358


P lt 005 H gt 599

A1=A2=A3 B1=B2=B3




HOMENAGEM










AGRADECIMENTOS














trabalho













aulas ministradas























LISTA DE FIGURAS




9



isquemia

9



12




400x)

13




400x)

14



16



16



17




36




36




400x)

37




37



400x)

38




38

LISTA DE TABELAS







20







22







24







26







28









30








32









34








da reperfusatildeo)

21







da reperfusatildeo)

23







da reperfusatildeo)

25







da reperfusatildeo)

27







da reperfusatildeo)

29









31








da reperfusatildeo)

33









35




Ca++ = Caacutelcio




dL = decilitro



g = grama



K+ = Potaacutessio

Kg = quilograma

L = litro

mg = miligrama

mL = mililitros


Na+= Soacutedio

PTX = Pentoxifilina





RESUMO
























ABSTRACT

























periods

SUMAacuteRIO


2 OBJETIVOS 4

3 MEacuteTODOS 5

4 RESULTADOS 19

5 DISCUSSAtildeO 39




APEcircNDICE 59





isquecircmico3-8













celular8-10







agrave isquemia5-10






2

































3

























apoptose

2 OBJETIVOS

Geral


rim de ratos

Especiacutefico



3 MEacuteTODOS







Amostra


















6



reperfusatildeo



reperfusatildeo










Procedimentos







palpebral




7

Figu


Ratos N-66

GRUPO A n=30


Simulado n=6

GRUPO B n=30


A1 n=10


A2 n=10


B3 n=10


B2 n=10


B1 n=10


A 3 n=10










cavidade abdominal

8





















aberto e retirado







9




10



























11























12
















13

A



B

D mento e com

14


















iacutemica














15








PBS pH 74























16











17

B









A








a ImageLABreg

18











4 RESULTADOS























6 e graacutefico 6




20









Grupo S

Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

Meacutedia

DP

75100

13079

333230

238439

314360

160457

201070

70543

221500

182314

207410

100432

245120

183187


P lt 005 H gt 599

A1=A2=A3 B1=B2=B3


Plt005

A1 =A2 A1=A3 A2gtA3

B1=B2 B1=B3 B2=B3

A1=B1 A2gtB2 A3=B3


21

CPK

6000 6000

5000 5000

3UL 4000

000

4000

3000

2000 2000

1000 1000


GRUPOS





22






Grupo S

Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

Meacutedia

DP

5323

468

6530

2225

6840

2019

5710

934

5556

1323

6230

1972

9050

3096


P lt 005 H gt 599

A1=A2=A3 B1ltB2ltB3


Plt005

A1=A2 A1=A3 A2=A3


A1=B1 A2=B2 A3ltB3


23

UREacuteIA

140 140

120 120

100 100

80 80mgdL

60 6040 40

20 20

0 0


GRUPOS





24






Grupo S

Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

Meacutedia

DP

073

014

096

042

106

019

079

009

122

025

097

043

228

054


P lt 005 H gt 599



Plt005

A1=A2 A1=A3 A2ltA3


A1=B1 A2=B2 A3ltB3


25

CREATININA

3 3

25 25

2

15

2mgdLL

15

1 1

05 05

0 0


GRUPOS





reperfusatildeo)

26






Grupo S

Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

Meacutedia

DP

14117

223

15160

700

14760

590

15000

420

15400

230

15520

660

16000

323


P lt 005 H gt 599

A1=A2=A3 B1ltB2ltB3


plt 005

A1=A2 A1=A3 A2=A3

B1=B2 B1ltB3 B2=B3

A1=B1 A2ltB2 A3ltB3


27

SOacuteDIO

170170

160160

150

140mmolL150

140

130130

120120

110110


GRUPOS





reperfusatildeo)

28






Grupo S

Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

Meacutedia

DP

508

066

101

205

122

338

60

077

87

380

103

512

160

366


P lt 005 H gt 599



Plt005

A1=A2 A1gtA3 A2gtA3

B1=B2 B1ltB3 B2ltB3

A1=B1 A2=B2 A3ltB3


29

POTAacuteSSIO

20 20

15 15

10mmolLL

10

5 5


GRUPOS





reperfusatildeo)

30







Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

Meacutedia

DP

074

007

064

021

088

007

059

007

085

033

097

042


P lt 005 H gt 599

A1=A2=A3 B1ltB2ltB3


plt005

A1=A2 A1=A3 A2ltA3

B1ltB2 B1ltB3 B2=B3

A1gtB1 A2=B2 B3=B3

31


12 12

1 1

08 08

06 06

04 04

02 02

0 0 A1 A2 A3 B2 B3B1

GRUPOS






32







Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

Meacutedia

DP

084

014

115

007

120

021

103

049

070

014

087

007


P lt 005 H gt 599



plt005

A1=A2 A1=A3 A2=A3

B1gtB2 B1=B3 B2=B3

A1=B1 A2gtB2 A3=B3

33


16 1614 1412 12

1 1

08 0806 0604 0402 02

0 0 A1 A2 A3 B1 B2 B3

GRUPOS






34







Grupo S

Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

MD

DP

98

198

1186

240

1416

455

1038

154

1419

372

1635

165

1557

254


P lt 005 H gt 599

A1ltA2gtA3 B1=B2=B3


plt005

A1=A2 A1=A3 A2gtA3

B1=B2 B1=B3 B2=B3

A1=B1 A2=B2 A3ltB3


35


02468

101214161820

02468101214161820


CASPASE-3


36





37





38





5 DISCUSSAtildeO






















45






40

































41









necrose111314
























42

































43
































44

































45

































46



















PTX














47

































48














muscular



















49












rins21-2868







ser considerada













50





























51





























6 CONCLUSOtildeES 1

2

3











667















54
















55















56















57























Med 1997 12636-47

APEcircNDICE

PROTOCOLO







______________________________________________________________________




______________________________________________________________________


______________________________________________________________________

______________________________________________________________________


____________________________________________________________

____________________________________________________________

____________________________________________________________

60






Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3

680 709 668 828 982 639

6383 7458 2234 2111 1433 1109 1644 1977 6253 2721

2726 7638 2987 2304 3018 2579 2561 2476 2960 2187

1058 1982 1547 1954 2497 2777 2852 1272 1289 2879

- 1510 1331 2948 6835 1118 1828 1402 1069 1894

1729 1391 1482 1251 2724 1288 3402 2146 4071 1257

1637 1971 2631 1158 1728 7512 2586 1832 1622 1835

MD DP

75100 13079

333230 238439

314360 160457

201070 70543

221500 182314

207410 100432

245120 183187


P lt 005 H gt 599 A1=A2=A3 B1=B2=B3




61






Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3 53

52 55 57 45 58

67 65 62 51 53 66 42 80

120 47

65 45 54 42

119 74 60 66 69 61

45 72 78 54 66 55 56 58 55 47

- 72 53 83 47 45 56 46 51 47

53 58 47 59 45 50 77 69

111 54

81 88

118 67 66

162 101 93 69 60

MD DP

5323 468

6530 2225

6840 2019

5710 934

5556 1323

6230 1972

9050 3096




A1=A2 A1=A3 A2=A3 A1=B1 A2=B2 A3ltB3


62






Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3 07

10 07 07 06 07

15 16 14 07 08 05 07 06 12 06

11 09 10 12 09 10 13 10 08 14

09 09 08 08 08 08 07 08 08 06

- 11 13 14 11 18 12 10 11 10

09 09 10 10 02 08 07 13 10 19

24 23 23 23 21 27 31 27 12 17

MD DP

073 014

096 042

106 019

079 009

122 025

097 043

228 054






63






Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3

142 144 142 139 142 138

158 158 162 158 152 143 150 145 143 147

149 151 132 147 146 150 147 153 150 151

152 156 151 152 152 153 147 141 148 148

- 159 151 152 152 154 155 155 154 154

155 154 156 152 164 155 147 162 163 144

164 161 158 158 165 154 160 158 160 162

MD DP

14117 223

15160 700

14760 590

15000 420

15400 230

15520 660

16000 323


P lt 005 H gt 599

A1=A2=A3 B1ltB2ltB3


plt 005

A1=A2 A1=A3 A2=A3

B1=B2 B1ltB3 B2=B3

A1=B1 A2ltB2 A3ltB3


64






reperfusatildeo)

-1

Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3

54 51 53 46 41 60

129 141 108 93 81 78 91 85

104 100

119 111 103 73

109 128 203 118 110 144

56 52 72 51 60 65 53 57 67 70

- 77

174 108 77 88 94 56 53 53

53 57 62 98

151 70 48

159 160 170

207 172 152 179 136 228 148 142 120 115

MD DP

508 066

101 205

122 338

60 077

87 380

103 512

160 366


P lt 005 H gt 599



Plt005

A1=A2 A1gtA3 A2gtA3

B1=B2 B1ltB3 B2ltB3

A1=B1 A2=B2 A3ltB3


65








Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3

- 06 09 07 08 11 06 07 08 07 05

07 09 04 06 09 07 04 07 07 04

08 07 09 08 06 13 10 12 06 09

- 05 07 06 06 06 04 06 07 06

06 06 07 10 10 07 14 05 14 06

06 08 12 11 06 06 12 11 13 12

MD DP

- -

074 007

064 021

088 007

059 007

085 033

097 042


P lt 005 H gt 599

A1=A2=A3 B1ltB2ltB3


plt005

A1=A2 A1=A3 A2ltA3

B1ltB2 B1ltB3 B2=B3

A1gtB1 A2=B2 B3=B3

66







Grupo S

A

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3

- 05 07 10 06 09 05 11 14 10 07

07 14 18 14 08 07 14 17 10 06

07 15 07 25 21 09 08 09 19 10

- 16 11 08 08 16 08 08 08 09

05 06 04 04 06 08 08 14 09 07

06 08 12 12 06 11 12 06 09 05

MD DP

- -

084 014

115 007

120 021

103 049

070 014

087 007


P lt 005 H gt 599



A1=A2 A1=A3 A2=A3 B1gtB2 B1=B3 B2=B3

A1=B1 A2gtB2 A3=B3

67








Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3

824 803 951 777

1140 1254

1247 940

1273 1283 1054 1670 809

1364 1104 1116

1891 2430 979

1231 1193 1044 1329 1371 1644 1049

1274 1173 737

1129 1039 879

1136 970

1016 1029

- 1673 1494 1527 1297 1816 1189 1924 763

1084

1526 1606 1453 1576 1759 1344 1757 1874 1779 1679

1853 1620 1673 1720 1269 1749 1794 1123 1316 1449

MD DP

98 198

1186 240

1416 455

1038 154

1419 372

1635 165

1557 254


P lt 005 H gt 599

A1ltA2gtA3 B1=B2=B3




68






Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3 486

184 154 100 96 275

522 694 385 379 431 640 456

1206 1237 1368

405 582 225 206 285 458 367 394 391 402

281 429 403 340 489 756 245 218 308 392

- 538 319 884 401 130 372 283 276 417

261 268 220 741 812 379 422 344 837 349

29 13 25 10 13 15 35 37

289 125

MD DP

21583 14772

73180 38730

37150 11110

38610 15530

40222 21297

46320 23868

5910 8752


P lt 005 H gt 599





69






Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3 65

56 72 56 50 60

193 235 112 70

103 120 75

200 253 286

94 240 60 64 71

203 77 81

100 163

66 104 80 99

130 218 64 70

150 180

- 83 67

288 152 69 53 47 65 74

47 40 50

138 135 90 98 53

200 180

80 10 25 10 20 97 63 82 48 84

MD DP

5983 776

16470 7824

11530 6368

11610 5260

9980 7990

10310 5792

5190 3358


P lt 005 H gt 599

A1=A2=A3 B1=B2=B3









AGRADECIMENTOS














trabalho













aulas ministradas























LISTA DE FIGURAS




9



isquemia

9



12




400x)

13




400x)

14



16



16



17




36




36




400x)

37




37



400x)

38




38

LISTA DE TABELAS







20







22







24







26







28









30








32









34








da reperfusatildeo)

21







da reperfusatildeo)

23







da reperfusatildeo)

25







da reperfusatildeo)

27







da reperfusatildeo)

29









31








da reperfusatildeo)

33









35




Ca++ = Caacutelcio




dL = decilitro



g = grama



K+ = Potaacutessio

Kg = quilograma

L = litro

mg = miligrama

mL = mililitros


Na+= Soacutedio

PTX = Pentoxifilina





RESUMO
























ABSTRACT

























periods

SUMAacuteRIO


2 OBJETIVOS 4

3 MEacuteTODOS 5

4 RESULTADOS 19

5 DISCUSSAtildeO 39




APEcircNDICE 59





isquecircmico3-8













celular8-10







agrave isquemia5-10






2

































3

























apoptose

2 OBJETIVOS

Geral


rim de ratos

Especiacutefico



3 MEacuteTODOS







Amostra


















6



reperfusatildeo



reperfusatildeo










Procedimentos







palpebral




7

Figu


Ratos N-66

GRUPO A n=30


Simulado n=6

GRUPO B n=30


A1 n=10


A2 n=10


B3 n=10


B2 n=10


B1 n=10


A 3 n=10










cavidade abdominal

8





















aberto e retirado







9




10



























11























12
















13

A



B

D mento e com

14


















iacutemica














15








PBS pH 74























16











17

B









A








a ImageLABreg

18











4 RESULTADOS























6 e graacutefico 6




20









Grupo S

Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

Meacutedia

DP

75100

13079

333230

238439

314360

160457

201070

70543

221500

182314

207410

100432

245120

183187


P lt 005 H gt 599

A1=A2=A3 B1=B2=B3


Plt005

A1 =A2 A1=A3 A2gtA3

B1=B2 B1=B3 B2=B3

A1=B1 A2gtB2 A3=B3


21

CPK

6000 6000

5000 5000

3UL 4000

000

4000

3000

2000 2000

1000 1000


GRUPOS





22






Grupo S

Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

Meacutedia

DP

5323

468

6530

2225

6840

2019

5710

934

5556

1323

6230

1972

9050

3096


P lt 005 H gt 599

A1=A2=A3 B1ltB2ltB3


Plt005

A1=A2 A1=A3 A2=A3


A1=B1 A2=B2 A3ltB3


23

UREacuteIA

140 140

120 120

100 100

80 80mgdL

60 6040 40

20 20

0 0


GRUPOS





24






Grupo S

Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

Meacutedia

DP

073

014

096

042

106

019

079

009

122

025

097

043

228

054


P lt 005 H gt 599



Plt005

A1=A2 A1=A3 A2ltA3


A1=B1 A2=B2 A3ltB3


25

CREATININA

3 3

25 25

2

15

2mgdLL

15

1 1

05 05

0 0


GRUPOS





reperfusatildeo)

26






Grupo S

Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

Meacutedia

DP

14117

223

15160

700

14760

590

15000

420

15400

230

15520

660

16000

323


P lt 005 H gt 599

A1=A2=A3 B1ltB2ltB3


plt 005

A1=A2 A1=A3 A2=A3

B1=B2 B1ltB3 B2=B3

A1=B1 A2ltB2 A3ltB3


27

SOacuteDIO

170170

160160

150

140mmolL150

140

130130

120120

110110


GRUPOS





reperfusatildeo)

28






Grupo S

Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

Meacutedia

DP

508

066

101

205

122

338

60

077

87

380

103

512

160

366


P lt 005 H gt 599



Plt005

A1=A2 A1gtA3 A2gtA3

B1=B2 B1ltB3 B2ltB3

A1=B1 A2=B2 A3ltB3


29

POTAacuteSSIO

20 20

15 15

10mmolLL

10

5 5


GRUPOS





reperfusatildeo)

30







Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

Meacutedia

DP

074

007

064

021

088

007

059

007

085

033

097

042


P lt 005 H gt 599

A1=A2=A3 B1ltB2ltB3


plt005

A1=A2 A1=A3 A2ltA3

B1ltB2 B1ltB3 B2=B3

A1gtB1 A2=B2 B3=B3

31


12 12

1 1

08 08

06 06

04 04

02 02

0 0 A1 A2 A3 B2 B3B1

GRUPOS






32







Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

Meacutedia

DP

084

014

115

007

120

021

103

049

070

014

087

007


P lt 005 H gt 599



plt005

A1=A2 A1=A3 A2=A3

B1gtB2 B1=B3 B2=B3

A1=B1 A2gtB2 A3=B3

33


16 1614 1412 12

1 1

08 0806 0604 0402 02

0 0 A1 A2 A3 B1 B2 B3

GRUPOS






34







Grupo S

Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

MD

DP

98

198

1186

240

1416

455

1038

154

1419

372

1635

165

1557

254


P lt 005 H gt 599

A1ltA2gtA3 B1=B2=B3


plt005

A1=A2 A1=A3 A2gtA3

B1=B2 B1=B3 B2=B3

A1=B1 A2=B2 A3ltB3


35


02468

101214161820

02468101214161820


CASPASE-3


36





37





38





5 DISCUSSAtildeO






















45






40

































41









necrose111314
























42

































43
































44

































45

































46



















PTX














47

































48














muscular



















49












rins21-2868







ser considerada













50





























51





























6 CONCLUSOtildeES 1

2

3











667















54
















55















56















57























Med 1997 12636-47

APEcircNDICE

PROTOCOLO







______________________________________________________________________




______________________________________________________________________


______________________________________________________________________

______________________________________________________________________


____________________________________________________________

____________________________________________________________

____________________________________________________________

60






Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3

680 709 668 828 982 639

6383 7458 2234 2111 1433 1109 1644 1977 6253 2721

2726 7638 2987 2304 3018 2579 2561 2476 2960 2187

1058 1982 1547 1954 2497 2777 2852 1272 1289 2879

- 1510 1331 2948 6835 1118 1828 1402 1069 1894

1729 1391 1482 1251 2724 1288 3402 2146 4071 1257

1637 1971 2631 1158 1728 7512 2586 1832 1622 1835

MD DP

75100 13079

333230 238439

314360 160457

201070 70543

221500 182314

207410 100432

245120 183187


P lt 005 H gt 599 A1=A2=A3 B1=B2=B3




61






Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3 53

52 55 57 45 58

67 65 62 51 53 66 42 80

120 47

65 45 54 42

119 74 60 66 69 61

45 72 78 54 66 55 56 58 55 47

- 72 53 83 47 45 56 46 51 47

53 58 47 59 45 50 77 69

111 54

81 88

118 67 66

162 101 93 69 60

MD DP

5323 468

6530 2225

6840 2019

5710 934

5556 1323

6230 1972

9050 3096




A1=A2 A1=A3 A2=A3 A1=B1 A2=B2 A3ltB3


62






Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3 07

10 07 07 06 07

15 16 14 07 08 05 07 06 12 06

11 09 10 12 09 10 13 10 08 14

09 09 08 08 08 08 07 08 08 06

- 11 13 14 11 18 12 10 11 10

09 09 10 10 02 08 07 13 10 19

24 23 23 23 21 27 31 27 12 17

MD DP

073 014

096 042

106 019

079 009

122 025

097 043

228 054






63






Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3

142 144 142 139 142 138

158 158 162 158 152 143 150 145 143 147

149 151 132 147 146 150 147 153 150 151

152 156 151 152 152 153 147 141 148 148

- 159 151 152 152 154 155 155 154 154

155 154 156 152 164 155 147 162 163 144

164 161 158 158 165 154 160 158 160 162

MD DP

14117 223

15160 700

14760 590

15000 420

15400 230

15520 660

16000 323


P lt 005 H gt 599

A1=A2=A3 B1ltB2ltB3


plt 005

A1=A2 A1=A3 A2=A3

B1=B2 B1ltB3 B2=B3

A1=B1 A2ltB2 A3ltB3


64






reperfusatildeo)

-1

Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3

54 51 53 46 41 60

129 141 108 93 81 78 91 85

104 100

119 111 103 73

109 128 203 118 110 144

56 52 72 51 60 65 53 57 67 70

- 77

174 108 77 88 94 56 53 53

53 57 62 98

151 70 48

159 160 170

207 172 152 179 136 228 148 142 120 115

MD DP

508 066

101 205

122 338

60 077

87 380

103 512

160 366


P lt 005 H gt 599



Plt005

A1=A2 A1gtA3 A2gtA3

B1=B2 B1ltB3 B2ltB3

A1=B1 A2=B2 A3ltB3


65








Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3

- 06 09 07 08 11 06 07 08 07 05

07 09 04 06 09 07 04 07 07 04

08 07 09 08 06 13 10 12 06 09

- 05 07 06 06 06 04 06 07 06

06 06 07 10 10 07 14 05 14 06

06 08 12 11 06 06 12 11 13 12

MD DP

- -

074 007

064 021

088 007

059 007

085 033

097 042


P lt 005 H gt 599

A1=A2=A3 B1ltB2ltB3


plt005

A1=A2 A1=A3 A2ltA3

B1ltB2 B1ltB3 B2=B3

A1gtB1 A2=B2 B3=B3

66







Grupo S

A

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3

- 05 07 10 06 09 05 11 14 10 07

07 14 18 14 08 07 14 17 10 06

07 15 07 25 21 09 08 09 19 10

- 16 11 08 08 16 08 08 08 09

05 06 04 04 06 08 08 14 09 07

06 08 12 12 06 11 12 06 09 05

MD DP

- -

084 014

115 007

120 021

103 049

070 014

087 007


P lt 005 H gt 599



A1=A2 A1=A3 A2=A3 B1gtB2 B1=B3 B2=B3

A1=B1 A2gtB2 A3=B3

67








Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3

824 803 951 777

1140 1254

1247 940

1273 1283 1054 1670 809

1364 1104 1116

1891 2430 979

1231 1193 1044 1329 1371 1644 1049

1274 1173 737

1129 1039 879

1136 970

1016 1029

- 1673 1494 1527 1297 1816 1189 1924 763

1084

1526 1606 1453 1576 1759 1344 1757 1874 1779 1679

1853 1620 1673 1720 1269 1749 1794 1123 1316 1449

MD DP

98 198

1186 240

1416 455

1038 154

1419 372

1635 165

1557 254


P lt 005 H gt 599

A1ltA2gtA3 B1=B2=B3




68






Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3 486

184 154 100 96 275

522 694 385 379 431 640 456

1206 1237 1368

405 582 225 206 285 458 367 394 391 402

281 429 403 340 489 756 245 218 308 392

- 538 319 884 401 130 372 283 276 417

261 268 220 741 812 379 422 344 837 349

29 13 25 10 13 15 35 37

289 125

MD DP

21583 14772

73180 38730

37150 11110

38610 15530

40222 21297

46320 23868

5910 8752


P lt 005 H gt 599





69






Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3 65

56 72 56 50 60

193 235 112 70

103 120 75

200 253 286

94 240 60 64 71

203 77 81

100 163

66 104 80 99

130 218 64 70

150 180

- 83 67

288 152 69 53 47 65 74

47 40 50

138 135 90 98 53

200 180

80 10 25 10 20 97 63 82 48 84

MD DP

5983 776

16470 7824

11530 6368

11610 5260

9980 7990

10310 5792

5190 3358


P lt 005 H gt 599

A1=A2=A3 B1=B2=B3




AGRADECIMENTOS














trabalho













aulas ministradas























LISTA DE FIGURAS




9



isquemia

9



12




400x)

13




400x)

14



16



16



17




36




36




400x)

37




37



400x)

38




38

LISTA DE TABELAS







20







22







24







26







28









30








32









34








da reperfusatildeo)

21







da reperfusatildeo)

23







da reperfusatildeo)

25







da reperfusatildeo)

27







da reperfusatildeo)

29









31








da reperfusatildeo)

33









35




Ca++ = Caacutelcio




dL = decilitro



g = grama



K+ = Potaacutessio

Kg = quilograma

L = litro

mg = miligrama

mL = mililitros


Na+= Soacutedio

PTX = Pentoxifilina





RESUMO
























ABSTRACT

























periods

SUMAacuteRIO


2 OBJETIVOS 4

3 MEacuteTODOS 5

4 RESULTADOS 19

5 DISCUSSAtildeO 39




APEcircNDICE 59





isquecircmico3-8













celular8-10







agrave isquemia5-10






2

































3

























apoptose

2 OBJETIVOS

Geral


rim de ratos

Especiacutefico



3 MEacuteTODOS







Amostra


















6



reperfusatildeo



reperfusatildeo










Procedimentos







palpebral




7

Figu


Ratos N-66

GRUPO A n=30


Simulado n=6

GRUPO B n=30


A1 n=10


A2 n=10


B3 n=10


B2 n=10


B1 n=10


A 3 n=10










cavidade abdominal

8





















aberto e retirado







9




10



























11























12
















13

A



B

D mento e com

14


















iacutemica














15








PBS pH 74























16











17

B









A








a ImageLABreg

18











4 RESULTADOS























6 e graacutefico 6




20









Grupo S

Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

Meacutedia

DP

75100

13079

333230

238439

314360

160457

201070

70543

221500

182314

207410

100432

245120

183187


P lt 005 H gt 599

A1=A2=A3 B1=B2=B3


Plt005

A1 =A2 A1=A3 A2gtA3

B1=B2 B1=B3 B2=B3

A1=B1 A2gtB2 A3=B3


21

CPK

6000 6000

5000 5000

3UL 4000

000

4000

3000

2000 2000

1000 1000


GRUPOS





22






Grupo S

Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

Meacutedia

DP

5323

468

6530

2225

6840

2019

5710

934

5556

1323

6230

1972

9050

3096


P lt 005 H gt 599

A1=A2=A3 B1ltB2ltB3


Plt005

A1=A2 A1=A3 A2=A3


A1=B1 A2=B2 A3ltB3


23

UREacuteIA

140 140

120 120

100 100

80 80mgdL

60 6040 40

20 20

0 0


GRUPOS





24






Grupo S

Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

Meacutedia

DP

073

014

096

042

106

019

079

009

122

025

097

043

228

054


P lt 005 H gt 599



Plt005

A1=A2 A1=A3 A2ltA3


A1=B1 A2=B2 A3ltB3


25

CREATININA

3 3

25 25

2

15

2mgdLL

15

1 1

05 05

0 0


GRUPOS





reperfusatildeo)

26






Grupo S

Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

Meacutedia

DP

14117

223

15160

700

14760

590

15000

420

15400

230

15520

660

16000

323


P lt 005 H gt 599

A1=A2=A3 B1ltB2ltB3


plt 005

A1=A2 A1=A3 A2=A3

B1=B2 B1ltB3 B2=B3

A1=B1 A2ltB2 A3ltB3


27

SOacuteDIO

170170

160160

150

140mmolL150

140

130130

120120

110110


GRUPOS





reperfusatildeo)

28






Grupo S

Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

Meacutedia

DP

508

066

101

205

122

338

60

077

87

380

103

512

160

366


P lt 005 H gt 599



Plt005

A1=A2 A1gtA3 A2gtA3

B1=B2 B1ltB3 B2ltB3

A1=B1 A2=B2 A3ltB3


29

POTAacuteSSIO

20 20

15 15

10mmolLL

10

5 5


GRUPOS





reperfusatildeo)

30







Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

Meacutedia

DP

074

007

064

021

088

007

059

007

085

033

097

042


P lt 005 H gt 599

A1=A2=A3 B1ltB2ltB3


plt005

A1=A2 A1=A3 A2ltA3

B1ltB2 B1ltB3 B2=B3

A1gtB1 A2=B2 B3=B3

31


12 12

1 1

08 08

06 06

04 04

02 02

0 0 A1 A2 A3 B2 B3B1

GRUPOS






32







Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

Meacutedia

DP

084

014

115

007

120

021

103

049

070

014

087

007


P lt 005 H gt 599



plt005

A1=A2 A1=A3 A2=A3

B1gtB2 B1=B3 B2=B3

A1=B1 A2gtB2 A3=B3

33


16 1614 1412 12

1 1

08 0806 0604 0402 02

0 0 A1 A2 A3 B1 B2 B3

GRUPOS






34







Grupo S

Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

MD

DP

98

198

1186

240

1416

455

1038

154

1419

372

1635

165

1557

254


P lt 005 H gt 599

A1ltA2gtA3 B1=B2=B3


plt005

A1=A2 A1=A3 A2gtA3

B1=B2 B1=B3 B2=B3

A1=B1 A2=B2 A3ltB3


35


02468

101214161820

02468101214161820


CASPASE-3


36





37





38





5 DISCUSSAtildeO






















45






40

































41









necrose111314
























42

































43
































44

































45

































46



















PTX














47

































48














muscular



















49












rins21-2868







ser considerada













50





























51





























6 CONCLUSOtildeES 1

2

3











667















54
















55















56















57























Med 1997 12636-47

APEcircNDICE

PROTOCOLO







______________________________________________________________________




______________________________________________________________________


______________________________________________________________________

______________________________________________________________________


____________________________________________________________

____________________________________________________________

____________________________________________________________

60






Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3

680 709 668 828 982 639

6383 7458 2234 2111 1433 1109 1644 1977 6253 2721

2726 7638 2987 2304 3018 2579 2561 2476 2960 2187

1058 1982 1547 1954 2497 2777 2852 1272 1289 2879

- 1510 1331 2948 6835 1118 1828 1402 1069 1894

1729 1391 1482 1251 2724 1288 3402 2146 4071 1257

1637 1971 2631 1158 1728 7512 2586 1832 1622 1835

MD DP

75100 13079

333230 238439

314360 160457

201070 70543

221500 182314

207410 100432

245120 183187


P lt 005 H gt 599 A1=A2=A3 B1=B2=B3




61






Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3 53

52 55 57 45 58

67 65 62 51 53 66 42 80

120 47

65 45 54 42

119 74 60 66 69 61

45 72 78 54 66 55 56 58 55 47

- 72 53 83 47 45 56 46 51 47

53 58 47 59 45 50 77 69

111 54

81 88

118 67 66

162 101 93 69 60

MD DP

5323 468

6530 2225

6840 2019

5710 934

5556 1323

6230 1972

9050 3096




A1=A2 A1=A3 A2=A3 A1=B1 A2=B2 A3ltB3


62






Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3 07

10 07 07 06 07

15 16 14 07 08 05 07 06 12 06

11 09 10 12 09 10 13 10 08 14

09 09 08 08 08 08 07 08 08 06

- 11 13 14 11 18 12 10 11 10

09 09 10 10 02 08 07 13 10 19

24 23 23 23 21 27 31 27 12 17

MD DP

073 014

096 042

106 019

079 009

122 025

097 043

228 054






63






Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3

142 144 142 139 142 138

158 158 162 158 152 143 150 145 143 147

149 151 132 147 146 150 147 153 150 151

152 156 151 152 152 153 147 141 148 148

- 159 151 152 152 154 155 155 154 154

155 154 156 152 164 155 147 162 163 144

164 161 158 158 165 154 160 158 160 162

MD DP

14117 223

15160 700

14760 590

15000 420

15400 230

15520 660

16000 323


P lt 005 H gt 599

A1=A2=A3 B1ltB2ltB3


plt 005

A1=A2 A1=A3 A2=A3

B1=B2 B1ltB3 B2=B3

A1=B1 A2ltB2 A3ltB3


64






reperfusatildeo)

-1

Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3

54 51 53 46 41 60

129 141 108 93 81 78 91 85

104 100

119 111 103 73

109 128 203 118 110 144

56 52 72 51 60 65 53 57 67 70

- 77

174 108 77 88 94 56 53 53

53 57 62 98

151 70 48

159 160 170

207 172 152 179 136 228 148 142 120 115

MD DP

508 066

101 205

122 338

60 077

87 380

103 512

160 366


P lt 005 H gt 599



Plt005

A1=A2 A1gtA3 A2gtA3

B1=B2 B1ltB3 B2ltB3

A1=B1 A2=B2 A3ltB3


65








Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3

- 06 09 07 08 11 06 07 08 07 05

07 09 04 06 09 07 04 07 07 04

08 07 09 08 06 13 10 12 06 09

- 05 07 06 06 06 04 06 07 06

06 06 07 10 10 07 14 05 14 06

06 08 12 11 06 06 12 11 13 12

MD DP

- -

074 007

064 021

088 007

059 007

085 033

097 042


P lt 005 H gt 599

A1=A2=A3 B1ltB2ltB3


plt005

A1=A2 A1=A3 A2ltA3

B1ltB2 B1ltB3 B2=B3

A1gtB1 A2=B2 B3=B3

66







Grupo S

A

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3

- 05 07 10 06 09 05 11 14 10 07

07 14 18 14 08 07 14 17 10 06

07 15 07 25 21 09 08 09 19 10

- 16 11 08 08 16 08 08 08 09

05 06 04 04 06 08 08 14 09 07

06 08 12 12 06 11 12 06 09 05

MD DP

- -

084 014

115 007

120 021

103 049

070 014

087 007


P lt 005 H gt 599



A1=A2 A1=A3 A2=A3 B1gtB2 B1=B3 B2=B3

A1=B1 A2gtB2 A3=B3

67








Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3

824 803 951 777

1140 1254

1247 940

1273 1283 1054 1670 809

1364 1104 1116

1891 2430 979

1231 1193 1044 1329 1371 1644 1049

1274 1173 737

1129 1039 879

1136 970

1016 1029

- 1673 1494 1527 1297 1816 1189 1924 763

1084

1526 1606 1453 1576 1759 1344 1757 1874 1779 1679

1853 1620 1673 1720 1269 1749 1794 1123 1316 1449

MD DP

98 198

1186 240

1416 455

1038 154

1419 372

1635 165

1557 254


P lt 005 H gt 599

A1ltA2gtA3 B1=B2=B3




68






Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3 486

184 154 100 96 275

522 694 385 379 431 640 456

1206 1237 1368

405 582 225 206 285 458 367 394 391 402

281 429 403 340 489 756 245 218 308 392

- 538 319 884 401 130 372 283 276 417

261 268 220 741 812 379 422 344 837 349

29 13 25 10 13 15 35 37

289 125

MD DP

21583 14772

73180 38730

37150 11110

38610 15530

40222 21297

46320 23868

5910 8752


P lt 005 H gt 599





69






Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3 65

56 72 56 50 60

193 235 112 70

103 120 75

200 253 286

94 240 60 64 71

203 77 81

100 163

66 104 80 99

130 218 64 70

150 180

- 83 67

288 152 69 53 47 65 74

47 40 50

138 135 90 98 53

200 180

80 10 25 10 20 97 63 82 48 84

MD DP

5983 776

16470 7824

11530 6368

11610 5260

9980 7990

10310 5792

5190 3358


P lt 005 H gt 599

A1=A2=A3 B1=B2=B3









aulas ministradas























LISTA DE FIGURAS




9



isquemia

9



12




400x)

13




400x)

14



16



16



17




36




36




400x)

37




37



400x)

38




38

LISTA DE TABELAS







20







22







24







26







28









30








32









34








da reperfusatildeo)

21







da reperfusatildeo)

23







da reperfusatildeo)

25







da reperfusatildeo)

27







da reperfusatildeo)

29









31








da reperfusatildeo)

33









35




Ca++ = Caacutelcio




dL = decilitro



g = grama



K+ = Potaacutessio

Kg = quilograma

L = litro

mg = miligrama

mL = mililitros


Na+= Soacutedio

PTX = Pentoxifilina





RESUMO
























ABSTRACT

























periods

SUMAacuteRIO


2 OBJETIVOS 4

3 MEacuteTODOS 5

4 RESULTADOS 19

5 DISCUSSAtildeO 39




APEcircNDICE 59





isquecircmico3-8













celular8-10







agrave isquemia5-10






2

































3

























apoptose

2 OBJETIVOS

Geral


rim de ratos

Especiacutefico



3 MEacuteTODOS







Amostra


















6



reperfusatildeo



reperfusatildeo










Procedimentos







palpebral




7

Figu


Ratos N-66

GRUPO A n=30


Simulado n=6

GRUPO B n=30


A1 n=10


A2 n=10


B3 n=10


B2 n=10


B1 n=10


A 3 n=10










cavidade abdominal

8





















aberto e retirado







9




10



























11























12
















13

A



B

D mento e com

14


















iacutemica














15








PBS pH 74























16











17

B









A








a ImageLABreg

18











4 RESULTADOS























6 e graacutefico 6




20









Grupo S

Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

Meacutedia

DP

75100

13079

333230

238439

314360

160457

201070

70543

221500

182314

207410

100432

245120

183187


P lt 005 H gt 599

A1=A2=A3 B1=B2=B3


Plt005

A1 =A2 A1=A3 A2gtA3

B1=B2 B1=B3 B2=B3

A1=B1 A2gtB2 A3=B3


21

CPK

6000 6000

5000 5000

3UL 4000

000

4000

3000

2000 2000

1000 1000


GRUPOS





22






Grupo S

Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

Meacutedia

DP

5323

468

6530

2225

6840

2019

5710

934

5556

1323

6230

1972

9050

3096


P lt 005 H gt 599

A1=A2=A3 B1ltB2ltB3


Plt005

A1=A2 A1=A3 A2=A3


A1=B1 A2=B2 A3ltB3


23

UREacuteIA

140 140

120 120

100 100

80 80mgdL

60 6040 40

20 20

0 0


GRUPOS





24






Grupo S

Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

Meacutedia

DP

073

014

096

042

106

019

079

009

122

025

097

043

228

054


P lt 005 H gt 599



Plt005

A1=A2 A1=A3 A2ltA3


A1=B1 A2=B2 A3ltB3


25

CREATININA

3 3

25 25

2

15

2mgdLL

15

1 1

05 05

0 0


GRUPOS





reperfusatildeo)

26






Grupo S

Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

Meacutedia

DP

14117

223

15160

700

14760

590

15000

420

15400

230

15520

660

16000

323


P lt 005 H gt 599

A1=A2=A3 B1ltB2ltB3


plt 005

A1=A2 A1=A3 A2=A3

B1=B2 B1ltB3 B2=B3

A1=B1 A2ltB2 A3ltB3


27

SOacuteDIO

170170

160160

150

140mmolL150

140

130130

120120

110110


GRUPOS





reperfusatildeo)

28






Grupo S

Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

Meacutedia

DP

508

066

101

205

122

338

60

077

87

380

103

512

160

366


P lt 005 H gt 599



Plt005

A1=A2 A1gtA3 A2gtA3

B1=B2 B1ltB3 B2ltB3

A1=B1 A2=B2 A3ltB3


29

POTAacuteSSIO

20 20

15 15

10mmolLL

10

5 5


GRUPOS





reperfusatildeo)

30







Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

Meacutedia

DP

074

007

064

021

088

007

059

007

085

033

097

042


P lt 005 H gt 599

A1=A2=A3 B1ltB2ltB3


plt005

A1=A2 A1=A3 A2ltA3

B1ltB2 B1ltB3 B2=B3

A1gtB1 A2=B2 B3=B3

31


12 12

1 1

08 08

06 06

04 04

02 02

0 0 A1 A2 A3 B2 B3B1

GRUPOS






32







Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

Meacutedia

DP

084

014

115

007

120

021

103

049

070

014

087

007


P lt 005 H gt 599



plt005

A1=A2 A1=A3 A2=A3

B1gtB2 B1=B3 B2=B3

A1=B1 A2gtB2 A3=B3

33


16 1614 1412 12

1 1

08 0806 0604 0402 02

0 0 A1 A2 A3 B1 B2 B3

GRUPOS






34







Grupo S

Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

MD

DP

98

198

1186

240

1416

455

1038

154

1419

372

1635

165

1557

254


P lt 005 H gt 599

A1ltA2gtA3 B1=B2=B3


plt005

A1=A2 A1=A3 A2gtA3

B1=B2 B1=B3 B2=B3

A1=B1 A2=B2 A3ltB3


35


02468

101214161820

02468101214161820


CASPASE-3


36





37





38





5 DISCUSSAtildeO






















45






40

































41









necrose111314
























42

































43
































44

































45

































46



















PTX














47

































48














muscular



















49












rins21-2868







ser considerada













50





























51





























6 CONCLUSOtildeES 1

2

3











667















54
















55















56















57























Med 1997 12636-47

APEcircNDICE

PROTOCOLO







______________________________________________________________________




______________________________________________________________________


______________________________________________________________________

______________________________________________________________________


____________________________________________________________

____________________________________________________________

____________________________________________________________

60






Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3

680 709 668 828 982 639

6383 7458 2234 2111 1433 1109 1644 1977 6253 2721

2726 7638 2987 2304 3018 2579 2561 2476 2960 2187

1058 1982 1547 1954 2497 2777 2852 1272 1289 2879

- 1510 1331 2948 6835 1118 1828 1402 1069 1894

1729 1391 1482 1251 2724 1288 3402 2146 4071 1257

1637 1971 2631 1158 1728 7512 2586 1832 1622 1835

MD DP

75100 13079

333230 238439

314360 160457

201070 70543

221500 182314

207410 100432

245120 183187


P lt 005 H gt 599 A1=A2=A3 B1=B2=B3




61






Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3 53

52 55 57 45 58

67 65 62 51 53 66 42 80

120 47

65 45 54 42

119 74 60 66 69 61

45 72 78 54 66 55 56 58 55 47

- 72 53 83 47 45 56 46 51 47

53 58 47 59 45 50 77 69

111 54

81 88

118 67 66

162 101 93 69 60

MD DP

5323 468

6530 2225

6840 2019

5710 934

5556 1323

6230 1972

9050 3096




A1=A2 A1=A3 A2=A3 A1=B1 A2=B2 A3ltB3


62






Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3 07

10 07 07 06 07

15 16 14 07 08 05 07 06 12 06

11 09 10 12 09 10 13 10 08 14

09 09 08 08 08 08 07 08 08 06

- 11 13 14 11 18 12 10 11 10

09 09 10 10 02 08 07 13 10 19

24 23 23 23 21 27 31 27 12 17

MD DP

073 014

096 042

106 019

079 009

122 025

097 043

228 054






63






Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3

142 144 142 139 142 138

158 158 162 158 152 143 150 145 143 147

149 151 132 147 146 150 147 153 150 151

152 156 151 152 152 153 147 141 148 148

- 159 151 152 152 154 155 155 154 154

155 154 156 152 164 155 147 162 163 144

164 161 158 158 165 154 160 158 160 162

MD DP

14117 223

15160 700

14760 590

15000 420

15400 230

15520 660

16000 323


P lt 005 H gt 599

A1=A2=A3 B1ltB2ltB3


plt 005

A1=A2 A1=A3 A2=A3

B1=B2 B1ltB3 B2=B3

A1=B1 A2ltB2 A3ltB3


64






reperfusatildeo)

-1

Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3

54 51 53 46 41 60

129 141 108 93 81 78 91 85

104 100

119 111 103 73

109 128 203 118 110 144

56 52 72 51 60 65 53 57 67 70

- 77

174 108 77 88 94 56 53 53

53 57 62 98

151 70 48

159 160 170

207 172 152 179 136 228 148 142 120 115

MD DP

508 066

101 205

122 338

60 077

87 380

103 512

160 366


P lt 005 H gt 599



Plt005

A1=A2 A1gtA3 A2gtA3

B1=B2 B1ltB3 B2ltB3

A1=B1 A2=B2 A3ltB3


65








Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3

- 06 09 07 08 11 06 07 08 07 05

07 09 04 06 09 07 04 07 07 04

08 07 09 08 06 13 10 12 06 09

- 05 07 06 06 06 04 06 07 06

06 06 07 10 10 07 14 05 14 06

06 08 12 11 06 06 12 11 13 12

MD DP

- -

074 007

064 021

088 007

059 007

085 033

097 042


P lt 005 H gt 599

A1=A2=A3 B1ltB2ltB3


plt005

A1=A2 A1=A3 A2ltA3

B1ltB2 B1ltB3 B2=B3

A1gtB1 A2=B2 B3=B3

66







Grupo S

A

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3

- 05 07 10 06 09 05 11 14 10 07

07 14 18 14 08 07 14 17 10 06

07 15 07 25 21 09 08 09 19 10

- 16 11 08 08 16 08 08 08 09

05 06 04 04 06 08 08 14 09 07

06 08 12 12 06 11 12 06 09 05

MD DP

- -

084 014

115 007

120 021

103 049

070 014

087 007


P lt 005 H gt 599



A1=A2 A1=A3 A2=A3 B1gtB2 B1=B3 B2=B3

A1=B1 A2gtB2 A3=B3

67








Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3

824 803 951 777

1140 1254

1247 940

1273 1283 1054 1670 809

1364 1104 1116

1891 2430 979

1231 1193 1044 1329 1371 1644 1049

1274 1173 737

1129 1039 879

1136 970

1016 1029

- 1673 1494 1527 1297 1816 1189 1924 763

1084

1526 1606 1453 1576 1759 1344 1757 1874 1779 1679

1853 1620 1673 1720 1269 1749 1794 1123 1316 1449

MD DP

98 198

1186 240

1416 455

1038 154

1419 372

1635 165

1557 254


P lt 005 H gt 599

A1ltA2gtA3 B1=B2=B3




68






Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3 486

184 154 100 96 275

522 694 385 379 431 640 456

1206 1237 1368

405 582 225 206 285 458 367 394 391 402

281 429 403 340 489 756 245 218 308 392

- 538 319 884 401 130 372 283 276 417

261 268 220 741 812 379 422 344 837 349

29 13 25 10 13 15 35 37

289 125

MD DP

21583 14772

73180 38730

37150 11110

38610 15530

40222 21297

46320 23868

5910 8752


P lt 005 H gt 599





69






Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3 65

56 72 56 50 60

193 235 112 70

103 120 75

200 253 286

94 240 60 64 71

203 77 81

100 163

66 104 80 99

130 218 64 70

150 180

- 83 67

288 152 69 53 47 65 74

47 40 50

138 135 90 98 53

200 180

80 10 25 10 20 97 63 82 48 84

MD DP

5983 776

16470 7824

11530 6368

11610 5260

9980 7990

10310 5792

5190 3358


P lt 005 H gt 599

A1=A2=A3 B1=B2=B3










LISTA DE FIGURAS




9



isquemia

9



12




400x)

13




400x)

14



16



16



17




36




36




400x)

37




37



400x)

38




38

LISTA DE TABELAS







20







22







24







26







28









30








32









34








da reperfusatildeo)

21







da reperfusatildeo)

23







da reperfusatildeo)

25







da reperfusatildeo)

27







da reperfusatildeo)

29









31








da reperfusatildeo)

33









35




Ca++ = Caacutelcio




dL = decilitro



g = grama



K+ = Potaacutessio

Kg = quilograma

L = litro

mg = miligrama

mL = mililitros


Na+= Soacutedio

PTX = Pentoxifilina





RESUMO
























ABSTRACT

























periods

SUMAacuteRIO


2 OBJETIVOS 4

3 MEacuteTODOS 5

4 RESULTADOS 19

5 DISCUSSAtildeO 39




APEcircNDICE 59





isquecircmico3-8













celular8-10







agrave isquemia5-10






2

































3

























apoptose

2 OBJETIVOS

Geral


rim de ratos

Especiacutefico



3 MEacuteTODOS







Amostra


















6



reperfusatildeo



reperfusatildeo










Procedimentos







palpebral




7

Figu


Ratos N-66

GRUPO A n=30


Simulado n=6

GRUPO B n=30


A1 n=10


A2 n=10


B3 n=10


B2 n=10


B1 n=10


A 3 n=10










cavidade abdominal

8





















aberto e retirado







9




10



























11























12
















13

A



B

D mento e com

14


















iacutemica














15








PBS pH 74























16











17

B









A








a ImageLABreg

18











4 RESULTADOS























6 e graacutefico 6




20









Grupo S

Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

Meacutedia

DP

75100

13079

333230

238439

314360

160457

201070

70543

221500

182314

207410

100432

245120

183187


P lt 005 H gt 599

A1=A2=A3 B1=B2=B3


Plt005

A1 =A2 A1=A3 A2gtA3

B1=B2 B1=B3 B2=B3

A1=B1 A2gtB2 A3=B3


21

CPK

6000 6000

5000 5000

3UL 4000

000

4000

3000

2000 2000

1000 1000


GRUPOS





22






Grupo S

Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

Meacutedia

DP

5323

468

6530

2225

6840

2019

5710

934

5556

1323

6230

1972

9050

3096


P lt 005 H gt 599

A1=A2=A3 B1ltB2ltB3


Plt005

A1=A2 A1=A3 A2=A3


A1=B1 A2=B2 A3ltB3


23

UREacuteIA

140 140

120 120

100 100

80 80mgdL

60 6040 40

20 20

0 0


GRUPOS





24






Grupo S

Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

Meacutedia

DP

073

014

096

042

106

019

079

009

122

025

097

043

228

054


P lt 005 H gt 599



Plt005

A1=A2 A1=A3 A2ltA3


A1=B1 A2=B2 A3ltB3


25

CREATININA

3 3

25 25

2

15

2mgdLL

15

1 1

05 05

0 0


GRUPOS





reperfusatildeo)

26






Grupo S

Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

Meacutedia

DP

14117

223

15160

700

14760

590

15000

420

15400

230

15520

660

16000

323


P lt 005 H gt 599

A1=A2=A3 B1ltB2ltB3


plt 005

A1=A2 A1=A3 A2=A3

B1=B2 B1ltB3 B2=B3

A1=B1 A2ltB2 A3ltB3


27

SOacuteDIO

170170

160160

150

140mmolL150

140

130130

120120

110110


GRUPOS





reperfusatildeo)

28






Grupo S

Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

Meacutedia

DP

508

066

101

205

122

338

60

077

87

380

103

512

160

366


P lt 005 H gt 599



Plt005

A1=A2 A1gtA3 A2gtA3

B1=B2 B1ltB3 B2ltB3

A1=B1 A2=B2 A3ltB3


29

POTAacuteSSIO

20 20

15 15

10mmolLL

10

5 5


GRUPOS





reperfusatildeo)

30







Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

Meacutedia

DP

074

007

064

021

088

007

059

007

085

033

097

042


P lt 005 H gt 599

A1=A2=A3 B1ltB2ltB3


plt005

A1=A2 A1=A3 A2ltA3

B1ltB2 B1ltB3 B2=B3

A1gtB1 A2=B2 B3=B3

31


12 12

1 1

08 08

06 06

04 04

02 02

0 0 A1 A2 A3 B2 B3B1

GRUPOS






32







Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

Meacutedia

DP

084

014

115

007

120

021

103

049

070

014

087

007


P lt 005 H gt 599



plt005

A1=A2 A1=A3 A2=A3

B1gtB2 B1=B3 B2=B3

A1=B1 A2gtB2 A3=B3

33


16 1614 1412 12

1 1

08 0806 0604 0402 02

0 0 A1 A2 A3 B1 B2 B3

GRUPOS






34







Grupo S

Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

MD

DP

98

198

1186

240

1416

455

1038

154

1419

372

1635

165

1557

254


P lt 005 H gt 599

A1ltA2gtA3 B1=B2=B3


plt005

A1=A2 A1=A3 A2gtA3

B1=B2 B1=B3 B2=B3

A1=B1 A2=B2 A3ltB3


35


02468

101214161820

02468101214161820


CASPASE-3


36





37





38





5 DISCUSSAtildeO






















45






40

































41









necrose111314
























42

































43
































44

































45

































46



















PTX














47

































48














muscular



















49












rins21-2868







ser considerada













50





























51





























6 CONCLUSOtildeES 1

2

3











667















54
















55















56















57























Med 1997 12636-47

APEcircNDICE

PROTOCOLO







______________________________________________________________________




______________________________________________________________________


______________________________________________________________________

______________________________________________________________________


____________________________________________________________

____________________________________________________________

____________________________________________________________

60






Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3

680 709 668 828 982 639

6383 7458 2234 2111 1433 1109 1644 1977 6253 2721

2726 7638 2987 2304 3018 2579 2561 2476 2960 2187

1058 1982 1547 1954 2497 2777 2852 1272 1289 2879

- 1510 1331 2948 6835 1118 1828 1402 1069 1894

1729 1391 1482 1251 2724 1288 3402 2146 4071 1257

1637 1971 2631 1158 1728 7512 2586 1832 1622 1835

MD DP

75100 13079

333230 238439

314360 160457

201070 70543

221500 182314

207410 100432

245120 183187


P lt 005 H gt 599 A1=A2=A3 B1=B2=B3




61






Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3 53

52 55 57 45 58

67 65 62 51 53 66 42 80

120 47

65 45 54 42

119 74 60 66 69 61

45 72 78 54 66 55 56 58 55 47

- 72 53 83 47 45 56 46 51 47

53 58 47 59 45 50 77 69

111 54

81 88

118 67 66

162 101 93 69 60

MD DP

5323 468

6530 2225

6840 2019

5710 934

5556 1323

6230 1972

9050 3096




A1=A2 A1=A3 A2=A3 A1=B1 A2=B2 A3ltB3


62






Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3 07

10 07 07 06 07

15 16 14 07 08 05 07 06 12 06

11 09 10 12 09 10 13 10 08 14

09 09 08 08 08 08 07 08 08 06

- 11 13 14 11 18 12 10 11 10

09 09 10 10 02 08 07 13 10 19

24 23 23 23 21 27 31 27 12 17

MD DP

073 014

096 042

106 019

079 009

122 025

097 043

228 054






63






Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3

142 144 142 139 142 138

158 158 162 158 152 143 150 145 143 147

149 151 132 147 146 150 147 153 150 151

152 156 151 152 152 153 147 141 148 148

- 159 151 152 152 154 155 155 154 154

155 154 156 152 164 155 147 162 163 144

164 161 158 158 165 154 160 158 160 162

MD DP

14117 223

15160 700

14760 590

15000 420

15400 230

15520 660

16000 323


P lt 005 H gt 599

A1=A2=A3 B1ltB2ltB3


plt 005

A1=A2 A1=A3 A2=A3

B1=B2 B1ltB3 B2=B3

A1=B1 A2ltB2 A3ltB3


64






reperfusatildeo)

-1

Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3

54 51 53 46 41 60

129 141 108 93 81 78 91 85

104 100

119 111 103 73

109 128 203 118 110 144

56 52 72 51 60 65 53 57 67 70

- 77

174 108 77 88 94 56 53 53

53 57 62 98

151 70 48

159 160 170

207 172 152 179 136 228 148 142 120 115

MD DP

508 066

101 205

122 338

60 077

87 380

103 512

160 366


P lt 005 H gt 599



Plt005

A1=A2 A1gtA3 A2gtA3

B1=B2 B1ltB3 B2ltB3

A1=B1 A2=B2 A3ltB3


65








Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3

- 06 09 07 08 11 06 07 08 07 05

07 09 04 06 09 07 04 07 07 04

08 07 09 08 06 13 10 12 06 09

- 05 07 06 06 06 04 06 07 06

06 06 07 10 10 07 14 05 14 06

06 08 12 11 06 06 12 11 13 12

MD DP

- -

074 007

064 021

088 007

059 007

085 033

097 042


P lt 005 H gt 599

A1=A2=A3 B1ltB2ltB3


plt005

A1=A2 A1=A3 A2ltA3

B1ltB2 B1ltB3 B2=B3

A1gtB1 A2=B2 B3=B3

66







Grupo S

A

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3

- 05 07 10 06 09 05 11 14 10 07

07 14 18 14 08 07 14 17 10 06

07 15 07 25 21 09 08 09 19 10

- 16 11 08 08 16 08 08 08 09

05 06 04 04 06 08 08 14 09 07

06 08 12 12 06 11 12 06 09 05

MD DP

- -

084 014

115 007

120 021

103 049

070 014

087 007


P lt 005 H gt 599



A1=A2 A1=A3 A2=A3 B1gtB2 B1=B3 B2=B3

A1=B1 A2gtB2 A3=B3

67








Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3

824 803 951 777

1140 1254

1247 940

1273 1283 1054 1670 809

1364 1104 1116

1891 2430 979

1231 1193 1044 1329 1371 1644 1049

1274 1173 737

1129 1039 879

1136 970

1016 1029

- 1673 1494 1527 1297 1816 1189 1924 763

1084

1526 1606 1453 1576 1759 1344 1757 1874 1779 1679

1853 1620 1673 1720 1269 1749 1794 1123 1316 1449

MD DP

98 198

1186 240

1416 455

1038 154

1419 372

1635 165

1557 254


P lt 005 H gt 599

A1ltA2gtA3 B1=B2=B3




68






Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3 486

184 154 100 96 275

522 694 385 379 431 640 456

1206 1237 1368

405 582 225 206 285 458 367 394 391 402

281 429 403 340 489 756 245 218 308 392

- 538 319 884 401 130 372 283 276 417

261 268 220 741 812 379 422 344 837 349

29 13 25 10 13 15 35 37

289 125

MD DP

21583 14772

73180 38730

37150 11110

38610 15530

40222 21297

46320 23868

5910 8752


P lt 005 H gt 599





69






Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3 65

56 72 56 50 60

193 235 112 70

103 120 75

200 253 286

94 240 60 64 71

203 77 81

100 163

66 104 80 99

130 218 64 70

150 180

- 83 67

288 152 69 53 47 65 74

47 40 50

138 135 90 98 53

200 180

80 10 25 10 20 97 63 82 48 84

MD DP

5983 776

16470 7824

11530 6368

11610 5260

9980 7990

10310 5792

5190 3358


P lt 005 H gt 599

A1=A2=A3 B1=B2=B3




LISTA DE FIGURAS




9



isquemia

9



12




400x)

13




400x)

14



16



16



17




36




36




400x)

37




37



400x)

38




38

LISTA DE TABELAS







20







22







24







26







28









30








32









34








da reperfusatildeo)

21







da reperfusatildeo)

23







da reperfusatildeo)

25







da reperfusatildeo)

27







da reperfusatildeo)

29









31








da reperfusatildeo)

33









35




Ca++ = Caacutelcio




dL = decilitro



g = grama



K+ = Potaacutessio

Kg = quilograma

L = litro

mg = miligrama

mL = mililitros


Na+= Soacutedio

PTX = Pentoxifilina





RESUMO
























ABSTRACT

























periods

SUMAacuteRIO


2 OBJETIVOS 4

3 MEacuteTODOS 5

4 RESULTADOS 19

5 DISCUSSAtildeO 39




APEcircNDICE 59





isquecircmico3-8













celular8-10







agrave isquemia5-10






2

































3

























apoptose

2 OBJETIVOS

Geral


rim de ratos

Especiacutefico



3 MEacuteTODOS







Amostra


















6



reperfusatildeo



reperfusatildeo










Procedimentos







palpebral




7

Figu


Ratos N-66

GRUPO A n=30


Simulado n=6

GRUPO B n=30


A1 n=10


A2 n=10


B3 n=10


B2 n=10


B1 n=10


A 3 n=10










cavidade abdominal

8





















aberto e retirado







9




10



























11























12
















13

A



B

D mento e com

14


















iacutemica














15








PBS pH 74























16











17

B









A








a ImageLABreg

18











4 RESULTADOS























6 e graacutefico 6




20









Grupo S

Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

Meacutedia

DP

75100

13079

333230

238439

314360

160457

201070

70543

221500

182314

207410

100432

245120

183187


P lt 005 H gt 599

A1=A2=A3 B1=B2=B3


Plt005

A1 =A2 A1=A3 A2gtA3

B1=B2 B1=B3 B2=B3

A1=B1 A2gtB2 A3=B3


21

CPK

6000 6000

5000 5000

3UL 4000

000

4000

3000

2000 2000

1000 1000


GRUPOS





22






Grupo S

Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

Meacutedia

DP

5323

468

6530

2225

6840

2019

5710

934

5556

1323

6230

1972

9050

3096


P lt 005 H gt 599

A1=A2=A3 B1ltB2ltB3


Plt005

A1=A2 A1=A3 A2=A3


A1=B1 A2=B2 A3ltB3


23

UREacuteIA

140 140

120 120

100 100

80 80mgdL

60 6040 40

20 20

0 0


GRUPOS





24






Grupo S

Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

Meacutedia

DP

073

014

096

042

106

019

079

009

122

025

097

043

228

054


P lt 005 H gt 599



Plt005

A1=A2 A1=A3 A2ltA3


A1=B1 A2=B2 A3ltB3


25

CREATININA

3 3

25 25

2

15

2mgdLL

15

1 1

05 05

0 0


GRUPOS





reperfusatildeo)

26






Grupo S

Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

Meacutedia

DP

14117

223

15160

700

14760

590

15000

420

15400

230

15520

660

16000

323


P lt 005 H gt 599

A1=A2=A3 B1ltB2ltB3


plt 005

A1=A2 A1=A3 A2=A3

B1=B2 B1ltB3 B2=B3

A1=B1 A2ltB2 A3ltB3


27

SOacuteDIO

170170

160160

150

140mmolL150

140

130130

120120

110110


GRUPOS





reperfusatildeo)

28






Grupo S

Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

Meacutedia

DP

508

066

101

205

122

338

60

077

87

380

103

512

160

366


P lt 005 H gt 599



Plt005

A1=A2 A1gtA3 A2gtA3

B1=B2 B1ltB3 B2ltB3

A1=B1 A2=B2 A3ltB3


29

POTAacuteSSIO

20 20

15 15

10mmolLL

10

5 5


GRUPOS





reperfusatildeo)

30







Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

Meacutedia

DP

074

007

064

021

088

007

059

007

085

033

097

042


P lt 005 H gt 599

A1=A2=A3 B1ltB2ltB3


plt005

A1=A2 A1=A3 A2ltA3

B1ltB2 B1ltB3 B2=B3

A1gtB1 A2=B2 B3=B3

31


12 12

1 1

08 08

06 06

04 04

02 02

0 0 A1 A2 A3 B2 B3B1

GRUPOS






32







Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

Meacutedia

DP

084

014

115

007

120

021

103

049

070

014

087

007


P lt 005 H gt 599



plt005

A1=A2 A1=A3 A2=A3

B1gtB2 B1=B3 B2=B3

A1=B1 A2gtB2 A3=B3

33


16 1614 1412 12

1 1

08 0806 0604 0402 02

0 0 A1 A2 A3 B1 B2 B3

GRUPOS






34







Grupo S

Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

MD

DP

98

198

1186

240

1416

455

1038

154

1419

372

1635

165

1557

254


P lt 005 H gt 599

A1ltA2gtA3 B1=B2=B3


plt005

A1=A2 A1=A3 A2gtA3

B1=B2 B1=B3 B2=B3

A1=B1 A2=B2 A3ltB3


35


02468

101214161820

02468101214161820


CASPASE-3


36





37





38





5 DISCUSSAtildeO






















45






40

































41









necrose111314
























42

































43
































44

































45

































46



















PTX














47

































48














muscular



















49












rins21-2868







ser considerada













50





























51





























6 CONCLUSOtildeES 1

2

3











667















54
















55















56















57























Med 1997 12636-47

APEcircNDICE

PROTOCOLO







______________________________________________________________________




______________________________________________________________________


______________________________________________________________________

______________________________________________________________________


____________________________________________________________

____________________________________________________________

____________________________________________________________

60






Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3

680 709 668 828 982 639

6383 7458 2234 2111 1433 1109 1644 1977 6253 2721

2726 7638 2987 2304 3018 2579 2561 2476 2960 2187

1058 1982 1547 1954 2497 2777 2852 1272 1289 2879

- 1510 1331 2948 6835 1118 1828 1402 1069 1894

1729 1391 1482 1251 2724 1288 3402 2146 4071 1257

1637 1971 2631 1158 1728 7512 2586 1832 1622 1835

MD DP

75100 13079

333230 238439

314360 160457

201070 70543

221500 182314

207410 100432

245120 183187


P lt 005 H gt 599 A1=A2=A3 B1=B2=B3




61






Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3 53

52 55 57 45 58

67 65 62 51 53 66 42 80

120 47

65 45 54 42

119 74 60 66 69 61

45 72 78 54 66 55 56 58 55 47

- 72 53 83 47 45 56 46 51 47

53 58 47 59 45 50 77 69

111 54

81 88

118 67 66

162 101 93 69 60

MD DP

5323 468

6530 2225

6840 2019

5710 934

5556 1323

6230 1972

9050 3096




A1=A2 A1=A3 A2=A3 A1=B1 A2=B2 A3ltB3


62






Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3 07

10 07 07 06 07

15 16 14 07 08 05 07 06 12 06

11 09 10 12 09 10 13 10 08 14

09 09 08 08 08 08 07 08 08 06

- 11 13 14 11 18 12 10 11 10

09 09 10 10 02 08 07 13 10 19

24 23 23 23 21 27 31 27 12 17

MD DP

073 014

096 042

106 019

079 009

122 025

097 043

228 054






63






Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3

142 144 142 139 142 138

158 158 162 158 152 143 150 145 143 147

149 151 132 147 146 150 147 153 150 151

152 156 151 152 152 153 147 141 148 148

- 159 151 152 152 154 155 155 154 154

155 154 156 152 164 155 147 162 163 144

164 161 158 158 165 154 160 158 160 162

MD DP

14117 223

15160 700

14760 590

15000 420

15400 230

15520 660

16000 323


P lt 005 H gt 599

A1=A2=A3 B1ltB2ltB3


plt 005

A1=A2 A1=A3 A2=A3

B1=B2 B1ltB3 B2=B3

A1=B1 A2ltB2 A3ltB3


64






reperfusatildeo)

-1

Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3

54 51 53 46 41 60

129 141 108 93 81 78 91 85

104 100

119 111 103 73

109 128 203 118 110 144

56 52 72 51 60 65 53 57 67 70

- 77

174 108 77 88 94 56 53 53

53 57 62 98

151 70 48

159 160 170

207 172 152 179 136 228 148 142 120 115

MD DP

508 066

101 205

122 338

60 077

87 380

103 512

160 366


P lt 005 H gt 599



Plt005

A1=A2 A1gtA3 A2gtA3

B1=B2 B1ltB3 B2ltB3

A1=B1 A2=B2 A3ltB3


65








Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3

- 06 09 07 08 11 06 07 08 07 05

07 09 04 06 09 07 04 07 07 04

08 07 09 08 06 13 10 12 06 09

- 05 07 06 06 06 04 06 07 06

06 06 07 10 10 07 14 05 14 06

06 08 12 11 06 06 12 11 13 12

MD DP

- -

074 007

064 021

088 007

059 007

085 033

097 042


P lt 005 H gt 599

A1=A2=A3 B1ltB2ltB3


plt005

A1=A2 A1=A3 A2ltA3

B1ltB2 B1ltB3 B2=B3

A1gtB1 A2=B2 B3=B3

66







Grupo S

A

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3

- 05 07 10 06 09 05 11 14 10 07

07 14 18 14 08 07 14 17 10 06

07 15 07 25 21 09 08 09 19 10

- 16 11 08 08 16 08 08 08 09

05 06 04 04 06 08 08 14 09 07

06 08 12 12 06 11 12 06 09 05

MD DP

- -

084 014

115 007

120 021

103 049

070 014

087 007


P lt 005 H gt 599



A1=A2 A1=A3 A2=A3 B1gtB2 B1=B3 B2=B3

A1=B1 A2gtB2 A3=B3

67








Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3

824 803 951 777

1140 1254

1247 940

1273 1283 1054 1670 809

1364 1104 1116

1891 2430 979

1231 1193 1044 1329 1371 1644 1049

1274 1173 737

1129 1039 879

1136 970

1016 1029

- 1673 1494 1527 1297 1816 1189 1924 763

1084

1526 1606 1453 1576 1759 1344 1757 1874 1779 1679

1853 1620 1673 1720 1269 1749 1794 1123 1316 1449

MD DP

98 198

1186 240

1416 455

1038 154

1419 372

1635 165

1557 254


P lt 005 H gt 599

A1ltA2gtA3 B1=B2=B3




68






Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3 486

184 154 100 96 275

522 694 385 379 431 640 456

1206 1237 1368

405 582 225 206 285 458 367 394 391 402

281 429 403 340 489 756 245 218 308 392

- 538 319 884 401 130 372 283 276 417

261 268 220 741 812 379 422 344 837 349

29 13 25 10 13 15 35 37

289 125

MD DP

21583 14772

73180 38730

37150 11110

38610 15530

40222 21297

46320 23868

5910 8752


P lt 005 H gt 599





69






Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3 65

56 72 56 50 60

193 235 112 70

103 120 75

200 253 286

94 240 60 64 71

203 77 81

100 163

66 104 80 99

130 218 64 70

150 180

- 83 67

288 152 69 53 47 65 74

47 40 50

138 135 90 98 53

200 180

80 10 25 10 20 97 63 82 48 84

MD DP

5983 776

16470 7824

11530 6368

11610 5260

9980 7990

10310 5792

5190 3358


P lt 005 H gt 599

A1=A2=A3 B1=B2=B3







400x)

37




37



400x)

38




38

LISTA DE TABELAS







20







22







24







26







28









30








32









34








da reperfusatildeo)

21







da reperfusatildeo)

23







da reperfusatildeo)

25







da reperfusatildeo)

27







da reperfusatildeo)

29









31








da reperfusatildeo)

33









35




Ca++ = Caacutelcio




dL = decilitro



g = grama



K+ = Potaacutessio

Kg = quilograma

L = litro

mg = miligrama

mL = mililitros


Na+= Soacutedio

PTX = Pentoxifilina





RESUMO
























ABSTRACT

























periods

SUMAacuteRIO


2 OBJETIVOS 4

3 MEacuteTODOS 5

4 RESULTADOS 19

5 DISCUSSAtildeO 39




APEcircNDICE 59





isquecircmico3-8













celular8-10







agrave isquemia5-10






2

































3

























apoptose

2 OBJETIVOS

Geral


rim de ratos

Especiacutefico



3 MEacuteTODOS







Amostra


















6



reperfusatildeo



reperfusatildeo










Procedimentos







palpebral




7

Figu


Ratos N-66

GRUPO A n=30


Simulado n=6

GRUPO B n=30


A1 n=10


A2 n=10


B3 n=10


B2 n=10


B1 n=10


A 3 n=10










cavidade abdominal

8





















aberto e retirado







9




10



























11























12
















13

A



B

D mento e com

14


















iacutemica














15








PBS pH 74























16











17

B









A








a ImageLABreg

18











4 RESULTADOS























6 e graacutefico 6




20









Grupo S

Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

Meacutedia

DP

75100

13079

333230

238439

314360

160457

201070

70543

221500

182314

207410

100432

245120

183187


P lt 005 H gt 599

A1=A2=A3 B1=B2=B3


Plt005

A1 =A2 A1=A3 A2gtA3

B1=B2 B1=B3 B2=B3

A1=B1 A2gtB2 A3=B3


21

CPK

6000 6000

5000 5000

3UL 4000

000

4000

3000

2000 2000

1000 1000


GRUPOS





22






Grupo S

Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

Meacutedia

DP

5323

468

6530

2225

6840

2019

5710

934

5556

1323

6230

1972

9050

3096


P lt 005 H gt 599

A1=A2=A3 B1ltB2ltB3


Plt005

A1=A2 A1=A3 A2=A3


A1=B1 A2=B2 A3ltB3


23

UREacuteIA

140 140

120 120

100 100

80 80mgdL

60 6040 40

20 20

0 0


GRUPOS





24






Grupo S

Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

Meacutedia

DP

073

014

096

042

106

019

079

009

122

025

097

043

228

054


P lt 005 H gt 599



Plt005

A1=A2 A1=A3 A2ltA3


A1=B1 A2=B2 A3ltB3


25

CREATININA

3 3

25 25

2

15

2mgdLL

15

1 1

05 05

0 0


GRUPOS





reperfusatildeo)

26






Grupo S

Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

Meacutedia

DP

14117

223

15160

700

14760

590

15000

420

15400

230

15520

660

16000

323


P lt 005 H gt 599

A1=A2=A3 B1ltB2ltB3


plt 005

A1=A2 A1=A3 A2=A3

B1=B2 B1ltB3 B2=B3

A1=B1 A2ltB2 A3ltB3


27

SOacuteDIO

170170

160160

150

140mmolL150

140

130130

120120

110110


GRUPOS





reperfusatildeo)

28






Grupo S

Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

Meacutedia

DP

508

066

101

205

122

338

60

077

87

380

103

512

160

366


P lt 005 H gt 599



Plt005

A1=A2 A1gtA3 A2gtA3

B1=B2 B1ltB3 B2ltB3

A1=B1 A2=B2 A3ltB3


29

POTAacuteSSIO

20 20

15 15

10mmolLL

10

5 5


GRUPOS





reperfusatildeo)

30







Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

Meacutedia

DP

074

007

064

021

088

007

059

007

085

033

097

042


P lt 005 H gt 599

A1=A2=A3 B1ltB2ltB3


plt005

A1=A2 A1=A3 A2ltA3

B1ltB2 B1ltB3 B2=B3

A1gtB1 A2=B2 B3=B3

31


12 12

1 1

08 08

06 06

04 04

02 02

0 0 A1 A2 A3 B2 B3B1

GRUPOS






32







Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

Meacutedia

DP

084

014

115

007

120

021

103

049

070

014

087

007


P lt 005 H gt 599



plt005

A1=A2 A1=A3 A2=A3

B1gtB2 B1=B3 B2=B3

A1=B1 A2gtB2 A3=B3

33


16 1614 1412 12

1 1

08 0806 0604 0402 02

0 0 A1 A2 A3 B1 B2 B3

GRUPOS






34







Grupo S

Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

MD

DP

98

198

1186

240

1416

455

1038

154

1419

372

1635

165

1557

254


P lt 005 H gt 599

A1ltA2gtA3 B1=B2=B3


plt005

A1=A2 A1=A3 A2gtA3

B1=B2 B1=B3 B2=B3

A1=B1 A2=B2 A3ltB3


35


02468

101214161820

02468101214161820


CASPASE-3


36





37





38





5 DISCUSSAtildeO






















45






40

































41









necrose111314
























42

































43
































44

































45

































46



















PTX














47

































48














muscular



















49












rins21-2868







ser considerada













50





























51





























6 CONCLUSOtildeES 1

2

3











667















54
















55















56















57























Med 1997 12636-47

APEcircNDICE

PROTOCOLO







______________________________________________________________________




______________________________________________________________________


______________________________________________________________________

______________________________________________________________________


____________________________________________________________

____________________________________________________________

____________________________________________________________

60






Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3

680 709 668 828 982 639

6383 7458 2234 2111 1433 1109 1644 1977 6253 2721

2726 7638 2987 2304 3018 2579 2561 2476 2960 2187

1058 1982 1547 1954 2497 2777 2852 1272 1289 2879

- 1510 1331 2948 6835 1118 1828 1402 1069 1894

1729 1391 1482 1251 2724 1288 3402 2146 4071 1257

1637 1971 2631 1158 1728 7512 2586 1832 1622 1835

MD DP

75100 13079

333230 238439

314360 160457

201070 70543

221500 182314

207410 100432

245120 183187


P lt 005 H gt 599 A1=A2=A3 B1=B2=B3




61






Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3 53

52 55 57 45 58

67 65 62 51 53 66 42 80

120 47

65 45 54 42

119 74 60 66 69 61

45 72 78 54 66 55 56 58 55 47

- 72 53 83 47 45 56 46 51 47

53 58 47 59 45 50 77 69

111 54

81 88

118 67 66

162 101 93 69 60

MD DP

5323 468

6530 2225

6840 2019

5710 934

5556 1323

6230 1972

9050 3096




A1=A2 A1=A3 A2=A3 A1=B1 A2=B2 A3ltB3


62






Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3 07

10 07 07 06 07

15 16 14 07 08 05 07 06 12 06

11 09 10 12 09 10 13 10 08 14

09 09 08 08 08 08 07 08 08 06

- 11 13 14 11 18 12 10 11 10

09 09 10 10 02 08 07 13 10 19

24 23 23 23 21 27 31 27 12 17

MD DP

073 014

096 042

106 019

079 009

122 025

097 043

228 054






63






Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3

142 144 142 139 142 138

158 158 162 158 152 143 150 145 143 147

149 151 132 147 146 150 147 153 150 151

152 156 151 152 152 153 147 141 148 148

- 159 151 152 152 154 155 155 154 154

155 154 156 152 164 155 147 162 163 144

164 161 158 158 165 154 160 158 160 162

MD DP

14117 223

15160 700

14760 590

15000 420

15400 230

15520 660

16000 323


P lt 005 H gt 599

A1=A2=A3 B1ltB2ltB3


plt 005

A1=A2 A1=A3 A2=A3

B1=B2 B1ltB3 B2=B3

A1=B1 A2ltB2 A3ltB3


64






reperfusatildeo)

-1

Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3

54 51 53 46 41 60

129 141 108 93 81 78 91 85

104 100

119 111 103 73

109 128 203 118 110 144

56 52 72 51 60 65 53 57 67 70

- 77

174 108 77 88 94 56 53 53

53 57 62 98

151 70 48

159 160 170

207 172 152 179 136 228 148 142 120 115

MD DP

508 066

101 205

122 338

60 077

87 380

103 512

160 366


P lt 005 H gt 599



Plt005

A1=A2 A1gtA3 A2gtA3

B1=B2 B1ltB3 B2ltB3

A1=B1 A2=B2 A3ltB3


65








Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3

- 06 09 07 08 11 06 07 08 07 05

07 09 04 06 09 07 04 07 07 04

08 07 09 08 06 13 10 12 06 09

- 05 07 06 06 06 04 06 07 06

06 06 07 10 10 07 14 05 14 06

06 08 12 11 06 06 12 11 13 12

MD DP

- -

074 007

064 021

088 007

059 007

085 033

097 042


P lt 005 H gt 599

A1=A2=A3 B1ltB2ltB3


plt005

A1=A2 A1=A3 A2ltA3

B1ltB2 B1ltB3 B2=B3

A1gtB1 A2=B2 B3=B3

66







Grupo S

A

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3

- 05 07 10 06 09 05 11 14 10 07

07 14 18 14 08 07 14 17 10 06

07 15 07 25 21 09 08 09 19 10

- 16 11 08 08 16 08 08 08 09

05 06 04 04 06 08 08 14 09 07

06 08 12 12 06 11 12 06 09 05

MD DP

- -

084 014

115 007

120 021

103 049

070 014

087 007


P lt 005 H gt 599



A1=A2 A1=A3 A2=A3 B1gtB2 B1=B3 B2=B3

A1=B1 A2gtB2 A3=B3

67








Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3

824 803 951 777

1140 1254

1247 940

1273 1283 1054 1670 809

1364 1104 1116

1891 2430 979

1231 1193 1044 1329 1371 1644 1049

1274 1173 737

1129 1039 879

1136 970

1016 1029

- 1673 1494 1527 1297 1816 1189 1924 763

1084

1526 1606 1453 1576 1759 1344 1757 1874 1779 1679

1853 1620 1673 1720 1269 1749 1794 1123 1316 1449

MD DP

98 198

1186 240

1416 455

1038 154

1419 372

1635 165

1557 254


P lt 005 H gt 599

A1ltA2gtA3 B1=B2=B3




68






Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3 486

184 154 100 96 275

522 694 385 379 431 640 456

1206 1237 1368

405 582 225 206 285 458 367 394 391 402

281 429 403 340 489 756 245 218 308 392

- 538 319 884 401 130 372 283 276 417

261 268 220 741 812 379 422 344 837 349

29 13 25 10 13 15 35 37

289 125

MD DP

21583 14772

73180 38730

37150 11110

38610 15530

40222 21297

46320 23868

5910 8752


P lt 005 H gt 599





69






Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3 65

56 72 56 50 60

193 235 112 70

103 120 75

200 253 286

94 240 60 64 71

203 77 81

100 163

66 104 80 99

130 218 64 70

150 180

- 83 67

288 152 69 53 47 65 74

47 40 50

138 135 90 98 53

200 180

80 10 25 10 20 97 63 82 48 84

MD DP

5983 776

16470 7824

11530 6368

11610 5260

9980 7990

10310 5792

5190 3358


P lt 005 H gt 599

A1=A2=A3 B1=B2=B3




LISTA DE TABELAS







20







22







24







26







28









30








32









34








da reperfusatildeo)

21







da reperfusatildeo)

23







da reperfusatildeo)

25







da reperfusatildeo)

27







da reperfusatildeo)

29









31








da reperfusatildeo)

33









35




Ca++ = Caacutelcio




dL = decilitro



g = grama



K+ = Potaacutessio

Kg = quilograma

L = litro

mg = miligrama

mL = mililitros


Na+= Soacutedio

PTX = Pentoxifilina





RESUMO
























ABSTRACT

























periods

SUMAacuteRIO


2 OBJETIVOS 4

3 MEacuteTODOS 5

4 RESULTADOS 19

5 DISCUSSAtildeO 39




APEcircNDICE 59





isquecircmico3-8













celular8-10







agrave isquemia5-10






2

































3

























apoptose

2 OBJETIVOS

Geral


rim de ratos

Especiacutefico



3 MEacuteTODOS







Amostra


















6



reperfusatildeo



reperfusatildeo










Procedimentos







palpebral




7

Figu


Ratos N-66

GRUPO A n=30


Simulado n=6

GRUPO B n=30


A1 n=10


A2 n=10


B3 n=10


B2 n=10


B1 n=10


A 3 n=10










cavidade abdominal

8





















aberto e retirado







9




10



























11























12
















13

A



B

D mento e com

14


















iacutemica














15








PBS pH 74























16











17

B









A








a ImageLABreg

18











4 RESULTADOS























6 e graacutefico 6




20









Grupo S

Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

Meacutedia

DP

75100

13079

333230

238439

314360

160457

201070

70543

221500

182314

207410

100432

245120

183187


P lt 005 H gt 599

A1=A2=A3 B1=B2=B3


Plt005

A1 =A2 A1=A3 A2gtA3

B1=B2 B1=B3 B2=B3

A1=B1 A2gtB2 A3=B3


21

CPK

6000 6000

5000 5000

3UL 4000

000

4000

3000

2000 2000

1000 1000


GRUPOS





22






Grupo S

Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

Meacutedia

DP

5323

468

6530

2225

6840

2019

5710

934

5556

1323

6230

1972

9050

3096


P lt 005 H gt 599

A1=A2=A3 B1ltB2ltB3


Plt005

A1=A2 A1=A3 A2=A3


A1=B1 A2=B2 A3ltB3


23

UREacuteIA

140 140

120 120

100 100

80 80mgdL

60 6040 40

20 20

0 0


GRUPOS





24






Grupo S

Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

Meacutedia

DP

073

014

096

042

106

019

079

009

122

025

097

043

228

054


P lt 005 H gt 599



Plt005

A1=A2 A1=A3 A2ltA3


A1=B1 A2=B2 A3ltB3


25

CREATININA

3 3

25 25

2

15

2mgdLL

15

1 1

05 05

0 0


GRUPOS





reperfusatildeo)

26






Grupo S

Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

Meacutedia

DP

14117

223

15160

700

14760

590

15000

420

15400

230

15520

660

16000

323


P lt 005 H gt 599

A1=A2=A3 B1ltB2ltB3


plt 005

A1=A2 A1=A3 A2=A3

B1=B2 B1ltB3 B2=B3

A1=B1 A2ltB2 A3ltB3


27

SOacuteDIO

170170

160160

150

140mmolL150

140

130130

120120

110110


GRUPOS





reperfusatildeo)

28






Grupo S

Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

Meacutedia

DP

508

066

101

205

122

338

60

077

87

380

103

512

160

366


P lt 005 H gt 599



Plt005

A1=A2 A1gtA3 A2gtA3

B1=B2 B1ltB3 B2ltB3

A1=B1 A2=B2 A3ltB3


29

POTAacuteSSIO

20 20

15 15

10mmolLL

10

5 5


GRUPOS





reperfusatildeo)

30







Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

Meacutedia

DP

074

007

064

021

088

007

059

007

085

033

097

042


P lt 005 H gt 599

A1=A2=A3 B1ltB2ltB3


plt005

A1=A2 A1=A3 A2ltA3

B1ltB2 B1ltB3 B2=B3

A1gtB1 A2=B2 B3=B3

31


12 12

1 1

08 08

06 06

04 04

02 02

0 0 A1 A2 A3 B2 B3B1

GRUPOS






32







Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

Meacutedia

DP

084

014

115

007

120

021

103

049

070

014

087

007


P lt 005 H gt 599



plt005

A1=A2 A1=A3 A2=A3

B1gtB2 B1=B3 B2=B3

A1=B1 A2gtB2 A3=B3

33


16 1614 1412 12

1 1

08 0806 0604 0402 02

0 0 A1 A2 A3 B1 B2 B3

GRUPOS






34







Grupo S

Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

MD

DP

98

198

1186

240

1416

455

1038

154

1419

372

1635

165

1557

254


P lt 005 H gt 599

A1ltA2gtA3 B1=B2=B3


plt005

A1=A2 A1=A3 A2gtA3

B1=B2 B1=B3 B2=B3

A1=B1 A2=B2 A3ltB3


35


02468

101214161820

02468101214161820


CASPASE-3


36





37





38





5 DISCUSSAtildeO






















45






40

































41









necrose111314
























42

































43
































44

































45

































46



















PTX














47

































48














muscular



















49












rins21-2868







ser considerada













50





























51





























6 CONCLUSOtildeES 1

2

3











667















54
















55















56















57























Med 1997 12636-47

APEcircNDICE

PROTOCOLO







______________________________________________________________________




______________________________________________________________________


______________________________________________________________________

______________________________________________________________________


____________________________________________________________

____________________________________________________________

____________________________________________________________

60






Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3

680 709 668 828 982 639

6383 7458 2234 2111 1433 1109 1644 1977 6253 2721

2726 7638 2987 2304 3018 2579 2561 2476 2960 2187

1058 1982 1547 1954 2497 2777 2852 1272 1289 2879

- 1510 1331 2948 6835 1118 1828 1402 1069 1894

1729 1391 1482 1251 2724 1288 3402 2146 4071 1257

1637 1971 2631 1158 1728 7512 2586 1832 1622 1835

MD DP

75100 13079

333230 238439

314360 160457

201070 70543

221500 182314

207410 100432

245120 183187


P lt 005 H gt 599 A1=A2=A3 B1=B2=B3




61






Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3 53

52 55 57 45 58

67 65 62 51 53 66 42 80

120 47

65 45 54 42

119 74 60 66 69 61

45 72 78 54 66 55 56 58 55 47

- 72 53 83 47 45 56 46 51 47

53 58 47 59 45 50 77 69

111 54

81 88

118 67 66

162 101 93 69 60

MD DP

5323 468

6530 2225

6840 2019

5710 934

5556 1323

6230 1972

9050 3096




A1=A2 A1=A3 A2=A3 A1=B1 A2=B2 A3ltB3


62






Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3 07

10 07 07 06 07

15 16 14 07 08 05 07 06 12 06

11 09 10 12 09 10 13 10 08 14

09 09 08 08 08 08 07 08 08 06

- 11 13 14 11 18 12 10 11 10

09 09 10 10 02 08 07 13 10 19

24 23 23 23 21 27 31 27 12 17

MD DP

073 014

096 042

106 019

079 009

122 025

097 043

228 054






63






Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3

142 144 142 139 142 138

158 158 162 158 152 143 150 145 143 147

149 151 132 147 146 150 147 153 150 151

152 156 151 152 152 153 147 141 148 148

- 159 151 152 152 154 155 155 154 154

155 154 156 152 164 155 147 162 163 144

164 161 158 158 165 154 160 158 160 162

MD DP

14117 223

15160 700

14760 590

15000 420

15400 230

15520 660

16000 323


P lt 005 H gt 599

A1=A2=A3 B1ltB2ltB3


plt 005

A1=A2 A1=A3 A2=A3

B1=B2 B1ltB3 B2=B3

A1=B1 A2ltB2 A3ltB3


64






reperfusatildeo)

-1

Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3

54 51 53 46 41 60

129 141 108 93 81 78 91 85

104 100

119 111 103 73

109 128 203 118 110 144

56 52 72 51 60 65 53 57 67 70

- 77

174 108 77 88 94 56 53 53

53 57 62 98

151 70 48

159 160 170

207 172 152 179 136 228 148 142 120 115

MD DP

508 066

101 205

122 338

60 077

87 380

103 512

160 366


P lt 005 H gt 599



Plt005

A1=A2 A1gtA3 A2gtA3

B1=B2 B1ltB3 B2ltB3

A1=B1 A2=B2 A3ltB3


65








Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3

- 06 09 07 08 11 06 07 08 07 05

07 09 04 06 09 07 04 07 07 04

08 07 09 08 06 13 10 12 06 09

- 05 07 06 06 06 04 06 07 06

06 06 07 10 10 07 14 05 14 06

06 08 12 11 06 06 12 11 13 12

MD DP

- -

074 007

064 021

088 007

059 007

085 033

097 042


P lt 005 H gt 599

A1=A2=A3 B1ltB2ltB3


plt005

A1=A2 A1=A3 A2ltA3

B1ltB2 B1ltB3 B2=B3

A1gtB1 A2=B2 B3=B3

66







Grupo S

A

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3

- 05 07 10 06 09 05 11 14 10 07

07 14 18 14 08 07 14 17 10 06

07 15 07 25 21 09 08 09 19 10

- 16 11 08 08 16 08 08 08 09

05 06 04 04 06 08 08 14 09 07

06 08 12 12 06 11 12 06 09 05

MD DP

- -

084 014

115 007

120 021

103 049

070 014

087 007


P lt 005 H gt 599



A1=A2 A1=A3 A2=A3 B1gtB2 B1=B3 B2=B3

A1=B1 A2gtB2 A3=B3

67








Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3

824 803 951 777

1140 1254

1247 940

1273 1283 1054 1670 809

1364 1104 1116

1891 2430 979

1231 1193 1044 1329 1371 1644 1049

1274 1173 737

1129 1039 879

1136 970

1016 1029

- 1673 1494 1527 1297 1816 1189 1924 763

1084

1526 1606 1453 1576 1759 1344 1757 1874 1779 1679

1853 1620 1673 1720 1269 1749 1794 1123 1316 1449

MD DP

98 198

1186 240

1416 455

1038 154

1419 372

1635 165

1557 254


P lt 005 H gt 599

A1ltA2gtA3 B1=B2=B3




68






Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3 486

184 154 100 96 275

522 694 385 379 431 640 456

1206 1237 1368

405 582 225 206 285 458 367 394 391 402

281 429 403 340 489 756 245 218 308 392

- 538 319 884 401 130 372 283 276 417

261 268 220 741 812 379 422 344 837 349

29 13 25 10 13 15 35 37

289 125

MD DP

21583 14772

73180 38730

37150 11110

38610 15530

40222 21297

46320 23868

5910 8752


P lt 005 H gt 599





69






Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3 65

56 72 56 50 60

193 235 112 70

103 120 75

200 253 286

94 240 60 64 71

203 77 81

100 163

66 104 80 99

130 218 64 70

150 180

- 83 67

288 152 69 53 47 65 74

47 40 50

138 135 90 98 53

200 180

80 10 25 10 20 97 63 82 48 84

MD DP

5983 776

16470 7824

11530 6368

11610 5260

9980 7990

10310 5792

5190 3358


P lt 005 H gt 599

A1=A2=A3 B1=B2=B3










28









30








32









34








da reperfusatildeo)

21







da reperfusatildeo)

23







da reperfusatildeo)

25







da reperfusatildeo)

27







da reperfusatildeo)

29









31








da reperfusatildeo)

33









35




Ca++ = Caacutelcio




dL = decilitro



g = grama



K+ = Potaacutessio

Kg = quilograma

L = litro

mg = miligrama

mL = mililitros


Na+= Soacutedio

PTX = Pentoxifilina





RESUMO
























ABSTRACT

























periods

SUMAacuteRIO


2 OBJETIVOS 4

3 MEacuteTODOS 5

4 RESULTADOS 19

5 DISCUSSAtildeO 39




APEcircNDICE 59





isquecircmico3-8













celular8-10







agrave isquemia5-10






2

































3

























apoptose

2 OBJETIVOS

Geral


rim de ratos

Especiacutefico



3 MEacuteTODOS







Amostra


















6



reperfusatildeo



reperfusatildeo










Procedimentos







palpebral




7

Figu


Ratos N-66

GRUPO A n=30


Simulado n=6

GRUPO B n=30


A1 n=10


A2 n=10


B3 n=10


B2 n=10


B1 n=10


A 3 n=10










cavidade abdominal

8





















aberto e retirado







9




10



























11























12
















13

A



B

D mento e com

14


















iacutemica














15








PBS pH 74























16











17

B









A








a ImageLABreg

18











4 RESULTADOS























6 e graacutefico 6




20









Grupo S

Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

Meacutedia

DP

75100

13079

333230

238439

314360

160457

201070

70543

221500

182314

207410

100432

245120

183187


P lt 005 H gt 599

A1=A2=A3 B1=B2=B3


Plt005

A1 =A2 A1=A3 A2gtA3

B1=B2 B1=B3 B2=B3

A1=B1 A2gtB2 A3=B3


21

CPK

6000 6000

5000 5000

3UL 4000

000

4000

3000

2000 2000

1000 1000


GRUPOS





22






Grupo S

Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

Meacutedia

DP

5323

468

6530

2225

6840

2019

5710

934

5556

1323

6230

1972

9050

3096


P lt 005 H gt 599

A1=A2=A3 B1ltB2ltB3


Plt005

A1=A2 A1=A3 A2=A3


A1=B1 A2=B2 A3ltB3


23

UREacuteIA

140 140

120 120

100 100

80 80mgdL

60 6040 40

20 20

0 0


GRUPOS





24






Grupo S

Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

Meacutedia

DP

073

014

096

042

106

019

079

009

122

025

097

043

228

054


P lt 005 H gt 599



Plt005

A1=A2 A1=A3 A2ltA3


A1=B1 A2=B2 A3ltB3


25

CREATININA

3 3

25 25

2

15

2mgdLL

15

1 1

05 05

0 0


GRUPOS





reperfusatildeo)

26






Grupo S

Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

Meacutedia

DP

14117

223

15160

700

14760

590

15000

420

15400

230

15520

660

16000

323


P lt 005 H gt 599

A1=A2=A3 B1ltB2ltB3


plt 005

A1=A2 A1=A3 A2=A3

B1=B2 B1ltB3 B2=B3

A1=B1 A2ltB2 A3ltB3


27

SOacuteDIO

170170

160160

150

140mmolL150

140

130130

120120

110110


GRUPOS





reperfusatildeo)

28






Grupo S

Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

Meacutedia

DP

508

066

101

205

122

338

60

077

87

380

103

512

160

366


P lt 005 H gt 599



Plt005

A1=A2 A1gtA3 A2gtA3

B1=B2 B1ltB3 B2ltB3

A1=B1 A2=B2 A3ltB3


29

POTAacuteSSIO

20 20

15 15

10mmolLL

10

5 5


GRUPOS





reperfusatildeo)

30







Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

Meacutedia

DP

074

007

064

021

088

007

059

007

085

033

097

042


P lt 005 H gt 599

A1=A2=A3 B1ltB2ltB3


plt005

A1=A2 A1=A3 A2ltA3

B1ltB2 B1ltB3 B2=B3

A1gtB1 A2=B2 B3=B3

31


12 12

1 1

08 08

06 06

04 04

02 02

0 0 A1 A2 A3 B2 B3B1

GRUPOS






32







Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

Meacutedia

DP

084

014

115

007

120

021

103

049

070

014

087

007


P lt 005 H gt 599



plt005

A1=A2 A1=A3 A2=A3

B1gtB2 B1=B3 B2=B3

A1=B1 A2gtB2 A3=B3

33


16 1614 1412 12

1 1

08 0806 0604 0402 02

0 0 A1 A2 A3 B1 B2 B3

GRUPOS






34







Grupo S

Grupo A

Grupo B

A1

A2

A3

B1

B2

B3

MD

DP

98

198

1186

240

1416

455

1038

154

1419

372

1635

165

1557

254


P lt 005 H gt 599

A1ltA2gtA3 B1=B2=B3


plt005

A1=A2 A1=A3 A2gtA3

B1=B2 B1=B3 B2=B3

A1=B1 A2=B2 A3ltB3


35


02468

101214161820

02468101214161820


CASPASE-3


36





37





38





5 DISCUSSAtildeO






















45






40

































41









necrose111314
























42

































43
































44

































45

































46



















PTX














47

































48














muscular



















49












rins21-2868







ser considerada













50





























51





























6 CONCLUSOtildeES 1

2

3











667















54
















55















56















57























Med 1997 12636-47

APEcircNDICE

PROTOCOLO







______________________________________________________________________




______________________________________________________________________


______________________________________________________________________

______________________________________________________________________


____________________________________________________________

____________________________________________________________

____________________________________________________________

60






Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3

680 709 668 828 982 639

6383 7458 2234 2111 1433 1109 1644 1977 6253 2721

2726 7638 2987 2304 3018 2579 2561 2476 2960 2187

1058 1982 1547 1954 2497 2777 2852 1272 1289 2879

- 1510 1331 2948 6835 1118 1828 1402 1069 1894

1729 1391 1482 1251 2724 1288 3402 2146 4071 1257

1637 1971 2631 1158 1728 7512 2586 1832 1622 1835

MD DP

75100 13079

333230 238439

314360 160457

201070 70543

221500 182314

207410 100432

245120 183187


P lt 005 H gt 599 A1=A2=A3 B1=B2=B3




61






Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3 53

52 55 57 45 58

67 65 62 51 53 66 42 80

120 47

65 45 54 42

119 74 60 66 69 61

45 72 78 54 66 55 56 58 55 47

- 72 53 83 47 45 56 46 51 47

53 58 47 59 45 50 77 69

111 54

81 88

118 67 66

162 101 93 69 60

MD DP

5323 468

6530 2225

6840 2019

5710 934

5556 1323

6230 1972

9050 3096




A1=A2 A1=A3 A2=A3 A1=B1 A2=B2 A3ltB3


62






Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3 07

10 07 07 06 07

15 16 14 07 08 05 07 06 12 06

11 09 10 12 09 10 13 10 08 14

09 09 08 08 08 08 07 08 08 06

- 11 13 14 11 18 12 10 11 10

09 09 10 10 02 08 07 13 10 19

24 23 23 23 21 27 31 27 12 17

MD DP

073 014

096 042

106 019

079 009

122 025

097 043

228 054






63






Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3

142 144 142 139 142 138

158 158 162 158 152 143 150 145 143 147

149 151 132 147 146 150 147 153 150 151

152 156 151 152 152 153 147 141 148 148

- 159 151 152 152 154 155 155 154 154

155 154 156 152 164 155 147 162 163 144

164 161 158 158 165 154 160 158 160 162

MD DP

14117 223

15160 700

14760 590

15000 420

15400 230

15520 660

16000 323


P lt 005 H gt 599

A1=A2=A3 B1ltB2ltB3


plt 005

A1=A2 A1=A3 A2=A3

B1=B2 B1ltB3 B2=B3

A1=B1 A2ltB2 A3ltB3


64






reperfusatildeo)

-1

Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3

54 51 53 46 41 60

129 141 108 93 81 78 91 85

104 100

119 111 103 73

109 128 203 118 110 144

56 52 72 51 60 65 53 57 67 70

- 77

174 108 77 88 94 56 53 53

53 57 62 98

151 70 48

159 160 170

207 172 152 179 136 228 148 142 120 115

MD DP

508 066

101 205

122 338

60 077

87 380

103 512

160 366


P lt 005 H gt 599



Plt005

A1=A2 A1gtA3 A2gtA3

B1=B2 B1ltB3 B2ltB3

A1=B1 A2=B2 A3ltB3


65








Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3

- 06 09 07 08 11 06 07 08 07 05

07 09 04 06 09 07 04 07 07 04

08 07 09 08 06 13 10 12 06 09

- 05 07 06 06 06 04 06 07 06

06 06 07 10 10 07 14 05 14 06

06 08 12 11 06 06 12 11 13 12

MD DP

- -

074 007

064 021

088 007

059 007

085 033

097 042


P lt 005 H gt 599

A1=A2=A3 B1ltB2ltB3


plt005

A1=A2 A1=A3 A2ltA3

B1ltB2 B1ltB3 B2=B3

A1gtB1 A2=B2 B3=B3

66







Grupo S

A

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3

- 05 07 10 06 09 05 11 14 10 07

07 14 18 14 08 07 14 17 10 06

07 15 07 25 21 09 08 09 19 10

- 16 11 08 08 16 08 08 08 09

05 06 04 04 06 08 08 14 09 07

06 08 12 12 06 11 12 06 09 05

MD DP

- -

084 014

115 007

120 021

103 049

070 014

087 007


P lt 005 H gt 599



A1=A2 A1=A3 A2=A3 B1gtB2 B1=B3 B2=B3

A1=B1 A2gtB2 A3=B3

67








Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3

824 803 951 777

1140 1254

1247 940

1273 1283 1054 1670 809

1364 1104 1116

1891 2430 979

1231 1193 1044 1329 1371 1644 1049

1274 1173 737

1129 1039 879

1136 970

1016 1029

- 1673 1494 1527 1297 1816 1189 1924 763

1084

1526 1606 1453 1576 1759 1344 1757 1874 1779 1679

1853 1620 1673 1720 1269 1749 1794 1123 1316 1449

MD DP

98 198

1186 240

1416 455

1038 154

1419 372

1635 165

1557 254


P lt 005 H gt 599

A1ltA2gtA3 B1=B2=B3




68






Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3 486

184 154 100 96 275

522 694 385 379 431 640 456

1206 1237 1368

405 582 225 206 285 458 367 394 391 402

281 429 403 340 489 756 245 218 308 392

- 538 319 884 401 130 372 283 276 417

261 268 220 741 812 379 422 344 837 349

29 13 25 10 13 15 35 37

289 125

MD DP

21583 14772

73180 38730

37150 11110

38610 15530

40222 21297

46320 23868

5910 8752


P lt 005 H gt 599





69






Grupo S

A1

Grupo A

A2

A3

B1

Grupo B

B2

B3 65

56 72 56 50 60

193 235 112 70

103 120 75

200 253 286

94 240 60 64 71

203 77 81

100 163

66 104 80 99

130 218 64 70

150 180

- 83 67

288 152 69 53 47 65 74

47 40 50

138 135 90 98 53

200 180

80 10 25 10 20 97 63 82 48 84

MD DP

5983 776

16470 7824

11530 6368

11610 5260

9980 7990

10310 5792

5190 3358


P lt 005 H gt 599

A1=A2=A3 B1=B2=B3




Documents

ESTUDO DE ASPECTOS MORFOLÓGICOS E FUNCIONAIS DO …Celina Tizuko Fujiyama Oshima, Professora Pesquisadora Assistente do Departamento de Patologia Molecular do Departamento de Patologia