Estudo da Mobilização de Polihidroxibutirato em Herbaspirillum seropedicae

Fernanda Holthmam UFPR/TN Marcelo Müller-Santos (Orientador), Cícero Silvano Teixeira (Co-orientador),

Emanuel M. de Souza (Colaborador), Fabio O. Pedrosa (Colaborador)

Herbaspirillum seropedicae é uma bacteria diazotrofica que produz PHB. Em condições de baixa disponibilidade de carbono, este polimero é mobilizado por PHA depolimerases (PhaZ). Em H. seropedicae foram identificados dois genes que codificam PhaZ (phaZ1 e phaZ2). O objetivo deste trabalho é construir estirpes mutantes que tenham os genes phaZ1 e phaZ2 suprimidos e verificar qual o impacto destas mutações em H. seropedicae SmR1.

ReferênciaPEDROSA, F. O. et al. Genome of Herbaspirillum seropedicae  strain SmR1, specialized diazotrophic endophyte of tropical grasses. Plos Genetics. v. 7, n. 5, e1002064, 2011.

Materiais e métodosDiferentes métodos de biologia molecular foram utilizados para a construção dos mutantes, tais como: reações de PCR com Taq DNA polimerase para amplificação dos genes de interesse, eletroforese de DNA em gel de agarose, digestão com enzimas de restrição, ligação de fragmentos de DNA com T4 DNA ligase, transformação em E. coli e conjugação bacteriana em H. seropedicae SmR1.

ConclusãoOs fragmentos a montante e a jusante dos gene phaZ1 e phaZ2 de H. seropedicae foram clonados, sequenciados e subclonados em pK18mobsacB, para posterior seleção dos mutantes ΔphaZ1 e ΔphaZ2.

ResultadosFigura 1 – Eletroforese dos produtos de fusão, obtidos por PCR, dos fragmentos a montante e a jusante dos genes phaz1 e phaz2 de Herbaspirillum seropedicae.Figura 2 - Eletroforese da digestão do plasmídeo pK18mobsacB_Δphaz1 de Herbaspirillum seropedicae.

Fig.1 Fig. 2

O plasmídeo pK18mobsacB com o inserto foi purificado de E. coli Top10 e transformado em E. coli S17-1 para conjugação bacteriana. As colônias resistentes a canamicina, portanto que sofreram recombinação homologa com o plasmídeo estão sendo analisadas para confirmar a ocorrência da deleção do gene de interesse.