Voc foi contratado por uma empresa farmacutica para produzir
insulina humana recombinante. A empresa deseja produzir usando o
sistema de expresso em leveduras e ainda recebeu de outro
laboratrio uma bactria contendo o plasmdeo pUC18 com o RNAm da
insulina humana, de 469 pares de base (REF NCBI Gene ID 3630,
NM_000207), clonado no stio de BamHI.
1. Como voc faz para ter certeza que a bactria que voc recebeu
contm o plasmdeo
com a insulina humana clonada no stio de BamHI do pUC18 ? 2. O
RNAm da insulina no possui stio para a enzima de restrio BamHI. Que
tamanhos
de fragmentos vocs vai observar em eletroforese em gel de
agarose se voc digerir o pUC18 com o RNAm da insulina clonada com
BamHI?
3. Quais as vantagens de produzir se produzir uma protena humana
em levedura? 4. Descreva brevemente a funo, na produo de protena
recombinante, dos segmentos
do vetor pPIC9K relacionados abaixo:
5AOX1 promoter fragment fator alpha de secreo Stio de clonagem
ORF HIS4 Gene resistncia a canamicina Origem de replicao Gene
resistncia a ampicilina
5. Quais sero as etapas para construir o vetor pIC9K com o gene
da insulina humana clonado. Quais enzimas utilizaria, em que ordem,
quando transforma bactria ou levedura?
pBR322 origin: Origem de replicao em bactria
O Stio Mltiplo de Clonagem de pPIC9K possui um stio para
BamHI
