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8/13/2019 Pratica_Electroforese
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9/27/2012
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Digesto e Electroforese de
DNA
Electroforese
Separao de componentes de uma mistura.Protenas ou cidos nucleicosDNAou RNA
Migrao dependente da carga elctrica da
molcula.
Arne Tiselius
Cientista sueco ganhou o
prmio Nobel da Qumica em
1948.
Foi assistente de Svedberg edesenvolveu o mtodo da
electroforese para separao
de protenas em suspenso a
partir da sua carga elctrica
PolinucletidoCadeia simples de DNA
Carga global negativa
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ElectroforeseProcedimento experimental
Em Gel de Agarose
Toma partido da carga global negativa das molculas de DNA
ElectroforeseGlobal
Visualizao do DNA
A visualizao do DNA corado com
brometo de etdeocorante
fluorescente - s possvel com luz
UltraVioleta
Visualizao de DNA
Separa molculas de DNA de diferentes tamanhos
Visualizao do DNA
W R T W R T W R T
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DNA do Fago Lambda
Figure 8-31 Molecular Biology of the Cell( Garland Science 2008)
Enzimas de restrio
Corte cego
ou
Deixando extremidadesadesivas
Biologia 2009 5aula
Corte frequente ou raro
Enzyme Recognit ion sequence Type of ends End sequences
________________________________________________________________________________
AluI 5 -AGCT-3 Blunt 5 -AG CT-3'
3' -TCGA-5 3' -TC GA-5
Sau3AI 5-GATC-3' Sticky, 5 overhang 5' - GATC-3'
3' -CTAG-5' 3' -CTAG-5'
HinfI 5' -GANTC-3' Sticky, 5' overhang 5' -G ANTC-3'
3' -CTNAG-5' 3' -CTNA G-5'
BamHI 5' -GGATCC-3' Sticky, 5' overhang 5' -G GATCC-3'
3' -CCTAGG-5' 3' -CCTAG G-5'
BsrBI 5' -CCGCTC-3' Blunt 5' - NNNCCGCTC-3'
3' -GGCGAG-5' 3' - NNNGGCGAG-5'
EcoRI 5' -GAATTC-3' Sticky, 5' overhang 5' -G AATTC-3'
3' -CTTAAG-5' 3' -CTTAA G-5'
PstI 5' -CTGCAG-3' Sticky, 3' overhang 5' -CTGCAG-3'
3' -GACGTC-5' 3' -G ACGTC-5'
NotI 5' -GCGGCCGC-3' Sticky, 5' overhang 5' -GC GGCCGC-3'
3' -CGCCGGCG-5' 3' -CGCCGGCG-5'
BglI 5' -GCCNNNNNGGC-3' Sticky, 3' overhang 5' -GCCNNNNNGGC-3'
3' -CGGNNNNNCCG-5' 3' -CGGN NNNNCCG-5'
________________________________________
N = any nucleotide.
Note that most, but not all, recognition sequences have inverted symmetry: when read in the 5' 3 direction, thesequence is the same in both strands.
_____________________________________ Figure 8-32 Molecular Biology of the Cell( Garland Science 2008)
Molculas hbridas
DNAs de diferentes origens cortados
pelas mesmas enzimas podem dar
origem a molculas hbridas