RESUMOS DE DISSERTAÇÕES DE MESTRADO E TESES DE …revista.fmrp.usp.br/2009/vol42n1/teses_4%BAtrim_08.pdf · ponentes dos rafts, tais como: a LAT e os gangliosídeos derivados do

RESUMOS DE DISSERTAÇÕES DE MESTRADO E TESES DE DOUTORADOAPRESENTADAS NA FACULDADE DE MEDICINA DE RIBEIRÃO PRETO - USP

DE OUTUBRO A DEZEMBRO DE 2008

BIOLOGIA CELULAR E MOLECULAR

IDENTIFICAÇÃO E ANÁLISE DA EXPRESSÃO DE GENES CODIFICANDO MEMBROS DA FAMÍLIANEPH-RST EM GALLUS GALLUS

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José Eduardo BaronezaOrientador: Prof. Dr. Ricardo Guelerman Pinheiro RamosDissertação de Mestrado apresentada em 13/10/2008

Proteínas da família das imunoglobulinas têm sidorelatadas como fundamentais na regulação de eventos rela-cionados com a formação de órgãos tanto em invertebradoscomo em vertebrados. Em Drosophila melanogaster, porexemplo, um subgrupo desta família, que inclui as proteínasRoughest (Rst), Kin-of-lrre (Kirre), Sticks-and-stones (Sns)e Hibris (Hbs), é necessário à formação de olho, cérebro,túbulo de malpighi e tecido muscular. Proteínas homologasem vertebrados, Neph1, Neph2, Neph3 e Nefrina participamdo processo de filtração da urina nos podócitos e sua faltaacarreta em proteinúria, síndrome nefrótica congênita e morteperinatal. Este trabalho teve como objetivos identificar, pormeio de análises in silico, possíveis membros da famíliaNeph em Gallus gallus, isolar os fragmentos genômicos cor-respondentes e analisar a dinâmica de seu padrão de ex-pressão, tanto temporal como espacial durante o desenvol-vimento embrionário e em adultos, contribuindo assim paraas análises comparativas da evolução e diversificação es-trutural e funcional desta família gênica ao longo da escala

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filogenética. Nossos resultados levaram a concluir a exis-tência em galinha de apenas dois genes inequivocamentepertencentes a família Neph que denominamos chkNeph1 echkNeph. Ambos são funcionais e transcrevem rnRNAs deaproximadamente 2 kb Primeiramente observados nos está-gios HH-22 e HH-24 do desenvolvimento de G.ga//us. Emadultos, podem ser encontrados transcritos de ambos osgenes em coração, fígado, rim, testículo e retina, com dife-renças quanto ao perfil de expressão em ovário, pâncreas epulmão onde apenas foi observado o mRNA de chkNeph1 ecórtex parietal cerebral onde observamos somente a expres-são de chkNeph2. A comparação de sequências de proteí-nas da família Neph de Gallus e de outros vertebrados comseus homólogos em Drosophila suporta a hipótese de queos genes Neph são e resultado de divergência evolutiva dogrupo formado por Roughest e Kirre, enquanto as Nefrinasseriam oriundas do grupo formado por Hibris e Sns. Alémdisso, propomos que Neph3, ausente em galinha, seja pro-vavelmente uma molécula alternativa a Neph2 em pâncreasde mamíferos. Consideramos que os resultados obtidos atéo momento formam uma base a partir da qual experimentosespecíficos visando estabelecer as diferentes funções des-tes loci em Gallus poderão ser realizados.

CARACTERIZAÇÃO DO PAPEL DOS GANGLIOSÍDEOS NA ENDOCITOSE DO FCεεεεεRI EM MASTÓ-CITOS DEFICIENTES NA EXPRESSÃO DOS GANGLIOSÍDEOS DERIVADOS DO GD1B

Vivian Marino MazucatoOrientadora: Profª. Drª.Constance OliverDissertação de Mestrado apresentada em 17/10/2008

Lipid rafts são microdomínios especializados damembrana plasmática. Quando os mastócitos são ativadosvia FcεRI, estes receptores se agregam e se deslocam paradentro dos Lipid rafts onde se associam com outros com-ponentes dos rafts, tais como: a LAT e os gangliosídeosderivados do GD1b específicos de mastócitos. Em célulasRBL-2H3, após a estimulação, estes gangliosídeos especí-ficos de mastócitos são internalizados juntamente comFcεRI, em uma vesícula coberta por clatrina. No presente

trabalho foi investigado o papel dos gangliosídeos especí-ficos de mastócitos na modulação da via endocítica doFcεRI em células RBL-2H3 e em duas linhagens celularesmutantes B6A4A2III-E5 (E5) e B6A4C1III-D1 (D1). As cé-lulas E5 expressam 35% dos gangliosídeos específicos demastócitos encontrados nas células RBL-2H3 e as célulasD1 expressam menos de 1%. O mAb BC4 conjugado comFITC, que se liga na subunidade á do FcεRI, foi conjugadocom FITC e utilizado tanto para ativar as células quanto naanálise da internalização do FcεRI. As células RBL-2H3 eE5, após incubadas por 30 minutos de incubação com omAb BC4-FITC continham vesículas endocíticas dispersaspor todo o citoplasma. Com 1 hora as vesículas endocíticas

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das células RBL-2H3 começaram a se fusionar e formar agre-gados e, após 3 horas a maioria dos FcεRIs estava presenteem grandes agregados. Nas células E5 a formação de agre-gados pela fusão de vesículas endocíticas foi mais lenta,sendo observados somente com 3 horas de incubação. Emcontraste, mesmo com 3 horas de incubação, nas célulasD1 as vesículas endocíticas eram menores e a maioria delaspermanecia próxima à membrana plasmática. As diferençasobservadas entre a endocitose das três linhagens celula-res, despertou o interesse em melhor caracterizar a via en-docítica destas células. Quando as linhagens celulares fo-ram incubadas com o mAb BC4-FITC e, posteriormente,imonumarcadas com LAT (um marcador de Lipid rafts), α-adaptina (uma proteina adaptadora envovida na formaçãodas vesículas cobertas por clatrina), clatrina (uma cobertu-ra protéica para as vesículas endocíticas), Rab5 (um marca-dor de endossomo primário), CD63 (presente na membranalisossomal e de grânulos secretores), ficou claro que haviaum defeito na via endocítica do FcεRI nas células E5 e D1,que tem início na formação das vesíciculas endocíticas namembrana plasmática e se reflete por toda avia endocítica.O impedimento na formação das vesículas e no seu trans-

porte é mais severo nas células D1, onde quase todas asvesículas endocíticas foram encontradas próximas àmembrane plasmática. Estas diferenças na endocitose e notransporte foram confirmadas por microscopia eletrônica.O nível de expressão do FcεRI e das diferentes proteínasenvolvidas na endocitose foram analisadas por WesternBlotting e por citometria de fluxo. As células D1 apresenta-ram uma redução significante (79,8%) na expressão doFcεRI e, ambas as células E5 e D1 apresentaram umasuperexpressão de LAT. Não houve diferença na expres-são de α-adaptina, clatrina e Rab 5. A quantidadedelisossomos foi encontrado por Lysotracker Red e Green,também foi o mesmo nas três linhagens celulares. O defeitovisto nas linhagens celulares mutantes não foi limitado paraa endocitose do FcεRI. A endocitose de marcadores da su-perfície celular, a concanavalina A (ConA), bem como apinocitose de fase fluida também foi examinada. As célulasD1 motraram defeitos significantes na endocitose dos mar-cadores da ConA e na pinocitose de fase fluida. Portanto odefeito endocítico visto, principalmente nas células D1,parece ser um defeito geral que está relacionado com a au-sência dos gangliosídeos na membrane plasmática.

Tais resultados são sugestivos de que a desgranulação demastócitos induzida por Artin M possa ser decorrente dainteração entre os CRDs da lectina e componente (s)glicosilado (s) da superfície dessas células, como FcεRI.Ou ainda, de uma possível interação entre Artin M e a IgEligada ao FcεRI. A possível ligação de Artin M a IgE foiaveriguada através de ensaios em microplacas, onde verifi-cou-se que Artin M se liga à IgE de maneira dose-depen-dente. Investigou-se ainda se o receptor de alta afinidadepara IgE - FcεRI - seria reconhecido por Artin M. Atravésda separação eletroforética de proteínas de lisados de célu-las RBL-2H3, ativadas ou não, seguida da eletrotransferên-cia para membrana de nitrocelulose e incubação com ArtinM biotinilada, observou-se o reconhecimento, pela lectina,de diversos componentes que apresentam massas molecu-lares aparentes variáveis. Entretanto, dentre estes compo-nentes, encontra-se uma banda protéica de aproximada-mente 35 kDa, coincidente com aquela reconhecida pormAbs BE's, específicos para a subunidade β de FcεRI, fatoque sugere que esta subunidade do receptor seja reconhe-cida por Artin M. A análise da expressão de FcεRI, atravésde citometria de fluxo, mostrou que células RBL-2H3 esti-muladas por Artin M e sensibilizadas ou não por IgE, man-tiveram o nível de expressão de FcεRI, contrariamente àscélulas sensibilizadas pela imunoglobulina e estimuladaspor DNP48-HSA, que apresentaram uma redução de 40%na expressão de FcεRI. Através de ensaios de microscopiaconfocal e Western Blot, observou-se um aumento na in-

Valéria Cintra BarbosaOrientadora: Profª. Drª. Gabriela Silva BissonDissertação de Mestrado apresentada em 27/10/2008

Estudos anteriores demonstraram que Artin M in-duz a ativação de mastócitos na presença ou na ausênciade IgE ligada ao FcεRI e que os domínios de reconhecimen-to de carboidrato (CRDs) da lectina estavam envolvidosnessa atividade. No presente trabalho estudou-se a intera-ção da lectina Artin M com glicoconjugados da superfíciede mastócitos. A ligação de Artin M biotinilada à superfíciede células RBL-2H3, avaliada por ensaios de citometria defluxo, ocorreu em 97% das células. Tal ligação foi inibida em98 e 99%, respectivamente, por D-manose (25 e 50 mM) emetil-?-D-manopiranosídeo (25 e 50 mM). Através de mi-croscopia de fluorescência, observou-se marcação positi-va distribuída na superfície de células RBL-2H3. Não hou-ve marcação quando Artin M foi previamente incubada comD-manose (25 mM), contrariamente ao observado quandoa lectina foi pré- incubada com D-galactose (25 mM). Adesgranulação de células RBL-2H3 induzida por Artin Mfoi verificada através de ensaio de detecção de atividade β-hexosaminidase, onde se verificou que a liberação da enzi-ma ocorre na ausência ou presença de IgE, e que, nesseúltimo caso, há um aumento expressivo da atividade enzi-mática detectada. A liberação de β-hexosaminidase foi ini-bida em aproximadamente 97% quando Artin M foi previa-mente incubada com metil-α-D-manopiranosídeo (50 mM).

O PAPEL DA LECTINA ARTIN M NA ATIVAÇÃO DE MASTÓCITOS

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Medicina (Ribeirão Preto) 2009;42 (1): 00-00Resumos de Dissertações de Mestrado e Teses de Doutorado apresentadas na FMRP-USP http://www.fmrp.usp.br/revista

Ana Paula SaitaOrientador: Prof. Dr. Claudio Roberto SimonDissertação de Mestrado apresentada em 28/10/2008

Em estudos anteriores em nosso grupo, um screengenético de uma coleção de inserções únicas de elemento-P de Drosophila melanogaster, permitiu a identificação deuma mutação que provoca um severo fenótipo defectivode morte celular de glândulas salivares larvais. Animais ho-mozigotos mutantes para a inserção de elemento P morremcomo pupas tardias e apresentam glândulas salivares per-sistentes. Em animais selvagens a glândula salivar larval édestinada a morrer durante o estágio pupal num processode morte celular autofágico mediado por esteróide. O locusmutado pela inserção do elemento-P foi identificado e no-meado jazigo. Análises bioinformáticas demonstraram gran-de homologia do gene e de seu produto com componentesde uma família de proteínas denominada forminas (proteí-nas FH ou Formin Homology) quê foram conservadas emeucariotos e cuja função foi relacionada com o remodela-mento ativo do citoesqueleto de actina e microtúbulos emdistintos processos celulares. Nesse trabalho demos inícioà caracterização bioquímica e funcional de JAZIGO utili-

zando análises de bioinformática e produção de anticorpospoliclonais capazes de detectar o padrão de localizaçãosubcelular de JAZIGO na glândula salivar larval durante operíodo de morte celular programada. (MCP). Com base nasanálises de bioinformática verificamos que as duas isofor-mas de JAZIGO são essencialmente hidrofilicas e que es-sas proteínas possuem um alto grau de similaridade comforminas da subfamília FHOD, as quais foram envolvidasna apoptose artificialmente induzida em células HeLa. Alocalização de JAZIGO durante a morte celular programadaé inicialmente citoplasmática, mas com o progresso do pro-cesso de morte celular a proteína é translocada para o nú-cleo progressivamente. Nossos dados sugerem que JAZpossui comportamento similar a formina FHODl e que JAZ,similarmente a FHODl, poderia desempenhar um papel naregulação de eventos de morte celular. Esses dados suge-rem que JAZ e FHOD poderiam hipoteticamente comporum grupo distinto de forminas relacionadas a processos demorte celular. Também utilizamos o anticorpo para determi-nar a localização subcelular de JAZ em glândulas salivarespersistentes de animais mutantes. Notamos que a localiza-ção nuclear de JAZ foi observada apenas nas células cujoprocesso de MCP foi interrompido mais tardiamente.

tensidade da marcação pelo anticorpo anti-fosfotirosina,após estímulo por Artin M, que pode ser devido a um au-mento da fosforilação de tirosinas induzido pela lectina, napresença de IgE, sugerindo que FcεRI esteja de fato envol-vido no processo de ativação celular induzido por Artin M.Através de ensaios imunoenzimáticos - ELISA- verificou-se um aumento de 43% na produção de MCP-1 em célulassensibilizadas por IgE e estimuladas por Artin M, durante 1hora, comparado às células estimuladas via FcεRI. Foi ob-servado um aumento de 92% na produção da TGF-β emcélulas não sensibilizadas por IgE e estimuladas por Artin

M, durante 8 horas, em relação às células estimuladas viaFcεRI; em adição, houve um aumento de 68% na produçãode TGF-β em células sensibilizadas por IgE e estimuladaspor Artin M durante 8 horas, em relação às células estimu-ladas via FcεRI.

O conjunto dos resultados obtidos sugere que ArtinM, ao ligar-se apropriadamente a carboidratos da superfí-cie de mastócitos, possivelmente àqueles presentes no re-ceptor de alta afinidade para IgE e/ou na própria IgE ligadaao FcεRI, induza a transdução de sinal intracelular, respon-sável pela ativação dos mastócitos.

PRODUÇÃO DE ANTICORPOS POLICLONAIS E DETERMINAÇÃO DO PADRÃO SUBCELULARDE DISTRIBUIÇÃO DE JAZIGO DURANTE A MORTE CELULAR PROGRAMADA EM GLÂNDULASSALIVARES DE Drosophila melanogaster

em áreas urbanas da Amazônia, assim como pelo seu poten-cial de disseminação para outras regiões do Brasil e da Amé-rica do Sul. Apesar de sua importância nunca foi determina-da a existência de componentes do vírus Oropouche, estru-turais ou não, que estejam relacionados a sua patogenicida-de. Diante da ausência desses marcadores, o presente estu-do procurou desenvolver uma metodologia que fosse capazde analisar acúmulos das espécies de RNAs virais ao longoda replicação em um único ciclo. No presente estudo foideterminada a curva biológica do vírus Oropouche em um

Andrei Furlan da SilvaOrientador: Prof. Dr. Eurico de Arruda NetoDissertação de Mestrado apresentada em 03/11/2008

O vírus Oropouche é reconhecido como a segundacausa mais frequente de arbovirose febril no Brasil, só sen-do superado em número de casos pelo vírus da dengue. Ovírus Oropouche se destaca pelo elevado número de casosde infecção aguda febril, que ocorrem em surtos epidêmicos

PCR EM TEMPO REAL PARA DETECÇÃO ESPECÍFICA DE RNAS (+) E (-) DE VÍRUS OROPOUCHE

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Claudia Maria Meirelles MarchiniOrientadora: Profª. Drª. Constance OliverDissertação de Mestrado apresentada em 11/11/2008

Os mastócitos participam do sistema imunológicoliberando mediadores farmacologicamente ativos. A princi-pal via de ativação dos mastócitos é através do receptor dealta afinidade para a imunoglobulina E (FcεRI). A ativaçãodos mastócitos via FcεRI culmina com a liberação de medi-adores. A enzima PLD atua sobre fosfolipídios hidrolisandoa fosfatidilcolina em ácido fosfatídico e colina. A PLD éativada após o estímulo via FcεRI e possui um papel impor-tante na transdução do sinal em mastócitos. Existem duasisoformas da enzima PLD, a PLD1 e a PLD2 que são expres-sas, diferentemente, de acordo com o tipo celular. Ambasas isoformas podem estar expressas numa mesma célula,apenas uma ou nenhuma. Neste estudo foram utilizadascélulas RBL-2H3 transfectadas para a super expressão PLD2nas formas catalítica ativa (CA) e inativa (CI). O papel daPLD2 foi examinado nestas células com o objetivo de elucidarsua atuação no processo de secreção incluindo o aparelhode Golgi e os grânulos secretores. As células CA e CI pos-suem maior atividavidade de β-hexosaminidase total, po-rém quando estimuladas mostram uma deficiência na libe-ração desta enzima, quando comparadas com as célulasselvagens. A PLD2 nas células CA, CI, VET e RBL-2H3 estálocalizada no citosol, sendo abundante na região justanu-clear, principalmente nas células CI, sugerindo uma associ-ação com o aparelho de Golgi. A dupla marcação com o

mAb AA4, que imunomarca gangliosídeos derivados doGD1b da membrana plasmática e com anti-PLD2, mostrouque esta enzima não se localiza na membrana plasmática. Adupla marcação com anti-PLD2 e anti-GM130 mostrou queas áreas de maior concentração da PLD2 se co-localizamcom o aparelho de Golgi, especialmente nas células CI. Amarcação com anti-GM130 e os experimentos com micros-copia eletrônica de transmissão mostraram que o aparelhode Golgi está organizado nas células CA e desorganizadonas células CI, onde se encontra disperso no citoplasma.Ainda, as células CI expressam menos GM130 em compara-ção com as demais linhagens celulares. Quando a produ-ção de PA pela PLD está inibida pelo 1-Butanol, as célulasCA apresentam as mesmas características fenotípicas dascélulas CI. A incubação das CI com PA resulta na reestrutu-ração do aparelho de Golgi. A manutenção estrutural doaparelho de Golgi, também está relacionada com os micro-túbulos. Nas células CI o centro organizador de microtúbu-los é dificilmente identificado. Os microtúbulos nas célulasCI são desordenados em comparação com as demais linha-gens celulares. Estes resultados mostram que a produçãode PA pela PLD2 é importante na organização de microtú-bulos e na manutenção da estrutura do aparelho de Golgi.As alterações celulares relacionadas com os microtúbulose o aparelho de Golgi afetam o processo secretor nestascélulas e, provavelmente, em outros tipos de células secre-toras. Estes achados poderão levar a novas estratégias te-rapêuticas para controlar a liberação de mediadores duran-te processos alérgicos e inflamatórios.

único ciclo com MOI > 1 em células Hela I e desenvolvidoum ensaio de RT-PCR em tempo real capaz de detectar RNAs(+) e RNAs (-) durante o ciclo replicativo. Nesse estudotambém observamos a presença de cDNAs formados mes-mo sem a adição de primers exógenos, aos quais chamamosde cDNAprimer (-), e que geram falso-positivos. Para solucio-nar este problema desenvolvemos um ensaio de RT-PCR em

tempo real específico, utilizando na etapa da RT primersbiotinilados que permitem purificar o cDNA no qual se in-corporam por meio de separação magnética. Com isso con-seguimos desenvolver um método de detecção específicodiferencial para RNAs positivos e negativos produzidosdurante ciclo e replicativo e pode vir a ser uma importanteferramenta nos estudos de atogêneses.

O PAPEL FUNCIONAL DA ENZIMA FOSFOLIPASE D2 (PLD2) NAS CÉLULAS DA LINHAGEM DEMASTÓCITOS RBL-2H3

protozoário parasita Leishmania quando submetido a estí-mulos negativos como, por exemplo, a presença de drogas.A região H do genoma de Leishmania (Leishmania) major éum dos loci mais estudados que leva à amplificação em res-posta a drogas não relacionadas, como a terbinafina. Foramisoladas linhagens de L. (L.) major e Leishmania (Viannia)

Fabrício César DiasOrientador: Prof. Dr. Luiz Ricardo Orsini TosiTese de Doutorado apresentada em 24/11/2008

O fenômeno de amplificação gênica é um mecanismode auto-preservação celular observado com frequência no

CARACTERIZAÇÃO DE MECANISMOS DE RESISTÊNCIA À TERBINAFINA EM DIFERENTES ES-PÉCIES DE Leishmania

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braziliensis resistentes à terbinafina. Análises por corridascurtas de eletroforese em campo pulsado (PFGE) e Southernblotting revelaram que a resistência observada nestas li-nhagens não foi gerada pela amplificação do locus H. Sen-do assim, a resistência ao inibidor da esqualeno epoxidaseestá sendo gerada por um outro mecanismo uma vez queoutros loci podem estar envolvidos na resistência àterbinafina e através da análise diferencial do perfil de pro-teínas, os mutantes resistentes apresentaram diferenças naexpressão de proteínas. O alvo inicial para a elucidação daresistência à terbinafina nas linhagens selecionadas foi avia de biossíntese de ergosterol. Foram escolhidos os genesda 3-cetoacil-CoA tiolase (ERG10), esqualeno sintase (ERG9ou SQS1), esqualeno epoxidase (ERG1), oxidoesqualeno-lanosterol ciclase (ERG7) e lanosterol 14 -demetilase (ERG11),de L. major e L. braziliensis, além do gene YIP1 de L.braziliensis. Para isso foram sintetizados oligonucleotídeosa partir das sequências geradas pelo projeto genoma destasespécies depositadas em bancos de dados.

Os genes ERG10, SQS1, ERG1, ERG7 e ERG11 deL. major e de L. braziliensis além do YIP1 de L. braziliensisamplificados por PCR foram clonados no vetor pGEM-TEasy, que possibilitou a construção de reagentes para rup-tura de todos genes pela inserção da marca HYG e, comexceção do gene ERG7 de L. braziliensis, os genes foramsubclonados no vetor pXG1. Fragmentos de restrição dos

genes clonados no vetor pGEM-T Easy foram utilizadospara analisar o nível de seus transcritos por northern blot.Também verificamos através de corridas curtas de PFGE eanálises de Southern, que as linhagens em estudo não apre-sentam amplificação dos loci em estudo. A participação degenes da via de biossíntese de ergosterol de L. major e L.braziliensis e do gene YIP1 de L. braziliensis na resistên-cia ou susceptibilidade à terbinafina e/ou anfotericina B foiverificada através de experimentos funcionais. Com esseobjetivo, os genes YIP1, ERG10 e ERG1 de L. braziliensisforam transfectados na linhagem LB2904 de L. braziliensis,e os genes ERG10, SQS1, ERG1, ERG7 e ERG11 e a ruptu-ra do gene ERG1 pelo cassete HYG de L. major foram trans-fectados na linhagem LT252 de L. major.

Foram realizados experimentos para analisar a sus-ceptibilidade à anfotericina B associada ou não à terbinafina,das linhagens selvagens de L. major e L. braziliensis, e apartir destes experimentos iniciais, foram selecionadas li-nhagens destas duas espécies resistentes à anfotericina B.

Para analisar a possível função regulatória dos ele-mentos RIME 5/2/6 de L. braziliensis, foi feita a amplifica-ção por PCR da repetição invertida LbRIME 5/2/6b quepermitiu a clonagem deste fragmento no vetor pGEM-T Easye a sua ruptura pela marca SAT. A clonagem no vetor pGEMpossibilitou a análise da interação de proteínas nucleares àrepetição LbRIME 5/2/6b através do gel shift.

sie coloidal G-250, coloração específica para fosfoproteínase anticorpos específicos contra resíduos fosforilados deserina e tirosina. Mapas bidimensionais foram analisadosutilizando o software ImageMaster Platinum. Vinte oito spotsde um total de duzentos, cerca de ±14%, desapareceramapós o tratamento com fosfatase alcalina. Proteínas modifi-cadas pelo tratamento passaram por digestão in situ comtripsina e os peptídeos tripsínicos submetidos a espectro-metria de massas em equipamentos do tipo MALDI-ToF eESI triplo quádruplo. Doze proteínas dos spots digeridos,selecionados após o tratamento com ëPPase, foram identi-ficados. As seguintes proteínas foram identificadas em maisde um spot alinhado horizontalmente: Nucleofosmina, umaproteína fosforilada envolvida com acetilação nucleolar eAnexina A6, uma proteína reguladora de cálcio extrema-mente conservada. Outras proteínas escolhidas após o tra-tamento com lPPase foram identificadas como Heat shock70 kDa protein 1, Stress-70 protein, mitochondrial,Heterogeneous nuclear ribonucleoprotein H, Tumor proteinD52, Actin-related protein 2/3 complex subunit 5, Eukaryotictranslation initiation factor 5A-1 e Rho GDP-dissociationinhibitor 1.

Germano Aguiar FerreiraOrientador: Prof. Dr. Lewis Joel GreeneDissertação de Mestrado apresentada em 27/11/2008

O estudo fosfoproteômico de células linfóides podecontribuir para a compreensão de sua origem através daelucidação das vias responsáveis pelo escape dessas docontrole celular. A abordagem proteômica foi utilizada noestudo inicial da linhagem GRANTA-519, uma linhagem ce-lular estabelecida de linfoma de células do manto, atravésda criação de um inventário inicial de identificação de pro-teínas com possíveis modificações pós-traducionais, es-pecialmente fosforilações. Inicialmente as células deGRANTA-519 foram cultivadas em condições adequadas.Proteínas foram extraídas com tampão de lise contendo 7,7M de uréia, 2,2 M de tiouréia, 4,4 % de CHAPS e uma mistu-ra de cocktail inibidor de proteases. Após extração dasproteínas do extrato celular, alíquotas de proteínas foramtratadas com lPPase e submetidas a focalização isoelétricaem faixa de pH de 4,0 – 7,0 e eletroforese em gel depoliacrilamida e SDS preparados em nosso laboratório. Pro-teínas foram detectadas através de coloração com coomas-

IDENTIFICAÇÃO DE FOSFOPROTEÍNAS EM CÉLULAS DE UMA LINHAGEM DE LINFOMA DOMANTO

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Fabrício Freitas FernandesOrientador: Prof. Dr. Paulo Sérgio Rodrigues CoelhoDissertação de Mestrado apresentada em 15/12/2008

A incidência de infecções por fungos oportunistasna população de pacientes imunocomprometidos tem au-mentado nos últimos anos, e estas são, principalmente, cau-sadas por Candida albicans. Este patógeno oportunistapode crescer em diferentes formas, variando de levedura,pseudohifa e hifa e essa transição morfológica está associ-ada com a virulência. Na transição de levedura para hifa,genes hifa-específicos são expressos e muitos deles codifi-cam proteínas que possuem uma molécula de GPI(glicosilfosfatilinositol), mas a maioria (66%) das proteínaspreditas ancoradas por GPI (PGAs), ainda possuem funçãodesconhecida. Portanto, o objetivo deste trabalho, foi ini-ciar a caracterização funcional dos genes PGA13 e PGA58através de análises in silico, da expressão diferencial dosRNAm sob condições ambientais diversas, e nos mutantes

nulos TUP1 e EFG1, e a obtenção e caracterizaçãofenotípica dos mutantes de PGA13: homozigoto nulo e desuperexpressão.

Os estudos realizados in silico indicam que PGA13e PGA58 são reguladas pelos fatores transcricionais Efg1,Tec1 e Nrg1 e que possuem sítios potenciais de glicosilação.A análise transcricional desses genes mostra que ambossão regulados por Tup1 e que respondem aos estímulosNaCl (Cloreto de sódio), H2O2 (Peróxido de hidrogênio),etanol, cafeína, HCl (Ácido Clorídrico) e às condições hipoe hiperosmótica. Os mutantes nulos e de superexpressãode PGA13 e PGA58 foram obtidos e as linhagens que per-deram o gene PGA13 tiveram um padrão de crescimento dacolônia diferente da linhagem CAI-4 e foram mais sensíveisaos compostos SDS, Higromicina B e pH ácido, enquanto omutante que superexpressava foi mais resistente. Estes re-sultados sugerem que PGA13 deve ter papel importante naparede celular, visto que a falta dela ocasionou maior sensi-bilidade a compostos que agridem a parede celular.

doença respiratória na unidade de emergência. Os critériosde inclusão foram sintomas e sinais de infecção respiratória,incluindo coriza, obstrução nasal, febre, tosse, dispnéia,taquipnéia, sibilos e sinais de bronquiolite ou pneumonia.

Ao todo 191 amostras foram testadas por todos osmétodos. O Directigen EZ RSV detectou HRSV em 73/191(38%) amostras, enquanto imunofluorescência indireta, iso-lamento em cultura e o semi-nested-RT-PCR identificaramrespectivamente 63/191 (33%), 62/191 (32%) e 82/191 (43%).Em comparação com todos os outros testes tomados emconjunto, o Directigen EZ RSV obteve 80% de sensibilida-de, 99% especificidade, 99% valor preditivo positivo (PPV),85% valor preditivo negativo (NPV) e 90% acurácia.

Os resultados mostraram que o teste Directigen EZRSV é uma boa alternativa para o diagnóstico de HRSV,pela sua facilidade e rapidez de execução, sendo especial-mente útil em serviços de atenção primária de saúde.

Flávia Escremim de PaulaOrientador: Prof. Dr. Eurico de Arruda NetoDissertação de Mestrado apresentada em 17/12/2008

O diagnóstico rápido de infecção do trato respirató-rio por HRSV é importante para definição de conduta bemcomo para a identificação de surtos. No presente estudonós avaliamos o desempenho do teste rápido DirectigenEZ™ RSV (BD Diagnostic Systems, Sparks, USA.), em com-paração com a imunofluorescência indireta (IF), isolamentoem cultura e semi-nested-RT-PCR, para a detecção do vírussincicial respiratório humano (HRSV) em amostras de secre-ção respiratória de crianças atendidas no Hospital das Clíni-cas da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto, Universi-dade de São Paulo, Brasil. De fevereiro a dezembro de 2005foram coletadas 191 amostras de aspirados nasais de crian-ças com idade entre oito dias e 50 meses, atendidas por

COMPARAÇÃO DE UM TESTE RÁPIDO IMUNOCROMATOGRÁFICO (DIRECTIGEN EZ RSV)COM IMUNOFLUORESCÊNCIA INDIRETA, ISOLAMENTO EM CULTURA E SEMI-NESTED-RT-PCR PARA A DETECÇÃO DE VÍRUS SINCICIAL RESPIRATÓRIO HUMANO

CARACTERIZAÇÃO MOLECULAR DO GENE NCSA DE Aspergillus fumigatus

André Oliveira Mota JúniorOrientador: Prof. Dr. Gustavo H. GoldmanTese de Doutorado apresentada em 18/12/2008

O foco do trabalho está direcionado para a constru-ção da linhagem "knock-out" do gene ncsA de A. fumigatus,bem como a caracterização do fenótipo da linhagem ∆ncsAe a investigação de interações deste gene com vias de sina-

lização importantes para o desenvolvimento do fungo. Alinhagem mutante ∆ncsA foi construída através da transfor-mação do WT ( ku80) com o gene marcador pyrG de A.fumigatus. Foi confirmada a deleção por Southern blot e asalterações fenotípicas da linhagem foram analisadas. O genencsA em A. fumigatus não é essencial e a linhagem ∆ncsAapresentou-se sensível EGTA e SDS, alé, de tolerante a al-tas concentrações de íons cálcio. Na linhagem NcsA:mRFP

CARACTERIZAÇÃO FUNCIONAL DOS GENES PGA13 E PGA58 DE Candida albicans

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Janaína Silva de FreitasOrientador: Prof. Dr. Antonio Rossi FilhoTese de Doutorado apresentada em 30/10/2008

A via transdutora de sinal mediada pelo fator detranscrição PacC atua em muitos eventos metabólicos en-volvidos na resposta adaptativa ao pH alcalino em Asper-gillus nidulans. O gene pacC codifica um fator de transcri-ção zinc-finger, e os seis genes paI (A, B, C, F, H e l) sãomembros putativos de uma cascata sinalizadora que pro-movem a ativação proteolítica de PacC em ambiente alcali-no. A proteína PalA interage com os motivos YPXL/I emPacC, o que é necessário para a ação de PaIB, uma proteaseda família das calpaínas. Este modelo implica que mutaçõesacarretando perda de função em qualquer dos genes paIlevariam a mimetização do fenótipo ácido (selvagem) inde-pendentemente do pH ambiente. Assim, qualquer que sejao pH de cultivo, a mutação pa/A1 deveria mimetizar ofenótipo selvagem, o que não foi observado na linhagemmutante biA1 palA1. Experimentos simples foram designa-dos para identificar a influência dos nutrientes no pH finaldas culturas e na secreção da fosfatase ácida em Aspergi-llus nidulans. A linhagem mutante pa/C4 foi selecionadapelo seu aumento substancial da atividade da fosfataseácida e diminuição da atividade da fosfatase alcalina, quan-do cultivada em meio mínimo sólido, Pi limitante, pH 6.5. Foi

demonstrado que o crescimento pobre e a conidiação dalinhagem mutante pa/C4 em meio sólido, pH alcalino, foramhiper sensíveis ao tampão Tris (hydroxymethyl). A secre-ção da fosfatase ácida foi reprimida em ambas as linhagensparental biA 1 e mutante palC4 biA 1 quando cultivadas emmeio líquido de extrato de levedura, Pi limitante, pH 5.0.Essa condição indica que a secreção da fosfatase ácidanão é necessária para regenerar fosfato inorgânico a partirdo fosfato orgânico presente no extrato de levedura. Osresultados apresentados não invalidam a hipótese da cas-cata de sinalização governada por PacC em resposta fisio-lógicas ao pH alcalino. Entretanto, está claro que a percep-ção do pH alcalino pode não ser sua única função. Com afinalidade de identificar genes envolvidos na respostaadaptativa ao pH ambiente e avançar no entendimento dafuncionalidade do gene palA em pH ácido, a hibridaçãosubtrativa por supressão foi realizada a partir dos mRNAsisolados das linhagens biA 1 e biA 1 palA 1 de A. nidulanscultivadas em condições de fosfato limitante, pH 5,0. Esteestudo revelou genes com expressão diminuída na linha-gem mutante biA1 palA1 envolvidos na defesa celular, res-posta ao estresse, transcrição, síntese de proteínas, comu-nicação celular e etc. A expressão diferencial de nove des-ses genes, confirmada por Norlhern blot, indica que o genepalA tem função metabólica específica em pH ácido em A.nidulans.

foi localizado a proteína NcsA no citoplasma das células esua localização não é alterada pela em resposta ao aumentoda concentração de cálcio. A linhagem ∆ncsA foi sensível adrogas que afetam a biossíntese e a manutenção da mem-brana plasmática, tais como voriconazole, anfotericina eitraconazole. O crescimento polarizado em presença delovastatina nessa linhagem foi consideravelmente mais afe-tado que no tipo selvagem. O Spitzenkörper não foi

visualizado no mutante ∆ncsA, e existe uma significantediminuição de estruturas vacuolares e endossomos. Os re-sultados obtidos em ensaios de TRPCR em tempo real su-gerem que NcsA modula a expressão dos genes pmcA epmcB, que codificam proteínas ATPases transportadorasde íons cálcio. Os ensaios de virulência no modelo animalrevelaram que a mutação do gene ncsA não causa perda devirulência no A. fumigatus.

BIOQUÍMICA

IDENTIFICAÇÃO DE GENES NO FUNGO FILAMENTOSO Aspergillus nidulans MODULADOS PORPaIA, UM COMPONENTE DE UMA CASCATA SINALIZADORA EM RESPOSTA AO pH AMBIENTE

PROGRAMA DE TRIAGEM DE COMPOSTOS E ESTRATÉGIA PARA PROSPECÇÃO E DESENVOLVI-MENTO EM LARGA ESCALA DE NOVOS BIOATIVOS COM POTENCIAL ANTIMICOBACTERIANO

Fabio Cícero de Sá GalettiOrientador: Prof. Dr. Celio Lopes SilvaTese de Doutorado apresentada em 03/11/2008

O atual tratamento da tuberculose (TB) implica naterapia combinada de quatro diferentes drogas por pelo

menos seis meses o que pode levar a não adesão do paci-ente ao regime terapêutico. O abandono da terapia é umdos principais fatores que favorecem o aumento dos casosde tuberculose multidroga resistente(MDR- TB) e tubercu-lose extremamente resistente (XDR- TB), que somados aosproblemas de co-infecção com HIV/AIDS, diminuem dras-

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ticamente a eficácia anti- TB das drogas de primeira esco-lha. Estes fatores indicam a necessidade urgente para des-coberta de uma nova droga para ser-aplicada no tratamentoda TB. Desta forma o Núcleo de Pesquisas em Tuberculose(NPT), estabeleceu o programa de triagem de compostos,utilizando a estratégia de triagem aleatória de compostos emlarga escala, para prospecção de potenciais novos bioativosanti- TB, tanto de produtos naturais (biodiversidade brasi-leira) como de produtos de origem sintética. Basicamente aplataforma é constituída de três etapas principais: (i) deter-minação da concentração inibitória mínima (CIM) das amos-tras contra o bacilo da TB; (ii) realização de estudos decitotoxicidade (IC50) e atividade biológica em macrófagosinfectados; e (iii) determinação da atividade biológica emmodelos de TB experimental. Foram realizados bioensaiosin vitro de concentração inibitória mínima frente à cepa deMtb (H37Rv A TCC 27294) com um total de 2076 amostras:81,41 % de extratos brutos de produtos naturais, 13,34% deamostras fracionadas ou isoladas dos produtos naturais e5,25% de compostos sintéticos. Os resultados seleciona-ram 60 extratos com CIM inferior a 125 µg/mL que levaramao isolamento de dois bioativos do extrato bruto da esponja

marinha Aplysina cauliformis. Estes extratos apresentaraminédita atividade anti- TB in vitro, ausência de citotoxicidadeem células de mamíferos e capacidade de reduzir em 3,53 logde UFCs a carga bacilar intracelularmente semelhante à dro-ga padrão RFP. Resultados semelhantes também foram en-contrados para três compostos sintéticos, dois análogosheterocíclicos da nitrofurazona com CIM=16 µMol e umderivado análogo da INH (composto 227) com CIM=2 µMol.Todas os três compostos apresentaram excelentes índicesde seletividade sendo o melhor deles caracterizado para ocomposto 227 (IS > 250). O mesmo composto também apre-sentou resultado promissor em teste pré-clínico em modelomurino de TB experimental ao reduzir significativamente acarga bacilar de tecido pulmonar em 3,27 log de UFC quan-do comparado ao controle negativo (animais não tratados).Por fim, testes preliminares detectaram uma atividadeimunomoduladora em potencial para o composto na respos-ta contra a TB. As análises dos resultados indicaram o su-cesso do Programa de Triagem de compostos e a eficácia daestratégia de triagem aleatória em larga escala em identificarpotenciais novos bioativos anti- TB em curto período detempo e baixo investimento de capital.

bactericida, as mutantes H48Q, D49K e G30S na região desitio ativo foram produzidos com o intuito de reduz ou eli-minar a atividade catalítica da enzima. A proteína hsPLA2-IID tipo selvagem e a mutante H48Q apresentaram ativida-de hidrolítica de 58,45 e 7,7 µM.min-1.mg-1 respectivamente,e demonstraram uma atividade de danificação de membra-nas artificiais. Em contraste, as mutantes G30S e D49K per-deram completamente a atividade catalítica, mas mantive-ram a capacidade de danificar membranas artificiais, de-monstrando que a atividade hidrolítica e a danificação demembranas modelos não estão correlacionadas. A proteínahsPLA2-IID tipo selvagem demonstrou um efeito bactericidacontra bactérias Gram-negativa (E. coli K12) e Gram-positi-va (Micrococcus luteus). As mutantes H48Q e D49K redu-ziram, mas não aboliram a atividade bactericida contra a E.coli, demonstrando que a atividade independente da ativi-dade catalítica contribui para o efeito contra este linhagem.As mesmas mutantes causam uma redução maior na ativi-dade contra M. luteus, mostrando que os mecanismos doefeito bactericida são diferentes entre bactérias Gram nega-tivas e positivas. Os efeitos das mutações da hsPLA2-IIDforam comparados com os efeitos das mesmas mutações nahsPLA2-IIA e com botropstoxina-l, uma Lys49- PLA2 isola-do do veneno da serpente Bothrops jararacussu, indican-do que além da atividade catalítica e a atividade indepen-dente de catalise, acesso a membrana interna da bactériapode ser um fator na determinação da atividade bactericidadas fosfolipases A2 de classe II.

Raquel Gomes FonsecaOrientador: Prof. Dr. Richard John WardDissertação de Mestrado apresentada em 19/11/2008

As fosfolipases A2 (PLA2s, EC 3.1.1.4) são enzimasenvolvidas em uma ampla variedade de processos fisioló-gicos que compreendem digestão fosfolipídica, remodela-gem de membranas, regulação do sistema imunológico eprocessos patofisiológicos. As PLA2s secretadas do gru-po II (PLA2-II) são proteínas do sistema imune presentesna resposta de fase aguda e na atividade bactericida, parti-cipando na ativação e liberação de citocinas e de outrosmediadores pré-inflamatórios. Apesar dos estudos recen-tes sobre os efeitos farmacológicos e mecanismo catalíticoda PLA2 do grupo lIA humana (PLA2-IIA), pouca atençãotem sido dada à PLA2 do grupo IID humana (hsPLA2-IID),uma proteína associada ao progresso do processo inflama-tório. O presente trabalho representa um estudo para avali-ar uma eventual correlação entre o mecanismo de permea-bilização de membranas modelos e a atividade bactericidade hsPLA2-IID. A sequência codificadora da hsPLA2-IIDfoi inserida no vetor de expressão pET3a, e a proteínaheteróloga foi produzida na forma de corpos de inclusãoem EscherIchia coli BL21 (DE3). Um protocolo de enovela-mento da proteína recombinante foi desenvolvido que per-mitiu a produção de hsPLA2-IID na conformação nativa.Para avaliar o papel de atividade catalítica no efeito de per-meabilização de membranas modelos e na atividade

ATIVIDADE DA FOSTOLIPASE A2 SECRETADA HUMANA DO GRUPO IID (HSPLA2-IID) CONTRAMEMBRANAS ARTIFICIAIS E BIOLÓGICAS

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Spencer VaiciunasOrientador: Prof. Dr. Reginaldo CenevivaDissertação de Mestrado apresentada em 30/10/2008

A descoberta endoscópica de um tumor subepitelial(TSE) é frequente. Geralmente o aspecto corresponde à deuma compressão extrínseca (CE) ou ao de um tumor intra-mural (TI). O diagnóstico dessas lesões, por vezes, é difícil,mesmo após a obtenção de biópsias pela endoscopia di-gestiva alta (EDA). A ecoendoscopia (EE) tem apresentadoimportante papel na elucidação diagnóstica. A propostanesse estudo foi comparar os resultados da EDA com os daEE no diagnóstico diferencial entre TI e CE do esôfago,estômago e duodeno e avaliar o desempenho da ecoendos-copia no diagnóstico diferencial dos TSE. Foi feita análiseretrospectiva dos exames de 176 pacientes (93 mulheres),com média de idade de 62,5 (10- 89) anos, de janeiro de 2000a maio de 2006, que foram estudados por EDA e EE porapresentar abaulamento subepitelial ao exame endoscópicodo trato gastrointestinal alto. O tamanho, mobilidade, loca-lização e o diagnóstico de presunção foram registrados nomomento da EDA. Durante a EE foram analisados o tama-

nho, a ecogenicidade do tumor, as camadas da parede davíscera e o diagnóstico presuntivo. Todos os pacientes fo-ram avaliados consecutivamente pela EDA e EE. Os tumo-res intramurais representaram 87% dos casos e dentre eles,o tumor estromal gastrointestinal foi a maioria (62%), en-quanto as compressões extrínsecas representaram 13%, dasquais a compressão pelo figado foi a mais frequente (31 %).Para a avaliação dos TI a sensibilidade, especificidade aacurácia da EDA foram menores de 50 % com p=0,25 e paraa EE de 95%, 100% e 95% respectivamente, com p=0,0003(teste de Fisher). Na avaliação das CE, a sensibilidade, es-pecificidade e acurácia da EDA foram de 87%, 50% e 86%com p=0,43 e a EE de 95%, 100% e 95% respectivamente,com p=0,08 (teste de Fisher). Conclui-se que a endoscopiadigestiva é um bom exame para diagnosticar a presença detumores intramurais do trato digestivo, mas tem fraco de-sempenho em identificar o tipo específico do tumor, e é ummau exame para o diagnóstico das compressões extrínse-cas. Por outro lado, a ecoendoscopia é um bom exame parao diagnóstico diferencial dos tumores subepiteliais, poden-do fornecer com precisão a localização do tumor além depermitir biópsias dirigidas.

CLÍNICA CIRÚRGICA

ESTUDO COMPARATIVO ENTRE ECOENDOSCOPIA E ENDOSCOPIA DIGESTIVA ALTA NO DIAG-NÓSTICO DOS TUMORES SUBEPITELIAIS DO ESÔFAGO ESTÔMAGO E DUODENO

ram colhidas do rim esquerdo após determinação da FIL.Resultados: A associação da espectroscopia óptica

com o dano histológico foi: FIL -442nm - r2 = 0,39, p ≤ 0,001e 532nm -r2 = 0,18, P = 0,003; FFI (fator de fluorescência daisquemia -laser refletido / fluorescência induzida) -442nm -r2= 0,20, P = 0,002 e 532nm -r2 = 0,004, P = 0,67. As associaçõesentre a função mitocondrial e o dano tecidual foram: estado3 da respiração -r2 = 0,43, P = 0,0004, estado 4 da respiração-r2 = 0,03, P = 0,38, RCR -r2 = 0,28, P = 0,007, e intumescimentoda membrana mitocondrial -r2 = 0,02, p = 0,43.

Conclusões: A intensidade de fluorescência emitidapelo tecido excitado por laser, especialmente no compri-mento de onda 442nm, foi capaz de determinar, em temporeal, a gravidade das lesões teciduais provocadas pelaisquemia renal. O estado 3 da respiração mitocondrial e aRCR (razão do controle respiratório) também mostraram umaboa correlação com o grau de lesão do tecido isquêmico.

Beatriz Flávia Moraes TrazziOrientador: Prof. Dr. Luís Fernando TirapelliTese de Doutorado apresentada em 31/10/2008

Objetivos: Avaliar a associação da gravidade da le-são renal isquêmica determinada pela histopatologia, es-pectroscopia de fluorescência induzida por laser (FIL -442nm e 532nm), função renal, respiração mitocondrial eintumescimento osmótico da membrana mitocondrial e fun-ção renal.

Material e Métodos: Cinquenta ratos Wistar foramsubmetidos à isquemia renal esquerda quente durante 20,40, 60 e 80 minutos. A FIL foi realizada antes da isquemia(controle) e repetida aos 20, 40, 60 e 80 minutos de isquemia.Amostras de tecido para histologia e análise mitocondrial(estado 3 e 4 da respiração, razão de controle respiratório eintumescimento osmótico da membrana mitocondrial) fo-

AVALIAÇÃO DA ISQUEMIA RENAL EM RATOS WISTAR PELA ESPECTROSCOPIA DE FLUORES-CÊNCIA INDUZIDA POR LASER, PELA ANÁLISE HISTOPATOLÓGICA E PELA FUNÇÃO RENALE MITOCONDRIAL

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Jorge Luiz FernandesOrientador: Prof. Dr. Ajith Kumar SankarankuttyDissertação de Mestrado apresentada em 31/10/2008

Novos métodos para a caracterização de tecidos oupara investigar e analisar diversos, parâmetros teciduaistêm sido buscados ultimamente. A avaliação da viabilidadedo figado de ratos pela "espectroscopia de fluorescênciainduzi da por laser" após isquemia normotérmica visa mos-trar a eficácia do método e delinear critérios objetivos nasua utilização. A função mitocondrial, provas bioquímicase a morfometria foram utilizadas como indicadores da viabi-lidade hepática. Estudos recentes mostram a eficácia dométodo em condições de hipotermia. Outros estudos foramrealizados com outros parâmetros. Os animais foram dividi-dos em dois grupos: G1(isquemia parcial de 1 hora), com 12animais, G2(isquemia parcial de 2 horas), também com 12animais. A isquemia parcial foi realizada com oclusãovascular do lobo mediano e do lobo lateral esquerdo, per-mitindo fluxo sanguíneo para o lobo caudado e para o lobolateral direito. Após o período de isquemia a pinça vascular

foi removida e as leituras da espectroscopia de fluorescên-cia foram realizadas antes da isquemia, após o período deisquemia e 24 horas após a reperfusão. Imediatamente apósas leituras espectroscópicas, foram realizadas coletas desangue para dosagem das bilirrubinas, AST, ALT e DHL.Após a última coleta de sangue o tecido hepático, do lobosubmetido à isquemia, foi retirado e encaminhado parte parao exame histopatológico (morfometria) e parte para avalia-ção da função mitocondrial. Foi possível comparar os pa-drões espectrais com a área de necrose. Os padrões espec-trais foram distintos nas 3 fases e foi possível avaliar evi-dências de associação das respostas da espectroscopia defluorescência com relação à Morfometria, pelo Teste Exatode Fisher (p < 0,0l), e também em relação à sua concordân-cia, pelo Coeficiente Kappa, variando de concordância mo-derada à concordância quase perfeita. Valores semelhantesforam obtidos na avaliação do Potencial de Membrana mi-tocondrial. A "espectroscopia de fluorescência induzida porlaser" após isquemia normotérmica mostrou ser um métodorápido e eficaz na avaliação de lesões isquêmicas e de teci-dos viáveis.

AVALIAÇÃO EXPERIMENTAL DA VIABILIDADE HEPÁTICA, APÓS ISQUEMIA NORMOTÉRMICA,PELA ESPECTROSCOPIA DE FLUORESCÊNCIA INDUZIDA POR LASER (efil)

Material e Métodos: Um protocolo contendo 22 me-didas de prevenção foi elaborado tendo como base as re-comendações do US Preventive Services Task Force, doCanadian Task Force on Preventive Health Care, do Pro-grama de Actividades Preventivas y de Promocion de IaSalud (P APPS) da Sociedade Espanhola de Saúde da Famí-lia e Comunidade e das recomendações do Ministério daSaúde, todas adaptadas as condições locais. Os profissio-nais de saúde foram entrevistados e logo depois treinados,em dezembro de 2007, para a aplicação do protocolo. Apóscinco meses do treinamento, a aplicação das 22 medidasforam avaliadas.

Resultados: Apesar de afirmarem conhecer as medi-das de promoção de saúde e prevenção de doenças e de semostrarem motivados a empregá-las, o registro de muitasmedidas de prevenção ficou muito abaixo daquilo preconi-zado por organismos oficiais e a análise dos índices deperformance de medidas apropriadas e inapropriadas, an-tes a após o treinamento das equipes, mostrou que a estra-tégia proposta não conseguiu melhorar o emprego das me-didas de prevenção analisadas.

Conclusões: Mudar o comportamento dos profissi-onais de saúde de forma que empreguem mais medidas deprevenção é uma tarefa bastante complexa. Além de maisinvestimentos em pesquisas, é preciso que governos e es-colas médicas enfatizem a importância do emprego de me-didas de prevenção por profissionais da Atenção Básica.

Anderson Soares da SilvaOrientador: Prof. Dr. Orlando de Castro e Silva JúniorTese de Doutorado apresentada em 10/11/2008

Introdução: Ainda que a prevenção represente ocerne do trabalho dos médicos da Atenção Básica, as taxasde emprego de medidas de prevenção, por mais simplesque sejam, ainda sem encontram em níveis inadequados. Odesafio que é posto aos profissionais de saúde é o empre-go de um rol mínimo de medidas de prevenção a pacienteselegíveis, baseados em uma avaliação rigorosa de fatoresde risco individuais e familiares, associado à aplicação demedidas baseadas em sólidas evidências científicas. Deforma a atingir esse objetivo, a literatura científica tem for-necido uma série de ferramentas (intervenções não eletrô-nicas, tais como tabelas de prevenção, cartas-lembrete ecartões de saúde para os pacientes), que tem se mostradoseficientes no curto prazo para o aumento do emprego demedidas de prevenção.

Objetivos: Dado a escassa disponibilidade de pes-quisas sobre estratégias voltadas para a melhoria da provi-são de serviços preventivos por equipes do Programa Saú-de da Família, o pesquisador estudou os valores e atitudesatribuídos à prevenção pelos profissionais de saúde e ava-liou a implementação de um protocolo de promoção de saú-de e prevenção de doenças em cinco equipes do ProgramaSaúde da Família do município de Ribeirão Preto, São Paulo.

AVALIAÇÃO DA IMPLANTAÇÃO DE UM PROTOCOLO DE PREVENÇÃO EM EQUIPES DA ATEN-ÇÃO BÁSICA EM RIBEIRÃO PRETO, SÃO PAULO

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Mayra Mayumi KamijiOrientador: Prof. Dr. Ricardo Brandt de OliveiraTese de Doutorado apresentada em 13/10/2008

No presente estudo, foram avaliados, em indivídu-os submetidos previamente à gastrectomia, os níveis plas-máticos de grelina total e de PYY3-36, as sensações de ape-tite e o trânsito gastrintestinal após a ingestão de uma re-feição líquida, e também o gasto energético de repouso(GER) e a ingestão energética. Foram estudados sete indi-víduos com gastrectomia total (GT), 14 com gastrectomiaparcial (GP) e 10 indivíduos sadios. O Índice de Massa Cor-poral (IMC) não era diferente entre os grupos [grupo con-trole: 25 (20-34) kg/m2, GP: 22 (18-30) kg/ m2, GT: 23 (18-32)kg/ m2]. Os pacientes haviam sido operados por câncer oupor úlcera, há pelo menos 1 ano, e não apresentavam sus-peita ou diagnóstico de neoplasia. O GER foi medido porcalorimetria indireta e comparado ao calculado pela fórmulade Harris- Benedict (% GERm/GERt). A ingestão alimentarhabitual foi avaliada por recordatório de 24h e por registroalimentar de 3 dias. As sensações de apetite (fome, plenitu-de e consumo prospectivo) foram medidas por um questio-nário que incluía uma escala analógica visual, aplicado aosparticipantes em jejum e durante o estudo cintilográfico dotrânsito gastrintestinal após uma refeição teste (361kcal). Adosagem dos hormônios foi realizada por radioimunoensaio.A relação % GERm/GERt foi mais alta no grupo GP (P < 0,05)comparativamente ao grupo controle. A ingestão energética

habitual foi mais alta no grupo GT em comparação ao GP eao controle, e semelhante entre esses dois grupos. Os va-lores basais de grelina total foram mais baixas (P < 0,05) nogrupo GT, e os de PYY não foram diferentes entre os gru-pos. A grelina basal se correlacionou positivamente (r =0,74, P < 0,01) com o GER no grupo GP e negativamente (r =-0,87, P < 0,05) com o GER no grupo GT. Após a refeiçãoteste, nos grupos GP e GT, não houve variação nas con-centrações de grelina pós-prandial, diferentemente dos ní-veis de PYY, que aumentaram aos 15min. A recuperação defome e consumo prospectivo, e o pico de plenitude ocorre-ram mais precocemente nos grupos GP e GT em compara-ção aos indivíduos sadios. O esvaziamento gástrico foi maisrápido no grupo GP que no grupo controle, e o trânsitogastrintestinal foi acelerado nos grupos GP e GT. As con-centrações de grelina e de PYY3-36 não se correlacionaramcom as pontuações de apetite. Nossos resultados indicamque indivíduos com GP ou GT, com IMC normal, apresen-tam um GER aumentado, que, nos indivíduos com GT, pare-ce ser compensado por maior ingestão energética. As sen-sações de apetite estão preservadas nesses pacientes, e aplenitude pós-prandial é mais intensa e precoce, o que pa-rece estar associado ao trânsito gastrintestinal acelerado, enão depender da integridade de nervos vagais. Nos indiví-duos com GP ou GT, a grelina e o PYY3-36 exercem influênciapequena ou nula sobre apetite e ingestão alimentar, e agrelina parece exercer papel importante na regulação doGER.

CLÍNICA MÉDICA

APETITE, EQUILÍBRIO ENERGÉTICO E TRÂNSITO GASTRINTESTINAL EM INDIVÍDUOS GAS-TRECTOMIZADOS

e da capacidade destas células em migrar e regenerar a lon-go prazo o tecido específico. Partindo da hipótese de queCTM de diferentes tecidos têm potencial proliferativo e ex-pressão gênica distintos, comparamos CTM de medula ós-sea do adulto (CTM-MO), CTM de veia de cordão umbilical(CTM-VCU) e CTM derivadas de cinco tecidos fetais (caró-tida, fáscia, fígado, gônada e pele). Observamos que CTM-MO, CTM-VCU e CTM derivadas de diversos tecidos fetais(CTM- TF) apresentaram perfil imunofenotípico similar bemcomo capacidade de diferenciação in vitro em osteócito eadipócito. Nossos dados mostraram que as CTM-TF sãomenores e possuem maior potencial proliferativo quandocomparadas às CTM-MO e CTM-VCU. A partir de resulta-dos de expressão gênica global de CTM-MO e CTM-VCU,

Ana Valéria Gouveia de AndradeOrientador: Prof. Dr. Dimas Tadeu CovasDissertação de Mestrado apresentada em 23/10/2008

As células mesenquimais estromais multipotentes(CTM) são células derivadas do mesoderma que podem serisoladas de diversos tecidos adultos e fetais. Estudos pré-vios do nosso grupo isolaram CTM de medula óssea, veiade cordão umbilical, veia safena e, diversos tecidos fetais.Estas células apresentam perfil imunofenotípico caracterís-tico e potencial de diferenciação em osteócito, adipócito econdrócito. As CTM podem ser utilizadas para as mais di-versas aplicações na terapia celular em função da plastici-dade, baixo risco de induzir tumores, do status imunológico

MORFOLOGIA, FENÓTIPO, POTENCIAL PROLIFERATIVO E EXPRESSÃO GÊNICA DE CÉLULASMESENQUIMAIS ESTROMAIS MULTIPOTENTES OBTIDAS DA MEDULA ÓSSEA DO ADULTO, DAVEIA DO CORDÃO UMBILICAL E DE DIVERSOS TECIDOS FETAIS

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escolhemos genes hiper ou hipoexpressos para serem ana-lisados nas CTM. Os genes escolhidos estavam relaciona-dos ao homing (SDF1, CXCR4, VCAM1, ITGA4), à osteogê-nese (RUNX2 e BMP2), à angiogênese (VEGFC) e à imuno-modulação (TGFβ1). A expressão gênica relativa mostrouque o SDF1 estava significativamente mais expresso nasCTM-MO do que nas CTM-VCU e nas CTM-TF. Este resul-tado significativo para o SDF1 nas CTM-MO pode estarrelacionado com o suporte da hematopoese. O CXCR4 foidetectado em quase todas as CTM-TF, em todas as CTM-VCU e não foi detectado em algumas CTM-MO. O VCAM1encontrou-se mais expresso tanto nas CTM-MO quanto nasCTM-VCU quando comparadas às CTM-TF. O ITGA4 en-controu-se mais expresso nas CTM-VCU do que nas CTM-TF. O RUNX2, importante iniciador da osteogênese, assimcomo o BMP2, encontraram-se mais expressos nas CTM-MO do que nas CTM-TF, enfatizando a participação destas

células na diferenciação osteogênica. O TGFβ1, potente imu-nossupressor, estava mais expresso nas CTM-MO do quenas CTM-TF. O VEGFC, por sua vez, encontrou-se maisexpresso nas CTM-MO e nas CTM-VCU do que nas CTM-TF. Estes achados indicam que as CTM possuem uma am-pla distribuição no organismo, que as CTM-TF possuemum maior potencial proliferativo e sugerem que as CTM-TFe as CTM-VCU podem possuir uma maior habilidade migra-tória. Estes dados também sugerem que as CTM-MO po-dem ser mais eficientes na osteogênese e como fonte imu-nossupressora do que as CTM-TF na terapia celular. Porfim, estes resultados mostram que CTM obtidas de fontesdiferentes, embora semelhantes do ponto de vista imunofe-notípico e funcional, apresentam diferenças morfológicas ena expressão de vários genes. Estas diferenças podem serdecorrentes da especialização funcional do estroma que podeocorrer nos diversos tecidos em decorrência de sua função.

celular. Dosagem sérica de IgE total medida por Fluoro-enzimaimunoensaio (Feia) no sistema UniCAP 100 (Pharmacia& UpJohn Diagnostics AS, Uppsala, Suécia). Doadores ereceptores foram avaliados no período pré transplante. Nosreceptores as avaliações foram repetidas no D+100, D+180 eum ano após o TCTH.

Resultados: Foram avaliados nove receptores e seusrespectivos doadores. Não houve redução das capacida-des e volumes pulmonares nas diferentes etapas estuda-das. A redução da capacidade de difusão pulmonar foi ob-servada em 44% dos receptores. Houve aumento dos fluxosexpiratórios máximos em 55% dos receptores após o HSCT.Observamos hiperresponsividade em um receptor na avali-ação basal e no D+360. Esse mesmo receptor apresentoudistúrbio ventilatório obstrutivo somente na avaliação basal.Observamos que, em cinco receptores (55%) que exibiamresposta atópica antes do TCTH, esta resposta se normali-zou na avaliação realizada um ano após e não houve relaçãocom a resposta do doador. O percentual de linfócitos noescarro induzido foi maior após o TCTH em comparaçãocom a etapa basal.

Conclusão: No grupo de pacientes estudados oTCTH não induziu o aparecimento de distúrbio ventilatório.Em metade dos pacientes houve queda da capacidade dedifusão pulmonar após o TCTH, queda esta que persistiuaté a avaliação ao término de um ano. Houve aumento dosfluxos expiratórios máximos após o TCTH. O TCTH não es-teve associado ao aumento da responsividade brônquica àmetacolina mesmo nos pacientes que apresentaram OECH.Nossos resultados indicam sugerem que a normalização daresposta atópica pode estar relacionada a um melhor con-trole da produção de IgE pelos linfócitos T. Houve persis-tência de um maior percentual de linfócitos no escarro indu-zido após o TCTH.

Elisa Cristina Vendramini NogueiraOrientador: Prof. Dr. João Terra FilhoTese de Doutorado apresentada em 29/10/2008

Apesar do interesse crescente na investigação dareconstituição do sistema imune após o transplante de célu-las tronco hematopoéticas (TCTH) em humanos, há umaescassez de informação sobre a transferência da imunidadea um antígeno específico dos doadores aos receptores.

Objetivo: Avaliar a função pulmonar e a responsivi-dade brônquica após o TCTH alogênico; verificar a influên-cia da inibição ou transferência da resposta atópica cutâneaentre receptores e doadores do TCTH alogênico.

Material: Foram avaliados 16 voluntários recepto-res do TCTH alogênico e seus respectivos doadores, dosquais sete foram posteriormente afastados do estudo pormotivo de óbito e/ou sustação do TCTH.

Métodos: Questionário padrão para história de atopia.Avaliação da função pulmonar (em espirômetro Collins mo-delo GS Plus) com obtenção dos seguintes parâmetros: Vo-lumes (inclusive residual) e capacidades pulmonares: capa-cidade vital forçada e fluxos expiratórios máximos; capaci-dade de difusão pulmonar (DLCOSB). No estudo da res-ponsividade brônquica (teste de broncoprovocação) utili-zamos o cloreto de metacolina (Sigma) em doses crescentesdiluídas em solução salina tamponada, administrada peloSistema Koko Digi Doses, pds Instrumentation. Assim, ob-tivemos as curvas dose (concentração de metacolina mg/ml) x resposta (queda VEF1) e a concentração necessáriapara provocar queda de 20% no volume expiratório forçadono primeiro segundo (PC20 VEF1). Teste Cutâneo (Prick Test)foi realizado para 19 alérgenos. Indução de escarro com so-lução hipertônica foi empregada para caracterizar o perfil

INFLUÊNCIA DO TRANSPLANTE ALOGÊNICO DE CÉLULAS TRONCO HEMATOPOÉTICAS SO-BRE O COMPORTAMENTO FUNCIONAL DO PULMÃO E A RESPOSTA ATÓPICA

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Lívia Maria Camargo SilvaOrientador: Prof. Dr. Alex Vainey Callado FrançaDissertação de Mestrado apresentada em 29/10/2008

É frequente a presença de dispnéia em pacientescirróticos com ascite. Além disto, parâmetros de funçãorespiratória podem estar alterados, bem como disfunçãoalvéolo-capilar. Um desequilíbrio na relação ventilação/perfusão pode ser a principal causa destes achados. Notratamento da ascite, a paracentese terapêutica é um méto-do seguro e eficaz para redução do líquido ascítico, semque haja necessidade de permanência hospitalar. A utiliza-ção deste método terapêutico parece interferir positivamen-te nos parâmetros de função pulmonar e de trocas gasosas.Os objetivos deste estudo foram avaliar os parâmetros defunção pulmonar e dos gases sanguíneos arteriais de pa-cientes cirróticos com ascite tensa e avaliar os efeitos daparacentese terapêutica nos parâmetros de função pulmo-

nar e dos gases sanguíneos arteriais. Seis pacientes dosexo masculino, com idade média de 62 anos (de 46 a 72anos) com diagnóstico de cirrose hepática e ascite tensaforam incluídos neste estudo. Foram realizadas 15 avalia-ções de prova de função pulmonar e 10 de gasometria arte-rial antes e após a paracentese, para verificar os valoresdos volumes e capacidades pulmonares e dos gases san-guíneos arteriais. Houve melhora significativa nos valoresda espirometria de capacidade vital, capacidade residualfuncional, volume de reserva expiratório e volume respira-tório forçado no primeiro segundo. Não houve mudançasignificativa nos valores dos gases sanguíneos arteriais.Concluímos que, pacientes com cirrose e ascite tensa, apre-sentam diminuição dos volumes pulmonares e disfunçãoalveolo-capilar leve, porem não foram notadas alteraçõesnos valores dos gases sanguíneos arteriais. Após aparacentese terapêutica, somente os valores de função pul-monar melhoraram significantemente.

EFEITOS DA PARACENTESE TERAPÊUTICA NOS PARÂMETROS DE FUNÇÃO PULMONAR EM PA-CIENTES CIRRÓTICOS COM ASCITE TENSA

ca utilizando seringa com citrato 3,2%, e o plasma obtidopor centrifugação e estocado -80ºC até a realização dostestes. A dosagem do TAT e da atividade do PAI1 foramfeitas por ELISA. As citocinas foram dosadas usando oteste "BDTM CBA Mouse Inflammation Kit" (do inglês,Cytometric Bead Array, kit inflamatório de camundon-gos). A análise histológica foi realizada em cortes de medu-la óssea, baço, fígado, pulmão, rim, cérebro e coração inclu-ídos em parafina e corados com HE, enquanto a deposiçãode fibrina foi avaliada por histoquímica usando a técnica dahematoxilina ácida fosfotúngstica de Mallory (PTAH). Osdados foram expressos pela mediana (25º-75º percentis), ascomparações entre animais leucêmicos e controles foramfeitas pelo método de Mann-Whitney (bicaudal), e as cor-relações entre as variáveis por meio da correlação dePearson.

Resultados: Os níveis plasmáticos do TAT estavamelevados nos animais leucêmicos em comparação aos sel-vagens [48,1 ng/ml (37,7 ng/ml - 61,4 ng/ml) versus 17,7 ng/ml (10,9 ng/ml - 34,3 ng/ml) respectivamente; p=0,010]. Ati-vidade do PAI1 também estava elevada nos animais leucê-micos em comparação aos controles [10,4 ng/ml (2,3 ng/ml- 21,5 ng/ml) versus 0,8 ng/ml (0,6 ng/ml - 1,5 ng/ml), respec-tivamente; p=0,002]. Análise histológica confirmou o diag-nóstico de leucemia, mas não houve sinais de trombose ousangramento nos cortes analisados. Também não houvesinais de deposição de fibrina pela coloração PTAH. Den-tre as citocinas avaliadas apenas os níveis de TNF foramsignificativamente diferentes nos animais leucêmicos emcomparação aos controles [18.7 pg/ml (13,8 pg/ml - 26,6 pg/

Maria Carolina Tostes PintãoOrientador: Prof. Dr. Eduardo Magalhães RegoTese de Doutorado apresentada em 29/10/2008

Introdução: A coagulopatia associada à leucemiapromielocítica aguda (LPA) é caracterizada por ativaçãodifusa da coagulação, fibrinólise e proteólise. Os blastosda LPA produzem citocinas inflamatórias como TNF e IL1β,as quais regulam negativamente as propriedades anticoa-gulantes do endotélio vascular normal e estimulam suaspropriedades pró-coagulantes. Entretanto, o papel in vivodas citocinas pró-inflamatórias na coagulopatia associadaà LPA é desconhecido. Camundongos transgênicos hCG-PML/RARα desenvolvem uma forma de leucemia mielóideaguda semelhante a LPA humana do ponto de vista morfo-lógico, molecular e quanto a resposta a diferentes terapias,entretanto nenhum estudo até hoje determinou se há e quaissão as alterações da hemostasia neste modelo.

Objetivos: a) investigar a existência de alteraçõeslaboratoriais sugestivas de coagulação intravascular dis-seminada (CIVD) por meio da dosagem do complexotrombina-antitrombina (TAT) e do inibidor do ativador doplasminogênio-1 (PAI1); b) pesquisar a presença de trombose/ou hemorragia por meio da análise histopatológica e dahistoquímica; c) determinar os níveis séricos de citocinaspró e antiinflamatórias (IL6, IL10, MCP1, INFγ, TNF eIL12p70); d) correlacionar estes parâmetros (quando alte-rados) com o tamanho da massa tumoral. Métodos: Foramavaliados 12 animais leucêmicos e 22 animais selvagenscomo controles. O sangue foi coletado por punção cardía-

ESTUDO DA ATIVAÇÃO DA COAGULAÇÃO E SUA RELAÇÃO COM AS CITOCINAS REGULADO-RAS DA INFLAMAÇÃO NUM MODELO TRANSGÊNICO DE LEUCEMIA PROMIELOCÍTICA AGUDA

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Paula Pileggi VinhaOrientadora: Profª. Drª. Selma Freire de Carvalho da CunhaDissertação de Mestrado apresentada em 31/10/2008

Introdução: O estresse orgânico decorrente da quei-madura é intenso e prolongado. O hipercatabolismo e ohipermetabolismo secundários alteram o sistema de pró eantioxidantes. Pela necessidade de reepitelização da áreadoadora e receptora, a cirurgia reparadora pode desenca-dear ou perpetuar o estresse oxidativo.

Objetivos: Em pacientes vítimas de trauma térmicoagudo (Grupo Queimadura) e naqueles em pós-operatóriode sequelas de queimaduras (Grupo Sequela), comparar oestresse oxidativo e os níveis de anti e pró-oxidantes comos obtidos no pré-operatório de pacientes com sequelas dequeimaduras (Grupo Controle).

Casuística e métodos: O estudo foi conduzido naUnidade de Queimados do HCFMRP-USP. O Grupo Quei-madura (n=11) incluiu pacientes com ≤ 48 horas do traumatérmico agudo, SCQ ≥ 10%. Os pacientes que necessitaramde correção cirúrgica das sequelas do trauma térmico, ocor-rido ≥ 1ano (n=8), foram avaliados no pré-operatório (Gru-po Controle) e após 48 horas-da cirurgia (Grupo Sequela).Todos os voluntários foram submetidos à antropometria equantificação da ingestão alimentar. Foi realizada a avalia-ção laboratorial do estado nutricional, dos marcadores daatividade inflamatória e dos anti e pró-oxidantes.

Resultados: Em pacientes vítimas de trauma térmicoagudo, foi documentado estresse orgânico caracterizado

pelo aumento das proteínas de fase aguda como a PCR[8,76 (0,91 -34,54) vs 0,40 (0,01 -0,97)mg/dL, p=0,0004] eferritina (254,45 ± 84,25 vs 145,10 ± 88,80ng/mL, p=0,014),além da diminuição da albumina (3,55 ± 0,65 vs 4, 16 ± 0,26g/dL, p=0,004), da transferrina (110,67 ± 55,13 vs 238,70 ±67,99mg/dL, p=0,0003), do colesterol (126,82 ± 32,19 vs193,75 ± 51,64mg/dL, p=0,002) e triglicérides séricos (95,54± 36,84 vs 168,75 ± 54,83mg/dL, p=0,003), ferro [30,00 (6,00-73,00) vs 109,00 (70,00 -252,00)lJg/dL, p=0,0004] e zinco(63,55 ± 23,34 vs 92,72 ± 16,65mg/dL, p=0,014). O estresseoxidativo diminuiu os níveis séricos das vitaminas C [0,45(034-1,30) vs 0,93 (0,48 - 1,30)mg/dL, p=0,016], A (1,55 ± 0,87vs 3,35 ± O,72lJmol/L, p=0,0002) e da vitamina E (9,49 ± 3,4vs 4,96 ± 1,60lJmol/g lipídeo, p=0,003). Não houve modifi-cação nos níveis do GSH [40,37 (30,27 -87,46 ) vs 49,90(10,09 - 54,95)lJmol/L, p= 0,48] e do MOA [1,75 (1,15 -2,74)vs 1,77 (1,62 -6,82nmol/g proteína), p=0,043]. O procedi-mento cirúrgico para correção das sequelas de queimadu-ras determinou aumento da proteína C reativa [0,40 (0,01 -0,97) vs 2,53 (0,56 -4,70)mg/dL, p=O,O1], mas não alterouos níveis de anti e pró-oxidantes, exceto a diminuição dosníveis séricos de vitamina A (3,35 ± 0,72 vs 2,52 ± 0,90~mol/L, p=0,006).

Conclusões: O estresse orgânico decorrente do trau-ma térmico agudo diminuiu as respostas anti-oxidantes. Ex-ceto pela queda nos níveis séricos de vitamina A, a cirurgiapara correção das cicatrizes das queimaduras acarretou es-tresse orgânico, sem modificação na resposta anti e pró-oxidante.

ml) versus 3,9 pg/ml (3,5 pg/ml - 5,8 pg/ml) em leucêmicos econtroles respectivamente; p<0,002]. Os níveis do TAT nãose correlacionaram aos do TNF, ao peso do baço (expressocomo fração do peso corporal) ou ao número de blastos namedula óssea. Ao contrário observamos correlação diretaentre os níveis de PAI1 e o TNF (p=0,008). Conclusões:Demonstramos pela primeira vez que os camundongostransgênicos hCG-PML/RARα leucêmicos apresentam ati-vação espontânea da coagulação com elevação do TAT e

do PAI1, mas sem evidências histológicas de deposição defibrina. Níveis aumentados de TNF também foram detecta-dos, e correlacionaram-se diretamente com os níveis de PAI1.Estes dados sugerem que o TNF, mas não as demais citoci-nas testadas, tem papel relevante na patogênese da LPA.Além disto, nossos resultados demonstraram a utilidadedo modelo transgênico para o estudo da fisiopatologia dacoagulopatia associada à LPA, e sendo de valia no desen-volvimento de novas intervenções terapêuticas.

ESTRESSE ORGÂNICO E ATIVIDADE ANTI E PRÓ-OXIDANTE NA QUEIMADURA AGUDA E NOPÓS-OPERATÓRIO DE CIRURGIA REPARADORA DE SEqueLAS DO TRAUMA TÉRMICO

PROGRAMAS DE HIDROGINÁSTICA PARA PERDA DE PESO E MELHORA DE PERFIL METABÓ-LICO EM OBESAS

Renata Pereira CalhauOrientadora: Profª. Drª. Paula Garcia ChiarelloDissertação de Mestrado apresentada em 31/10/2008

A hidroginástica é uma modalidade de exercício commínimo impacto em articulações, frequentemente utilizada

na busca por perda de peso, especialmente por grandesobesos. Neste trabalho, foram comparados os efeitos dedois tipos de programas de hidroginástica (contínuo eintervalado) em tempos inicial e final para as variáveis: peso,composição corporal, gasto energético de repouso, parâ-metros bioquímicos, registro alimentar e qualidade de vida.

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Foram selecionadas 27 mulheres entre 30 e 53 anos, comIMC entre 30 e 54,2 Kg/mm2, acompanhadas em dois pro-gramas: Grupo A, hidroginástica com exercícios contínuosde intensidade moderada, duração de dois meses com 3sessões por semana; e Grupo B: hidroginástica com exercí-cios intervalados de intensidade alta, com mesma duraçãoe quantidade de sessões. Antes e ao final dos programasforam realizados exames de calorimetria indireta, coletadosdados antropométricos (peso, altura, e circunferências),sangue em jejum para análise de glicemia e perfil lipídico eaplicado registro alimentar e questionário de qualidade devida SF-36. As voluntárias não foram orientadas a fazerdieta hipocalórica durante a intervenção da hidroginástica,porém foram convidadas a assistir quatro aulas de 50 minu-tos sobre a importância da reeducação alimentar após qua-tro semanas de intervenção. Foi utilizado um modelo deWilcoxon para analisar e comparar os dados, considerandop < 0,05 para resultados estatisticamente significativos.Quando comparado o valor das médias nos tempos inicial(T0) e final (T1) houve diferença significativa no grupo A

para reduções de peso, IMC, massa gordurosa, circunfe-rência do braço, circunferência do quadril, circunferênciada coxa, gasto energético de repouso e aumentos nos as-pectos sociais, dor e vitalidade. No grupo B, quando com-parados T0 e T1, foi apresentada diferença significativapara reduções de massa gorda, circunferência do braço,ingestão de energia total e carboidratos, e aumentos nosaspectos vitalidade e estado de saúde e na glicemia de je-jum, embora esta tenha se mantido dentro dos níveis denormalidade, conforme preconizado. Não foram observa-das outras alterações significativas em medidas corporaise parâmetros bioquímicos após ambos os programas. Exer-cícios contínuos na água, de intensidade moderada, sãomais eficientes para perda de peso e massa de gordura doque exercícios intervalados na água, de intensidade alta; eem geral, programas curtos de hidroginástica, sem restri-ção energética orientada, são ineficientes para se alcançarperda de peso considerável, mudança em gasto energéticoou alterações em glicemia e lipídios sanguíneos, mas podemelhorar a vitalidade para os praticantes.

atendidos na Unidade de Emergência, foram realizados 1123exames de TC de crânio em 763 pacientes no ano de 2005.Os índices de trauma, que são sistemas de pontuação cria-dos para avaliar as alterações fisiológicas, a gravidade daslesões anatômicas e a probabilidade de sobrevida dos pa-cientes traumatizados, também foram coletados neste estu-do. Os índices usados foram o RTS (Revised Trauma Score),o ISS (Injury Severity Score) e o TRISS (Trauma Score andInjury Severity Score). Os resultados do estudo foram ob-tidos por meio da coleta de dados dos índices de trauma,que foram correlacionados com os resultados das tomo-grafias de crânio, pontuação na escala de coma de Glasgowe custos dispendidos com estes exames. Assim, foi possí-vel caracterizar o perfil de gravidade do trauma cranioence-fálico como leve (Glasgow 14-15), moderado (Glasgow 9-13) e grave (3-8), inclusive com análise pormenorizada napopulação pediátrica (≤ 12 anos) e idosa (≥ 60 anos), quecostumam trazer consequências graves para serviços deatendimento a trauma. Depois da análise dos dados coleta-dos, observamos que o número de solicitações de tomografiade crânio em pacientes com pontuação 15 na escala de comade Glasgow foi elevado, quando comparamos com os crité-rios recomendados pela literatura médica científica, assimcomo as solicitações para exames-controle, que também foiexagerada, pois nem sempre houve constatação de piorado estado neurológico do paciente que justificasse a soli-citação de novo exame. O trabalho conclui que o uso datomografia de crânio na admissão hospitalar não deve serutilizado em pacientes assintomáticos com pontuação 15

Marcus Vinicius Nascimento ValentinOrientadora: Profª. Drª. Ângela Delete BellucciDissertação de Mestrado apresentada em 17/11/2008

O trabalho consiste na caracterização do nível degravidade e na investigação radiológica utilizada no aten-dimento ao paciente traumatizado, por meio da análise sis-temática de todas as tomografias computadorizadas de crâ-nio realizadas em pacientes vítimas de trauma, atendidosao longo do ano de 2005. Trata-se de estudo retrospectivo,em que foram analisados todos os pacientes de todas asfaixas etárias atendidos na Sala de Trauma da Unidade deEmergência do Hospital das Clínicas da Faculdade de Me-dicina de Ribeirão Preto da Universidade de São Paulo, noperíodo de 01 de janeiro a 31 de dezembro de 2005. A médiamensal de atendimento foi de 228 traumatizados, tendo sidoanalisados um total de 2735 prontuários. Foram excluídosdo estudo os pacientes traumatizados que faleceram antesda realização de qualquer avaliação radiológica e pacientessem registro no sistema de laudos de tomografia de crânioemitidos eletronicamente. Os objetivos do estudo foramcaracterizar a gravidade dos pacientes em termos de índi-ces de trauma, avaliar as indicações e o resultado das to-mografias de crânio por meio dos relatórios eletrônicos emi-tidos e estimar os custos, em moeda nacional, dispendidoscom o número de exames tomográficos de crânio solicita-dos para o traumatizado, seguindo os protocolos básicosrecomendados pelo ATLS® e a literatura médica científicadisponível. Do total de 2735 pacientes vítimas de trauma

TOMOGRAFIA COMPUTADORIZADA DE CRÂNIO NO ATENDIMENTO AO TRAUMATIZADO NUM SER-VIÇO UNIVERSITÁRIO: CORRELAÇÕES ENTRE NÍVEIS DE GRAVIDADE, INDICAÇÕES E CUSTOS

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Izabel de Arruda LemeOrientador: Prof. Dr. Júlio Sérgio MarchiniDissertação de Mestrado apresentada em 02/12/2008

A alta taxa de replicação celular no tumor, aumenta ademanda de ácidos graxos para composição de membrana ede nucleotídeos para síntese de DNA. Visto que a síntesede ambos depende de intermediários do ciclo de Krebs eque no tumor a maior parte da glicose disponível é conver-tida a ácido lático (e não a acetil-coA, como ocorre na célu-la normal), a glutamina passa a ser a principal fonte de inter-mediários do ciclo de Krebs para síntese de ácidos graxos ede nucleotídeos. Além da glutamina, outros aminoácidostêm seu metabolismo alterado no tumor. Assim, os objeti-vos do trabalho foram comparar o perfil de ácidos graxos ede aminoácidos em tecido tumoral e tecido normal adjacen-te de pacientes com carcinoma espinocelular de mucosa decabeça e pescoço, quantificar lipídeos totais nas amostrase avaliar o estado nutricional dos pacientes. Participaramda pesquisa pacientes internados junto ao Serviço de Ci-rurgia de Cabeça e Pescoço do Hospital das Clínicas daFaculdade de Medicina de Ribeirão Preto-USP. As amos-tras de tecido tumoral e de tecido normal foram coletadasdurante procedimento cirúrgico, após excisão do tumor. A

extração dos lipídeos e dos aminoácidos livres foi realizadapelo método de Folch. A determinação de ácidos graxoslivres e totais foi realizada por cromatografia gasosa/es-pectrometria de massa. A análise de aminoácidos foi reali-zada por cromatografia gasosa com detector de chama. Aavaliação nutricional incluiu: aferição de peso, estatura,dobras cutâneas e exame de impedância bioelétrica paraestimativa de composição corporal, além de avaliação daingestão alimentar por questionário de frequência alimen-tar. Não foi verificada diferença na concentração de lipídeostotais e dos ácidos palmítico, esteárico e oléico. Quanto àanálise de aminoácidos, apenas a alanina, metionina e alisina não mostraram diferença entre tecido tumoral e nor-mal. Os demais aminoácidos apresentaram-se aumentadosno tumor em relação à margem. A extração de aminoácidosa partir do método de Folch (desenvolvido para extração delipídeos) possibilita a determinação de ácidos graxos e deaminoácidos livres em fragmentos bastante reduzidos detecido, como, por exemplo, material obtido a partir de biópsia.O estado nutricional dos pacientes variou de eutrofia asobrepeso, predominando excesso de gordura corporal, ava-liado por impedância bioelétrica. A ingestão alimentar demacronutrientes mostrou-se adequada na maior parte dapopulação avaliada.

na escala de coma de Glasgow, optando-se por condutaobservatória/expectante e que exames-controle apenas de-vem ser solicitados quando houver piora clínica durante a

observação do paciente com TCE. Desta maneira, os recur-sos financeiros, humanos e tecnológicos poderão ser maisbem aproveitados.

CONCENTRAÇÕES DE ÁCIDOS GRAXOS E DE AMINOÁCIDOS EM TECIDO TUMORAL E TECI-DO NORMAL ADJACENTE DE PACIENTES COM CARCINOMA ESPINOCELULAR DE MUCOSA DECABEÇA E PESCOÇO

45% do sexo feminino) com idade de 11,9 ± 4,2 anos (0,8 -21,2 anos) com início de obesidade anteriormente aos 10anos de idade, acompanhados no Hospital das Clínicas daFaculdade de Medicina de Ribeirão Preto - USP e 88 indiví-duos controles com peso normal e sem história familiar dediabetes mellitus tipo 2 (DM2). Nos pacientes foi realizadacoleta das amostras de sangue para análise bioquímica emolecular, enquanto que nos indivíduos controles realizou-se apenas a análise molecular. A resistência à insulina foiestimada pelo índice de resistência insulínica HomeostasisModel Assessment (HOMA-IR) e pela relação glicose/insu-lina. No presente estudo 42% dos pacientes avaliados setomaram obesos no primeiro ano de vida. A obesidade gra-ve (Score Z do IMC > 3) foi encontrada em 16% dos casos.Doenças relacionadas à obesidade tiveram uma frequênciaelevada, com HAS em 38%, dislipidemia (DLP) em 63%, DM2

Daniela de Godoy NeryOrientador: Profª. Drª. Lucila Leico Kagohara EliasDissertação de Mestrado apresentada em 04/12/2008

A regulação da homeostase energética envolve ohipotálamo e a participação de circuito de sinais orexígenose anorexígenos. Entre esses últimos, destaca-se a participa-ção do sistema da melanocortina em que o α-MSH,neuropeptídeo derivado da proopiomelanocortina (POMC),tem efeitos anorexígenos que são mediados pelo receptor 4da melanocortina (MC4-R). Mutações e polimorfismos nes-tes genes têm sido associados à obesidade grave de inícioprecoce. Os objetivos do presente estudo foram avaliar aocorrência de co-morbidades e realizar a análise moleculardos genes POMC e MC4R em pacientes com obesidade deinício precoce. Foram incluídos 88 pacientes obesos (41/

ESTUDO DOS GENES DA PROOPIOMELANOCORTINA E DO RECEPTOR DA MELANOCORTINA4 EM PACIENTES COM OBESIDADE DESDE A INFÂNCIA

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Fernanda Rodrigues de Oliveira PenaforteOrientadora: Profª. Drª. Paula Garcia ChiarelloDissertação de Mestrado apresentada em 04/12/2008

A Síndrome do Ovário Policístico (SOP) é uma dasdesordens endócrinas mais comuns no gênero feminino,afetando entre 5-10% das mulheres em idade reprodutiva.Grande parte das mulheres com diagnóstico de SOP, entre50-90% (dependendo do critério diagnóstico utilizado), apre-senta resistência a insulina (RI), e tal quadro torna-se maisgrave na presença de obesidade. Diante disto, o objetivo dotrabalho foi avaliar a composição corporal total e segmenta-da, especialmente em região abdominal, e suas relações como perfil metabólico de mulheres obesas com Síndrome doOvário Policístico. A amostra foi composta por 31 indivídu-os com SOP, obesas e com RI. Foram também avaliadas 15mulheres obesas sem SOP (grupo controle), controladas emrelação à idade, peso e lMC, para comparação das variáveisrelacionadas à composição corporal perfil metabólico. Rea-lizaram-se medidas antropométricas de peso, estatura, cál-culo do IMC, circunferências da cintura, abdômen, quadril,tronco e pescoço e a avaliação da composição corporal,feita pelo método da impedância bioelétrica (BlA) total e

dos segmentos do braço, perna e tronco. A tomografia com-putadorizada foi realizada para avaliar a gordura abdomi-nal, visceral, do tronco e da perna. Não foram observadasdiferenças em nenhum dos parâmetros antropométricos ede composição corporal avaliados entre os grupos SOP egrupo controle. Mesmo estando em uso de medicamentopara melhora da sensibilidade à insulina, 64,5% das mulhe-res com SOP apresentaram exames compatíveis com RI. Mu-lheres obesas com SOP e RI apresentaram maiores quanti-dades de gordura visceral (78,4 ± 23,5g x 60,2 ± 20,3g) egordura no tronco (374,0 ± 78,1g x 282,4 ± 83,4g), ambasavaliadas pela TC, do que as sem RI, além de apresentaremmenores quantidades de gordura na região do braço (16,0 ±2,6kg x 18,1 ± 2,1kg). O consumo alimentar das mulherescom SOP mostrou inadequado principalmente em relação aoconsumo abaixo do recomendado de fibras, cálcio e folato edistribuição dos tipos de lipídios na dieta (alto consumo degorduras saturadas e baixo de gorduras mono e poli-insaturadas). Os resultados do trabalho indicam que o acú-mulo de gordura no gênero feminino parece estar sendopreferencialmente localizado na região central do corpo, in-dependente da presença da SOP. Já a presença de RI asso-ciada à SOP foi acompanhada de aumentos da adiposidadetanto na região visceral quanto do tronco.

em 5%, GJA em 8%, hiperinsulinemia em 36% e resistênciainsulínica (HOMA-IR) em 51% dos casos. A concentraçãoplasmática de leptina foi maior nos pacientes do sexo femi-nino, não havendo diferença entre o estádio puberal, tantoentre as meninas quanto entre os meninos. Foram encon-trados dois polimorfismos no gene POMC, g.4512C > T(p.=Cys6Cys; rs8192605; frequência alélica de 0,0056) eg.8246C > T (rs1042571; frequência alélica de 0,0056), empacientes obesos e duas alterações no gene MC4R, g.497A> G (p. Tyr35Cys; frequência alélica de 0,0056) e g.987C > T(p.=lle198lIe; frequência alélica de 0,012), em pacientes obe-

sos e um polimorfismo, g.700G > A (p. Val103lle; rs2229626;frequência alélica de 0,0056), em um indivíduo controle. As-sim, o presente estudo indica que a obesidade de inícioprecoce está associada à resistência insulínica, dislipidemiae hipertensão arterial sistêmica. Portanto, medidas de inter-venção nutricional e mudança de estilo de vida devem serintroduzidas precocemente, visando a redução de co-morbidades associadas à síndrome metabólica na vida adul-ta. Neste grupo de pacientes com obesidade desde a infân-cia mutações ou polimorfismos nos genes POMC e MC4Rnão foram encontrados em frequência significativa.

DISTRIBUIÇÃO DE GORDURA CORPORAL E PERFIL METABÓLICO EM OBESAS COMSÍNDROME DO OVÁRIO POLICÍSTICO

meio de ensaio biomecânico, de histomorfometria óssea ede imunoistoquímica de IGF-I e de R-GH em tecido hepáticoe em cartilagem de crescimento a etiopatogenia da OH. Qua-renta e seis ratos machos da linhagem Wistar foram dividi-dos em dois grupos: grupo controle operado (GCO: n = 23)e grupo colestase (GCol: n = 23). Os animais foram sacrifi-cados no 30º dia pós-operatório. A imuno-istoquímica de

Francisco de Assis PereiraOrientador: Prof. Dr. Francisco José Albuquerque de PaulaTese de Doutorado apresentada em 08/12/2008

A fisiopatologia da osteodistrofia hepática (OH) per-manece pouco compreendida. Nosso objetivo foi avaliar por

ETIOPATOGENIA DA OSTEODISTROFIA HEPÁTICA: ANÁLISE BIOMECÂNICA, HISTOMORFO-MÉTRICA E IMUNOISTOQUÍMICA DE FATOR I DE CRESCIMENTO SEMELHANTE À INSULINA(IGF-I) E DE RECEPTOR DE HORMÔNIO DE CRESCIMENTO (R-GH), EM MODELO EXPERI-MENTAL DE COLESTASE

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Juliana Maria Pernambuco ClímacoOrientador: Prof. Dr. Paulo Louzada JúniorDissertação de Mestrado apresentada em 10/12/2008

A Síndrome do Anticorpo Antifosfolípide (SAF) écaracterizada por eventos trombóticos arteriais e/ou veno-sos e/ou complicações obstétricas associados à persisten-te presença de anticorpos antifosfolípides. A β2-glicopro-teína I (β2GPI) é o principal auto-antígeno para a produçãode anticorpos antifosfolípides envolvidos na doença. Es-tudos prévios sugerem que o polimorfismo genético daβ2GPI pode influenciar a produção de auto-anticorpos naSAF. O presente trabalho tem por objetivo estudar o poli-morfismo do códon 247 do gene que expressa a β2GPI em61 pacientes com SAF primária e 33 pacientes com SAFsecundária e em 100 controles, e sua associação com asmanifestações clínicas e laboratoriais da SAF, incluindo osanticorpos anti-β2GPI. O polimorfismo genético Val/Leu247

foi determinado pela reação da polimerase em cadeia e di-gestão de seu produto por enzima específica. A presençade anticorpos anti-β2GPI foi detectada por teste imunoen-zimático (ELISA). Foi utilizado o teste exato de Fischer paraanálise dos resultados. Observou-se aumento na frequên-cia do alelo V e do genótipo VV no grupo total de pacientescom SAF em comparação com o grupo controle (P = 0,0068;OR = 1,781 e P < 0,0001; OR = 6,413, respectivamente). Ospacientes com trombose arterial e venosa apresentaram ogenótipo VV significativamente mais frequente que o gru-po controle saudável (52% e 44%, respectivamente, vs.13%). Os pacientes com SAF com anticorpos anti-β2GPIpresentes apresentaram o genótipo VV mais frequentementeque o controle saudável (P < 0,0001; OR = 8,179). Os resul-tados deste estudo sugerem que o genótipo VV do códon247 do gene da β2GPI pode desempenhar papel na produ-ção de anticorpos anti-β2GPI e, talvez, na expressão de trom-bose arterial e venosa nos pacientes com SAF.

IGF-I e de R-GH foi realizada em tecido hepático e em carti-lagem de crescimento da tíbia esquerda; a análise histo-morfométrica foi realizada na tíbia direita e o ensaio biome-cânico foi realizado no fêmur direito. Todos os animais dogrupo colestase apresentaram alterações histopatológicascompatíveis com cirrose biliar secundária. A rigidez e a for-ça máxima para ocasionar a fratura na diáfise do fêmur fo-ram respectivamente, 24% (p < 0,01) e 53% (p < 0,003) me-nor no GCol comparado ao GCO. A avaliação histomorfo-métrica mostrou menor volume ósseo trabecular e menorconectividade no GCol, compatível com osteoporose. Estegrupo também mostrou aumento no tempo de mineraliza-

ção, caracterizando distúrbio de mineralização. As concen-trações séricas de IGF-I foram menores no sacrifício quan-do comparado ao basal no GCol (Início do experimento: GCol= 1816 ± 336 vs Final do experimento: GCol = 1062 ± 191 ng/ml; p < 0,0001). Este grupo apresentou maior expressão deIGF-I (p < 0,0002) e menor expressão de R-GH (p < 0,0001) notecido hepático do que o grupo GCO. Na cartilagem de cres-cimento, a expressão de IGF-I (p < 0,0001) e R-GH (p < 0,04)foram significativamente maiores no GCO. Nossos dadosreforçam que a osteoporose é o principal componente daOH e que alterações no sistema IGF-I endócrino e parácrinotêm papel chave neste processo.

ESTUDO DO POLIMORFISMO GENÉTICO Val/Leu247 DA βββββ2-GLICOPROTEÍNA I EM PACIENTESCOM SÍNDROME DO ANTICORPO ANTIFOSFOLÍPIDE

para selecionar genes candidatos envolvidos no processode tumorigênese; validar alguns dos genes candidatos di-ferencialmente expressos; analisar a expressão relativa deum painel de miRNAs nas amostras de corticotrofinomasem comparação ao tecido normal; analisar a associação degenes e miRNAs diferencialmente expressos com diâmetrotumoral e remissão após-cirurgia transesfenoidal.

Material e Métodos: utilizamos a técnica de análiseseriada da expressão gênica (SAGE). Para confecção dasbibliotecas de cDNA três amostras de hipófises normais eduas de corticotrofinomas foram utilizadas. Por análise debioinformática, selecionamos os genes diferencialmente ex-pressos T-PIT, RASD1, GLUL, PCDH21, GJA1, F11R e DLK1para validação por PCR em tempo real (qPCR). A expessão

Fernando Colbari do AmaralOrientadora: Profª. Drª. Margaret de CastroTese de Doutorado apresentada em 15/12/2008

Introdução: A patogênese dos tumores hipofisáriostem sido extensivamente estudada, porém ainda é poucaesclarecida. São descritas alterações em genes que contro-lam o ciclo celular, em genes envolvidos na diferenciação eno desenvolvimento hipofisário, na apoptose, além de fa-tores hipotalâmicos e de crescimento. Recentemente, a ex-pressão diferencial de microRNAs (miRNAs) também temsido associada à tumorigênese hipofisária.

Objetivos: avaliar a expressão gênica diferencial emcorticotrofinomas em relação ao tecido hipofisário normal,

EXPRESSÃO GÊNICA DIFERENCIAL EM TUMORES HIPOFISÁRIOS SECRETORES DE ACTH

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Guilherme Vannucchi PortariOrientador: Prof. Dr. Alceu Afonso Jordão JúniorTese de Doutorado apresentada em 15/12/2008

Os mecanismos propostos para a gama de açõesdeletérias provocadas pelo etanol são decorrentes de alte-rações bioquímicas ocorridas nos hepatócitos tais como:1) aumento da geração de radicais livres; 2) produção exa-cerbada de intermediários de alta reatividade vindos deperoxidação de macromoléculas, e 3) depleção de substân-cias da defesa antioxidante. A utilização de antioxidantesvisando restaurar o sistema antioxidante é uma das linhasde tratamento para os danos provocados pelo etanol. Re-centemente, estudos têm apontado para um possível papelantioxidante da tiamina e benfotiamina com efeitos benéfi-cos principalmente em doenças crônicas-degenerativas.

Assim este estudo verificou o papel da tiamina ou benfo-tiamina no sistema antioxidante hepático em ratos com in-toxicação aguda por etanol. Verificou-se que o tratamentocom tiamina e benfotiamina teve influencia no metabolismodo etanol ficando este mais circulante sem metabolização.Os tratamentos foram eficazes em aumentar os valores he-páticos de tiamina, o que resultou em diminuição dos da-nos hepáticos e diminuição de vitaminas antioxidantes dofígado. Além disso, a benfotiamina foi capaz de aumentarem 25 vezes os níveis eritrocitários de tiamina não fosfatadaem relação à administração de tiamina hidrocloreto. Destamaneira ficou constatada a atividade antioxidante da tiaminafrente ao estresse oxidativo provocado pela intoxicaçãoaguda por etanol e a alta biodisponibilidade da benfotiami-na. Assim sendo seria recomendada a utilização da benfo-tiamina como antioxidante mais biodisponível que a tiamina.

dos miRNAs let-7a, miR-15a, miR-16, miR-21, miR-141, miR-143, miR-145 e miR-150 também foi analisada por qPCR. Paravalidação desses genes e miRNAs foram utilizadas 14 amos-tras tumorais e 7 hipófises normais.

Resultados: Não houve validação dos genes T-PIT,RASD1, GLUL, PCDH21, GJA1, F11R nas amostras decorticotrofinomas pela qPCR; o gene DLK1 apresentou umahipo expressão em relação ao tecido normal. Não houveassociação entre a expressão de nenhum desses genes comtamanho tumoral ou remissão pós-cirurgia. Nosso trabalhodemonstrou uma redução significativa da expressão dosmiR-145 (1,8x), miR-21 (2,2x), miR-141 (2,8x), miR-150 (3,2x),let-7a (3,4x), miR-16 (4,6x), miR-15a (5,0x) e miR-143 (8,0x)nas amostras de corticotrofinomas em relação ao tecidonormal. Houve uma associação entre a expressão do miR-141 e remissão pós-cirurgia, assim como a expressão domiR-143 e tamanho tumoral. Observamos, ainda, uma corre-lação negativa da expressão de let-7a com a de GLUL e umacorrelação positiva com a expressão de DLK1; a expressãode miR-16 apresentou correlação negativa apenas com a de

TPIT; a expressão de miR-21 apresentou uma correlaçãonegativa com as de TPIT, RASD1 e GLUL; a expressão demiR-141 apresentou uma correlação negativa com a de GLULe de GJA1, além de uma correlação positiva com a de DLK1.As expressões de miR-15a, miR-143, miR-145 e miR-150 nãoapresentaram correlação com as de nenhum dos genes es-tudados.

Conclusões: Nossos resultados demonstram que ocritério de escolha dos genes diferencialmente expressosnão foi útil para validação dos possíveis genes envolvidosna gênese dos corticotrofinomas. A expressão reduzida dosmiRNAs e a associação da expressão de alguns deles comgenes envolvidos na proliferação e diferenciação celular,assim como com remissão e tamanho tumoral sugerem umpossível papel dos mesmos na tumorigênese corticotrófica.Entretanto, a necessidade de aprimoramento na seleção degenes candidatos diferencialmente expressos e o desco-nhecimento de genes alvo para cada miRNA dificultam oentendimento das funções biológicas desses genes e dosmiRNAs na tumorigênese corticotrófica.

AVALIAÇÃO DO EFEITO DA TIAMINA OU BENFOTIAMINA SOBRE SISTEMA ANTIOXIDANTEHEPÁTICO EM MODELO EXPERIMENTAL AGUDO DE ALCOOLISMO

ESTUDO VIDEOFLUOROSCÓPICO DA DEGLUTIÇÃO NA DOENÇA DE CHAGAS

Carla Manfredi dos SantosOrientador: Prof. Dr. Roberto Oliveira DantasDissertação de Mestrado apresentada em 17/12/2008

Introdução: As alterações motoras do esôfago pre-sentes na doença de Chagas podem ocasionar sintomas dealteração da deglutição como a disfagia. A disfagia na do-ença de Chagas está relacionada ao envolvimento esofágico,

entretanto, alterações orofaringenas têm sido demonstra-das nestes pacientes.

Objetivo: Estudar as fases oral e faringeana da de-glutição em pacientes com sorologia positiva para doençade Chagas e comparar com indivíduos voluntários assinto-máticos.

Metodologia: Foram estudados 17 pacientes comdoença de Chagas (idades entre 31-67 anos, média 53,3

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anos) e 15 sujeitos saudáveis (idades entre 35-69 anos,média 55,2). Todos os doentes apresentavam queixa dedisfagia e possuíam o diagnóstico de megaesôfago a partirda radiografia contrastada. Os dois grupos responderam aum questionário sobre a história pregressa da queixa dedeglutição e posteriormente foram submetidos a uma avali-ação clínica fonoaudiológica. Após este procedimento, foirealizado o exame videofluoroscópico da deglutição a fimde observar sua conformação anatômica e funcional, comregistro na velocidade de 60 quadros por segundo. Foramrealizadas deglutições em duplicata nos volumes de 5 e 10ml de sulfato de bário na consistência líquida e pastosa,nos dois grupos. Este exame permitiu analisar a deglutiçãode forma qualitativa e quantitativa, sendo possível a obser-vação dos seguintes parâmetros: movimento da base dalíngua, trânsito oral, trânsito faríngeo, duração do movi-mento do osso hióide, trânsito pelo esfincter superior doesôfago, depuração faringeana e trânsito orofaringeano.Além disso, pôde-se observar ocorrência de escape poste-rior do alimento, resíduo oral, resíduo faríngeo, penetraçãoe aspiração laringotraqueal.

Resultados: Quanto aos resultados da avaliação clí-nica fonoaudiológia, a elevação laríngea foi reduzida nadeglutição do alimento líquido e pastoso no grupo chagá-sico em relação ao grupo controle (p < 0,01). O grupo cha-

gásico realizou manobras de deglutição múltipla nas con-sistências líquida e pastosa em comparação ao grupo sau-dável (p < 0,01). Os pacientes com megaesôfago grau IIapresentaram mais queixa de alteração respiratória durantea deglutição (p < 0,05) e de perda de peso (p < 0,0 1) quandocomparados aos pacientes com megaesôfago grau I. O exa-me videofluoroscópico mostrou diferenças estatísticas sig-nificativas para os seguintes tempos das variáveis estuda-das: trânsito oral, trânsito faríngeo, trânsito pelo esfinctersuperior do esôfago, depuração faringeana e trânsito oro-faringeano (p < 0,05), sendo o tempo mais prolongado parao grupo de doentes. Essas diferenças foram encontradaspara a consistência pastosa e no volume de 10ml, excetopara o TOF cuja diferença também ocorreu para a consis-tência líquida, no volume de 5ml e no TO, na consistêncialíquida e no volume de 10ml. Qualitativamente, houve so-bra de resíduo oral na deglutição de pastoso e no volumede 10ml para o grupo chagásico (p < 0,02).

Conclusão: Conclui-se nesse trabalho que o tempode trânsito do alimento foi mais prolongado no grupo dedoentes em relação ao grupo controle, principalmente naconsistência pastosa e em volume maior (10ml). Esses resul-tados sugerem a existência de mecanismos compensatóriosnos pacientes com doença de Chagas a fim de amenizar ossintomas de disfagia decorrentes da doença do esôfago.

codificadores do gene PRKAR1A e suas regiões de tran-sição éxon/íntron foram amplificados por PCR (reação emcadeia de polimerase) e os fragmentos submetidos ao se-quenciamento automatizado. Para comparação, este genetambém foi sequenciado em 50 indivíduos normais. Aidade ao diagnóstico variou de 4 a 25 anos (16,4 ± 7,8 anos).Três pacientes apresentaram manchas pigmentadas; doispacientes apresentaram mixomas cutâneo-mucosos e 1 pa-ciente desenvolveu mixoma cardíaco; 1 paciente apresen-tou tumor testicular de células de Leydig. A avaliação porimagem das adrenais identificou a presença de micronódulosem 4 pacientes e volume aumentado em três deles. Encon-tramos 2 novas mutações no gene PRKAR1A, IVS4+5G > Ae g.149A > G, em 2 de 4 famílias estudadas. Observamosuma distribuição etária bimodal da PPNAD, com grandevariabilidade nas manifestações clínicas e laboratoriais.Em 75% das famílias, a PPNAD esteve associada ao Com-plexo de Carney. O estudo genético, com o achado da mu-tação g.149A > G, permitiu o diagnóstico de Complexo deCarney em uma paciente previamente diagnosticada comoPPNAD isolada. Possibilitou, ainda, a detecção de muta-ção IVS4+5G > A no gene PRKAR1A em 2 filhas assintomá-ticas de outra paciente, permitindo aconselhamento gené-tico apropriado.

Marcelo Pinho BittarOrientador: Prof. Dr. Ayrton Custódio MoreiraDissertação de Mestrado apresentada em 17/12/2008

O Complexo de Carney (CNC) é uma neoplasia en-dócrina múltipla que cursa com tumores endócrinos, cardí-acos e neurais, além de lesões mucocutâneas pigmentadas.Entre os tumores endócrinos, a doença adrenocortical no-dular pigmentada primária (PPNAD) é o mais frequente. Atransmissão é autossômica dominante, enquanto que al-guns casos são esporádicos. O gene PRKAR1A foi identi-ficado no lócus 17q22-24 e mutações nesse gene são ob-servadas em 60% dos pacientes com CNC. O objetivo des-te trabalho foi a avaliação clínica, laboratorial e molecularde 1 paciente com PPNAD isolado e 4 com CNC, pertencen-tes a 4 famílias seguidas no ambulatório de Endocrinologiado HCFMRP-USP. Os dados clínicos e os achados anáto-mo-patológicos das adrenais foram avaliados, retrospecti-vamente, por meio de consulta aos prontuários; a presençade doenças endócrinas pela realização de exames laborato-riais específicos. A presença de doenças associadas foiavaliada por meio de ecocardiograma, ultra-som de tireóidee imagem da sela túrcica. Para avaliação molecular, DNAgenômico foi extraído dos pacientes com PPNAD, os éxons

AVALIAÇÃO CLÍNICA, LABORATORIAL E MOLECULAR DE PACIENTES COM DOENÇA ADRE-NOCORTICAL NODULAR PIGMENTADA PRIMÁRIA OU COMPLEXO DE CARNEY

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Dannielle Fernandes GodoiOrientador: Prof. Dr. Júlio César VoltarelliTese de Doutorado apresentada em 18/12/2008

Introdução e Objetivos: O transplante de células tron-co hematopoéticas (TCTH) assim como quimioterapia emaltas doses tem sido explorado como terapia para váriascondições refratárias imuno-mediadas humanas, incluindoas doenças inflamatórias intestinais (DII). Apesar disso, oexato mecanismo imunológico pelo qual as células de me-dula óssea ou a imunossupressão levam à remissão destasdoenças ainda não está claro. Neste trabalho, nós investi-gamos o papel destas terapias na modulação da inflamaçãoda mucosa do intestino em um modelo experimental de DII.

Métodos: A colite experimental foi induzida em ca-mundongos pela infusão intra-retal de 2,4,6-ácidotrinitrobenzenesolfonico (TNBS). Após 24 horas os animaisforam submetidos a imunossupressão com ciclofosfamida(Cy -200mg/Kg) ou por irradiação corporal total (ICT -7Gy).Após 24 e 12 horas da imunossupressão com Cy e ICT

respectivamente, 1,6 x 107 células de medula óssea foraminfundidas nos grupos TCTH. Os animais dos diferentesgrupos foram estudados por 60 dias.

Resultados: Tanto os grupos que receberam TCTHcomo os que receberam imunossupressão por Cy e ICTisoladamente tiveram redução significativa do quadro clí-nico e histológico da colite experimental mas somente oTCTH resultou em aumento da sobrevida comparado como grupo não tratado. Um decréscimo acentuado nas célulasCD4+ no infiltrado inflamatório nos dias + 7 e +14 e nascélulas CD8+ no dia 7 foi encontrado em ambos os trata-mentos aliado a marcante redução nas citocinas pro-infla-matórias como TNF-α, IFN-γ, IL-1β, IL 12p70 e IL-17, sobre-tudo nos grupos Cy e Cy + TCTH.

Conclusões: Nossos achados indicam que a Cy emalta dose assim como a ICT associadas ou não com TCTHsão efetivas em reduzir os quadros clínico e patológicoassociados à DII por uma proeminente contra- regulaçãodo perfil de citocinas inflamatórias Th1 porém apenas oTCTH resultou em diminuição da taxa de mortalidade asso-ciada à colite.

(p=0,0055) e aos 6 meses (p=0,0066). Em relação a % desangramento à sondagem as reduções foram estatistica-mente significantes aos 6 meses (p=0,0128) e para % deplaca microbiana aos 3 meses (p=0,0128) e aos 6 meses(p=0,0002) em favor do grupo raspado. A melhora no Grupo1 após o tratamento periodontal não-cirúrgico (TPNC) foiestatisticamente significante no controle periodontal, masos exames sistêmicos, embora reduzidos, não foram signifi-cativos. O tratamento periodontal não apresentou correla-ção com a melhora dos exames laboratoriais, nem com osexames de qualidade de vida (HAQ, DAS 28, SF 36), masuma melhora nos exames foi evidente nas comparaçõesintra-grupos. A melhora periodontal influenciando os exa-mes laboratoriais foi mais fácil de ser observada no Grupo 4(AR-DP+TR+). Comparando o Grupo 1 com Grupo 3(AR+PT) houve diferença estatisticamente significante so-mente no DAS28 no tempo inicial e aos 3 meses. Aos 6meses essa diferença não foi estatisticamente significante.

Conclusões: Não foi possível verificar uma correla-ção direta do tratamento periodontal na atividade da doen-ça sistêmica, mas pode-se constatar a sua importância, evi-tando a extração múltipla dos dentes nos pacientes comAR, o que, obviamente, ocasionará maior conforto para osmesmos, evitando uma possível situação de estresse.

Márcia de Noronha PinhoOrientador: Prof. Dr. Júlio César VoltarelliTese de Doutorado apresentada em 18/12/2008

Objetivo: Este estudo avaliou a influência da doen-ça periodontal (DP) na artrite reumatóide (AR), através deexames clínicos e laboratoriais, antes e depois do tratamen-to periodontal não cirúrgico.

Materiais e Métodos: 75 pacientes, entre 35-60 anos,divididos em 5 grupos, foram analisados de acordo com asituação sistêmica e periodontal. Os parâmetros clínicos elaboratoriais coletados nos exames: inicial, 3 e 6 meses re-ceberam tratamento estatístico. As correlações para averi-guar a associação das reduções da profundidade de son-dagem (PS), placa microbiana (PM) e sangramento à son-dagem (SS) com as reduções de α-1-glicoproteína ácida(alfa1), proteína C-reativa (PCR), velocidade de hemossedi-mentação (VHS), questionário de saúde para avaliação dedoenças reumáticas (HAQ), avaliação da atividade da do-ença (DAS28) e SF-36 foram também analisadas.

Resultados: Comparando os grupos com AR e DP,Grupo 1 (AR+DP+TR+) e Grupo 2 (AR+DP+TR-), aquelesque receberam tratamento periodontal tiveram reduções es-tatisticamente significativas em relação a PS aos 3 meses

INFLUÊNCIA DA DOENÇA PERIODONTAL E SEU TRATAMENTO NA ATIVIDADE DA ARTRITEREUMATÓIDE

ESTUDO DO POTENCIAL TERAPÊUTICO DO TRANSPLANTE AUTÓLOGO DE CÉLULAS TRONCOHEMATOPOÉTICAS EM UM MODELO EXPERIMENTAL DE DOENÇA INFLAMATÓRIA INTESTINAL

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Leon Gustavo dos Reis MacedoOrientador: Prof. Dr. Antonio Pazin FilhoDissertação de Mestrado apresentada em 19/12/2008

A enoxaparina vem ganhando espaço como anti-coagulante de eleição em situações para as quais se utiliza-va heparina não fracionada previamente. Além das evidên-cias que sugerem igualdade ou até superioridade em ter-mos de desfechos clínicos, a grande vantagem da enoxapa-rina reside na facilidade de sua posologia. Para a anticoa-gulação plena ela deve ser prescrita de acordo com o pesocorporal. Porém, na maioria das vezes utiliza-se o peso esti-mado pelo médico ao invés do peso real. Já existem evidên-cias de que em síndromes coronarianas agudas de alto ris-co os pacientes que não estão anticoagulados adequada-mente com enoxaparina (atividade anti-Xa ≤ 0,5 UI/ml) apre-sentam risco aumentado de evolução desfavorável seme-lhante a idade avançada ou a disfunção ventricular esquer-da. Este estudo tem como objetivo primário avaliar a ade-quação da anticoagulação com a enoxaparina quando seutiliza o peso estimado para sua prescrição (fase I) (ativida-de anti-Xa colhido após a segunda dose) e como secundá-rio avaliar outros métodos de estimativa de peso, comopeso relatado e peso obtido por fórmulas antropométricasem comparação ao peso real e evolução do nível de antico-agulação após reajuste de dose em três grupos (A: dosemantida; B: ajuste pelo peso real; C: ajuste pelo peso obti-do pela fórmula) (fase II) (anti-Xa colhido após duas dosesjá corrigidas). Vinte e oito pacientes foram analisados nafase I, e divididos em dois grupos: grupo 1 (ausência desubdose de enoxaparina com erro >10% em relação ao peso

real, ou seja, dose recebida ≥ 0,9 mg/Kg/dose) e grupo 2(presença de subdose de enoxaparina com erro >10% emrelação ao peso real, ou seja, dose recebida < 0,9 mg/Kg/dose) uma vez que a dose adequada seria de 1 mg/Kg/dosede 12/12 horas. Das características basais dos dois grupos,não houve diferença em relação a idade, sexo e creatinina ehouve diferença em relação à média de peso (grupo 1: 67,1±14,0 Kg e grupo 2: 86,1± 18,8 Kg) (p=0,04). Vinte e um pa-cientes foram do grupo 1 (75%) e todos eles estavam ade-quadamente anticoagulados (atividade anti-Xa ≥ 0,5 UI/mL). Sete pacientes foram do grupo 2 (25%) e destes, qua-tro (57%) estavam inadequadamente anticoagulados (ati-vidade anti-Xa < 0,5 UI/mL) (p< 0,05). Dos Vinte e oito pa-cientes, apenas 24 (85,7%) souberam relatar seu peso, edestes, dois (8,3%) o subestimaram com erro >10%. Dosvinte e oito pacientes analisados, quatro (14,3%) tiveramseu peso subestimado pela fórmula, com erro >10% em re-lação ao peso real. Na fase II do estudo(após duas dosesiniciais mais duas doses corrigidas), todos os 24 pacientesatingiram nível adequado de atividade anti-Xa (≥ 0,5 e < 1,2UI/mL) independente da forma utilizada para ajuste da dose(grupos A,B e C). Como conclusão, o presente trabalhosalienta a necessidade da avaliação objetiva do peso cor-poral (pesagem dos pacientes) para prescrição de enoxapa-rina com o objetivo de heparinização plena (atividade anti-Xa ≥ 0,5 e < 1,2 UI/ml), uma vez que a estimativa subjetivadeste peso determinou uma inadequação da anticoagula-ção em cerca de 14% do total dos pacientes analisados. Naimpossibilidade de pesar o paciente, o peso relatado seria asegunda opção e para os que não souberam relatar seupeso a terceira opção seria a fórmula que utilizamos.

INADEQUAÇÃO TERAPÊUTICA DA ANTICOAGULAÇÃO COM ENOXAPARINA EM DECORRÊNCIADE ERRO NA ESTIMATIVA INICIAL DE PESO CORPORAL

reações defensivas, como por exemplo, a substância cin-zenta periaquedutal dorsolateral (SCPdl) e o núcleo pré-mamilar dorsal (PMd). Antagonistas de receptores NMDA(rNMDA) de glutamato e inibidores da NOS injetados intra-SCPdl produzem efeitos ansiolíticos. A exposição a estímu-los ameaçadores induz a ativação de células produtoras deNO nesta região. A SCPdl recebe uma densa projeção doPMd, também envolvido com reações de defesa. Lesões

Daniela Cristina de AguiarOrientador: Prof. Dr. Francisco Silveira GuimarãesTese de Doutorado apresentada em 03/10/2008

O óxido nítrico (NO), sintetizado pela sintase do óxi-do nítrico neuronial (NOSn), possui um papel moduladorem reações defensivas, possivelmente facilitando a ansie-dade. A NOSn está localizada em estruturas envolvidas com

FARMACOLOGIA

ENVOLVIMENTO DAS NEUROTRANSMISSÕES GLUTAMATÉRGICA E NITRÉRGICA DA SUBS-TÂNCIA CINZENTA PERIAQUEDUTAL DORSOLATERAL E DO NÚCLEO PRÉ-MAMILAR DORSALNA ELABORAÇÃO DE RESPOSTAS DEFENSIVAS

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bilaterais desse núcleo abolem a expressão de respostasdefensivas durante a exposição ao predador. Pouco se sabea respeito dos neurotransmissores envolvidos na media-ção desses comportamentos pelo PMd, o qual também ex-pressa receptores ionotrópicos de glutamato. Assim, o ob-jetivo geral do presente trabalho foi de investigar a partici-pação do NO e do glutamato na SCPdl e no PMd nas res-postas defensivas. Para tanto, testou-se a hipótese de que aadministração de inibidores da NOSn (7-nitroindazole, 7-NI,ou N-propil-L-arginina, NP) intra-SCPdl atenuaria as res-postas defensivas promovidas pela exposição a um eventoameaçador inato, um gato. Verificou-se também, a hipótesede que o tratamento com AP- 7 (antagonista de rNMDA)ou NP intra-SCPdl poderiam diminuir as reações comporta-mentais defensivas, além do número de células ativadas,bem como a ativação de neurônios NOSn postivos em regi-ões relacionadas com o comportamento defensivo após aexposição ao gato. A ativação neuronial foi verificada peladetecção da imunorreatividade à proteína c-FOS (IR-Fos) ea presença da NOS através da imunorreatividade à proteínaNOS. Por último, testou-se a hipótese de que o tratamentocom AP- 7 ou NP intra-PMd atenuaria as reações comporta-

mentais promovidas pela presença do gato. A exposição aogato promoveu respostas defensivas que foram atenuadaspelo tratamento intra-SCPdl com inibi dores da NOSn e como AP7. Adicionalmente, houve aumento das células IR-Fosda SCPdl, no PMd e no núcleo paraventricular do hipotála-mo (PVN), e aumento na porcentagem de células duplas (%duplas) marcadas na SCP e no PMd. O tratamento com AP-7 e com o NP intra-SCPdl atenuou a ativação celular na SCPe no PVN observada pela exposição ao gato, enquanto quehouve aumento nas células IR-Fos e na % duplas no PMd.Além disso, observamos que o tratamento de AP- 7 ou NPintra-PMd também atenuou as reações defensivas obser-vadas pela exposição ao predador. Em conclusão, os resul-tados do presente trabalho sugerem que o antagonismo daneurotransmissão glutamatérgica e nitrérgica na SCPdl eno PMd pode atenuar as respostas comportamentaisinduzidas pela exposição ao predador. Além disso, a admi-nistração intra-SCPdl de AP- 7 ou NP é capaz de reduzir aativação celular promovida pela exposição ao gato nestaestrutura, sem alterar, ou mesmo aumentando, essa ativa-ção em outras regiões relacionadas com o comportamentodefensivo como o PMd.

tudo demonstrou que a injeção de LPS (5µg/kg, i.v.) e ET-1(1 pmol/rat, i.c.v.) induziu uma resposta febril acompanha-da de um aumento das concentrações de PGE2 no CSF e nohipotálamo, enquanto que a injeção de vTs (150 µg/kg, i.p.)induziu febre sem alterar as concentrações de PGE2 no CFSe no hipotálamo. A indometacina (2 mg/kg, i.p.) somentereduziu a resposta febril induzida pelo LPS na terceira hora,entretanto preveniu o aumento de a PGE2. no hipotálamo eno CSF na segunda e terceira horas após a injeção de LPS.Como esperado, a indometacina não modificou a febre indu-zi da pela ET-1 e vTs, porém diminuiu a concentração dePGE2 no CFS e no hipotálamo induzido pela ET-1. Por outrolado, a dipirona (120 mg/kg, i.p.) inibiu a resposta febrilinduzida pelo LPS, ET-1 e vTs e reduziu a concentração de aPGE2. no CSF durante a febre induzida pelo LPS e ET-1, semmodificar a quantidade de PGE2 no hipotálamo após a inje-ção de LPS e ET-1. Adicionalmente, observamos que a inje-ção intracerebroventricular do antagonista seletivo de re-ceptores EP3 L-826266 inibiu a febre induzida pela PGE2(35%), mas não alterou a febre induzida pelo LPS, ET-1 ouvTs. Em síntese, esses resultados indicam que nem todas asfebres dependem de PGE2 para o seu desenvolvimento (ex.,febre induzida pela ET-1 e vTs) e que a dipirona exerce seuefeito antipirético sem reduzir a quantidade de PGE2 no hi-potálamo. Uma vez que a dipirona aboliu a febre insensívelà indometacina induzida pela ET-1 e a febre induzida pelovTs, que não aumenta a concentração de PGE2 no CSF ou

David do Carmo MalvarOrientadora: Profª. Drª. Glória Emília Petto de SouzaDissertação de Mestrado apresentada em 07/10/2008

Vários trabalhos demonstram que a febre induzidapelo LPS requer a produção periférica de citocinas e centralde prostaglandina (PG)E2 e PGF2α por uma via sensível àindometacina. Entretanto, vários estudos de nosso gruposugerem a existência de uma via insensível à indometacinae independente de PGE2, devido ao fato de que não existerelação entre a febre induzida pela endotelina (ET)-1 e oaumento das concentrações de PGE2 no fluido cerebroespi-nhal (CSF). Além disso, também mostramos que o venenode Tityus Iserrulatus (vTs) causa uma resposta febril quenão é alterada pelos inibi dores de ciclooxigenase (COX)ibuprofeno e celecoxib. Adicionalmente, a febre induzidapela ET -1 ou vTs foi abolida pela dipirona, uma droga anti-pirética que parece produzir seu efeito por mecanismo in-dependente da inibição de COX. Dessa forma, o objetivodesse estudo foi avaliar a relação entre a quantidade dePGE2 no CSF e no hipotálamo durante a febre induzida peloLPS, ET-1 e vTs em ratos, bem como o efeito da indometaci-na e da dipirona nesses parâmetros. Além disso, a partici-pação do receptor EP3 para PGE2 na febre induzida pelo LPS,ET-1 e vTs também foi avaliado. O CSF e o hipotálamo foramcoletados de acordo com a curva-temporal da resposta fe-bril induzida por cada um desses estímulos. O presente es-

ESTUDO DO ENVOLVIMENTO DA PGE2 NA RESPOSTA FEBRIL INDUZIDA POR LPS, ENDOTELI-NA-1 E VENENO DE Tityus Serrulatus

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Daniel FragaOrientadora: Profª. Drª. Glória Emília Petto de SouzaTese de Doutorado apresentada em 08/10/2008

O envolvimento dos endocanabinóides no controleda temperatura corporal e na resposta febril ainda não esta-vam bem claros. Por esta razão, o presente estudo tevecomo objetivo investigar o envolvimento dos canabinóidesendógenos no controle da temperatura corporal e na res-posta febril. As alterações na temperatura corporal forammedidas em intervalos de 30 minutos até a sexta hora apósa administração do tratamento, através de uma sonda retalem ratos Wistar machos. Todos os pré-tratamentos foramadministrados 30 minutos antes do tratamento. Tanto a ad-ministração intracerebroventricular (0,01, 0,1, 1 e 10 µg/2 µI,i.c.v.) como intrahipotalâmica (0,1, 1, 10 e 100 ng/0,2 µI, i.h.)de nandamida (AEA) induziram aumentos dose-dependen-tes na temperatura corporal. O aumento na temperaturacorporal induzido pela AEA (1 µg, i.c.v.) foi precedido eacompanhado por uma redução da temperatura da pele dacauda dos animais o que foi causado por uma significativavasoconstrição representada pelo índice de perda de calor,(IPC). A dose de 1 µg, i.c.v. de AEA foi selecionada para osdemais experimentos. O URB597 (0,001, 0,01, 0,1, 1, 10, 100e 1000 ng/2 µI, i.c.v.), inibidor da enzima amido hidrolasedos ácidos graxos (FAAH, do inglês fatty acid amidehydrolase), promoveu uma curva em forma de sino. Oagonista CB1 seletivo ACEA (0,001, 0,01, 0,1 e 1 µg/2 µI,i.c.v.) também induziu um aumento na temperatura corporalem forma de sino. O pré- tratamento dos animais com oantagonista CB1 seletivo, AM251 (1,0, 5,0 e 10,0µg/2µI, i.c.v.)reduziu de forma dose-dependente a resposta febril induzidapela ABA e ACEA 0,01µg, i,c.v. A dose 5 µg de AM251 foi

selecionada para os demais experimentos. A injeção i.c.v.do agonista CB2 seletivo AM1241 (0,01, 0,1 e.1 µg/2 µI,i.c.v.) não promoveu nenhuma alteração significativa datemperatura corporal. O pré-tratamento com o antagonistaCB2 seletivo AM630 (10 µg/2 µI, i.c.v.), assim como com oantagonista dos receptores vanilóides capsazepina (1, 3 e10 µg/2 µI, i.c. v.), não alteraram a resposta febril induzidapela AEA. O inibidor não seletivo das enzimas ciclooxige-nase (COX) indometacina (2 mg/kg, i.p.), e o inibidor seleti-vo da COX-2 celecoxib (5 mg/kg, p.o.), reduziram a febreinduzida pela AEA. A AEA induziu um aumento significati-vo na concentração de PGE2 no fluído cerebroespinal (CSF)que foi abolido pelo pré-tratamento com o AM251. O anta-gonista não seletivo dos receptores opióides, naloxona (1mgkg, s.c.), aboliu a febre induzida pela AEA. Por sua vez,a AEA aumentou a concentração no CSF de β-endorfina. Opré-tratamento com AM251 foi capaz de reduzir este au-mento induzido pela AEA. O AM251 também reduziu a fe-bre induzida pelo lipopolissacarídeo (LPS 50 µg/kg, i.p.),interleucina (1L)-1β(3 ng, i.c.v.), fator de necrose tumoral(TNF)-α (250 ng, i.c.v.), 1L-6 (300 ng, i.c.v.), fator liberadorde corticotrofina (CRF 2,5 µ-lg, i.c.v.) e da endotelina (ET-11 pmol, i.c.v.). Porém, o AM251 não foi capaz de reduzir aresposta febril induzida pelas prostaglandinas PGE2 250 ng,i.c. v .) e PGF2 α (250 ng, i.c. v.) Em conjunto, estes dadossugerem que a AEA, pela ativação dos receptores CB1, écapaz de induzir febre. Esta resposta é dependente da sín-tese/liberação de prostaglandinas e opióides endógenos.Além disso, os endocanabinóides estão envolvidos no de-senvolvimento da resposta febril induzida pelo LPS e pordiversos mediadores que orquestram esta resposta inclu-indo 1L-1β, TNF-α, 1L-6, CRF e ET-1, mas não PGE2 PGE2 oua PGF2 α.

tecido hipotalâmico, é possível enfatizar que o efeito antipi-rético da dipirona pode depender do bloqueio da síntese/liberação de outros mediadores que não a PGE2. Além disso,

nossos resultados demonstram que o receptor EP3 está en-volvido na febre induzida pela PGE2, mas não apresenta re-levância crucial na febre induzida pelo LPS, ET-1 ou vTs.

ENVOLVIMENTO DE CANABINÓIDES ENDÓGENOS NA RESPOSTA FEBRIL

matórios, descritos como mediadores hipernociceptivos fi-nais (prostaglandinas e aminas simpáticas). Neste sentido,o controle farmacológico periférico da dor inflamatória ba-seia-se em duas estratégias principais: a) uso de fármacosque previnem a sensibilização dos nociceptores (ex: inibi-dores de COX), ou seja, inibem a liberação e/ou ação desubstâncias que os sensibilizam; b) fármacos que revertemdiretamente à sensibilização dos nociceptores já instalada,como a dipirona e principalmente os opióides. Em relação

Thiago Mattar CunhaOrientador: Prof. Dr. Fernando de Queiroz CunhaTese de Doutorado apresentada em 09/10/2008

O aumento da intensidade dolorosa durante o pro-cesso inflamatório (hiperalgesia/hipernocicepção) é cau-sado, principalmente, pela sensibilização de uma classe es-pecífica de neurônios nociceptivos primários (nociceptores),devido à ação direta de um conjunto de mediadores infla-

MECANISMOS MOLECULARES ENVOLVIDOS NO EFEITO ANTINOCICEPTIVO PRODUZIDOPELA AÇÃO PERIFÉRICA DOS OPIÓIDES : ATIVAÇÃO DA VIA DE SINALIZAÇÃO INTRACELULAR

PI3KγγγγγAKT/ÓXIDO NÍTRICO

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Lilian Rialto GimenesOrientadora: Profª. Drª. Ana Maria de OliveiraDissertação de Mestrado apresentada em 10/10/2008

A angioplastia por cateter balão é um procedimentoamplamente utilizado para desobstrução de artérias coro-nárias e periféricas a partir da remoção de placas ateroma-tosas e restauração do fluxo sanguíneo nestes locais. Apassagem do cateter balão pelo lúmen do vaso gera umestresse mecânico na parede vascular, como a remoção decélulas endoteliais, que resulta em resposta neurocompen-satória que tem reflexos sobre a reatividade não só do pró-prio vaso, mas também da artéria carótida contra-lateral àlesão (CCA). A endotelina-1 (ET-1) participa da regulaçãodo tônus vascular e também da formação da camadaneoíntima. A lesão por cateter balão em artérias carótidaspromove um aumento na expressão de ET-1, bem como deseu receptor ETA na artéria lesada, e resulta em alteraçõesna reatividade da CCA à fenilefrina e angiotensina II, 4 e 15dias após a lesão, Tespectivarnente. Os objetivos do pre-sente estudo foram avaliar: (a) a relação concentração-efei-to da ET-1 em CCA isoladas, obtidas de ratos Wistar ma-cho, com o intuito de obter os parâmentos de Emax (efeitomáximo) e pD2 da ET-1; (b) as consequências da lesão porcateter balão sobre esses parâmetros na CCA, após 2, 8, 16,30 e 45 dias da lesão, na presença e na ausência do endotélio.Os resultados mostraram um aumento do Emax da ET-1 apartir do 16º dia na CCA com endotélio. Alterações morfo-lógicas não estão relacionadas ao aumento da respostacontrátil induzida pela ET-1, uma vez que a integridade es-trutural da CCA foi mantida. A participação da população

de receptores ETB da CCA na resposta à lesão parece estarcomprometida pelos mecanismos neurocompensatórios quese seguem à lesão por cateter balão. Por outro lado, a parti-cipação de receptores ETA da CCA na contração desenca-deada pela ET-1 foi semelhante à da artéria controle. O in-fluxo de cálcio, bem como a mobilização de cálcio dos esto-ques intracelulares, participaram do aumento do Emax in-duzido por ET-1 na CCA. A reatividade à ET-1 na CCA comendotélio não foi alterada na presença de L-NAME (NG-nitro-L- arginina metil ester), um inibidor não-seletivo deóxido nítrico sintases, sugerindo uma redução na biodis-ponibilidade de NO. Os resultados também sugerem o com-prometimento do efeito modulatório da NNOS (óxido nítricosintase neuronal) e INOS (óxido nítrico sintase induzida)sobre a ação vasoconstritora da ET-1 na CCA com endotélio.Por outro lado, a ‘ENOS’ (óxido nítrico sintase endotelial)modulou negativamente a ação desencadeada pelo peptí-deo na CCA, todavia, a magnitude dessa modulação foimenor quando comparada com a do grupo controle. Osprostanóides parecem não participar da contração induzidapela ET-1 em artérias controle e CCA com endotélio, umavez que o Emax do peptídeo não foi alterado na presença deindometacina. As espécies reativas de oxigênio parecemcontribuir para o aumento do Emax desencadeado pela ET-1na CCA em resposta à lesão por cateter balão. Assim, alte-rações na biodisponibilidade de NO, na formação de espé-cies reativas de oxigênio e nas vias de sinalização de cálciofazem parte do conjunto de fatores intracelulares que leva-ram ao aumento do Emax da ET-1 na CCA com endotélio apartir do décimo sexto dia após a lesão vascular por cateterbalão.

aos efeitos analgésicos produzidos pela ação periférica dosopióides, demonstrou-se que este é dependente da ativa-ção da via óxido nítrico/GMPc, a qual culmina na aberturade canais de potássio sensíveis ao ATP, restaurando o po-tencial de membrana dos neurônios nociceptivos. No en-tanto, os mecanismos intracelulares envolvidos na ativa-ção desta via, ainda não estão estabelecidos. No presenteestudo, foram descritas tanto evidências in vivo quanto in

vitro de que a ativação desta via de sinalização depende daestimulação da via intracelular PI3Κγ/AKT. Estes resulta-dos revelam um até então desconhecido papel da viaPI3KγAKT para o efeito periférico dos opióides. Além dis-so, os resultados obtidos abrem uma nova perspectiva nomecanismo molecular de ação de velhas drogas analgési-cas com efeito periférico e também no desenvolvimento denovas drogas.

CONSEQUÊNCIAS DA RESPOSTA NEUROCOMPENSATÓRIA À LESÃO POR CATETER BALÃOSOBRE A REATIVIDADE À ENDOTELINA EM ARTÉRIA CARÓTIDA DE RATO

ALTERAÇÕES DAS CONCENTRAÇÕES PLASMÁTICAS DE METALOPROTEINASES-2 E 9 DA MA-TRIZ EXTRACELULAR E DE SEUS INIBIDORES ENDÓGENOS EM PACIENTES COM MIGRÂNEA

Alisson Martins de OliveiraOrientador: Prof. Dr. José Eduardo Tanus dos SantosDissertação de Mestrado apresentada em 23/10/2008

A migrânea é uma desordem neurológica comum,tendo maior prevalência em mulheres do que em homens.

Acomete a população durante os anos mais produtivosdas suas vidas, sendo uma causa importante de faltas aotrabalho e de aumentos dos custos com “cuidados médi-cos. A crise de migrânea é composta de ataques severos decefaléia associados à fotofobia, náusea, vômitos e sinto-mas autonômicos. Embora a fisiopatologia da migrânea ain-

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da não esteja totalmente elucidada, disfunções vasculares,neurológicas e mecanismos neuro-inflamatórios têm sidopropostos. Alguns estudos mostram a presença de altera-ções vasculares na migrânea. Algumas evidências apon-tam uma possível associação de alterações na integridadeda barreira hematoencefálica em pacientes com migrânea.Contudo, estudos mostram uma provável associação damigrânea a um risco aumentado destes pacientes desenvol-verem eventos cardiovasculares. As metaloproteinases dematriz extracelular modificam a estrutura dos vasos sanguí-neos e são associadas a várias patologias do sistema cardi-ovascular. A metaloproteinase-2 (MMP-2) é constitutiva-mente expressa nos vasos sanguíneos, já a metaloproteina-se-9 (MMP-9) é uma protease liberada durante processosinflamatórios em resposta a estimulação de citocinas. AMMP-2 e a MMP-9 promovem aumento de permeabilidadeda barreira hematoencefálica por degradarem as proteínasda lâmina basal (Iaminina, fibronectina, colágeno do tipo IVe gelatina) presentes nos vasos sanguíneos cerebrais. Al-guns estudos recentes mostram que os pacientes com mi-

grânea possuem aumentos nas concentrações plasmáticasde MMP-9. Baseado nestas informações, o objetivo donosso estudo foi avaliar possíveis alterações nas concen-trações plasmáticas de MMP-2 e MMP-9, bem como deseus inibidores endógenos (TIMP-1 e TIMP-2) em pacien-tes com migrânea, com e sem aura, e em indivíduos saudá-veis. Os resultados deste estudo mostraram que os indiví-duos com migrânea sem aura apresentam aumento das con-centrações plasmáticas das metaloproteinases-2 e 9, enquan-to que pacientes com migrânea com aura tem maiores con-centrações plasmáticas de MMP-2 quando comparados aoscontroles saudáveis. O estudo dos inibidores das MMPsmostraram maiores concentrações plasmáticas de TIMP-1em pacientes com aura quando comparados aos pacientessem aura ou controles sadios. As concentrações de TIMP-2 foram similares nos três grupos experimentais. Esses acha-dos sugerem haver aumentos da MMP-2 no plasma de pa-cientes com migrânea com aura, o que poderia ser umindicativo fisiopatológico que associa migrânea com riscoaumentado de desenvolvimento doenças cardiovasculares.

onados tratados com CBD apresentaram menor imunorrea-tividade à proteína c-Fos nas regiões pré- límbica (PL) einfralímbica (IL) do córtex pré-frontal medial (CPFm), bemcomo nas regiões medial anterior, lateral dorsal e ventral doleito do núcleo da estria terminal, sendo que houve correla-ção positiva entre o tempo de congelamento e a densidadede células marcadas para c- Fos apenas nas regiões medialanterior e ventral dessa estrutura. Em experimentos posteri-ores, observou-se que rnicroinjeções de CBD diretamenteno PL atenuaram o congelamento, enquanto que microinje-ções no IL apresentaram efeito oposto. Portanto, os resulta-dos do presente estudo sugerem que as regiões medial an-terior e ventral do núcleo do leito da estria terminal e tam-bém a região pré-límbica do CPFm podem estar envolvidasno efeito do tratamento sistêmico do CBD sobre a respostaemocional condicionada (REC) contextual. Palavras chaves:canabidiol, medo condicionado contextual, c-Fos, córtex pré-frontal, núcleo do leito da estria terminal.

José Inácio Lemos Monteiro CarvalhoOrientador: Prof. Dr. Francisco Silveira GuimarãesTese de Doutorado apresentada em 31/10/2008

Estudos prévios do laboratório mostraram que o tra-tamento sistêmico com canabidiol (CBD) atenuou as altera-ções cardiovasculares (pressão arterial e frequência cardía-ca) bem como os efeitos comportamentais (congelamento)provocados pela reexposição ao contexto previamentepareado com choques nas patas (Resstel et al. 2006). Entre-tanto, pouco se sabe sobre quais áreas cerebrais podemestar envolvidas no efeito ansiolítico do CBD no modeloexperimental presentemente estudado. Assim, o objetivo dopresente estudo foi identificar, através da técnica de imu-norreatividade à proteína c-Fos, quais áreas encefálicas ati-vadas pelo protocolo experimental poderiam ser alteradaspelo tratamento sistêrnico com CBD antes da re-exposiçãoao contexto aversivo. Observou-se que os animais condici-

EFEITOS DO CANABIDIOL SOBRE ESTRUTURAS ENCEFÁLICAS ENVOLVIDAS COM A RESPOS-TA EMOCIONAL CONDICIONADA CONTEXTUAL

MEDIADORES ENVOLVIDOS NA RESPOSTA FEBRIL INDUZIDA PELA SEPSE (CLP) EM RATOS

Maria José FigueiredoOrientadora: Profª. Drª. Glória Emília Petto de SouzaTese de Doutorado apresentada em 31/10/2008

Embora a injeção de LPS seja um modelo razoável deinfecção real, a febre induzida pelo LPS não é uma febre

típica. Este é usualmente removido. da circulação 1 h após ainjeção intravenosa e Induz uma febre de duração curta. Namaioria dos casos de f sepse a febre é induzida e mantidapor um longo período pela estimulação pirogênica contínua(Gourlne et al., 1998). O CLP (modelo de ligação e perfuraçãocecal) primeiramente descrito por Chaudry et al. (1979, 1980),

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é amplamente aceito por muitos investigadores como ummodelo de sepse, infecção aguda e peritonite bacteriana(Fink et al., 1990; Villa et al., 1995), que melhor reflete a com-plexa resposta desta síndrome em humanos (De Maio et al.,2005). O CLP envolve uma estimulação pirogênica contínuae simula uma infecção real muito melhor que a infusão dequantidades constantes de LPS (infecção simulada). Destaforma este trabalho objetivou: -padronizar o modelo de CLPcapaz de induzir resposta febril, -investigar como a terapiaantipirética influencia a mortalidade de animais no modelode sepse: -investigar quais mediadores estão envolvidos naestimulação pirogênica continua, induzida pelo CLP, bemcomo relacionar os níveis de mediadores pirogênicos nofluído cerebroespinal (CSF) com a febre e com a sobrevida.Para indução do modelo, utilizamos vários calibres de agu-lha e diferentes números de perfurações. Os animais quereceberam 4 furos com a agulha 16G no ceco, apresentaramaumento significativo da temperatura e índice de sobrevidade aproximadamente 50%. Então este estímulo foi escolhidopara avaliar o efeito dos antipiréticos na resposta febril Otratamento com os antipiréticos promoveu diferentes efei-tos sobre o aumento da temperatura e taxa de sobrevida dosanimais sépticos. Sendo que a antipirese foi mais, evidentenos animais tratados com o celecoxibe e dipirona e a melho-

ra significativa da sobrevida nos animais tratados comparacetamol. O CLP induziu aumento na concentração dePGE2 no CSF 6; 12; 24 e 48 horas após o estímulo, sendo queo pico deste aumento coincidiu com o pico da resposta fe-bril (6h). Este estímulo também promoveu aumento signifi-cativo dos níveis de TNF-α, IL- 1β e IL-6 no foco infecciosoe soro, mas não no CSF dos animais sépticos. Estas citoci-nas parecem não participar centralmente na resposta febrilinduzi da por CLP, uma vez que o tratamento com o antago-nista de receptores de IL-1 (IL-1ra), com o receptor solúvelde TNF (sTNFr) e com o anticorpo anti IL-6 não alteraram afebre induzida por CLP. O tratamento com os antipiréticosaumentou os níveis de IL-lβ e IL-6 no foco infeccioso ediminuiu no soro. Entretanto a maior diminuição foi vista nosoro dos animais tratados com celecoxibe e paracetamol.Com base nos achados descritos acima, é possível concluirque o modelo de febre induzido por CLP reproduz bem umquadro infeccioso, os mediadores diferem daqueles envol-vidos na febre do LPS. A melhora na sobrevida nos animaistratados com paracetomol deve envolver outro mecanismoque a inibição sérica de IL-6. Entretanto, mais estudos sãonecessários para entendermos melhor os mecanismos en-volvidos na indução desta resposta, bem como o mecanis-mo de ação evocado pelos antipiréticos.

oxidativo gerado pela ativação de enzimas pro-oxidantes,tais como a NADPH oxidase vascular e a xantina oxidase.Neste contexto, o modelo experimental 2R-1C foi propostopara este estudo por apresentar concentrações elevadas deEROs associadas ao aumento da renina plasmática eangiotensina II. Estas ações, associadas a um aumento dapressão intra-luminal, podem ser muito importantes para ati-vação das MMPs, o que pode contribuir para as alteraçõesvasculares observadas neste modelo de hipertensão. Destamaneira, os objetivos deste trabalho foram: 1) verificar seaumentos na expressão e atividade destas MMPs podemcontribuir para o aumento da pressão arterial e para as alte-rações vasculares observadas neste modelo; 2) verificar seaumentos nas concentrações das EROs podem contribuirpara esta maior ativação enzimática. Para isto, foi utilizada adoxiciclina, um inibidor inespecífico de MMPs, e diferentestipos de antioxidantes. A atividade e expressão das MMPsforam avaliadas por zimografia em gel e in situ, pelo métodode captura de anticorpo e imuno-histoquímica. Já a expres-são do RNAm da MMP-2 e do TIMP-2 foi analisada porReal Time RT -PCR. Os parâmetros funcionais e estruturaisda aorta foram determinados por reatividade vascular emorfologia, respectivamente. Por fim, as concentraçõesvasculares de EROs foram analisadas usando o dihidroetídeo

Michele Mazzaron de CastroOrientador: Prof. Dr. José Eduardo Tanus dos SantosTese de Doutorado apresentada em 07/11/2008

A hipertensão arterial sistêmica (HAS) é considera-da um grande problema de saúde pública no mundo, e estáamplamente relacionada a significativas alterações morfoló-gicas e funcionais no aparelho cardiovascular. Metalopro-teinases (MMPs) são endopeptidases cálcio-dependente,contendo zinco, que apresentam um papel importante nadisfunção endotelial e no remodelamento tecidual de váriasdoenças cardiovasculares, inclusive a hipertensão. Aumen-tos na atividade destas enzimas podem levar à degradaçãoexcessiva das proteínas da matriz extracelular (MEC), alémde acentuar a migração de células musculares lisas emonócitos. Isto pode contribuir para as alterações estrutu-rais observadas nos vasos sanguíneos durante a hiperten-são. Neste contexto, estudos clínicos e em modelos ani-mais de hipertensão mostraram um aumento significativoda expressão e atividade da MMP-2 (72-kDa gelatinase A)e MMP-9 (92-kDa gelatinase B), tanto no plasma quantoem tecidos cardíacos e vasculares. Interessantemente, es-tudos in vitro mostraram que o aumento da atividade des-tas MMPs pode estar relacionado diretamente ao estresse

PARTICIPAÇÃO DAS METALOPROTEINASES DA MATRIZ EXTRACELULAR NAS ALTERAÇÕESVASCULARES ASSOCIADAS À HIPERTENSÃO RENOVASCULAR: EFEITOS DE ANTIOXIDANTES

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(DHE) in situ e por citmometria de fluxo. O í tratamento coma doxiciclina atenuou o aumento da pressão arterial nosanimais 2R- 1C (p < 0,01) e preveniu a redução do relaxa-mento dependente do endotélio nestes animais. Além dis-so, a doxiciclina preveniu aumentos na espessura da cama-da media da aorta (p < 0,01) e a deposição elevada de colá-geno e elastina. Houve um aumento significativo da ex-pressão e atividade da MMP-2 nas aortas destes animaishipertensos (todos, p < 0,05) em paralelo a um aumento darazão da expressão do RNAm da MMP-2/TIMP-2 (p < 0,01).Da mesma maneira, o tratamento com ambos os antioxidantesatenuou o aumento da pressão arterial nos animais 2R-1C

(ambos, p < 0,05) e preveniu a redução do relaxamento de-pendente do endotélio pela acetilcolina. O tempol, mas nãoo apocinin (p > 0,05), também preveniu o remodelamentovascular hipertrófico observado nestes animais (p < 0,01).Além disso, o tratamento com o tempol atenuou aumentosna atividade e expressão da MMP-2 (ambos, p < 0,05) emparalelo à diminuição do estresse oxidativo (p < 0,05). Estesresultados sugerem que 1) as MMPs podem contribuir parao aumento da pressão arterial e para as alterações vascularesobservadas neste modelo experimental. 2) Aumentos nasconcentrações de EROs podem estar diretamente relaciona-dos com esta atividade aumentada da MMP-2.

articular tanto nos tratamentos quanto nos animais defici-entes acima mencionados. Assim, esses resultados suge-rem uma correlação entre resposta hipernociceptiva articu-lar e migração leucocitária articular. Além disso, para confir-mar a participação de TNF-α, IL-β e KC utilizando a técnicade ELISA foram detectadas a presença significativa destascitocinas nos tempos de 3-5 horas após injeção intra-articu-lar de zimosan ou LPS. Ademais, observou-se que o TNF-α,IL-β e KC induziram resposta hipernociceptiva articular demaneira dose-tempo-dependentes. A hipernocicepção arti-cular induzida pelo TNF-α, IL-β e KC foram parcialmenteinibida pelo pré-tratamento com indometacina, guanetidina,associação entre indometacina e guanetidina, IL-1Ra eDF2162. Além disso, detectou-se que animais deficientespara o receptor TNFRI do TNF-α, apresentaram redução daresposta hipernociceptiva articular. Dando continuidade aoestudo, foi detectado que a administração intra-articular deTNF-α induziu a produção de IL-β e quimiocina KC. Demaneira complementar, as concentrações de TNF-α e IL-βestavam elevadas nas articulações de animais que recebe-ram administração intra-articular de KC. Também foi obser-vado que a administração intra-articular de IL-β induziu au-mento das concentrações articulares de TNF-α e quimiocinaKC. Avaliando-se os resultados acima descritos podem-sesugerir a participação de prostanóides, aminas simpáticas,TNF-α agindo via receptores TNFRI, IL-β e KC. Em conjun-to, os resultados acima descritos, sugerem o conceito deque na resposta hipernociceptiva articular induzida peloTNF-α, IL-β e quimiocina KC, estas citocinas e quimiocinaestão agindo de maneira retro-alimentativa ou se auto-regu-lando e também precedem a liberação dos mediadores finaisda hipernocicepção inflamatória (prostanóides e aminas sim-páticas). O segundo objetivo deste estudo foi investigar aexistência de uma inter-relação entre o fenômeno hipernoci-ceptivo articular e a migração leucocitária articular induzidas

Ana Tereza Gomes GuerreroOrientador: Prof. Dr. Sergio Henrique FerreiraTese de Doutorado apresentada em 04/12/2008

Existem evidências experimentais e clínicas da parti-cipação de diferentes receptores e mediadores no desen-volvimento e manutenção da artrite reumatóide Corrobo-rando o caráter multifatorial dessa patologia, cerca de 30%dos pacientes não respondem a terapia anti-TNF-α. Dessaforma, a investigação dos mediadores envolvidos na pato-gênese da artrite pode contribuir para abordagens terapêu-ticas mais eficientes. Além disso, apesar da dor articular serum dos sintomas clínicos mais importantes dessa doençadevido à incapacitação motora ainda existe um longo cami-nho para sua compreensão. Dados da literatura demons-tram a participação das citocinas TNF-α, IL-β, IL-18, quimi-ocinas KC e MIP-1α, e receptores TRL-2 e TRL-4 em qua-dros de artrite tanto em animais quanto em humanos. Assim,como a artrite reumatóide é caracterizada pela intensa dorarticular e infiltrado inflamatório crônico no tecido sinovial,este estudo teve por objetivo investigar o efeito nociceptivoarticular e a migração leucocitária articular, bem como a inter-relação entre esses efeitos e a hierarquia entre os mediado-res envolvidos neste modelo de inflamação articular. Primei-ramente, detectou-se que a injeção intra-articular de zimosanou LPS induziu resposta hipernociceptiva mecânica articu-lar. A hipernocicepção mecânica articular induzida porzimosan ou LPS foi inibida pelo pré-tratamento com um an-tagonista de receptores CXCR1/2- DF2162 e IL1Ra. Ade-mais, a hipernocicepção articular induzida por zimosan ouLPS foi reduzida em camundongos deficientes para o recep-tor p55 do TNF-α, Toll-like 2, deficientes na via de sinaliza-ção para Toll-like 4 e molécula MyD88. Ao avaliar a migra-ção leucocitária articular utilizando o método da mielopero-xidase (MPO) observou-se redução da migração leucocitária

PARTICIPAÇÃO DE RECEPTORES TOLL-LIKE 2 E 4, CITOCINAS E QUIMIOCINAS NA HIPERNO-CICEPÇÃO MECÂNICA EM UM MODELO DE INFLAMAÇÃO ARTICULAR

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Andréia Lopes da SilvaOrientador: Prof. Dr. José Antunes-RodriguesDissertação de Mestrado apresentada em 29/10/2008

A regulação da homeostase hidroeletrolítica é umafunção mantida sob controle restrito no organismo animal.Mamíferos respondem às alterações na osmolalidade dolíquido extracelular alterando comportamentos e a fisiolo-gia do organismo. O comportamento requer regulação naresposta de ingestão de sal e água, através de alteraçõesno apetite ao sódio e na sede. As respostas fisiológicasnecessitam de modulação da excreção renal de água e sódio,o que acontece por alterações nas concentrações plasmáti-cas de hormônios antidiuréticos e natriuréticos. O principalsistema neuroendócrino pelo qual o cérebro mantém a ho-meostase dos líquidos corporais é o sistema hipotálamo-neuro-hipofisário. Este sistema consiste de neurôniosmagnocelulares localizados no núcleo supra-óptico do hi-potálamo (SON) e no núcleo paraventricular do hipotálamo(PVN), sendo que seus axônios terminam em capilares san-guíneos na neuro hipófise. O PVN e o SON estão direta-mente envolvidos com o controle do balanço hidroeletrolí-tico, pois são extremamente sensíveis às alterações daosmolalidade e seus neurônios são células especializadasna síntese e secreção de vasopressina (AVP) e ocitocina(OT). Com o aumento da osmolalidade plasmática mecanis-mos são ativados, inibindo a ingestão de sal e induzindo aexcreção de sódio através da OT, e ativando mecanismosde sede e redução da excreção urinária de água, mediadospela AVP. Estas respostas são vistas como estressores pelosistema nervoso central e são moduladas pelo eixo hipo-tálamo-hipófise-adrenal (HHA). Um fator conhecido por

participar dos efeitos dos glicocorticóides é o NF-kappa B,podendo, então, participar desta modulação hormonal frenteàs alterações osmóticas do líquido extracelular. Assim, estetrabalho teve por objetivo avaliar as alterações promovi-das pelo estímulo osmótico causado pela sobrecarga sali-na de quatro dias (SL4) e pela restrição hídrica de três dias(WD3), procurando avaliar a participação do eixo HHA nes-tas respostas. Os resultados apresentados mostram quetanto a SL4 quanto a WD3 aumenta o sódio plasmático, aosmolalidade plasmática, as concentrações plasmáticas deOT, AVP e corticosterona e a expressão do RNAm de AVP eOT no SON, PVN e NH. Após a injeção de dexametasona(1mg/kg, subcutâneo), as concentrações plasmáticas de OT,AVP e corticosterona diminuem, assim como a expressãodo RNAm de AVP e OT no SON e no PVN. A dexametasonanão altera o sódio e a osmolalidade plasmáticos no grupoSL4; diminui o sódio plasmático e não altera a osmolalidadeplasmática no grupo controle; e diminui o sódio plasmáticoe aumenta à osmolalidade plasmática no grupo WD3. Adexametasona também diminui a expressão do RNAm deAVP, mas não altera a expressão do RNAm da OT na NH nogrupo SL4; e diminui a expressão de RNAm de OT e aumen-ta a expressão do RNAm da AVP na NH do grupo WD3. Nogrupo controle, a dexametasona diminui a expressão doRNAm da OT e da AVP na NH. Dados imunoistoquímicosmostram que a subunidade p65 do fator de transcrição NF-KB está presente no SON e no PVN, sendo que não háalteração do conteúdo desta subunidade no PVN e no SONpromovidos pela i desidratação. Mas ambos os modelos dedesidratação diminuem a expressão do RNAm de p65 noSON, e a dexametasona diminui ainda mais a expressão doRNAm de p65 no SON e PVN nos animais I controles e com

pelas citocinas (TNF-α e IL-β) e quimiocina KC. E obser-vou-se que estes mediadores. pró-nociceptivos apresenta-ram aumento da migração leucocitária articular. Foi observa-do que o pré-tratamento com fucoidina (inibidor da migra-ção leucocitária) inibiu tanto a resposta hipernociceptivaarticular induzida pelo TNF-α, IL-β e KC quanto a migraçãoleucocitária articular induzida pelo TNF-α, IL-β e KC. As-sim, esses resultados sugerem uma correlação entre respos-

ta hipernociceptiva articular e migração leucocitária articu-lar induzidas pelo TNF-α, IL-β e quimiocina KC. Concluin-do, este trabalho contribuiu para a elucidação, pelo menosem parte, dos mecanismos envolvidos na resposta hiperno-ciceptiva articular induzida pelo zimosan (agonista toll-like2) e LPS (agonista toll-like 4). Além de sugerir que as citoci-nas TNF-α e IL-β e quimiocina KC estão agindo de maneiraretro-alimentativa neste modelo de inflamação articular.

FISIOLOGIA

PARTICIPAÇÃO DOS GLICOCORTICÓIDES NA SECREÇÃO DOS NEUROPEPTÍDEOS OCITOCI-NA E VASOPRESSINA EM RESPOSTA ÀS ALTERAÇÕES DE VOLUME E OSMOLALIDADE DO LI-QUIDO EXTRACELULAR

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Artur FernandesOrientador: Prof. Dr. Norberto Garcia-CairascoDissertação de Mestrado apresentada em 29/10/2008

As epilepsias são as desordens neurológicas maiscomuns entre humanos e, de longe, as mais estudadas. Den-tre elas a Epilepsia do Lobo Temporal (EL T) se destaca porapresentar grande número de pacientes refratários aos tra-tamentos medicamentosos e apresenta como característi-cas gerais: l) a ocorrência de um evento gatilho que deflagra,2) os processos epileptogenéticos responsáveis pelo surgi-mento das, 3) crises recorrentes espontâneas (CREs). O mo-delo animal utilizado neste estudo mimetiza as três etapasdescritas acima e consiste na estimulação elétrica do com-plexo amigdalóide e consequente estabelecimento do qua-dro de Status Epilepticus Auto Sustentado (SEAS). Nestemodelo foram descritos dois tipos de SEAS com- gravida-des de crises comportamentais e características morfológi-cas distintas. O SEAS-Típico é mais grave, apresenta crisescomportamentais mais severas e um quadro de morte celularbilateral em hipocampo e outros núcleos correlatos. O SEAS-Deambulatório é menos grave, apresenta crises comporta-mentais leves e perfil de mortes celulares com lesões exclu-sivamente unilaterais em hipocampo e núcleos correlatos. Oobjetivo do estudo foi diferenciar os dois tipos de SEASatravés de: marcadores eletroencefalográficos (EEGráfico) emoleculares a fim de estabelecermos alguns dos possíveismecanismos responsáveis pela ocorrência dos dois tiposde SEAS. O traçado EEGráfico das crises foi avaliado atra-vés da análise de frequências sustentadas ao longo do etempo em HIP e AMY. Como a atividade elétrica cerebraldepende da ativação de grupos neuronais específicos, foiavaliada em paralelo a expressão da proteína c-Fos, comoindicadora da atividade neuronal durante” o evento de SEAS.Por outro lado, a ocorrência de SEAS e a atividade neuronalaumentada promove modificações plásticas que envolvemalterações em neurotransmissores, neuropeptídeos, fatoresde crescimento neuronal, entre outros. Neste sentido foram

avaliadas as expressões do fator neurotrófico derivado docérebro (Brain Derived Neurotrophic Factor -BDNF) eneuropeptídeo- Y (NPY), um neropeptídeo produzido porintemeurônios inibitórios no hilus do giro denteado (GD) dohipocampo que apresenta ações anticonvulsivantes em vá-rios modelos de estudo. A análise do eletroencefalograma(EEG) deixou claro que durante comportamentos explorató-rios há a predominância de frequências sustentadas, tantoem HIP quanto em AMY, na faixa entre 5-9 Hz. Por outrolado, durante os comportamentos de crise, não importandosua gravidade, as frequências sustentadas reduzem paraentre 3-5 Hz em ambos os núcleos. A análise da atividadeneuronal através da expressão de c-Fos mostrou-se diferen-te entre os animais controle e os dos grupos experimentais,com muito maior expressão nos animais com SEAS. Foi ob-servada expressão de c-Fos em 17 regiões cerebrais comdiferenças em córtex ipsilateral, com maior número de célu-las no SEAS- T e em amígdala baso-lateral e amígdala medialcontralaterais com maior número de células em SEAS-D. i ONPY foi avaliado em três tempos pós-SEAS (3 h, 24 h e 14dias). Em todos os tempos estudados houve diferença entreo número de células no hilus do GD entre os grupos deSEAS e controles com maior número nos animais SEAS.Entre os dois tipos de Status, de maneira geral, houve dife-rença no número de células com maior expressão em SEAS-D. A ativação neuronal durante o período de SEAS parecenão ser o fator determinante que diferencia ambos os tiposde Status uma vez que a expressão de c-Fos entre os gruposé semelhante. A ocorrência de frequência su~tentadas nosdiferentes comportamentos de crise foi idêntica, indepen-dentemente de sua gravidade. Por outro lado, a expressãode NPY foi diferente entre os grupos e parece ser um fatorimportante na determinação da gravidade das crises nosanimais. Futuros estudos poderão auxiliar na compreensãoda relevância da expressão do NPY como sendo resultadoda ativação de um sistema anticonvulsivo endógeno, senão for observada a ocorrência de CREs em tempos maisprolongados de anális

WD3. A expressão do inibidor do NF-kappa B, o ‘iota’kappaB β, está aumentada no SON de animais SL4, e a dexameta-sona reverte esse efeito. A dexametasona também diminui aexpressão do RNAm do ‘iota’kappa B β no PVN de animaisSL4 e WD3. Nos animais com WD3 a expressão do RNAmde ‘iota’kappa B β no PVN está diminuída; e a dexametaso-na aumenta a expressão do RNAm do ‘iota’kappa B β ape-nas no SON destes animais. No grupo SL4 há um aumentoda concentração plasmática de IL-1 β e TNF-α, e a dexame-

tasona reverte este efeito; já no grupo WD3 só há um au-mento da concentração plasmática de IL-1 β, efeito que érevertido pela dexametasona. Em conjunto esses dadossugerem que o eixo HHA exerce um controle sobre ospeptídeos neuro-hipofisários diminuindo sua produção esecreção ante um estímulo osmótico. Esta inibição podeestar relacionada à diminuição da sinalização do sistemanervoso central, dada pelas citocinas periféricas, ou tam-bém por uma possível ativação da via do NF-kappa B.

EXPRESSÃO AUMENTADA DE NPY APÓS STATUS EPILEPTICUS INDUZIDO POR ESTIMULAÇÃOELÉTRICA DO COMPLEXO AMIGDALÓIDE EM RATOS : PROVÁVEL PARTICIPAÇÃO EM UM SIS-TEMA ANTICONVULSIVO ENDÓGENO

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Josiane de Campos CruzOrientador: Prof. Dr. Benedito Honorio MachadoTese de Doutorado apresentada em 17/12/2008

As células quimiossensíveis do corpúsculo carotídeosão ativadas em situações de alteração na pO2 do sanguearterial. A primeira sinapse das aferências dos quimiorrecep-tores periféricos ocorre no núcleo do trato solitário (NTS). Apartir do NTS duas vias autonômicas e distintas são ativa-das; a via simpato-excitatória e a via parassimpato-excitatória,desencadeando assim as respostas cardiovasculares à ati-vação do quimiorreflexo. Além disso, são também geradasrespostas respiratórias e comportamentais. Estudos farma-cológicos sugerem a participação do núcleo paraventriculardo hipotálamo (PVN) na via simpato-excitatória do quimior-reflexo. O PVN é um importante centro de controle autonô-mico e neuroendócrino. Vários trabalhos sugerem a partici-pação de mecanismos GABAérgicos, nitrérgicos e glutama-térgicos na modulação tônica da atividade simpática no PVN,sugerindo a existência de um balanço entre os receptoresexcitatórios e inibitórios no PVN sobre a modulação tônicada atividade simpática. Recentes estudos sugerem o envol-vimento dos receptores purinérgicos do PVN na modulaçãoautonômica simpática. O objetivo do nosso estudo foi ava-liar a participação de mecanismos GABAérgicos, nitrérgicos,glutamatérgicos e purinérgicos do PVN na modulação tôni-ca cardiovascular e nas respostas cardiovasculares à ati-vação do quimiorreflexo em ratos não anestesiados. Paratanto, utilizamos ratos Wistar (300-320g); cânulas-guia fo-ram implantadas em direção ao PVN 4-5 dias antes dos ex-perimentos. A artéria e a veia femoral esquerda dos animaisforam canuladas, um dia antes dos experimentos. O quimi-orreflexo foi ativado com KCN (80 µg/0,05 ml, iv) antes e emdiferentes tempos após a microinjeção bilateral de bicucu-lina (antagonista GABAA), L-NAME (inibidor não seletivoda enzima oxido nítrico sintase), ácido quinurênico [KYN(antagonista inespecífico dos receptores ionotrópicos doL-glutamato)] e PPADS (antagonista dos receptores puri-

nérgicos P2). Realizamos também a microinjeção bilateraldo coquetel PPADS + KYN no PVN de ratos não aneste-siados. Os resultados mostraram que a microinjeção bilate-ral de bicuculina no PVN (n=7) promoveu um aumento sig-nificativo na PAM basal (F5,34= 3; p= 0,04) e na FC basal(F5,32= 8,2; p < 0,001), contudo não promoveu alteraçõessignificativas nas respostas pressora (F5,36= 0,5; p= 0,8) oubradicárdica F5,32= 1; p= 0,7) à ativação do quimiorreflexo. Amicroinjeção bilateral de L-NAME (n=8) no PVN promoveuum aumento significativo na PAM basal (F 6,45= 5, p= 0,0005)e na FC basal (F6,45= 5, p= 0,0009), contudo não promoveualterações significativas nas respostas pressora (F6,45= 0,2,p= 0,95) ou bradicárdica (F 6,45= 1, p= 0,45) à ativação doquimiorreflexo. A microinjeção bilateral do ácido quinurênico(n=6) não promoveu alterações significativas na PAM basal(F 6,31= 0,9, p= 0,54), FC basal (F6,32= 0,6, p= 0,75) ou nasrespostas pressora (F6,29= 1, p= 0,4) e bradicárdica (F6,32=0,8, p= 0,4) à ativação do quimiorreflexo. A microinjeção dePPADS no PVN (n=6) promoveu um aumento significativona PAM basal (F 4,22= 5, p= 0,04) e na FC basal (F4, 18 = 3, p=0,04), contudo não promoveu alterações significativas nasrespostas pressora (F4,18= 0,4, p= 0,8) e bradicárdica (F4,18=1, p= 0,4) à ativação do quimiorreflexo. A microinjeção docoquetel PPADS + KYN (n=6) no PVN não promoveualterações significativas na PAM (F4,23 = 2, p= 0,2), FCbasal (F 4,24= 1, p= 0,4) ou nas respostas pressora (F4,23 = 1,p= 0,4) e bradicárdica (F4,24=2, p= 0,2) à ativação do quimior-reflexo. Concluímos que a) os receptores GABAA, o óxidonítrico e os receptores purinérgicos no PVN de ratos nãoanestesiados estão envolvido com a modulação tônica car-diovascular, mas aparentemente não estão envolvidos comas respostas cardiovasculares à ativação do quimiorreflexoem ratos não anestesiados e b) que os receptores ionotrópi-cos de L-glutamato no PVN de ratos não anestesiados nãoestão envolvidos com a modulação tônica cardiovascular etambém não parecem estar envolvidos com as respostascardiovasculares à ativação do quimiorref1exo em ratos nãoanestesiados.

AVALIAÇÃO DA PARTICIPAÇÃO DE MECANISMOS GABAérgicos, NITRÉRGICOS, GLUTAMATÉR-GICOS E PURINÉRGICOS NO NÚCLEO PARAVENTRICULAR DO HIPOTÁLAMO (PVN) NA MO-DULAÇÃO AUTONÔMICA BASAL E NAS RESPOSTAS CARDIOVASCULARES À ATIVAÇÃO DOQUIMIORREFLEXO EM RATOS NÃO ANESTESIADOS

EXPRESSÃO DE microRNAS NO SISTEMA NOCICEPTIVO DE CAMUNDONGOS

Ricardo KusudaOrientador: Prof. Dr. Guilherme de Araújo LuccasDissertação de Mestrado apresentada em 22/12/2008

MicroRNAs (miRs) representam uma nova classede RNAs não codificadores (ncRNA) que agem como po-tentes reguladores da expressão de diversos genes. A iden-

tificação e caracterização da ação de miRs têm oferecidouma visão completamente nova dos mecanismos de regula-ção pós-transcricional, influenciando diversos mecanismoscelulares como diferenciação, crescimento, apoptose, me-tabolismo e atividade sináptica. A descoberta dos miRs ede seus mecanismos de ação têm alterado fundamental-mente a nossa compreensão da fisiologia de órgãos e siste-

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mas e da fisiopatologia de diversas doenças. A expressãode miRs ocorre de maneira específica nos diferentes teci-dos, sendo que, no sistema nervoso, miRs foram descritosno córtex, cerebelo e no mesencéfalo. Este estudo investi-gou a expressão de miRs no gânglio da raiz dorsal e nacoluna dorsal da medula espinal onde a informação noci-ceptiva é inicialmente processada. Foi analisada a expres-são de miR-1, miR-16, miR-122a e miR-206 que possuemcomplementaridade parcial ao gene bdnf. O BDNF (brain-derivedneurotrophicfactor) é um fator neurotrófico respon-sável pela manutenção das características fenotípicas dediferentes populações neuronais no gânglio da raiz dorsal ena coluna dorsal da medula espinal, participando tanto datransmissão da informação nociceptiva, quanto dos meca-nismos de plasticidade neural induzidos pela lesão de nervoperiférico ou doença inflamatória crônica. Utilizando RT-PCRem tempo real, foram investigados: 1) a expressão destes

miRs após estimulação aguda de fibras nociceptivas do tipoC, 2) o perfil temporal e especificidade tecidual de expressãode miRs após a lesão parcial, 3) axotomia de nervo periféri-co, e 4) durante inflamação crônica no gânglio da raiz dorsalde no corno dorsal da medula espinal de camundongos. Asamostras foram normalizadas com o controle endógenosnoR-202. Com exceção do miR-122a, todos os demais miRsencontraram-se robustamente expressos tanto no gânglioda raiz dorsal como no corno dorsal da medula espinal. To-dos os modelos foram capazes de induzir alterações na ex-pressão dos miRs que apresentaram ora redução, ora au-mento dependendo do tecido, da duração ou da qualidadeda estimulação, caracterizando um alto grau de especificida-de espacial e temporal no sistema nociceptivo. Nossos re-sultados sugerem a participação destes miRs nos. diferen-tes mecanismos de regulação gênica associados, tanto àdor nociceptiva, quanto à fisiopatologia da dor crônica.

do estudo das alterações acarretadas pelo bloqueio de umde seus transcritos, utilizando a técnica do RNAi. Os da-dos de 5’ e 3’ RACE obtidos, juntamente com os diferentestrabalhos realizados em nosso laboratório, indicam que to-dos os transcritos da metiltransferase possuem o exon 1para iniciar a tradução, mas diferem significativamente norestante de sua composição de exons e nas escolhas dossítios de poliadenilação. Análises realizadas com o DNAgenômico, confirmaram a presença de pelo menos 2 genese 3 pseudogenes para a metiltransferase específica dopistilo. Como a linhagem Petit Havana SR-1 em estudo éhomozigota para a maioria dos genes, a presença de 5 se-quências distintas sugere a existência de duplicações nogenoma, durante a evolução deste gene. Estes genes sãoformados por 8 exons hipotéticos, divididos em três ouquatro blocos de fase aberta de leitura, intercalados pordois ou três introns, respectivamente. Assim, com os resul-tados disponíveis até o momento e com todas as análisesrealizadas neste trabalho, é proposto que as metiltransfera-ses do pistilo de N. Tabacum sofrem um complexo mecanis-mo de processamento alternativo, o que pode representaruma vantagem adaptativa no processo reprodutivo destaespécie. Para o estudo da função dos transcritos da metil-transferase específica do pistilo, parte da região codificadorado clone de cDNA 046B11 foi inserida no vetor de expres-são em plantas pK7GWIWG2(I) (RNAi), resultando noplasmídeo pGC2. Este plasmídeo foi utilizado para transfor-

Cristiane de Paula Gomes CalixtoOrientadora: Profª.Drª. Maria Helena de Souza GoldmanDissertação de Mestrado apresentada em 03/10/2008

A biologia da reprodução das plantas é uma área decrescente interesse. O pistilo é um órgão de importânciacentral no processo reprodutivo. A espécie Nicotianatabacum, linhagem Petit Havana SR-1, foi escolhida comomodelo para o estudo do pistilo, por possuir flores especia-lizadas e grandes, apresentando todos os principais ór-gãos facilmente identificáveis. Há diversos genes que sãoexclusivamente expressos no pistilo. Entre estes, foi en-contrado, por nosso grupo de pesquisa, vários transcritosque codificam proteínas com alta similaridade às metiltrans-ferases do ácido salicílico, jasmônico e benzóico. Os ésteresmetilados destes ácidos são largamente difundidos no rei-no vegetal, atuando na regulação do desenvolvimento daplanta, reprodução, defesa e sinalização. Este trabalho vi-sou estudar a estrutura destes transcritos e o papel da me-tiltransferase no processo reprodutivo. Os objetivos espe-cíficos foram: 1) realizar experimentos de 5’RACE para es-tudar a extremidade 5’ completa, incluindo a região 5’ nãotraduzida, dos diferentes transcritos da metiltransferaseexpressa no pistilo; 2) realizar experimentos de 3’RACE paraestudar a extremidade 3’ e identificar os sítios alternativosde poliadenilação nos diferentes transcritos da metiltrans-ferase; 3) analisar a função das metiltransferases por meio

GENÉTICA

ESTUDO DO PROCESSAMENTO ALTERNATIVO E ANÁLISE DO SILENCIAMENTO DAS METIL-TRANSFERASES ESPECÍFICAS DO PISTILO DE Nicotiana Tabacum L.

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mar discos foliares de N. Tabacum via Agrobacteriumtumefaciens. Um total de 10 plantas transgênicas indepen-dentes foram obtidas. A quantificação por RT-PCR em tem-po real demonstrou que todos os transgênicos pGC2 apre-sentaram níveis variáveis na redução da expressão da me-tiltransferase no pistilo. Todas as plantas presentes na casade vegetação apresentaram formação e disposição de todasas estruturas reprodutivas corretas, quando comparadas aplantas do grupo controle (linhagem Petit Havana SR-1).Com relação às análises do processo reprodutivo das plan-tas transgênicas, foram observados baixa taxa de fertilida-de em 2 plantas e baixo peso de sementes/flor em 5 plantas(p-valor < 0,01). No entanto, estas observações não foramcorrelacionadas de maneira convincente ao silenciamentoda metiltransferase, pois há a possibilidade disto ter sidocausado pelas infecções adquiridas pelas plantas duranteas análises. Paralelamente a estes experimentos, a região 5’regulatória de uma das sequências genômicas da metiltrans-ferase (cerca de 2,7 kb) foi clonada no vetor pPR97, pararegular a expressão do gene gus, resultando no plasmídeopCC2. Este plasmídeo foi utilizado para transformar discosfoliares de N. Tabacum via A. tumefaciens. Órgãos florais e

vegetativos de 13 plantas transformadas com esta constru-ção foram coletados e usados para extração de proteínatotal e realização de cortes histológicos. Os extratos foramanalisados em ensaio fluorimétrico para detecção da ativi-dade da proteína GUS. Os resultados mostraram que a se-quência 5’ regulatória da metiltransferase, utilizada por esseprojeto, dirigiu a expressão do gus na antera de 12 das 13plantas transgênicas analisadas. Em 9 dessas mesmas 12plantas também foi detectada expressão de gus no pistilo,como era esperado. O ensaio histoquímico de duas plantaspCC2 mostram que a expressão no pistilo ocorre nos teci-dos vascular e transmissor, e que na antera ocorre noestômio, tecido vascular e grãos-de-pólen. A expressão dogene gus na antera das plantas transgênicas foi inespera-da. Este trabalho sugere que os diferentes transcritos dasmetiltransferases específicas do pistilo de N. Tabacum pos-suem uma importante função biológica nesta espécie. Noentanto, experimentos de silenciamento gênico ainda nãoforam conclusivos para se desvendar suas funções na re-produção. Assim, experimentos adicionais são necessáriospara elucidar o papel do gene da metiltransferase na biolo-gia da reprodução de N. Tabacum.

biossíntese de novo de pirimidinas; galactose-1-fosfatouridililtransferase, a qual atua convertendo galactose-1-fosfato e UDP-glicose em glicose-1-fosfato e UDP-galactose. Por outro lado, dentre os genes com expressãodiferencial na linhagem mutante nuc-1RIP, os quais tive-ram a expressão confirmada, estão aqueles que codificampara as seguintes proteínas: hexagonal-1, principal compo-nente dos corpos de Woronin; proteína de choque térmicoHSP70, a qual atua como chaperona numa variedade deprocessos celulares; proteína carreadora de ADP/ATP, res-ponsável pela importação de ADP presente no citosol eexportação de ATP para fora da matriz mitocondrial; prote-ínas ribossomais L16 e L30, envolvidas na biossíntese deribossomos; proteína da via biosintética de tiamina NMT-1, implicada na biossíntese de tiamina; proteína bifuncionalARGJ, a qual participa da biossíntese de arginina; guanilatoquinase, envolvida na via de reciclagem de purinas (guaninesalvage pathway), uma via alternativa a via de biossíntesede novo de purinas. Além disso, genes como hsp-70 apre-sentaram expressão alterada na linhagem mutante pacCKOcultivada em pH ácido. Estes resultados revelam novas viasmetabólicas envolvidas na resposta adaptativa à limitaçãode Pi e reforçam a existência de uma convergência entre osistema de aquisição de Pi, o circuito regulador do pH e ometabolismo de nucleotídeos. Além disso, esses resulta-dos indicam que o fator de transcrição PACC também temfunções metabólicas em pH ácido.

Juliana LealOrientador: Prof.Dr. Antonio Rossi FilhoTese de Doutorado apresentada em 09/10/2008

O sistema de aquisição de fosfato inorgânico (Pi)em N. Crassa é mediado por quatro genes regulatórios:nuc-2, preg, pgov e nuc-1. Quando o Pi é limitante, NUC-2inibe a ação do complexo PREG-PGOV, permitindo o trans-porte do fator de transcrição NUC-1 para o núcleo e a ex-pressão de fosfatases Pi-repressíveis. No presente estudo,foi investigado o perfil de expressão gênica das linhagensmutantes pregC e nuc-1RIP cultivadas em pH alcalino eácido, sob condições de limitação de Pi. O objetivo dessetrabalho foi contribuir para o entendimento da respostaadaptativa à limitação de Pi e identificar genes reguladospela ciclina PREG e pelo fator de transcrição NUC-1. Utili-zando as técnicas de Differential Display (DDRT-PCR) eHibridação Subtrativa Supressiva (SSH) foram isoladostranscritos diferencialmente expressos nas linhagensmutantes pregC e nuc-1RIP cultivadas em Pi-limitante, pH7.8 e 5.4. Dentre os genes diferencialmente expressos nalinhagem mutante pregC que tiveram sua expressão valida-da por Northern Blot, estão transcritos similares a genesque codificam para ubiquinona C-metiltransferase, envol-vida na biossíntese de coenzima Q; iso-orotato decarboxi-lase, implicada na via de reciclagem de pirimidinas(thymidine salvage pathway), uma via alternativa a via de

EXPRESSÃO DIFERENCIAL DE GENES EM RESPOSTA A LIMITAÇÃO DE FOSFATO INORGÂNICONO FUNGO FILAMENTOSO Neurospora Crassa: ANÁLISE FUNCIONAL DOS GENES preg E nuc-1

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Patrícia Santos Pereira LimaOrientador: Prof.Dr. Wilson Araújo da Silva JuniorTese de Doutorado apresentada em 13/10/2008

A medula óssea de adultos contém células-troncomesenquimais (CTMs) que atuam na regeneração dos teci-dos mesenquimais tais como ósseo, cartilaginoso, adiposoe muscular, além de ligamentos e tendões. Essas caracterís-ticas elegem as CTMs como excelentes candidatas para ouso nos protocolos de medicina regenerativa. Os aspectosmoleculares que governam a regulação para cada via dediferenciação são uma área de investigação ainda em estu-do e a identificação de genes cuja expressão promova, porexemplo, a diferenciação osteoblástica ou iniba a diferenci-ação em outros tipos celulares é uma estratégia amplamen-te utilizada no esforço para a compreensão dos processosmoleculares envolvidos na diferenciação tecidual. O obje-tivo deste estudo é identificar genes regulados pelo meca-nismo de metilação durante a expansão e a diferenciaçãoinicial em osteoblastos das CTMs. As CTMs foram obtidasda medula óssea de dois diferentes doadores, expandidas etratadas por quatro dias com o agente demetilante 5-aza-2´-deoxicitidina. A diferenciação osteogênica foi estimuladapor sete dias, sendo os quatro últimos dias de tratamento.Todos os experimentos foram realizados com seus respec-tivos controles. Ao final dos quatro dias de tratamento, ascélulas foram coletadas para extração de RNA e DNA. Paraa identificação de genes com expressão aumentada após o

tratamento foi utilizada a plataforma de microarraysCodeLink. A validação da expressão dos genes seleciona-dos foi realizada por RT-PCR em tempo real e o padrão demetilação da região promotora dos genes foi analisado porsequenciamento após a modificação do DNA pelo bissulfitode sódio. Três genes de cada etapa foram selecionadospara a análise: os genes FBLN2, LAMB2 e ADFP na expan-são e na diferenciação foram selecionados TBKBP1,ARHGEF17 e ALPL. Os genes SAA2 e MMP7, cuja expres-são aumentou durante a diferenciação (amostras controle),também foram selecionados. A expressão de todos os genesfoi validada por qRT-PCR embora, em muitos casos, a dife-rença de expressão entre as amostras tratada e controletenha sido maior pela metodologia do microarray. No en-tanto, a expressão destes genes nas amostras de diferentesindivíduos foi semelhante, com exceção para os genes ADFPe ALPL. A análise de metilação na ilha CpG dos genesFBLN2, LAMB2, ADFP e ALPL revelou a presença demetilação apenas na ilha CpG do gene FBLN2. A diminui-ção na densidade de metilação do gene FBLN2 favoreceu oaumento da sua expressão, embora a metilação não pareçaser o único mecanismo responsável pela expressão destegene. O aumento da expressão de genes que codificam paracomponentes da matriz extracelular (FBLN2, LAMB2, SAA2e MMP7) e de genes relacionados à diferenciação celular(ADFP e ALPL) assim como o perfil destas expressões apósos sete dias de diferenciação em osteoblastos, indicam quea hipometilação favorece a diferenciação das CTMs.

IDENTIFICAÇÃO DE GENES REGULADOS PELO MECANISMO DE METILAÇÃO DURANTE AEXPANSÃO DE CÉLULAS-TRONCO MESENQUIMAIS E NA FASE INICIAL DA OSTEOGÊNESE

com CM, virgens de qualquer tipo tratamento e em mulhe-res saudáveis utilizadas como controles e além disso, esta-belecer as frequências dos polimorfismos nos genes XRCC1e XRCC3 na amostra de pacientes com CM e em mulheressaudáveis e associação destes dois polimorfismos com asuscetibilidade ao CM. No Teste do MN, foi observadauma sensibilidade maior do grupo de pacientes aos danosinduzidos pelo Etoposido. O Ensaio Cometa mostrou quepacientes e mulheres saudáveis respondem de modo seme-lhante ao tratamento com o Etoposido. Também foi obser-vado que pacientes acima de 45 anos apresentaram um graumaior de sensibilidade aos danos induzidos pelo Etoposidona concentração de 25 µM quando comparadas com pa-cientes abaixo de 45 anos avaliadas no Ensaio Cometa.Quanto ao hábito tabagista, este se mostrou um fator decontribuição ao aumento de sensibilidade a indução dedanos pelo Etoposido no Ensaio Cometa no grupo de mu-

Ana Claudia TeixeiraOrientador: Profª.Draª. Catarina Satie TakahashiDissertação de Mestrado apresentada em 17/10/2008

Apesar de intensivos estudos e substanciais pro-gressos no entendimento dos fatores de risco e suscetibi-lidade ao câncer de mama (CM), esta neoplasia permanececomo importante causa de morte entre mulheres. Idade, his-tória familiar, menarca precoce, menopausa tardia, ocorrên-cia da primeira gravidez após os 30 anos e da nuliparidadeconstituem fatores de risco. Além disso, polimorfismos nosgenes envolvidos no reparo de danos no DNA, como osgenes XRCC1 e XRCC3, podem contribuir para o aumentoda suscetibilidade ao CM. Os objetivos do presente traba-lho foram avaliar pelo Teste do MN e Ensaio Cometa osdanos basais e a resposta celular aos danos induzidos, invitro, no DNA pelo quimioterápico Etoposido em pacientes

POLIMORFISMOS DOS GENES XRCC1 E XRCC3 E A RESPOSTA AOS DANOS INDUZIDOS NODNA PELO ETOPOSIDO EM PACIENTES COM CÂNCER DE MAMA

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Danilo Jordão XavierOrientadora:Profª.Drª. Elza Tiemi Sakamoto HojoDissertação de Mestrado apresentada em 24/10/2008

O Diabetes é uma das maiores causas de mortalida-de no mundo, chegando a afetar cerca de 150 milhões depessoas atualmente, sendo que esse número tende a au-mentar, principalmente devido à obesidade, fator intima-mente relacionado ao Diabetes Mellitus tipo 2 (DM2). En-tretanto, o desenvolvimento da doença depende de diver-sos fatores de risco, tanto genéticos quanto ambientais,que ainda necessitam ser elucidados. Uma característicamarcante dos pacientes diabéticos é um alto nível de es-tresse oxidativo, resultante principalmente da hiperglicemiae diminuição da defesa anti-oxidante. No presente traba-lho, foi proposta a detecção dos níveis de dano no DNApelo ensaio do cometa, assim como comparar os níveis deexpressão de genes relacionados com a defesa, sinalizaçãoe reparo do DNA em resposta ao estresse oxidativo (ATM,ATR, SOD1, OGG1, XRCC1, APEX1 e FEN1) em pacientesDM2 hiperglicêmicos (PAH) e não hiperglicêmicos (PANH).Adicionalmente, o mesmo estudo foi realizado em pacien-tes DM2, cujas amostras foram coletadas em dois momen-tos: antes (PI) e após (PPI) um período de internação (setedias) para compensação da doença e normalização dos ní-veis glicêmicos, comparativamente ao grupo controle. Naanálise pelo ensaio do Cometa, o grupo PAH apresentouníveis significativamente (p<0,05) maiores de danos no DNAem relação ao grupo PANH, sendo que o último apresentou

níveis de dano semelhantes ao grupo controle, demons-trando que a hiperglicemia é o principal fator na indução doestresse oxidativo em pacientes DM2. Com relação aospacientes submetidos à internação por 7 dias, o grupo PPIapresentou níveis significativamente (p<0,05) menores dedano em relação ao grupo PI, embora estes tenham se apre-sentado acima dos observados para o grupo controle. Aanálise por qRT-PCR revelou perfis de expressão gênicadiferenciados entre os grupos de pacientes estudados,embora as diferenças não tenham sido estatisticamente sig-nificativas. Observou-se uma repressão de genes de repa-ro e de sinalização (ATM, ATR, OGG1, XRCC1, FEN1 eAPEX1) nos grupos PAH e PI, que apresentaram altos ní-veis de danos no DNA. Esse resultado pode apresentar umsignificado biológico relevante, sendo que na literatura,foram relatados resultados compatíveis com o estado derepressão transcricional de alguns desses genes, como osgenes ATM e ATR. Os resultados obtidos demonstram ainfluência da hiperglicemia na indução de dano oxidativono DNA. Além disso, os dados acerca da expressão gênicasugerem que pacientes DM2 regulam diferencialmentegenes envolvidos com os processos de defesa, sinalizaçãoe reparo do DNA em resposta ao estresse oxidativo, o quepode estar relacionado com os níveis de dano observadosem cada grupo analisado. Os mecanismos envolvidos naregulação desses processos são complexos e ainda neces-sitam ser elucidados, mas os dados do presente trabalhomostram informações relevantes que podem contribuir nacompreensão desses mecanismos.

lheres saudáveis, para os tratamentos com esta droga nasconcentrações de 10 e 25 µM. Na análise molecular, o alelovariante 241Met do gene XRCC3 mostrou-se mais frequen-te no grupo de pacientes tanto na amostra estudada naanálise citogenética quanto na amostra estudada na análi-se molecular, sugerindo uma diminuição da capacidade dereparo destas pacientes, o que poderia conferir um risco

aumentado ao CM. Quanto ao hábito tabagista, somenteas pacientes não fumantes, portadoras do alelo 241Met dogene XRCC3, possuem um risco aumentado para o CM.Não foi encontrada associação do polimorfismo Arg399Glndo gene XRCC1 com o risco ao CM mesmo quando associ-ado à fatores de risco como hábito tabagista e a presençade familiares com câncer.

INFLUÊNCIA DA HIPERGLICEMIA NOS NÍVEIS DE DANO NO DNA E NA EXPRESSÃO DE GENESDE DEFESA AO DANO OXIDATIVO EM PACIENTES COM DIABETES MELLITUS TIPO 2

ca que sugere uma relação entre o rápido crescimento ós-seo da adolescência e o desenvolvimento da neoplasia.Ainda, o conhecimento das bases genéticas é insuficiente.Estudos de citogenética clássica têm demonstrado que oOS caracteriza-se por exibir alta heterogeneidade cariotípica,incluindo altos graus de aneuploidia e rearranjos estrutu-rais complexos. A técnica de CGH constitui uma ferramentavaliosa na analise do perfil genômico de tumores sólidos, e

Angel Mauricio Castro GameroOrientador: Prof.Dr. Luiz Gonzaga ToneDissertação de Mestrado apresentada em 30/10/2008

O osteossarcoma (OS) é o tumor ósseo maligno maisfrequente da infância e adolescência com uma taxa de so-brevida livre de eventos de 50 – 70% após 3 anos. O pico deincidência ocorre na segunda década da vida, característi-

DESEQUILÍBRIOS CROMOSSÔMICOS EM NOVE CASOS DE OSTEOSSARCOMA DETECTADOSATRAVÉS DE HIBRIDAÇÃO GENÔMICA COMPARATIVA (CGH)

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Daniel Macedo de Melo JorgeOrientadora: Profª.Drª. Silvana GiuliattiDissertação de Mestrado apresentada em 31/10/2008

Os insetos são os mais numerosos animais encon-trados no mundo, com mais de 675 mil espécies conheci-das. Pertencentes à ordem Hymenoptera, da superfamíliaApoidea, as abelhas são encontradas distribuídas em apro-ximadamente 20 mil espécies. No Brasil estima-se que exis-tam 1.700 espécies. Uma das principais espécies é a Apismellifera, com ocorrência cosmopolita. A Apis mellifera,popularmente conhecida como abelha africanizada, é agres-siva, enxameia várias vezes ao ano e utiliza uma grandevariedade de locais para nidificar. Esse comportamento au-menta o contato direto entre o inseto e a população, au-mentando o número de acidentes. Os acidentes com abe-lhas representam um problema de saúde pública em diver-sos países do mundo pela frequência com que ocorrem epela mortalidade que ocasionam. O presente estudo pro-põe a busca por inibidores naturais contra o veneno deabelhas. Um sistema e uma base de dados foram desenvol-vidos para a integração entre dados de plantas medicinaisantivenenos e os venenos de abelhas. As atividades anti-hemorrágica, anti-proteolítica, anti-miotóxica, anti-fosfoli-

pase e anti-edema de plantas medicinais antiveneno foramanalisadas por meio de ensaios farmacológicos. As possí-veis interações entre as toxinas Melitina e Fosfolipase A2com inibidores foram avaliadas, através do docking virtu-al. O banco de dados, denominado Bee Venom, foi imple-mentado e os dados de bancos de dados públicos foraminseridos no sistema. O sistema foi liberado para acessopúblico no endereço eletrônico http://gbi.fmrp.usp.br/beevenom/. Durante a análise da proteína Melitina foramencontradas as regiões da proteína em que os possíveisinibidores devem interagir e identificadas as propriedadesquímicas que os inibidores devem possuir para interagircorretamente com a Melitina. Nas análises in silico foi pos-sível identificar 10 possíveis inibidores que interagiramcorretamente com o sítio ativo da Fosfolipase A2. Algumasespécies do Banco de Germoplasma da FMRP/USP foramobtidas e utilizadas nos experimentos de atividade fosfoli-pásica indireta e de Edema, sendo possível observar inibi-ção do veneno total e da proteína Fosfolipase A2. Os com-postos sintéticos e inibidores avaliados não causaram ini-bição em todos os experimentos avaliados. Já as plantasobtidas no laboratório de Toxinas Animais e InibidoresNaturais e Sintéticos causaram inibição do veneno total eda proteína Fosfolipase A2.

tem confirmado a complexidade das alterações cariotípicasem OS, descrita pela citogenética convencional. Nãoobstante, os estudos existentes são divergentes, e poucostêm estudado as informações obtidas por CGH em relaçãocom a progressão tumoral. O objetivo do presente estudofoi identificar a presença de desequilíbrios cromossômicosem amostras de OS por meio da técnica de CGH. Os experi-mentos de CGH foram realizados de acordo com o descritopor Kallioniemi et al (1994). Foram analisadas nove amos-tras (3 biópsias, 5 ressecções após quimioterapia e 1 metás-tase). O CGH detectou desequilíbrios cromossômicos emtodas as amostras. Os ganhos foram mais frequentes queas perdas. Muitas alterações cromossômicas foram obser-vadas, especialmente ganhos nos cromossomos 1q, 2, 3p,

4, 5p, 6, 7, 8, 11p, 14q, 16, 21q e X; e perdas nos cromosso-mos 1p, 2q, 3q, 5q, 9q, 11q e 17q. As regiões mínimas desobreposição mais frequentes foram ganhos de 2p13-p14,2q36-q37, 4q21 e 8p22, e perdas de 1p34.2, 3q22-q23 e 3q24.Três pacientes apresentaram amostras pareadas, e as alte-rações cromossômicas detectadas foram muito variadas,refletindo a heterogeneidade cromossômica intratumoral emcada caso. A mais alta divergência clonal entre as amostraspareadas foi observada entre a amostra de ressecção e aamostra metastática correspondente, mostrando a comple-xidade cromossômica adquirida durante a progressão emetastatização no caso descrito. Ainda são necessáriasinvestigações adicionais, que contribuíam para a caracteri-zação completa dos genes localizados nessas regiões.

BUSCA DE INIBIDORES NATURAIS CONTRA O VENENO DE Apis mellifera

bém conhecido como DARC (Duffy Antigen Receptor forChemokines), tem um importante papel na invasão dos eri-trócitos pelos parasitas causadores da malária, Plasmodiumvivax em humanos e Plasmodium knowlesi em outrosprimatas. A estrutura do gene DARC já é conhecida, estan-do este presente na região 1q22–q23 do cromossomo 1, esendo composto por dois éxons separados por um grande

Thiago Yukio Kikuchi OliveiraOrientador: Wilson Araújo da Silva JuniorDissertação de Mestrado apresentada em 10/12/2008

Genes envolvidos com a interação hospedeiro-pa-tógeno são fortemente afetados pela seleção natural posi-tiva. O gene codificante do antígeno sanguíneo Duffy, tam-

ASPECTOS MOLECULARES DA EVOLUÇÃO DO GENE DARC EM PRIMATAS

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Fernanda Cristina de Albuquerque MaranhãoOrientador: Nilce Maria Martinez RossiTese de Doutorado apresentada em 12/12/2008

Dermatófitos são fungos filamentosos com a habili-dade de invadir substratos queratinizados e causar derma-tofitoses em humanos e animais, penetrando profundamen-te apenas em hospedeiros imunocomprometidos. Tricho-phyton rubrum é um fungo antropofílico e cosmopolita, omais comum agente de micoses superficiais, que usa com-ponentes celulares como proteínas e lipídeos após uma es-pecífica regulação de sua expressão gênica governada pelopH ambiente e sensoriamento celular. A virulência de T.rubrum é relacionada com a secreção de enzimas proteolíti-cas, um importante fator determinante na invasão, utilizaçãoe subsequente disseminação através do estrato córneo. Oobjetivo desse estudo foi identificar através de Hibridiza-ção Subtrativa Supressiva (SSH) genes de T. rubrum prefe-rencialmente expressos durante o crescimento na presençade queratina e lipídeos, quando T. rubrum degrada fontesde carbono tipicamente encontradas em células epidérmi-cas. Inicialmente, nós avaliamos as mudanças no pH extra-celular durante seu crescimento em queratina e lipídeo (de-pois de 6, 12, 24, 48, 72 h e 7 dias) em pH inicial 5,0, onde foiobservado um gradual aumento do pH basal sob ambas ascondições de teste, comparado com a condição glicose (con-trole). Também identificamos 576 transcritos de T. rubrumdiferencialmente expressos por SSH usando conídios culti-vados por 72 h em queratina como teste e em glicose comocontrole. Os genes de T. rubrum ativados codificam proteí-

nas putativas que foram validadas por cDNA dot-blot enorthern blot, mostrando similaridade com proteínasfúngicas envolvidas no metabolismo básico, crescimento evirulência, p. ex., transportadores ABC-MDR, MFS e ATPasede cobre, permease, NIMA interactive protein, poliproteínaGag-Pol, fatores de virulência subtilisinas serino-proteases(Sub 3 e 5) e metaloproteases (Mep 3 e 4) e Hsp30. Adicio-nalmente, entre os 762 clones obtidos na biblioteca da con-dição lipídeo (72 h), 80 transcritos superexpressos foramconfirmados por cDNA dot-blot, revelando 14 unigenes si-milares à proteínas de vários organismos patogênicos, comoglicoproteína 43 kD, transportador MDR, proteína G, quitinasintase e serino/treonina fosfatase. Transcritos do geneTruMDR2, codificador de um transportador ABC, foi isola-do tanto na presença de queratina quanto em lipídeo, e aanálise da linhagem mutante ∆TruMDR2 de T. rubrum mos-trou uma redução na atividade infectante, caracterizada pelobaixo crescimento em unhas humanas comparada com o tiposelvagem. A alta expressão de transportadores por T. rubrumem condições que mimetizam a infecção e a redução na viru-lência de ∆TruMDR2 durante o modelo in vitro sugeremque transportadores estão envolvidos na patogenicidadede T. rubrum. Outro linhagem mutante (∆pacC-1) com umnocaute no gene pacC que codifica um fator de transcriçãoregulado pelo pH local, mostrou a expressão de proteases(Sub 3 e 5 e Mep 4) diminuída após o crescimento emqueratina em comparação com o tipo selvagem em análisesde northern blots. Essas proteases tem uma atividade ótimaem pH alcalino, e nossos resultados indicam uma regulaçãodefectiva do gene pacC de T. rubrum na ativação de

íntron. Em uma população africana a deleção de umnucleotídeo no domínio GATA-1 da região promotora dogene é responsável pela não expressão de DARC nos eri-trócitos e pela resistência à invasão pelo P. vivax. Alémdisso, o antígeno DARC age como um receptor promíscuode quimiocinas, sendo expresso nos eritrócitos, célulasendoteliais de vênulas e outros tecidos. Devido a esse pa-pel dual, no presente estudo sequenciou-se regiõeshomólogas do gene DARC em macacos do Novo e VelhoMundo e utilizando métodos estatísticos procurou-se indí-cios da seleção natural positiva na sua história evolutiva.Nenhuma nova mutação foi encontrada no promotor ou naregião codificante. As árvores filogenéticas pelos métodosde máxima parcimônia, máxima verossimilhança e neighbor-join apresentaram topologias semelhantes com três grandeclados monofiléticos reconhecíveis e com a espécie Macacafascicularis apresentando um perfil polifilético. O teste de

seleção positiva pelos métodos de Nei-Gojobori, máximaverossimilhança por ramos e máxima verossimilhança porsítios não demonstraram, estatisticamente, à ação da sele-ção positiva sobre o gene DARC. Porém, o teste de máximaverossimilhança por sítio em domínios demonstrou queexistem regiões do gene DARC sujeitas à diferentes pres-sões seletivas, mas também falhou em detectar a assinaturada seleção positiva. Os resultados indicam a presença daseleção darwiniana sobre a região de ligação do P. vivax,porém os testes de máxima verossimilhança utilizados, apa-rentemente, não possuem poder suficiente para detectar asua assinatura. Além disso, os resultados sugerem que aregião de ligação do P. vivax está sob influência de duaspressões seletivas antagônicas (seleção positiva exercidapelo parasita e seleção purificadora exercida pelas quimio-cinas) o que pode, também, explicar a não detecção da sele-ção positiva.

ANÁLISE DA EXPRESSÃO GÊNICA NO DERMATÓFITO Trichophyton rubrum MIMETIZANDO AINFECÇÃO in vitro: PH E DIFERENTES FONTES DE CARBONO REGULANDO GENES

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Conrado Milani CoutinhoOrientador: Prof. Dr. Geraldo DuarteDissertação de Mestrado apresentada em 10/10/2008

A aplicação dos métodos de biologia molecular temacrescentado benefícios aos métodos convencionais de diag-nóstico do grupo sanguíneo Rhesus (Rh). Alguns estudosevidenciaram a superioridade prática da genotipagem RhDpor reação em cadeia da polimerase (PCR) em relação às técni-cas de identificação do fenótipo dos antígenos do grupo Rhobtidas pela hemaglutinação. Esta análise molecular tem sidorealizada utilizando-se várias sequências cromossômicas ediferentes tipos de técnicas. O grupo Rh contém dois geneshomólogos, um codificando o antígeno D e o outro osantígenos C/c e E/e. Os objetivos deste projeto foram: 1)Detectar a presença de sequência RhD específica dos indi-víduos Rh positivo; 2) Comparar a presença/ausência des-tas sequências com o grupo sanguíneo detectado pela he-maglutinação e calcular a sensibilidade e a especificidadeda PCR. Para cumprir estes objetivos, foram analisadas amos-

tras de DNA extraídas de sangue periférico de 23 indivíduos(4 homens e 19 mulheres) Rh positivo (11) e negativo (12)para amplificação de sequências dos genes RhD e RhCEutilizando a técnica de PCR convencional. Nestas amostras,a comparação dos resultados da PCR com os da hemagluti-nação demonstrou total concordância entre os testes. Asensibilidade do método foi avaliada pela realização da PCRem amostras de sangue Rh positivo diluídas em água e emsangue Rh negativo, amplificando o DNA na concentraçãode até 4 pg/µl. Estes resultados indicaram que a técnica dePCR mostrou-se efetiva no diagnóstico da genotipagem dofator Rh, vislumbrando-se a possibilidade de sua utilizaçãoem outros tecidos de origem êmbrio-fetal para orientação dediagnóstico fetal invasivo e do uso profilático da imunoglo-bulina anti-D apenas nos casos de incompatibilidade Rhmaterno-fetal. Adicionalmente, indicaram que havendo me-lhora da sensibilidade desta técnica será possível detectarquantidades objetivamente menores de DNA fetal na circu-lação materna, fundamentando um importante passo rumoao diagnóstico do fator Rh fetal por técnica não invasiva.

proteases. Em conclusão, através do uso de SSH foi possí-vel identificar genes de T. rubrum ativados após tratamen-tos específicos, o que sugere a importância dos mesmos nainteração dermatófito-hospedeiro, instalação e manuten-ção da doença. Esses resultados disponibilizam novos da-

dos sobre T. rubrum que levarão a um melhor entendimen-to dos mecanismos moleculares envolvidos no crescimen-to, metabolismo geral e patogenicidade, e também auxiliarna identificação de novos e efetivos alvos de drogas paradermatófitos.

GINECOLOGIA E OBSTETRÍCIA

DIAGNÓSTICO DO FATOR RHD UTILIZANDO A REAÇÃO EM CADEIA DA POLIMERASE CON-VENCIONAL

INFLUÊNCIA DA ENDOMETRIOSE SOBRE A RESPOSTA OVARIANA EM CICLOS DE REPRODU-ÇÃO ASSISTIDA: PROVÁVEL ASSOCIAÇÃO COM PREJUÍZO DO DESENVOLVIMENTO FOLICU-LAR, MAS NÃO DO pool DE RESERVA

Bruno Ramalho de CarvalhoOrientadora: Profª. Drª. Ana Carolina J. de Sá Rosa e SilvaDissertação de Mestrado apresentada em 13/10/2008

Introdução: A avaliação da reserva ovariana em re-produção assistida (RA) busca identificar mulheres em quea exaustão folicular determine as dificuldades reprodutivas.Além da idade, a presença de causas outras de subfertilida-de, como a endometriose (EDT), implica interferências ne-gativas potenciais sobre a resposta ovariana.

Objetivo: Avaliar a reserva folicular ovariana demulheres subférteis portadoras de endometriose e determi-nar o melhor preditor de má resposta em RA.

Métodos: Foram analisados 87 ciclos de RA em mu-lheres com idade inferior a 40 anos, ciclos menstruais regu-lares, sem patologias endócrinas e com ambos os ovários,sendo 30 ciclos em portadoras de EDT (casos) e 57 ciclosem mulheres subférteis por fator masculino exclusivo (con-troles). A reserva ovariana foi inferida pelas dosagens basaisdos hormônios anti-mülleriano (AMH) e folículo estimu-lante (FSH), a contagem de folículos antrais pequenos (CFA)e a medida do volume ovariano médio (VOM). CurvasReceiver Operating Characteristic (ROC - AUC) foramtraçadas para avaliação da capacidade discriminatória decada teste em identificar má resposta.

Resultados: Pacientes com EDT apresentaram

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Fernanda Vieira Rodovalho CallegariOrientadora: Profª. Drª. Janete A. Anselmo FranciTese de Doutorado apresentada em 04/12/2008

A ocorrência do pico pré-ovulatório de LH noproestro depende da pré-exposição aos estrógenos segui-da da ação aguda da progesterona, hormônio responsávelpela deflagração e amplitude desse pico. No entanto, a ori-gem da progesterona durante essa fase do ciclo ainda éincerta. Enquanto alguns estudos sugerem que a adrenalcontribui significativamente para secreção de progestero-na nesse período, outros apontam a ovário como a fonteprincipal. Sendo assim, o objetivo desse trabalho foi estu-dar o perfil e a origem da secreção de progesterona duranteo proestro e a sua relação com o pico pré-ovulatório de LH.Para tanto, às 7h da manhã do proestro ratas Wistar adultasforam submetidas apenas à canulação da veia jugular (con-trole) ou a esse procedimento seguido pela cirurgia fictíciade retirada do ovário e adrenal (Sham), ou pela ovariecto-mia (OVX) ou pela adrenalectomia (ADX). Amostras san-guíneas foram coletadas a cada 15 minutos das 11h00 às13h45 para dosagem de progesterona, estradiol e corticos-terona e a cada hora das 14h às 19h para dosagem dessestrês hormônios e do LH. Adicionalmente, 7 dias depois daovariectomia, ratas foram tratadas com óleo milho (OVO)ou 17-β-estradiol (OVE) por 3 dias consecutivos, para com-preender melhor o padrão de secreção de progesterona pelaadrenal e verficar essa secreção se essa secreção poderiaser modulada pelos estrógenos. Um, dois ou três dias de-pois da última injeção amostras de sangue foram coletadasconforme descrito acima. No proestro, nenhuma diferençasignificativa foi detectada entre os grupos controle e Shamem relação ao número de animais que apresentaram o picopré-ovulatório de LH, ao número de oócitos presentes nosovidutos na manhã do estro, bem como às concentraçõesplasmáticas de LH, progesterona, estradiol e corticostero-

na, sendo os dados referentes a esses dois grupos apre-sentados em um único grupo denominado Controle. A se-creção de estradiol foi similar nos grupos Controle e ADX esignificativamente reduzida no grupo OVX. Como espera-do, a secreção de corticosterona foi completamente abolidano grupo ADX, enquanto foi similiar nos grupos Controle eOVX. Em todos os grupos experimentais as concentraçõesbasais de progesterona foram em média de 2 pg/mL. Entreàs 12h e 14h o grupo Controle apresentou um aumentodiscreto, mas significativo, da secreção de progesterona(pico 1: de 3,5 ± 1,1 para 22,3 ± 2,7 ng/mL), e após às 15h umsegundo pico de progesterona (pico 2: de 10,5 ± 2,2 para43,0 ± 2,5 ng/mL), como também o pico de LH (25,4 ± 2,4 ng/mL). Embora o grupo OVX não tenha apresentado o pico 2de progesterona (de 5,7 ± 2,2 para 6,5 ± 1,2 ng/mL), o picode LH (26,5 ± 3,9 ng/mL) foi similar ao do grupo Controle.Nessas ratas o pico 1 de progesterona foi atenuado para12,3 ± 1,9 ng/mL. Ambos picos de progesterona 1 e 2 comoo pico de LH, foram praticamente abolidos nas ratas ADX(pico 1: de 2,0 ± 0,3 para 4,5 ± 0,7 ng/mL; pico 2: de 2,2 ± 0,4para 8,9 ± 3,6 ng/mL). Nas ratas OVX, tratadas ou não comestradiol, um pico de progesterona (provavelmente de ori-gem adrenal) foi observado diariamente por volta das 12h00,sendo que a amplitude desse pico não foi influenciada peloestradiol (OVO: 19,0 ± 5,7 ng/mL; OVE: 22,9 ± 5,3 ng/mL).Esses dados, em conjunto, sugerem que: 1) o pico 1 deprogesterona é de origem adrenal e está envolvido na gê-nese do pico de LH ; 2) esse pico parece ser circadiano umavez que ratas OVX apresentam um ritmo diário de secreçãode progesterona, com um pico por volta das 12h00; 3) opico 2 de progesterona é de origem ovariana e não é neces-sário para ocorrência do pico de LH; 4) existe uma comuni-cação endócrina entre ovário e a adrenal de forma que oovário participa da regulação da secreção de progesteronapela adrenal e 5) o estradiol não está envolvido na regula-ção da secreção de progesterona pela adrenal.

FSH basal significativamente maior em relação aos contro-les (9,13 ± 5,09 mUI/mL vs. 6,28 ± 2,45 mUI/mL; p < 0,05),sem diferenças para AMH, CFA e VOM. O número total deoócitos aspirados foi menor na EDT em relação aos contro-les (5,33 ± 3,43 vs. 8,28 ± 5,8; p < 0,05) e correlacionou-sesignificativamente com o AMH em ambos os grupos (EDT:r = 0,61; Controles: r = 0,58; p<0,0001). O FSH basal apre-sentou correlação significativa com o total de oócitos aspi-rados apenas na EDT (r = -0,48; p<0,01); também na EDT, oAMH basal foi o marcador individual com melhor potencialdiscriminatório para má resposta (AUC = 0,875), seguidode FSH basal (AUC = 0,682) e VOM (AUC = 0,665), en-quanto no grupo controle, o AMH foi o melhor marcador

(AUC = 0,8372), seguido do VOM (AUC = 0,709) e da CFA(AUC = 0,686).

Conclusões: O FSH basal foi significativamentemaior nas pacientes subférteis com EDT e correlacionou-se com a resposta em RA apenas nas portadoras da doen-ça. O AMH basal foi o marcador com o melhor potencialdiscriminatório de má resposta, independentemente da pre-sença da endometriose. CFA e VOM não se apresentaramcomo bons preditores de má resposta. Sendo assim, a as-sociação entre endometriose e subfertilidade deve estarvinculada a alterações do crescimento/desenvolvimentoadequado do folículo ovariano e não a prejuízos sobre areserva folicular gonadal propriamente dita.

PERFIL DA SECREÇÃO DE PROGESTERONA EM RATAS NO PROESTRO: UMA NOVA PROPOS-TA PARA O CONTROLE DO PICO PRÉ-OVULATÓRIO DE LH

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Lúcia Alves da Silva LaraOrientadora: Profª. Drª. Ana Carolina J. de Sá Rosa e SilvaDissertação de Mestrado apresentada em 11/12/2008

Introdução: O hipoestrogenismo causa alteração es-trutural na vaginal que pode levar a alterações na respostasexual. Tem sido reportado o afinamento da parede vaginalapós a menopausa, porém, sem comprovação morfométrica.

Objetivos: Verificar a espessura da parede vaginalem condições normo e hipoestrogenicas, correlacionar dis-função sexual com espessura da parede, expressão do re-ceptor estrogênico e estradiol sérico.

Métodos: Espécimes cirúrgicos da vagina de 31 mu-lheres, sendo 18 normoestrogênicas e 13 na pós-menopau-sa, submetidas a colpoperineoplastia por prolapso genital Ie II. Aferidos: FSH e estradiol, prolactina e TSH. Realizou-se: tricrômico de Masson e HE, histomorfometria, imuno-histoquímica para receptores estrogênicos α, semiquantifi-

cados pelo H-score, função sexual aferida pelo GRISS. Re-sultados: A parede vaginal é mais espessa no grupo meno-pausa em relação ao grupo menacme (parede anterior2,72±0,72mm e 2,16±0,43, p=0,01 e parede posterior2,63±0,71mm e 2,07±0,49mm, p=0,01, respectivamente). Aespessura e a fração de área da camada muscular são maio-res no grupo menopausa (parede anterior:1,54±0,44 e1,09±0,3mm, p=0,02 e posterior 1,45±0,47 e 1,07±0,44mm,p=0,03 e 0,51±0,10 e 0,42±0,11mm2, p=0,03 e 0,40±0,10 e0,49±0,08 mm2, p=0,02). O epitélio vaginal do segmentoproximal é mais espesso do que o segmento médio na pare-de posterior (0,17±0,07mm, 0,15±0,05mm, 0,24±0,09mm,p=0,02). Não houve correlação entre dor coital, espessurada parede e concentrações do estradiol nos dois grupos.Conclusão: A parede vaginal é mais espessa após a meno-pausa. Neste estudo, não ocorreu associação entre disfun-ção sexual genital concentrações estrogênicas e espessurada parede vaginal.

INFLUÊNCIA DO ESTROGÊNIO NA HISTOMORFOMETRIA DA PAREDE VAGINAL: REPERCUS-SÕES NA FUNÇÃO SEXUAL

no da doença não tem sido detectado por mais de meioséculo no país. Algumas hipóteses têm sido investigadaspara se tentar explicar essa ausência de epidemias no Brasil,embora nenhuma delas tenha sido efetivamente comprova-da. Este trabalho teve como objetivo estudar este achadoepidemiológico através da análise in vitro de um fenômenoconhecido como interferência viral, uma situação em que ainfecção por um determinado tipo viral impede a infecçãodas mesmas células por um vírus diferente. Desta forma, foiestudada a influência dos vírus dengue sorotipo 2 (DENV-2) e febre-amarela-cepa vacinaI17U (VFA 170) e selvagem(BeH111) em uma mesma cultura de células C6/36 (célulasprovenientes de Aedes albopictus) e células U937, anali-sando-se as dinâmicas de replicações virais. Observamosque células derivadas de Ae albopictus cronicamente in-fectadas com DENV-2 não se apresentam permissivas àreplicação do VFA, cepas17D e BeH111. Porém, em ensaiosde competição entre os dois vírus observamos uma maioreficiência de replicação de VFA 17D e VFABeH111 em rela-ção ao DENV-2. Finalmente, os ensaios de interferência viralenvolvendo linhagens de células de mamífero U937 demons-traram uma ligeira diminuição da replicação de VF A 17D emcélulas cronicamente infectadas com DENV2.

Emiliana Pereira AbrãoOrientador: Prof. Dr. Benedito Antônio Lopes da FonsecaTese de Doutorado apresentada em 27/10/2008

A dengue é a mais importante doença causada porum arbovírus. Anualmente as infecções com o vírus den-gue ocasionam aproximadamente 100 milhões de casos dedengue clássico e mais de 500 mil de dengue hemorrágicoem todo o mundo (Halstead, 2007)). O principal vetor urba-no dos vírus dengue é o mosquito Aedes aegypti (Aeaegypti), que se caracteriza por seu perfil altamente domés-tico. Da mesma forma que a dengue, outra arbovirose desemelhante importância é a febre amarela. Esta se caracteri-za por ser uma doença infecciosa aguda, prevalente nasAméricas e África. Manifesta-se nas modalidades urbana esilvestre e é causada pelo vírus da febre amarela, umarbovírus transmitido pelos mosquitos Aedes aegypti (nocaso da modalidade urbana) e Ae. africanus, Haemagogus-e outros (no caso da modalidade silvestre ). Com relação àfebre amarela, embora uma vacina segura esteja disponívelhá 60 anos, houve um aumento no número de pessoas in-fectadas desde o início da década de 1980 em países daAmérica do Sul, incluindo o Brasil. No entanto, o ciclo urba-

IMUNOLOGIA BÁSICA E APLICADA

ESTUDO DA DETECÇÃO DA INTERFERÊNCIA VIRAL ENTRE OS VÍRUS DENGUE-2 E FEBREAMARELA

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Giovanna Ribeiro-SantosOrientador: Prof. Dr. Celio Lopes SilvaTese de Doutorado apresentada em 05/11/2008

O câncer é um importante problema de saúde públicamundial e uma das causas mais relevantes de morbidade emortalidade em crianças e adultos. Apesar dos inúmerosprogressos no tratamento, incluindo aprimoramentos cirúr-gicos, quimioterápicos e radioterápicos, a cura da maior par-te das neoplasias ainda depende da identificação precoceda afecção, não sendo, muito frequentemente, possível apósa disseminação metastática da doença. Assim, novas abor-dagens terapêuticas são continuamente investigadas e den-tre elas, a imunoterapia representa uma forma de crescenterelevância. Dentre as novas estratégias imunológicas paraimunoterapia de tumores, vale a pena ressaltar o uso deimunomoduladores como as proteínas de choque térmico(Hsp). As características das Hsps em facilitar a apresenta-ção de peptídeos tumorais, estimular a secreção de citoci-nas inflamatórias por células apresentadoras de antígenos emediar a maturação de células dendríticas, fazem delas exce-lentes candidatas para o desenvolvimento de vacinas con-tra o câncer e doenças infecciosas. Nosso grupo vem de-senvolvendo uma vacina de DNA (DNA-Hsp65) que semostrou eficiente na profilaxia e terapia de doenças infecci-

osas, doenças autoimunes, alergia e câncer. No presentetrabalho, decidimos analisar mais detalhadamente, do pon-to de vista imunológico, a ação da vacina DNA-Hsp65 emmodelo experimental em camundongos inoculados commelanoma B16F10. Num grupo de animais o DNA-Hsp65 foiinoculado por via intratumoral e no outro foi feita transfe-rência de células B16F10 previamente transfectadas com avacina DNA-Hsp65. A vacina DNA-Hsp65 mostrou capaci-dade de retardar o desenvolvimento do tumor e aumentar asobrevida dos animais. Essa atenuação do crescimentotumoral e o aumento da taxa de sobrevivência foram correla-cionados com o aumento da porcentagem de linfócitos TCD4 e T CD8 ativados, considerados importante indicadorde resposta contra tumores. A vacina também induziu au-mento da expressão de moléculas co-estimulatórias na su-perfície de células dendríticas no sítio tumoral, favorecendouma apresentação antigênica eficiente num ambiente ativa-dor da resposta imune. Além disso, foi observado aumentosignificativo da porcentagem de lise específica das célulasde melanoma B16F10 mediada por linfócitos T CD8citotóxicos. Assim sendo, os dados aqui apresentados mos-tram o potencial antitumoral da vacina DNA-Hsp65 por meioda estimulação da resposta imunológica e ao mesmo tempoabrem perspectivas para estudos futuros que possam au-mentar a efetividade dessa vacina no combate a tumores.

EFEITO TERAPÊUTICO DA VACINA DNA-Hsp65 EM MELANOMA B16F10

características de apoptose. Contudo, não foi observadoativação de caspas e 9, 8 e 3 e fragmentação do DNA genô-mico, sugerindo um evento de morte celular programadoindependente da ativação de caspases. Adicionalmente, ascélulas NB4 tratadas com jArtinM expressaram marcadorgranulocítico CD11b, embora não fossem capazes de reali-zar “burst” oxidativo, característico de granulócitos madu-ros. Considerando, então, a diferenciação promovida porjArtinM insuficiente para promover a morte celular pormaturação, investigamos a produção de peróxido de hidro-gênio pelas células tratadas e observamos um aumentoconsiderável deste reativo intermediário deo oxigênio. Talevento, foi abolido com o tratamento com anti-oxidante,bem como restaurou parte da viabilidade celular. O eventode morte celular e indução da produção de peróxido dehidrogênio são eventos desencadeados por jArtinM nascélulas NB4 de modo dependente da interação de jArtinMcom as N-glycanas da célula leucêmica. De modo distindo,verificamos que a mesma dose capaz de induzir apoptoseem células leucêmicas NB4 é a mesma capaz de promover aimunoestimulação de células normais maduras como osmonócitos humanos a produzirem IL-12.

Fernanda Caroline de CarvalhoOrientadora: Profª. Drª. Maria Cristina R. Antunes BarreiraTese de Doutorado apresentada em 18/12/2008

Artin M, uma lectina ligante de manose presentenas sementes de Artocarpus integrifolia Gaca), induzhapotaxia de neutrofilos, produção de IL-12 por macrófa-gos e células dendríticas, e induz degranulação de mastóci-tos. Todos estes eventos são mediados pelo reconheci-mento de glicanas, contendo manose, presentes na super-fície celular. Devido alterações nos oligossacarídeos dasuperfície celular serem associadas a transformações ma-lignas, objetivamos testar o efeito de Artin M de jaca(jArtinM) e recombinante (rArtinM), quando a atividadecitotóxica em células transformadas. A capacidade anti-proliferativa foi testada, pelo método MTT, nas linhagensleucêmicas (NB4, K562 e U937), linfoma (Granta 519) e car-cinomas (HT29, MKN45 e AGS). Somente a lectina de jacaapresentou capacidade citotóxica após 48 horas de trata-mento. A linhagem celular NB4 foi a mais sensível ao trata-mento com jArtinM e apresentou exposição de fosfatidilserina e a quebra do potencial de membrane de mitocôndria,

MORTE DE LINHAGEM CELULAR DE LEUCEMIA MIELÓIDE HUMANA INDUZIDA PELA LECTINAARTIN M DE Artocarpus integrifolia

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Ana Paula SantosOrientador: Prof. Dr. Amilton Antunes BarreiraTese de Doutorado apresentada em 02/12/2008

A capacidade regenerativa do sistema nervoso peri-férico é conhecida, todavia em lesões onde há grande per-da de tecido nervoso, há limitações ou impossibilidade emrelação à regeneração. A lectina artinM é capaz de aceleraro processo de regeneração do tecido epitelial. O objetivodo presente estudo foi verificar se a lectina artinM é tam-bém ativa na regeneração do tecido nervoso, tendo em vis-ta que se trata de tecido originário do mesmo folheto embri-onário (ectoderma) que o tecido epitelial. No presente estu-do 10 mm do nervo isquiático de ratas Wistar adultas foramretirados e os cotos proximal e distal suturados em um tubode silicone. Houve melhor resposta a doses menores deartinM (1 a 5 µg). Não foi observada regeneração com do-ses de 10, 12 e 24 µg e essa foi precária com doses interme-diárias (6 e 8 µg). Os animais foram alocados em 4 grupos,tratados com tubos contendo artinM (1 a 5 µg) em gel deagarose, gel de agarose, Matrigel® ou artinM + Matrigel®.Análises macroscópica, histológica e morfométrica foramrealizadas 10 semanas - tempo de observação associado àregeneração de um número significativo de fibras mielínicas

no segmento distal - após a cirurgia. A formação do cabo detecido entre os cotos foi estatisticamente semelhante entreos grupos artinM e matrigel e entre artinM e artinM +matrigel, assemelhando-se a uma estrutura de nervo nor-mal. Nesses grupos, a análise histológica dos segmentoscentrais do tubo revelou uma camada epi-perineural espes-sa envolvendo a área endoneural, minifascículos, várioscapilares endoneurais em maior número na periferia, fibrasmielínicas de vários diâmetros e mastócitos. Os segmentosdistais ao tubo foram semelhantes aos nervos normais,porém com bainha de mielina mais fina. Nos segmentosdistais, os resultados morfométricos revelaram diferençassignificativas (p<0,05) nos diâmetros de axônios e fibrasmielínicas, área da bainha de mielina e número de capilaresentre os grupos artinM e matrigel, com o grupo artinMmostrando valores mais altos. O número de fibras mielínicase capilares no segmento distal foi significativamente maiorno grupo artinM do que no grupo artinM + matrigel. Nãohouve regeneração axonal significativa no grupo agarose,tendo havido apenas filamentos ligando os cotos. Os re-sultados indicam que a lectina artinM é capaz de induzir ocrescimento dos componentes do nervo periférico, poten-cialmente podendo ser usada para a indução de regenera-ção de nervos no homem.

NEUROLOGIA

A LECTINA artinM É ATIVA NA REGENERAÇÃO DO NERVO PERIFÉRICO

AVALIAÇÃO QUANTITATIVA DA FADIGA MUSCULAR EM PACIENTES COM DIFERENTES FOR-MAS CLÍNICAS DE MIOPATIA MITOCONDRIAL

Patrícia de Sá BarrosOrientadora: Profª. Drª. Claudia Ferreira da Rosa SobreiraTese de Doutorado apresentada em 03/12/2008

A fadiga muscular é definida como qualquer perdada capacidade de produzir força induzida por exercício, quereduz o desempenho muscular. Estudos de quantificação dafadiga muscular nas diversas formas clínicas de miopatiamitocondrial (MM) são escassos. O objetivo deste trabalhoé obter um método confiável, reprodutível, de baixo custo efácil aplicação para avaliação objetiva e comparativa da fa-diga muscular em grupos de pacientes com diferentes for-mas clínicas de MM. Neste estudo, foram selecionados 71pacientes adultos com miopatia, apresentando fraquezamuscular ou intolerância ao exercício (IE). A amostra con-trole foi composta por 123 voluntários saudáveis. Os pa-cientes selecionados para o estudo foram divididos em 4grupos: MM com oftalmoplegia externa progressiva (PEO);

MM com IE sem PEO; outras miopatias com IE e endocri-nopatias com IE. O grupo controle foi subdividido, uma vezque cada subgrupo participou como controle em diferentesexperimentos do estudo. As avaliações realizadas consisti-ram de quantificação da fadiga pelos testes dinamométricos,avaliação da gravidade da fadiga (FSS), escala numérica dafadiga, mensuração da dor pelo inventário breve da dor(IBD), avaliação da capacidade funcional (Brooke e Vignos)e das atividades da vida diária (Barthel), bem como a quali-dade de vida relacionada à saúde (SF-36). A presença dafadiga muscular foi avaliada através da realização da con-tratação voluntária da máxima (CVM) de preensão palmar,no lado dominante do paciente. Neste estudo foi realizado3 testes dinamométricos: teste da CVM durante 5 minutos,teste de 10 minutos utilizando 45% da CVM sustentadadurante 60 segundos. Nossos resultados demonstraram quea proporção de mulheres foi superior à de homens tanto nogrupo de pacientes como no grupo controle. Não houve

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diferença significativa entre as idades dos pacientes e con-troles. A maioria dos pacientes e controles apresentavacomo lado dominante o lado direito. A força muscular depreensão palmar no início do teste foi maior nos controlesque nos pacientes. A CVM inicial dos pacientes com MMcom PEO diferiram significativamente dos controles, en-quanto que os pacientes com MM sem PEO, outrasmiopatias com IE e endocrinopatias permaneceram iguaisaos controles. O teste de CVM durante 5 minutos demons-trou coeficientes de correlação bastante significativos, oque indica que as medidas obtidas no teste são estáveis ereprodutíveis. Quanto ao teste de 10 minutos utilizando45% da CVM, os resultados demonstraram que as medidasque ser referem às CVM na metade e no final do teste apre-sentam coeficientes de correlação consistentes e significa-tivos. No teste da CVM sustentada durante 60 segundos,os índices de correlação apresentaram magnitude modera-da. A comparação do teste da CVM durante 5 minutos entreos grupos demonstrou a ocorrência de fadiga precoce nogrupo de pacientes. A comparação entre o grupo de pa-cientes separadamente e controles no teste da CVM duran-te 5 minutos não demonstrou diferença significativa. No

teste de 10 minutos utilizando 45% da CVM a comparaçãoentre pacientes e controles demonstrou haver diferença sig-nificativa, indicando haver maior fadigabilidade no grupodos pacientes. Em adição, o grupo denominado outrasmiopatias com IE diferenciaram do grupo controle, não sen-do visível esta diferença nos demais grupos. A comparaçãoentre o grupo com MM com PEO, pacientes com IE e gru-pos controles demonstraram diferença significativa. No tes-te da CVM sustentada durante 60 segundos não houvediferença significativa entre os grupos analisados. A médiada FSS em todos os grupos foi similar. Os grupos demons-traram resultados similares com relação à escala numéricade fadiga. Nossos achados não demonstraram diferençasignificativa entre os grupos com relação à IBD. A maioriados pacientes avaliados apresenta mínima ou nenhuma in-capacidade funcional. A qualidade de vida dos pacientesdemonstrou estar muito comprometida. Concluímos que en-tre os 3 testes dinamométricos de medida da fadiga muscu-lar realizados, apenas o teste de CVM sustentada durante 5minutos apresentou elevada confiabilidade. O teste da CVMsustentada durante 60 segundos não foi capaz de induzirfadiga precoce nos grupos de pacientes.

(40,4%) dos pacientes apresentaram CPs. As CPs do Eixo Iforam evidenciadas em 154 (31,4%) pacientes e as CPs doEixo II em 44 (8,9%) pacientes. As mais comuns CPs do EixoI foram representadas pelos transtornos do humor, diag-nosticados em 94 pacientes (19,2%). Os transtornos deansiedade em 21 (4,3%) pacientes e a psicose interictal em39 (7,9%) pacientes. Nesta série de pacientes, foi observa-do que a epilepsia do lobo temporal mesial, associada àesclerose hipocampal, a história familiar de transtorno psi-quiátrico, a presença de transtornos psiquiátricos do EixoII, foram fatores de risco independentes para associaçãocom CPs do Eixo I. Por outro lado, a idade de início daepilepsia, a duração da epilepsia, o sexo, a frequência decrises secundariamente generalizadas, a média do QI, a eti-ologia (quando excluída a epilepsia do lobo temporal mesial,associada à esclerose hipocampal) e o lado da lesão foramvariáveis que não associaram estatisticamente com as CPsneste estudo.

Charles Luis DalmagroOrientador: Prof. Dr. Américo Ceiki SakamotoTese de Doutorado apresentada em 16/12/2008

Introdução: Epilepsia é definida pela presença decrises epilépticas recorrentes, podendo apresentar duranteseu estudo, um espectro bem variado de associações, den-tre elas as anormalidades cognitivas e do comportamento.A associação das comorbidades psiquiátricas (CPs) comas epilepsias tem sido investigada, tipicamente nos pacien-tes com crises epilépticas refratárias os quais foram avalia-dos em um centro terciário especializado no tratamentodesta forma de epilepsia. Objetivos: Este estudo relatará osresultados da prevalência e os fatores de risco associadosà presença das CPs em quatrocentos e noventa pacientescom crises epilépticas farmacorresistentes e sua correlaçãocom as diferentes zonas epileptogênicas (ZEs). Resultadose conclusões: De acordo com os critérios do DSM-IV, 198

COMORBIDADES PSIQUIÁTRICAS NOS PACIENTES COM EPILEPSIA FARMACORESISTENTESDE ACORDO COM A ZONA EPILEPTOGÊNICA: ESTUDO COM 490 PACIENTES

INFLUÊNCIA DO GÊNERO E DA EXPRESSÃO DA PROTEÍNA PRION CELULAR SOBRE ASPECTOSCOMPORTAMENTAIS E HISTOPATOLÓGICOS EM UM MODELO DE ANORMALIDADES DO DE-SENVOLVIMENTO CORTICAL EM CAMUNDONGOS

João Carlos XikotaOrientador: Prof. Dr. Roger WalzTese de Doutorado apresentada em 17/12/2008

Malformações do desenvolvimento cortical frequen-temente estão associadas com condições neurológicas in-cluindo déficits neuropsicológicos, atraso do desenvolvi-

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mento intelectual, retardo mental, dislexia, autismo e epi-lepsia. Malformações semelhantes à microgiria de 4 cama-das observadas em humanos podem ser induzidas por danohipóxico-isquêmico da placa cortical em roedores recém nas-cidos através da criolesão, a qual destrói a maioria dosneurônios presentes no momento da lesão, induzindo mo-dificações permanentes na estrutura e função da circuitariacortical. Há estudos indicando que o sexo do indivíduopossa estar associado à extensão, padrão estrutural e com-prometimento funcional de lesões cerebrais ocorridas pre-cocemente no desenvolvimento. A proteína prion celular(PrPC) tem sido implicada com processos envolvidos nodesenvolvimento cortical incluindo a modulação da apop-tose neuronal, adesão, crescimento e manutenção dosneuritos, além da proteção contra estresse oxidativo. Nopresente estudo investigamos a gravidade da lesão e sus-ceptibilidade a prejuízos na aprendizagem, memória, e loco-moção em camundongos machos e fêmeas das linhagensselvagem (Prnp+/+) e portadores da deleção do gene Prnpque codifica a PrPC (Prnp0/0). Os animais foram submeti-dos à criolesão unilateral no primeiro dia pós-natal (P0).Grupos controle receberam manipulações experimentais se-melhantes, com exceção da indução da criolesão. Entre 12-14 semanas após o procedimento os animais foram subme-tidos a testes comportamentais (atividade locomotora es-pontânea, labirinto em cruz elevado, memória social e es-quiva inibitória do tipo step-down) e sacrificados para aná-lise morfológica dos cérebros. A análise macroscópica re-

velou que a criolesão, independente do sexo ou linhagemdos animais, resultou na formação de uma área microgíricafocal com uma destacada invaginação da superfície corticaldeterminando uma pequena lesão intracortical ou uma le-são profunda alcançando a substância branca. Não houveevidência de lesão cortical em nenhum animal do gruposham (falso operado). Esta lesão não afetou a função motorados animais. Entretanto, nos animais selvagens, observa-mos uma desordem seletiva na memória de curto prazo noteste de reconhecimento social em camundongos machoscriolesados, enquanto a memória de longo prazo da esqui-va inibitória não foi afetada pelo procedimento ou sexo dosanimais. Estes resultados indicam uma menor susceptibili-dade das fêmeas aos prejuízos de memória de curto prazoinduzidos pelo modelo de microgiria por criolesão neona-tal, sugerindo que os déficits cognitivos induzidos pelacriolesão em roedores podem não ser inteiramente relacio-nados à gravidade da lesão cerebral. Além disso, camun-dongos fêmeas de ambos os genótipos apresentaram ativi-dade locomotora similares, porém as fêmeas Prnp0/0 de-monstraram uma tendência aumentada de respostas relaci-onadas à ansiedade comparadas aos animais Prnp+/+. Fi-nalmente, fêmeas Prnp0/0 tiveram um baixo rendimento natarefa de reconhecimento social comparadas aos animaissham e aqueles Prnp+/+. Esses dados sugerem que adeleção gênica da PrPC confere um aumento da susceptibi-lidade ao déficit de memória social de curto prazo induzidopelo modelo de microgiria por criolesão

ANÁLISE COMPARATIVA, QUALITATIVA E QUANTITATIVA DAS FIBRAS MIELÍNICAS DO NER-VO SURAL DE RATOS ESPONTANEAMENTE HIPERTENSOS E NORMOTENSOS, MACHOS E FÊ-MEAS

Luciana Sayuri SanadaOrientadora: Profª. Drª. Valéria Paula Sassoli FazanDissertação de Mestrado apresentada em 22/12/2008

As alterações vasculares importantes ocorrem emdecorrência da hipertensão, afetando inclusive os nervosperiféricos. Estudos relatam que as diferenças entre gêne-ros influenciam na remielinização, na sensibilidade doloro-sa, na regulação neural da função vascular, no crescimentoaxonal in vitro, na condução nervosa, entre outros. Entre-tanto, são escassos os relatos de literatura a respeito dediferenças morfológicas e/ou morfométricas nas estruturasdos nervos periféricos de mamíferos de diferentes gênerose das alterações consequentes a hipertensão. O objetivo dopresente estudo foi comparar os aspectos morfológicos emorfométricos dos diferentes segmentos e lados do nervosural de ratos das linhagens ratos espontaneamente hiper-tensos (SHR) e Wistar-Kyoto (WKY), machos e fêmeas. Osanimais (n=6 em cada grupo) foram pesados, anestesiados e

a sua pressão arterial aferida. Após o preparo do nervo suralcom técnicas histológicas convencionais, secções trans-versais dos segmentos proximais e distais, dos lados direitoe esquerdo, foram obtidas para análise em microscopia deluz. A morfometria dos fascículos, das fibras mielínicas eseus respectivos axônios foi realizada com o auxílio de umsistema analisador de imagens computacional. Os resulta-dos mostraram que os SHR e WKY machos apresentam peso(325 ± 16 g e 388 ± 20 g) e pressão arterial média (201 ± 18mmHg e 136 ± 6 mmHg) maiores, quando comparados àsfêmeas (194 ± 13 g e 218 ± 14 g; 180 ± 18 mmHg e 143 ± 14mmHg, respectivamente). Foi observado também que, paraos dados ponderais, os animais SHR apresentaram-se signi-ficativamente menores em relação aos ratos WKY de mes-mo gênero. Entretanto, quando se compara os dados pres-sóricos, verifica-se que os ratos SHR se apresentaram signi-ficativamente maiores em relação aos ratos WKY de mesmogênero. Não foram observadas diferenças estatísticas sig-nificativas na morfologia e na morfometria entre os lados esegmentos tanto em fêmeas como em machos, nos grupos

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WKY e SHR. Não foram observadas diferenças significati-vas na maioria dos parâmetros morfológicos e morfométri-cos quer dos fascículos ou das fibras mielínicas analisadasnos diferentes gêneros de WKY e SHR. Quando se comparaos animais das linhagens WKY e SHR de mesmo gêneroobserva-se diferença significativa quanto aos parâmetrosmorfológicos (vasos mais espessos e colabados em ratosSHR), diâmetro mínimo da fibra mielínica e da razão G, indi-cando que a hipertensão foi capaz de gerar alterações nos

parâmetros morfométricos relevantes para estudos funcio-nais. A comparação entre machos e fêmeas das linhagensSHR e WKY permite-nos concluir que os parâmetros morfo-lógicos e morfométricos do nervo sural não se alteram sobinfluência dos gêneros. Alguns parâmetros morfológicos emorfométricos do nervo sural de ratos SHR, machos e fême-as, em relação aos animais WKY de mesmo gênero permi-tem-nos concluir que a hipertensão foi capaz de gerar altera-ções neste nervo

São apresentados os detalhes construtivos, bem como oscuidados necessários para contornar as dificuldades ine-rentes ao ambiente interno das câmaras de ressonância mag-nética. Os testes de instrumentação confirmaram excelenteresposta acústica de todo o sistema. O protótipo foi testadocom um phanton no interior da câmara de ressonância, mos-trando índice de interferência dentro dos parâmetros de nor-malidade. Este trabalho abre caminhos para o desenvolvi-mento de outros instrumentos e acessórios para uso emregistros de imagens de ressonância magnética funcional.Abrem-se promissoras oportunidades de trabalho nas apli-cações de uso do próprio instrumento, quando será possí-vel melhor investigar inúmeras vias neurais relacionadascom o trato auditivo e vestibular, não somente nos aspectossensório-motores, mas também cognitivos.

Ricardo DavidOrientador: Prof. Dr. José Fernando ColafêminaTese de Doutorado apresentada em 17/10/2008

O objetivo deste trabalho é apresentar os resultadosda construção de um protótipo de estimulador auditivo parauso em câmaras de ressonância magnética, mostrando suaviabilidade técnica e funcional de forma a melhorar a acuráciae eficiência dos registros de ressonância magnética funcio-nal a partir de estímulos auditivos. Foram projetados econstruídos um transdutor especial, compondo caixa de res-sonância e cristal piezelétrico, além de todos os circuitos degeração de sinais, amplificação e controle, capazes de gerarestímulos auditivos em dois canais, cobrindo toda a faixa doespectro auditivo, com intensidade máxima de 122 dB Na.

OFTALMOLOGIA, OTORRINOLARINGOLOGIAE CIRURGIA DE CABEÇA E PESCOÇO

ESTIMULADOR PIEZELÉTRICO PARA AVALIAÇÃO DE POTENCIAIS EVOCADOS CÓCLEO-VES-TIBULARES E REGISTRO DE IMAGENS DE RESSONÂNCIA MAGNÉTICA FUNCIONAL

EXPRESSÃO DE ANTÍGENOS CÂNCER-TESTICULARES EM CARCINOMA ESPINOCELULAR DELARINGE: ANÁLISE POR IMUNO-HISTOQUÍMICA

Objetivos: Analisar a expressão de antígenos cân-cer-testiculares (ACT) em CECL e correlacioná-los com ca-racterísticas clínico-patológicas e de sobrevida.

Casuística e Métodos: Foram avaliados 63 pacien-tes com diagnóstico histopatológico de CECL, tratados ci-rurgicamente no período de 2001 a 2005. Seus respectivosespécimes foram submetidos a reações de imuno-histoquímica com os anticorpos MA454 (anti MAGE-A1),M3H67 (anti MAGE-A3), 57B (anti MAGE-A4), CT 7-33(anti MAGE-C1), CT10.5 (anti MAGE-C2), anti GAGE, E978(anti NY-ESO-1).

Resultados: A expressão de, pelo menos, um antíge-

David Livingstone Alves FigueiredoOrientador: Prof. Dr. Rui C. Martins MamedeTese de Doutorado apresentada em 03/11/2008

Introdução: O câncer de laringe ocasiona cerca de90.000 mortes por ano em todo o mundo, sendo que o car-cinoma espinocelular de larinbe (CECL), responsável por95% dos casos, se caracteriza por apresentar evoluçõesindefinidas, e que, apesar de todo o avanço na laringologia,a sobrevida não se alterou nos últimos 30 anos. Com basenisso, os pesquisadores procuram marcadores que possamservir como fatores prognósticos ou imunoterápicos.

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Angélica Gobbi JorgeOrientador: Prof. Dr. Eduardo Melani RochaTese de Doutorado apresentada em 03/11/2008

As alterações na glândula lacrimal e superfície ocu-lar após Diabetes mellitus (DM) crônico foram correlacio-nadas com ativação da sinalização inflamatória. O objetivodeste estudo foi determinar se o tratamento com AAS inibealterações na glândula lacrimal e superfície ocular provoca-das pelo DM. O DM foi induzido em ratos Wistar machoscom streptozotocina e um subgrupo foi tratado com AAS.Após 10 semanas, a glândula lacrimal e superfície oculardestes três grupos (n=5/grupo) foram comparadas em ter-mos da morfologia e expressão de peroxidase. A impressãocitológica foi utilizada para comparar o epitélio da córnea eo teste de Schimer para avaliar a secreção lacrimal. A análi-se por Western blot foi utilizada para avaliar a expressãodas proteínas desacopladoras (UCPs) e IKKs (IKK-α/β). A

impressão citológica não revelou diferenças na morfologiado epitélio da córnea embora o DM reduza a secreção lacri-mal, um efeito que foi prevenido pelo tratamento com AAS(P<0.01). Alterações na morfologia da glândula lacrimal eaumento no número de grânulos de lipofucsina foram ob-servados nos animais diabéticos na décima semana de ma-nisfestação do DM considerando que estas característicasforam similares no controle e diabéticos tratados com AAS.Os níveis de peroxidase foram maiores nos ratos diabéti-cos, mas semelhante no controle e diabético tratados comAAS (P=0.002). Há expressão de UCPs e IKK-α/β na glân-dula lacrimal, mas somente UCP-2 e 3 foram reduzidas peloDM (P<0.05). Estes dados sugerem que o estresse oxidativorelacionado com hiperglicemia possa participar da síndromedo olho seco em diabéticos. Estes eventos podem ser par-cialmente prevenidos pela AAS, pela a qual talvez tenhaum efeito inibitório direto sobre as vias oxidativas na glân-dula lacrimal ou em suas consequências inflamatórias.

no foi observada em 66,6% dos casos. Eles foram expres-sos com frequências variáveis: MAGE-A1 (47,62%), MAGE-A3 (36,5%), MAGE-A4 (60,32%), MAGE-C1 (22,2%),MAGE-C2 (7,93%), GAGE (20,64%) e NY-ESO-1 (9,52%). Aexpressão de um antígeno ou de múltiplos (2 ou mais) e aexpressão de MAGE-A4 são significantemente maiores emtumores avançados. Há expressão significantemente maiorde MAGE-A1 e de MAGE-A3 em tumores com recidivascervicais e não houve relação da expressão com o tempo desobrevida.

Discussão: Nossos resultados mostram que os CECLestão entre os tumores que mais expressam ACT, o que tor-na esse câncer um potencial alvo para tratamento imunote-rápico. Observamos, conforme a literatura, que a expressão

está frequentemente associada aos tumores avançados, queapresentam prognóstico ruim com os tratamentos hoje esta-belecidos.

Conclusão: Com base nos dados obtidos neste es-tudo, conclui-se que nos CECL, os ACT - MAGE-A1, MAGE-A3, MAGE-A4, MAGE-C1, MAGE-C2, GAGE e NY-ESO-1são expressos em proporções variáveis (7,93% a 60,32%), eque em 66,6% dos casos ocorre a expressão de, pelo me-nos, um desses antígenos. Encontrou-se correlação da ex-pressão e co-expressão dos antígenos estudados com apresença de tumores avançados. Houve correlação dosantígenos MAGE-A1 e MAGE-A3 com a presença de reci-divas cervicais e o MAGE-A4 se correlaciona com tumoresavançados.

O PAPEL DA ASPIRINA NA PREVENÇÃO DAS ALTERAÇÕES DA GLÂNDULA LACRIMAL E SU-PERFÍCIE OCULAR DE RATOS DIABÉTICOS

Casuística e Métodos: Foram selecionados, para re-alização de RM dos ouvidos, dez pacientes (20 orelhas)com diagnóstico clínico e tomográfico de SAVA unilateralou bilateral, que formaram o grupo SAVA. Foram seleciona-dos, também, dez indivíduos (20 orelhas) para o grupo con-trole, que foram encaminhados ao serviço de RM para rea-lização de exame do encéfalo, onde após exclusão de sinto-mas auditivos e/ou vestibulares e história prévia de doen-ça do aparelho auditivo ou vestibular e com o consenti-mento do mesmo, foi incluída a sequência 3DFT-CISS paraavaliação dos ouvidos. Assim, a avaliação foi realizada pordois observadores independentes de modo randomizado e

Carolina Ferreira MarquesOrientador: Prof. Dr. José Fernando ColafêminaDissertação de Mestrado apresentada em 17/11/2008

Objetivos: Analisar variáveis estruturais cócleo-ves-tibulares nos pacientes com Síndrome do Aqueduto Vesti-bular Alargado (SAVA) através da sequência "ThreeDimensional Fourier Transformation- Constructive Inter-ference in Steady State Sequence" (3DFT-CISS) de Resso-nância Magnética (RM), e compará-las com um grupo con-trole. As mesmas variáveis foram, ainda, comparadas entreas orelhas direitas e esquerdas, de ambos os grupos.

AVALIAÇÃO CÓCLEO-VESTIBULAR POR MEIO DE RESSONÂNCIA MAGNÉTICA SEQUÊNCIA3DFT-CISS NA SÍNDROME DO AQUEDUTO VESTIBULAR ALARGADO

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cego. Foram analisadas as variáveis: Área do modíolo, Di-âmetro Transverso do Vestíbulo (A), Diâmetro Interno aoCanal Semicircular Lateral (B) e relação A/B; posteriormen-te foi realizada comparação entre os grupos e entre orelhasdireitas e esquerdas.

Resultados: Ao comparar os grupos SAVA e contro-le, todas as variáveis analisadas apresentaram uma diferen-ça estatisticamente significante (p<0,01). Foi constatado,ainda, que aproximadamente 35% das orelhas do grupoSAVA obtiveram uma área modiolar inferior à mínima áreamodiolar descrita na literatura, sugerindo uma possível de-ficiência modiolar. Observado também que 85% das ore-lhas do grupo SAVA apresentaram uma relação A/B maiorque 1,2 (limite da normalidade estabelecido por diversosautores), sugerindo, talvez, um alargamento do vestíbulo.Ao comparar as variáveis entre orelhas direitas e esquer-das, de ambos os grupos, não foi verificada diferença esta-tisticamente significante.

Conclusões: 1) A análise das variáveis estruturaiscócleo-vestibulares, sendo elas: área modiolar, diâmetrotransverso do vestíbulo (A), diâmetro interno ao canal late-ral (B) e relação A/B mostrou uma diferença estatisticamen-te significante entre os grupos SAVA e controle. Os resulta-dos conferem indícios, porém não afirmam o encontro dedeficiência modiolar em pelo menos 35% das orelhas dogrupo SAVA e aumento da relação entre diâmetro transver-so do vestíbulo e diâmetro interno ao canal lateral em 85%das orelhas, sugerindo alargamento do vestíbulo. Essesresultados corroboram com a teoria da presença de defei-tos estruturais mínimos na orelha interna com capacidadede contribuir para o quadro clínico na SAVA; 2) Ao compa-rarmos as variáveis estruturais entre as orelhas direitas eesquerdas de ambos os grupos não encontramos diferençasignificante, sugerindo, provavelmente, não haver diferen-ça de comportamento entre orelhas, mesmo considerandocasos de SAVA unilateral e bilateral.

rinolaringológica para diagnóstico respiratório, avaliaçãoodontológica para diagnóstico do padrão oclusal e dentário,avaliação clínica fonoaudiológica e avaliação videofluoros-cópica da deglutição. Para avaliação ideofluoroscópica foiutilizada a consistência líquida em volume livre e 3 ml deconsistência pastosa modificadas com sulfato de bário.Avaliou-se na fase oral da deglutição o volume, a consis-tência e a organização do bolo, o tempo de trânsito oral, aejeção, a postura dos lábios, o número de deglutições e apresença de movimentos associados durante a deglutição.Observou-se que a consistência pastosa e o padrão de or-ganização do bolo influenciaram no tempo de trânsito oral,embora não ocorrera diferença entre os grupos. Em relaçãoaos outros aspectos avaliados durante a fase oral da deglu-tição não foi constatada diferença significativa entre os gru-pos bucal e controle. Os resultados indicaram que a obstru-ção nasal não influenciou significativamente a fase oral dadeglutição em crianças na fase de dentição decídua.

Tais Helena GrechiOrientadora: Profª. Drª. Luciana Vitaliano Voi TrawitzkiDissertação de Mestrado apresentada em 26/11/2008

A obstrução nasal crônica pode causar efeitos nega-tivos no crescimento e desenvolvimento craniofacial, alémde modificações na musculatura orofacial, com impacto so-bre a deglutição. O objetivo do presente estudo foi verificaros efeitos da obstrução nasal na fase oral da deglutição emcrianças na fase de dentição decídua. Participaram desteestudo 31crianças do Ambulatório de Otorrinolaringologiado Hospital das Clínicas de Ribeirão Preto - USP. Estas cri-anças foram divididas em dois grupos: 21 crianças respira-doras bucais, sendo 8 do gênero feminino e 13 do gêneromasculino, com idade média de 4,5 anos (grupo bucal) e 10crianças respiradoras nasais, 4 do gênero feminino e 6 dogênero masculino, com idade média de 4,6 anos (grupo con-trole). Ambos os grupos foram submetidos à avaliação otor-

EFEITO DA OBSTRUÇÃO NASAL NA FASE ORAL DA DEGLUTIÇÃO EM CRIANÇAS

ção auditiva periférica e central de crianças nascidas a ter-mo e prétermo, adequadas e pequenas à idade gestacional;discutir o estado de desenvolvimento de fala, linguagem eaprendizagem destas crianças.

Casuística e Métodos: estudo de prevalência, des-critivo, observacional, transversal, comparativo, prospecti-vo, com enfoque em diagnóstico. Amostra constituída por19 sujeitos nascidos a termo; 32 sujeitos nascidos prematu-ros e adequados à idade gestacional; 18 sujeitos nascidos

Cristiane Fregonesi Dutra GarciaOrientadora: Profa.Dra. Myrian de Lima IsaacTese de Doutorado apresentada em 17/12/2008

Introdução: O Potencial Evocado Auditivo de Lon-ga Latência denominado de Mismatch Negativity (MMN) éum potencial endógeno que reflete o processamento dediferenças ocorridas no estímulo acústico.

Objetivos: estimar a prevalência de alteração da fun-

AVALIAÇÃO PROSPECTIVA DE AUDIÇÃO E LINGUAGEM DE CRIANÇAS TRIADAS AO NASCI-MENTO

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prematuros e pequenos à idade gestacional. Foram realiza-dos os seguintes procedimentos: análise do prontuário eentrevista com a mãe ou responsável; exame otorrinolarin-gológico, avaliação auditiva por meio de Audiometria TonalLiminar, Limiar de Recepção de Fala, Imitanciometria, Poten-cial Evocado Auditivo do Tronco Encefálico, Potencial Evo-cado Auditivo de Longa Latência, MMN. Na análise esta-tística foram usados os testes Kruskal-Wallis, Qui- Quadra-do, de Dunn.

Resultados: a audição periférica apresentou-se den-tro da normalidade na maioria das crianças dos três gruposdo estudo. A função auditiva central apresentou indicaçãode alteração no registro do Reflexo Estapediano e PotencialEvocado Auditivo do Tronco Encefálico na maioria das cri-anças dos três grupos estudados. No exame MMN, a latênciamédia para a orelha direita, em crianças nascidas a termo, foide 207,6 milissegundos; para as crianças nascidas pré-ter-mo e adequadas à idade gestacional foi de 158,51 milisse-gundos; para as crianças nascidas pré-termo e pequenas àidade gestacional foi de 181,80 milissegundos; a latênciamédia para a orelha esquerda, para as crianças nascidas a

termo foi de 200 milissegundos; para as crianças nascidaspré-termo e adequadas à idade gestacional foi de 167,76milissegundos; para as crianças nascidas pré-termo e pe-quenas à idade gestacional foi de 174,1milissegundos. Aamplitude para a orelha direita, em crianças nascidas a ter-mo, apresentou média de -3,044 microVolts; de -3,584microVolts para as crianças nascidas pré-termo e adequadasà idade gestacional; de -3,165 microVolts para as criançasnascidas pré-termo e pequenas à idade gestacional. Na ore-lha esquerda, a média da amplitude foi de -3,407 microVoltspara as crianças nascidas a termo; de -5,22 microVolts paraas crianças nascidas pré-termo e adequadas à idade gesta-cional; de -3,863 microVolts para as crianças nascidas pré-termo e pequenas à idade gestacional. O desenvolvimentode fala, linguagem, audição e aprendizagem apresentaram-se dentro da normalidade para a maioria das crianças avali-adas nos três grupos.

Conclusão: o exame MMN deve ser instrumento com-plementar na avaliação e monitoramento de crianças de ris-co para alterações no desenvolvimento de fala, linguagem eaudição.

Foram analisadas a força máxima e a rigidez do terço proximaldo fêmur direito. O fêmur esquerdo foi submetido à análisedensitométrica. Os resultados mostraram uma redução daresistência mecânica, densidade óssea e calcemia no grupoOVX I em relação aos grupos Cont I e OVXT I, porém não foiobservada diferença estatística entre esses dois últimos gru-pos. O grupo OVX II demonstrou diminuição significativade calcemia em relação aos grupos Cont II e OVXT II, nasdemais comparações não houve diferença significativa. Adensidade óssea foi menor no grupo OVX II foi menor queno grupo Cont II e, entre os grupos OVXT II e Cont II nãofoi observada diferença estatística. A força máxima entre osgrupos Cont I, OVX I e OVXT I, não foi significativamentediferente, porém foi menor nos grupos OVX II e OVXT IIque no grupo Cont II. A rigidez dos grupos OVX I e OVX IIfoi menor que dos grupos Cont I e Cont II, respectivamente.O grupo OVXT I apresentou maior rigidez que o grupo OVXI e semelhante ao grupo Cont I. Já o grupo OVXT II nãoapresentou diferença estatística em relação aos grupos OVXII e Cont II. Estes resultados sugerem que o treinamentofísico foi eficaz na profilaxia da perda de massa óssea. Noentanto, não foi eficaz no controle da osteopenia.

Priscila Angelotti SimõesAntônio Carlos ShimanoDissertação (Mestrado) 03/10/2008

A contra medida mais estudada para previnir e/ouminimizar a reabsorção óssea e aumentar a tolerância à soli-citação mecânica é a prática de exercício físico. O objetivodeste estudo foi (1) analisar o efeito do exercício físico emfêmures de ratas submetidas à ovariectomia através de en-saios mecânicos e análise densitométrica e, (2) verificar asalterações nos níveis de calcemia. Foram utilizadas 60 ratasadultas da raça Wistar que foram separadas em 6 grupos(n=10): Cont I: controle; OVX I: ovariectomizados; OVXT I:ovariectomizados e treinados após 72 horas de ovariecto-mia; Cont II: controle; OVX: ovariectomizados e OVXT II:ovariectomizados e treinados após oito semanas de ovari-ectomia. Os animais do subgrupo I foram submetidos à eu-tanásia após 13 semanas a partir do início do experimento eos do subgrupo II com 21 semanas. O protocolo de treina-mento consistia em 15m/min da 1ª a 6ª semana e 18 m/min da7ª a 12ª com 4 sessões por semana. Foi coletado sangue noinício e final do experimento para a dosagem de calcemia.

ORTOPEDIA, TRAUMATOLOGIA E REAB ILITAÇÃO

AÇÃO DO TREINAMENTO FÍSICO ANTES E APÓS A INSTALAÇÃO DA OSTEOPENIA EM RATASOVARIECTOMIZADAS

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Juliano Silveira Luiz VieiraOrientador: Prof. Dr. Helton Luis Aparecido DefinoTese de Doutorado apresentada em 08/10/2008

A placa vertebral terminal (PVT) é uma estrutura ana-tômica que mantém relação funcional com a nutrição do dis-co intervertebral (DI). O objetivo do estudo foi avaliar pormeio de histomorfometria, a espessura da placa vertebral ter-minal, a espessura do disco intervertebral e a sua correlaçãonas diferentes faixas etárias e em diferentes níveis vertebrais.Foram avaliados os segmentos vertebrais C4-C5, C5- C6,T7- T8, T12-L 1, L4-L5 e L5-S1 de 50 cadáveres humanos, deambos os sexos, divididos em 5 grupos com intervalo defaixa etária de 10 anos, a partir dos 21 anos de idade. Aavaliação da espessura da PVT e do disco intervertebral foi

realizada por meio de avaliação histomorfométrica dos cor-tes histológicos corados pela Hematoxilina e Eosina. Asespessuras das PVT foram comparadas entre si e tambémcom a espessura do disco intervertebral interposto entre asrespectivas PVT. A espessura das placas vertebrais termi-nais adjacentes ao mesmo DI não apresentou diferença es-tatística. No entanto, a comparação da espessura das pla-cas vertebrais superior e inferior da mesma vértebra cervical(C5) e lombar (L5), apresentou diferença estatística em todosos grupos e em todas as faixas etárias avaliadas. Foi obser-vado coeficiente de correlação estatística, maior que 75%,entre a espessura da placa vertebral terminal e o disco inter-vertebral adjacente, com proporcional redução de espessu-ra de ambas estruturas, nos diferentes níveis vertebrais ava-liados, e também nas diferentes faixas etárias avaliadas.

ANÁLISE HISTOMORFOMÉTRICA DA PLACA VERTEBRAL TERMINAL E DO DISCO INTERVER-TEBRAL EM DIFERENTES NÍVEIS VERTEBRAIS DA COLUNA VERTEBRAL E DIFERENTES FAIXASETÁRIAS EM HUMANOS

cutivos. No trigésimo primeiro dia pós-operatório, os ani-mais foram sacrificados e o tendão operado foi dissecadoressecado, sendo que 40 tendões (10 de cada grupo) foramsubmetidos aos testes de resistência à tração na máquinauniversal de ensaio e um tendão de cada grupo foi subme-tido à análise histológica qualitativa. A partir dos gráficosforça versus deformação foram calculadas as seguintes pro-priedades mecânicas: força máxima, deformação na forçamáxima e rigidez. Ainda para a propriedade mecânica forçamáxima, foram estabelecidos quatro valores de referência(8, 16, 20 e 24 N), e verificou-se a porcentagem de tendõesde cada grupo experimental que suportava uma carga maiorou igual a cada um desses valores. Os resultados mostra-ram que, embora não houvesse diferenças estatisticamentesignificante entre os grupos experimentais, a força máximae a deformação na força máxima foram maiores para o grupoirradiado com ultra-som contínuo a uma intensidade de 0,6W/cm2, sugerindo que o ultra-som melhorou as proprieda-des mecânicas desses tendões. Especificamente para a pro-priedade mecânica força máxima, procurou-se verificar aporcentagem de tendões de cada grupo experimental quesuportava uma carga maior ou igual 8, 16, 20 e 24 N. Osresultados mostraram que os tendões do grupo tratado comultra-som contínuo a uma intensidade de 0,6 W/cm2, tolera-ram carga maior que os tendões dos demais grupos. A aná-lise histológica mostrou que o tendão desse mesmo grupoapresentou fibras colágenas totalmente densas, diferente-mente dos demais tendões que apresentaram fibras frouxasentremeadas às demais fibras.

Cristiane Vitaliano Graminha RomanoOrientador: Prof. Dr. Claúdio Henrique BarbieriTese de Doutorado apresentada em 09/10/2008

A literatura revela indícios de que o ultra-som tera-pêutico favorece a cicatrização tendinosa, embora os resul-tados dos estudos sejam ainda contraditórios. O objetivodeste trabalho foi investigar as propriedades mecânicasnos reparos de tendões flexores profundos de coelhos sub-metidos a tenotomia seguida de tenorrafia e aplicação doultra-som terapêutico com diferentes intensidades. Paratanto, foram utilizados 44 coelhos fêmea, da raça NovaZelândia, adultos jovens com peso corpóreo médio de 2,5Kg. Todos os animais foram operados sob anestesia geral esubmetidos à tenotomia do tendão flexor profundo do ter-ceiro dedo da pata direita dianteira e imediatamente repara-do com a técnica de Kessler modificada. As patas operadasforam imobilizadas com uma órtese de material termoplásticodurante todo o período do experimento (31 dias) e os ani-mais foram distribuídos em quatro grupos (A, B, C e D) deacordo com o tratamento pós-operatório. Os animais dogrupo A receberam aplicação do ultra-som com uma inten-sidade de 1,4 W/cm2, os do grupos B de 0,6 W/cm2, ambosno modo contínuo, os do C de 0,6 W/cm2 SATA (spatialaverage and temporal average) no modo pulsado a 50% eos animais do grupo D, não receberam tratamento ultra-sônico algum. A frequência ultra-sônica empregada foi de 1MHz, a aplicação foi diária, com duração de 6 minutos cada,iniciando no quarto dia pós-operatório, por 10 dias conse-

EFEITOS DOSE DEPENDENTES DO ULTRA-SOM TERAPÊUTICO NO PROCESSO DE CICATRIZA-ÇÃO DO TENDÃO FLEXOR. ANÁLISE BIOMECÂNICA EM TENDÕES DE COELHOS

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João Paulo Chieregato MatheusOrientador: Prof. Dr. Helton Luis Aparecido DefinoTese de Doutorado apresentada em 23/12/2008

As técnicas de preparo do orifício piloto durante ascirurgias de coluna, como a variação do diâmetro e a realiza-ção do macheamento, têm sido apontadas como determi-nantes no aumento da interface osso/implante dos parafu-sos cervicais e, consequentemente, maior estabilidade. As-sim, o objetivo deste estudo foi avaliar a influência do diâ-metro e do macheamento do orifício piloto na área ósseatrabecular entre os passos de rosca, na área paralela ao im-plante e na superfície de contato osso/implante, por meio demicroscopia eletrônica de varredura e em diferentes temposde fixação. Para tanto foram utilizados seis carneiros, commassa corporal média de 28±04 kg e 72 parafusos cervicaisde titânio (Synthes ®) com diâmetro externo de 3,5 mm, diâ-metro interno de 2,5 mm e 14,0 mm de comprimento. Os para-fusos foram implantados por acesso anterior no corpo dasvértebras cervicais dos carneiros em dois procedimentos ci-rúrgicos. Durante os procedimentos foram confeccionados,com brocas, orifícios piloto de 2,0 e 2,5 mm de diâmetros.Além disso, em metade dos orifícios de 2,5 mm foi realizadoo macheamento com instrumental específico (Synthes@),semelhante ao perfil dos parafusos. Na primeira cirurgia osparafusos foram implantados nas vértebras cervicais C2, C3e C4, conforme os grupos experimentais, e os animais forammantidos vivos por oito semanas (Crônico). Passado esseperíodo, foi realizada nova cirurgia para implantação dosparafusos nas vértebras cervicais C5, C6 e C7 e em seguidao animal foi submetido à eutanásia por meio de overdose

anestésica (Agudo). A partir destas cirurgias foram forma-dos os seguintes grupos experimentais: agudo com orifício2,0 mm (A 2,0); agudo com orifício 2,5 mm (A 2,5); agudocom orifício macheado de 2,5 mm (A 2,5 M); crônico comorifício 2,0 mm (C 2,0); crônico com orifício 2,5 mm (C 2,5) ecrônico com orifício macheado de 2,5 mm (C 2,5 M). Termi-nados os procedimentos cirúrgicos, o material foi prepara-do e conduzido para análise por meio de microscopia eletrô-nica de varredura (MEV). As imagens obtidas foram entãoqualificadas e quantificadas segundo as áreas: intra passode rosca, projeção em espelho e contato osso/implante. Nosgrupos agudos, o orifício de menor diâmetro (A 2,0) gerougrande fragmentação e compactação intra passo de rosca eo macheamento (A 2,5 M) removeu parte do material na re-gião do parafuso. Nos grupos crônicos, o orifício com maiorárea óssea intra passo e contato osso/implante foi aquelecom o mesmo diâmetro interno do parafuso e não macheado(C 2,5). Portanto, no momento de implantação dos parafu-sos cervicais, a maior área óssea intra passo de rosca e decontato foi obtida ao se realizar orifícios piloto com diâme-tro interno menor que o diâmetro dos implantes sem a reali-zação da técnica de macheamento. Entretanto, na fase crô-nica, os resultados obtidos sugerem que a melhor técnicaseja a realização do orifício piloto com mesmo diâmetro doparafuso, sem a realização do macheamento. Levando-seem consideração que a fixação de um segmento em umaabordagem terapêutica permanecerá por um tempo prolon-gado, muitas vezes acima de oito semanas, é I adequadosugerir que a confecção de um orifício piloto de mesmo diâ-metro interno do parafuso, sem o macheamento, seja a me-lhor técnica de fixação dos implantes em coluna cervical.

MICROSCOPIA ELETRÔNICA DE VARREDURA DA ÁREA ÓSSEA ADJACENTE AOS PARAFUSOSCERVICAIS, EM DIFERENTES TEMPOS DE FIXAÇÃO

PATOLOGIA

EXPRESSÃO DA CHECKPOINT KINASE 2 NOS CARCINOMAS MAMÁRIOS: ESTUDO CLINICO-PATOLÓGICO E IMUNOISTOQUÍMICO

compreendido. Este estudo foi realizado para avaliar a rela-ção entre a expressão do Chk2 e fatores prognósticos bemestabelecidos, incluindo sobrevida livre de doença e so-brevida global; e vários reguladores da proliferação celulare progressão tumoral nos carcinomas mamários, incluindooncogenes, genes supressores tumorais, proteínas relacio-nadas à apoptose e marcadores relacionados a angiogêne-se. Um painel imuno- histoquímico com 27 anticorpos pri-mários foi realizado em 100 amostras de carcinomas ductais

Michel Antonio Kiyota MoutinhoOrientador: Prof. Dr. Alfredo Ribeiro-SilvaDissertação de Mestrado apresentada em 23/10/2008

A Checkpoint quinase 2 (Chk2) é uma proteína dechecagem do ciclo celular que pode atuar como um supres-sor tumoral devido ao seu importante papel na sinalizaçãoao dano ao DNA e na regulação do ciclo celular. O papel doChk2 na tumorigênese mamária, entretanto, ainda é pouco

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invasores sem outras especificações (SOE), previamentefixadas em formalina e emblocados em parafina. Os dadosclínicos foram obtidos dos prontuários médicos. No parên-quima mamário normal adjacente ao tumor, o Chk2 marcouo núcleo das células epiteliais. Uma baixa expressão doChk2 foi observada em 23 carcinomas e essa expressãocorrelacionou-se com doença avançada. Entre os regula-dores da proliferação celular e progressão tumoral avalia-

dos, a baixa expressão do Chk2 correlacionou-se com baixaexpressão do p27 e da telomerase. Não houve diferençaentre a sobrevida global e sobrevida livre da doença deacordo com a marcação do Chk2. Em conclusão, A expres-são diferencial do h-TERT e do p27 pode contribuir nafisiopatogênese dos carcinomas mamários Chk2- positivos.A expressão do Chk2 não interferiu com a evolução daspacientes.

domicílio. Após o ajuste final do modelo para o BPN e paraa RCIU, ambos não favoreceram o excesso de peso na idadeescolar tanto pela referência de Must et al. como pela doNCHS/CDC e ainda tiveram associação positiva com a sub-nutrição nos escolares, com a RCIU pela referência de Mustet al. com Odds Ratio (OR) de 2,33 e intervalo de confiançade 95%, (IC95%) de 1,34;4,07) e do NCHS/CDC com OR=2,23(IC95% 1,29;3,84); e o BPN pelos critérios de Must et al.com OR=1,81 (IC95% 1,02;3,21) e NCHS/CDC com OR=1,78(IC95% 1,01;312). A associação positiva do sexo masculinocom o excesso de peso (OR=1,47; IC95% 1,02;2,13) e a ten-dência de associação positiva do maior número de morado-res no domicílio com o excesso de peso não foram suficien-tes para retirar a associação positiva do tamanho ao nascercom a subnutrição na idade escolar. Houve, ainda, associa-ção negativa da RCIU com o excesso de peso pela referên-cia do NCHS/CDC (OR=0,57; IC95% 0,34; 0,93). O excessode peso como um dos fatores de risco para a síndrome meta-bólica nos indivíduos com BPN e com RCIU, independentedas referências de IMC utilizadas, parece ainda não estarpresente na idade escolar. Os resultados encontrados sãoimportantes e demonstram que este município, como outrasregiões de países em desenvolvimento, encontra-se em fasede transição nutricional. Devido aos altos índices de exces-so de peso sem a diminuição dos níveis de subnutrição paraaqueles dos países desenvolvidos, o efeito de associaçãodo BPN e da RCIU com o excesso de peso na faixa etáriaentre 10 e 11 anos de idade ainda não ocorreu.

Ieda Regina Lopes Del CiampoOrientadora: Profª.Drª. Heloisa BettiolTese de Doutorado apresentada em 30/10/2008

O baixo peso ao nascer (BPN) e a restrição de cresci-mento intra-uterino (RCIU) são indicadores de comprometi-mento do estado nutricional durante a vida pré-natal e esta-riam associados a fatores de risco para doenças cardiovas-culares na vida adulta. Atualmente, acredita-se que este ris-co também esteja presente em idades mais precoces. Paraavaliar a influência do peso ao nascer e de outras variáveisao nascimento e entre 10 e 11 anos de idade sobre o estadonutricional de escolares em Ribeirão Preto-SP, foram avalia-das por meio de questionário e medidas antropométricas,uma amostra de 874 crianças em idade escolar, provenientesde um estudo de coorte iniciado em 1994. Foram considera-dos subnutridos os escolares com índice de massa corporal(IMC) < percentil (P) 5 e com excesso de peso aqueles comIMC ≥ P85 por duas referências: Must et al. e NCHS/CDC. Aassociação do IMC com o peso ao nascer e demais variá-veis de controle foi avaliada por modelo de regressão logís-tica nominal, sendo a faixa entre o P5 e o P85 consideradacomo referência. As variáveis de controle foram: sexo, ida-de, cor da pele, nascimento pré-termo, tabagismo maternodurante a gestação, situação conjugal materna no parto,idade da mãe ao nascimento da criança, idade da introduçãode leite artificial, tipo de escola que a criança frequenta es-colaridade materna atual e número atual de moradores por

SAÚDE DA CRIANÇA E DO ADOLESCENTE

INFLUÊNCIA DO TAMANHO AO NASCER E DE ALGUMAS VARIÁVEIS SOCIODEMOGRÁFICASSOBRE O ESTADO NUTRICIONAL DE CRIANÇAS ENTRE 10 E 11 ANOS DE IDADE, PERTENCEN-TES À COORTE DE 1994, RIBEIRÃO PRETO-SP

ESTUDO DO PERFIL DE EXPRESSÃO DOS GENES RELACIONADOS A APOPTOSE EM LEUCE-MIAS LINFÓIDES AGUDAS DA INFÂNCIA POR PCR QUANTITATIVO EM TEMPO REAL (RQ-PCR

Juliana França da MataOrientador: Prof.Dr. Carlos Alberto ScrideliTese de Doutorado apresentada em 05/11/2008

Introdução: Anormalidades na regulação da apop-tose, resultando tanto na sua inibição quanto aumento, temsido descritas como tendo um papel central no desenvolvi-

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mento de diversas malignidades onco-hematológicas. A as-sociação dos níveis de expressão destes genes com variá-veis biológicas e sobrevida em crianças com LLA não temsido bem estabelecida. O objetivo do estudo foi de compa-rar níveis de expressão dos genes pró-apoptóticos CASP3,CASP8, CASP9 e FAS e do gene anti-apoptótico BCL2 emcrianças com leucemia linfóide aguda (LLA) e correlacioná-los com prognóstico e variáveis clínicas e biológicas.

Métodos: Foram analisadas 140 amostras consecu-tivas de medula óssea de crianças com LLA ao diagnósti-co, classificadas e tratadas nas instituições participantessegundo os protocolos propostos pelo GBTLI-99. O perfilde expressão gênica foi analisado por PCR quantitativa emtempo-real (RQ-PCR) utilizando-se SYBR Green como mar-cador de fluorescência e o gene GUS como controle inter-no. O valor de expressão relativa de cada gene foi avaliadopela técnica 2-DDCT (com eficiências variando de 1,9-2,1).Foram comparados os níveis de expressão dos genes estu-dados com as variáveis: idade, número de glóbulos bran-cos (GB) ao diagnóstico, citogenética molecular, velocida-de na resposta ao tratamento de indução (respondedoresrápidos ou lentos), grupo de risco (risco básico-RB ou altorisco-AR), imunofenotipagem e sobrevida livre de eventos

(SLE). O tempo de seguimento variou de 26 a 66 meses. Aassociação entre as variáveis e os valores de expressão decada gene foi analisada pelo teste de Mann-Whitney. ASLE foi analisada através de curvas de Kaplan-Meier e tes-te log-rank e a correlação entre os valores de expressãopelo teste de Spearman. Foram considerados como aumen-tados os valores de expressão acima da mediana.

Resultados: SLE em 4 anos foi de 76% (RB-82% xAR-66%) no grupo analisado. Foi observada uma correla-ção significativa entre os genes CASP3, CASP8, CASP9 eFAS (P<0.001) e associação estatística significante (p≤0,05)entre hiperexpressão do gene BCL2 e GB <50000/dL aodiagnóstico e risco básico. Hiperexpressão dos genesCASP3, CASP8 e FAS esteve associada a contagem deGB<5000/dL no D7 da terapia de indução. Não foi verificadaassociação entre o nível de expressão destes genes e SLEem 4 anos.

Conclusões: Os resultados sugerem que o nível deexpressão de genes relacionados a apoptose pode estar as-sociado a variáveis clínicas e biológicas em crianças comLLA. O nível de expressão destes genes medidos ao diag-nóstico, no entanto, não parece ter associação significativacom sobrevida e chance de recaída em crianças com LLA.

momentos de avaliação: ao nascimento (sexo do recém-nascido, tabagismo, escolaridade e situação conjugal ma-ternas, paridade e relação de peso ao nascer para idadegestacional, classificada como adequado - AIG, pequeno -PIG e grande - GIG), na idade escolar (excesso de peso ounão) e aos 23/25 anos (ocupação do chefe da família, situa-ção conjugal, escolaridade, tabagismo e história familiar dedoenças cardiovasculares). SM foi definida pelo consensoda International Diabetes Federation (IDF). Foi aplicadaanálise de regressão logística múltipla, passo a passo, sen-do SM a variável dependente. O estudo foi aprovado peloComitê de Ética em Pesquisa do Hospital das Clínicas e daFaculdade de Medicina de Ribeirão Preto -USP, processon° 5587/2007.

Resultados: A prevalência de SM da coorte adulta,pelos critérios da IDF, foi 11,9% (18,1% nos homens e 6,1%nas mulheres). Entre os componentes da síndrome encon-trou-se: circunferência de cintura aumentada em 32%, hi-pertensão em 22,8%, HDL baixo em 42%, hiperglicemia em3,1%, e hipertrigliceridemia em 12,8%. Houve diferença en-tre os sexos em relação a todos os componentes da SM,sendo que os homens apresentaram maiores prevalênciasde alteração nas medidas de cintura, níveis pressóricos,glicemia de jejum e triglicerídeos (36,1%, 40,6%, 4,5% e 16%;respectivamente) do que as mulheres (28,1%, 6,3%, 1,8% e

Viviane Cunha CardosoOrientador: Prof. Dr. Marco Antonio BarbieriTese de Doutorado apresentada em 19/11/2008

Introdução: Diversos estudos sugerem que baixopeso ao nascer associado a sobrepeso na infância podeaumentar o risco de resistência insulínica e Síndrome Meta-bólica (SM) na vida adulta. SM é um transtorno complexorepresentado por um conjunto de fatores de risco para do-ença cardiovascular, relacionados à deposição central degordura e à resistência insulínica. A prevalência da SM éalta, variando entre 10% e 40%, dependendo da idade esexo.

Objetivos: Estimar a prevalência da SM e seus com-ponentes entre adultos jovens nascidos na coorte de Ri-beirão Preto/SP em 1978/79, e avaliar em que medida fatoresindicativos de nutrição intra-uterina (PIG e GIG) e excessode peso na infância são associados com SM.

Métodos: De 6827 nascidos de parto único hospita-lar em 1978/79 foram avaliados 2063 participantes aos 23/25anos para estabelecer a prevalência de SM na coorte adul-ta. Esta avaliação dos adultos jovens constou de coleta desangue, medidas antropométricas, aferição de pressão ar-terial e aplicação de questionários padronizados. Destes2063 sujeitos, 1138 tiveram informações coletadas em 3

DA SAÚDE PERINATAL À SAÚDE DO ADULTO JOVEM : ESTUDO DOS FATORES DE RISCOPARA A SÍNDROME METABÓLICA NA COORTE NASCIDA EM 1978/79 NOS HOSPITAIS DERIBEIRÃO PRETO, SP

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Virgínia Pavesi MiguelOrientadora: Profª. Drª. Jacqueline Pontes MonteiroDissertação de Mestrado apresentada em 25/11/2008

A obesidade pode ser definida como um distúrbiometabólico caracterizado por aumento da massa adiposa doorganismo que se reflete em aumento do peso corpóreo(OMS, 2004). Na adolescência, esta se associa ao apareci-mento precoce de doenças cardiovasculares, diabetes me-llitus tipo 2, problemas psicológicos, além de comprometer apostura, causar alterações no aparelho psicomotor entreoutros (Terres et al., 2006). A adolescência traz consigo algu-mas peculiaridades que podem fazer com que este seja umgrupo de risco para o excesso de peso, uma vez que aspráticas alimentares dessa faixa etária compreendem alta in-gestão de alimentos energéticos tais como fast foods, sal-gadinhos, doces e refrigerantes (Del Ciampo; Tomita, 2007)e baixa ingestão de frutas, vegetais e laticínios (Neumark-Sztalner et al., 1999). O presente estudo teve como objetivosdescrever e comparar o perfil nutricional de três grupos deadolescentes de mesma idade e gênero, com diagnóstico desobrepeso, obesidade e eutrofia determinado pelo Índice deMassa Corporal (IMC). Para avaliação do consumo alimen-tar, foi utilizado questionário semiquantitativo de frequên-cia alimentar, e as informações relativas aos hábitos associ-ados à alimentação foram coletadas por meio de um questi-onário. Foram avaliados 141 adolescentes, com idade entre10 e 19 anos, atendidos no Centro Médico Social Comunitá-rio Vila Lobato, cidade de Ribeirão Preto, São Paulo. Emrelação à antropometria, observou-se que houve diferençaestatística significante entre o IMC, peso, circunferência da

cintura e do braço, dobras cutâneas e composição corporalentre os grupos (p=0,000). A circunferência da cintura apre-sentou correlação estatisticamente significante com o IMC(0,947; p = 0,000), porcentagem de gordura corporal (0,757;p = 0,000 ), dobra cutânea triciptal (0,723; p = 0,000), dobracutânea subescapular ( 0,815; p = 0,000) e dobra cutâneasupra-ilíaca ( 0,841; P = 0,000). Entre os grupos não foi ob-servada diferença estatística significante em relação à in-gestão energética e à contribuição percentual de macronu-trientes, porém todos os grupos apresentaram percentuallipídico da dieta acima do recomendado. Além disso, nãohouve diferença estatística significante entre os três gru-pos para o consumo de micronutrientes. Quanto à análisequalitativa da dieta, observa-se em geral consumo frequen-te de arroz e feijão, pães, salgados, refrigerante, suco artifi-cial, café com açúcar e embutidos. As frutas mais consumidasforam laranja, maçã e banana, e os vegetais mais consumi-dos foram alface e tomate. No que se refere ao estilo de vida,observou-se que o tempo gasto em frente à televisão (p =0,018) foi maior entre os adolescentes obesos, o hábito defazer dieta (p = 0,023) e o menor número de refeições (p =0,014) foi mais prevalente entre os com sobrepeso e a pre-sença familiar de obesidade (p = 0,000) foi menos comumentre os eutróficos. Os nossos resultados mostram que ostrês grupos de adolescentes apresentaram semelhança emrelação ao padrão alimentar. Do ponto de vista qualitativo, opadrão alimentar de todos os adolescentes pesquisadosmostrou-se inadequado para a maioria dos grupos de ali-mentos. Os resultados referentes ao estilo de vida e presen-ça de obesidade na família mostram que, além do padrãoalimentar, estes devem ser considerados ao tratar obesida-de na adolescência.

9,8%; respectivamente). Em relação ao HDL colesterol bai-xo, as mulheres apresentaram maior porcentagem (44,4%)do que os homens (39,4%). O cálculo de tendência linearmostrou que o risco para SM aumentava conforme o au-mento da relação de peso para idade gestacional. Na análi-se não-ajustada recém-nascidos GIG apresentaram risco paraSM, associação esta que não se manteve com o ajuste pe-

las outras variáveis. Indivíduos do sexo masculino (OR 4,24),com excesso de peso na idade escolar (OR 2,81) e tabagistas(OR 3,03) tiveram um risco maior de SM.

Conclusões: A prevalência de SM foi elevada, con-siderando-se que a população é jovem. Ganho de peso naidade escolar mostrou-se associado a risco de SM, ao con-trário das condições de nascimento.

PERFIL NUTRICIONAL DE ADOLESCENTES EUTRÓFICOS, COM DIAGNÓSTICO DE SOBREPESOE OBESIDADE, ATENDIDOS NO CENTRO MÉDICO SOCIAL COMUNITÁRIO VILA LOBATO, RI-BEIRÃO PRETO (SP), BRASIL

IMPACTO DA SUPLEMENTAÇÃO MATERNA DE VITAMINA A DURANTE O PUERPÉRIO NO BINÔ-MIO MÃE-FILHO: ENSAIO CLÍNICO ALEATORIZADO DUPLO-CEGO PLACEBO-CONTROLADO

Thalia Manfrin MartinsOrientador: Prof. Dr. Ivan Savioli FerrazDissertação de Mestrado apresentada em 28/11/2008

Introdução: A deficiência de vitamina A (DVA) cons-titui grave problema de saúde pública em muitas regiões domundo, atingindo principalmente o grupo materno-infantil

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e aumentando a morbimortalidade na infância. A suplemen-tação materna pode ser uma estratégia eficaz no combateao problema.

Objetivos: Verificar o impacto da suplementaçãomaterna com vitamina A sobre a concentração de retinol doleite materno e do soro no binômio mãe-filho, além de esti-mar a prevalência da DVA neste grupo, verificar a associa-ção entre mãe e filho e a influência de alguns fatores envol-vidos na gênese da DVA.

Casuística e métodos: 33 puérperas receberam cáp-sulas com 200.000 UI de vitamina A entre o 20º e o 30º diaspós-parto (grupo suplementado) e 33 receberam cápsulasidênticas com óleo de soja (grupo placebo). Amostras desangue e leite maternos foram colhidas antes (T0) e após(T1) a intervenção (três meses pós-parto). Sangue doslactentes foi colhido aos três meses. O retinol foi analisadopelo método de HPLC. Concentrações inferiores a 0,70 µmol/l no soro e 1,05 µmol/l no leite foram indicativas de DVA.Peso e altura foram aferidos e dados sociodemográficos eclínicos foram obtidos através de entrevista.

Resultados: Concluíram a pesquisa 61 pares mãe-filho. Nas mães suplementadas, a concentração sérica deretinol aumentou de 1,05 ± 0,31 µmol/l no T0 para 1,17 ± 0,34µmol/l no T1 (p=0,026), mostrando diferença estatistica-mente significante em relação ao grupo placebo, cuja médiafoi 1,02 ± 0,28 µmol/l (p=0,032). No leite materno, houveredução significativa da concentração de retinol somente

no grupo que não recebeu a vitamina (1,98 ± 0,78 µmol/l noT0 e 1,34 ± 0,89 µmol/l no T1, p=0,003). Nos lactentes, nãohouve diferença estatística nas médias de retinol entre osgrupos (0,64 ± 0,30 µmol/l e 0,69 ± 0,26 µmol/l). Quanto àDVA materna sérica, encontrou-se 6,7% (T0) e 16,7% (T1)no grupo placebo e 6,5% (T0) e 3,2% (T1) no suplementado.DVA no leite materno foi observada em 7,4% (T0) e 55,6%(T1) das amostras do grupo placebo e 22,6% (T0) e 16,1%(T1) do suplementado. A DVA esteve presente em 66% doslactentes (69% no grupo placebo e 63,3% no suplementado).Apenas uma puérpera apresentou subnutrição e um lactenteapresentou risco nutricional. DVA materna associou-se àDVA no leite (p=0,015) e houve correlação positiva signifi-cante entre retinol sérico materno e do leite (r = 0,28;p=0,032). Não houve influência das variáveis paridade, es-colaridade, renda, uso de polivitamínico, febre e diarréia noretinol de puérperas e lactentes. O retinol sérico maternonão se alterou com o IMC, mas a idade das puérperas secorrelacionou positivamente com o retinol (r = 0,29; p=0,024).

Conclusões: A suplementação materna com 200.000UI de vitamina A mostrou impacto positivo na concentra-ção de retinol da mãe e do leite materno, porém não atingin-do o lactente. Apesar de a população estudada ter sidoconsiderada eutrófica em praticamente sua totalidade, ele-vada prevalência de DVA foi encontrada, principalmentenos lactentes de três meses de idade, questionando-se oponto de corte empregado para esta faixa etária.

realizou-se a validação transcultural dos instrumentos auto-avaliativos: Social Phobia Inventory (SPIN) e SelfStatements During Public Speaking Scale (SSPS -versãotraço e estado) e do instrumento hetero-avaliativo BriefSocial Phobia Scale (BSPS), com aprovação prévia dosautores das versões originais. O delineamento metodológicoenvolveu três etapas. Na primeira, a amostra utilizada paraavaliação dos instrumentos SPIN e SSPS foi composta por2314 estudantes universitários da população geral. Na se-gunda etapa, para a validação dos instrumentos SPIN, SSPSe BSPS, utilizou-se de uma amostra de 178 estudantes uni-versitários identificados como casos (N = 88) e não-casos(N = 90) de TAS, através da Entrevista Clínica Estruturadapara o DSM-IV (SCID-IV). Na terceira etapa, 45 estudantesuniversitários também classificados como casos (N = 24) enão-casos (N = 21) de TAS compuseram a amostra para

Flávia de Lima OsórioOrientadora: Profª. Drª. Sonia Regina LoureiroTese de Doutorado apresentada em 07/11/2008

O Transtorno de Ansiedade Social (TAS) é um dis-túrbio de início precoce, com prevalência e comorbidadessignificativas, favorecendo prejuízos importantes no fun-cionamento laboral, familiar, social e acadêmico, especial-mente em pessoas jovens. Dada tais características, faz-senecessária a identificação precoce e o diagnóstico precisodo TAS, o que requer instrumentos validados. Objetivou-se a avaliação sistemática do TAS, por meio de um conjun-to de instrumentos validados quanto às suas qualidadespsicométricas de fidedignidade e validade, em uma popula-ção de adultos jovens brasileiros, estudantes universitári-os, sob a perspectiva da auto e hetero-avaliação. Para tal,

SAÚDE MENTAL

TRANSTORNO DE ANSIEDADE SOCIAL : VALIDAÇÃO DE INSTRUMENTOS DE AVALIAÇÃO

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validação da SSPS-estado no contexto de um modelo expe-rimental de falar em público. O SPIN apresentou boa con-sistência interna ( α=0,63- 0,90), validade concorrente como Inventário de Ansiedade de Beck (BAI) (r = 0,10-0,63) eSSPS-traço (r = 0,22-0,65), validade discriminativa (sensibi-lidade =0,84, especificidade = 0,87) e validade de construto.A análise fatorial indicou a presença de um número variávelde fatores em função da amostra estudada. Destaca-se aversão reduzida deste instrumento, o Mini-SPIN, que tam-bém apresentou ótimos indicadores psicométricos (sensi-bilidade = 0,77, especificidade = 0,67). A SSPS-traço mos-trou-se bastante adequada quanto à consistência interna(α = 0,64-0,94), validade concorrente com o BAI (r = 0,18-0,53) e SPIN (r = 0,22-0,65) e validade discriminativa entrecasos e não-casos de TAS. A análise fatorial evidenciou apresença de dois fatores: auto-avaliação positiva e negati-va. A BSPS aplicada com o suporte de um roteiro de per-guntas-guia, apresentou excelentes confiabilidade inter-

avaliadores (0,86-1,00) e validade discriminativa (sensibili-dade = 0,84, especificidade = 0,83); adequadas consistên-cia interna (α = 0,48-0,88), validade concorrente com o BAI(r = 0,21-0,62), SPIN (r = 0,24-0,82) e SSPS-traço (r = 0,23-0,31) e validade de construto. A análise fatorial apontou apresença de seis fatores que explicam 71,8% da variânciados dados. A SSPS-estado mostrou-se apropriada para ava-liação dos aspectos cognitivos associados ao falar em pú-blico no contexto de um modelo experimental de simulaçãode falar em público, apresentando excelente validadediscriminativa entre casos e não-casos de TAS, além desensibilidade para discriminar os diferentes níveis de ansi-edade nas fases do procedimento. Todos os instrumentosmostraram boas qualidades psicométricas, o que recomen-da o uso na população de universitários brasileiros, po-dendo ser aplicados tanto em contextos experimentais comoclínicos, favorecendo a detecção mais precisa do TAS, es-pecialmente nos contextos de atenção primária à saúde.

semi-estruturada com os 10 cirurgiões dentistas que traba-lham na equipe de saúde bucal da ESF do município deRibeirão Preto.

As entrevistas gravadas e transcritas na íntegra. Parainterpretação dos dados nos baseamos na análise de con-teúdo preconizada por Bardin (1977). Com relação aos re-sultados da caracterização do sujeito, constatamos quetodos os CDs entrevistados egressaram da graduação hámais de 14 anos, com média de 24,4 anos de formação aca-dêmica. Com relação à idade, os profissionais, possuemmédia de 46,2 anos, a maioria é do sexo masculino e tambémcasado. Eles possuem uma média de tempo de trabalho naESF de 29,9 meses, todos os profissionais possuem especi-alização e somente um entrevistado não possui formaçãovoltada para a área de Saúde Pública. Da análise das entre-vistas realizadas com os cirurgiões dentistas da EstratégiaSaúde da Família emergiram dois temas principais: o traba-lho em equipe e as competências profissionais para o tra-balho na ESF.

Estes dois temas são de grande importância para ocirurgião dentista, para que este possa proporcionar umaelevação dos níveis de saúde da população, principalmen-te da saúde bucal.

Carolina Menez de Carvalho PintoOrientadora: Profª. Drª. Aldaísa Cassanho ForsterDissertação de Mestrado apresentada em 31/10/2008

A Saúde Bucal deve ser entendida como parte inte-grante e inseparável da saúde geral do indivíduo e que estárelacionada com as condições de saneamento; alimenta-ção; moradia; trabalho; educação; renda; transporte; lazer;liberdade; e acesso à terra, aos serviços de saúde e à infor-mação (Brasil, 1993). Um ator nesta história se torna primor-dial, o cirurgião dentista, responsável por proporcionarpadrões adequados de saúde bucal para o conjunto dapopulação de um país, de uma região, ou de uma localida-de; procurando formular estratégias e linhas de ação quepermitam a construção de uma saúde de base coletiva. Estainvestigação tem por objetivo analisar a percepção do ci-rurgião dentista da equipe de saúde Bucal (ESB) sobre aEstratégia Saúde da Família (ESF) e a Saúde Bucal; comenfoques no trabalho em equipe e nas suas competênciasna ESF.

Constitui-se em um estudo descritivo exploratóriocom abordagem qualitativa dos dados.

Para a coleta dos dados foi utilizada a entrevista

SAÚDE NA COMUNIDADE

TRABALHO EM EQUIPE E COMPETÊNCIA PROFISSIONAL NA ESTRATÉGIA SAÚDE DA FAMÍLIA:A PERCEPÇÃO DO CIRURGIÃO DENTISTA

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Silvia Tieko KasamaOrientador: Prof. Dr. Edson Zangiacomi MartinezDissertação de Mestrado apresentada em 07/11/2008

Introdução: os professores são profissionais comalto risco para disfonia. A intensa demanda vocal e a faltade conhecimento a respeito de cuidados com a própria vozsão aspectos comuns entre os professores. Experiênciasanteriores para orientar este profissional, com relação a suaprópria voz, demonstram sucesso e a opinião dos profes-sores, assim como a prática de novos hábitos são de gran-de importância. As Escolas Waldorf têm uma pedagogiabaseada na Antroposofia, sendo frequente o uso da vozfalada e cantada em suas atividades.

Objetivo: Propor uma ação de promoção de saúdevocal para professores, capaz de fornecer uma percepçãomais ampla, além da conscientização dos fatores que deter-minam ou interferem no processo saúde-doença da disfonia.

Método: 13 professores (2 do sexo masculino) de umaEscola Waldorf de Ribeirão Preto, com média de idade de 43anos (mín=24, máx=56), participaram das 3 etapas da pes-quisa, que compreendia uma avaliação inicial individual (eta-pa 1), o Programa de Saúde Vocal com duração de 12 encon-tros semanais (etapa 2) e uma reavaliação individual após o

término dos encontros (etapa 3). Houve a participação de 5professores do ensino infantil, 6 do fundamental e 2 do mé-dio. O programa abordou anatomia e fisiologia da fonação,higiene vocal e exercícios de aquecimento e desaquecimentovocal. Logo após o término dos encontros, os professorespreencheram um questionário de avaliação do programa.

Resultados: a comparação dos dados coletados nasavaliações individuais pré e pós-intervenção não revela-ram mudanças significativas, porém tiveram a função demonitoramento do aspecto vocal dos professores. De acor-do com os professores, o aspecto negativo do processo foia falta de tempo para comparecer aos encontros e para rea-lizar os exercícios diariamente. As mudanças citadas comomais importantes foram aspectos gerais de higiene vocal(destacando-se a hidratação), respiração, efeitos benéfi-cos dos exercícios, atenção para a própria voz e dos alunose o reconhecimento da importância da voz.

Conclusão: a ação de promoção de saúde propostaobteve grandes êxitos em ampliar a percepção e conscientizaros professores a respeito dos fatores que atuam de maneirafavorável ou prejudicial à voz. O resultado foi muito favore-cido pelo espaço criado para reflexão, troca de experiênciase vivências de situações proporcionadas pelo Programa deSaúde Vocal.

PROGRAMA DE SAÚDE VOCAL PARA PROFESSORES: ESTUDO EM UMA ESCOLA PARTICU-LAR DE RIBEIRÃO PRETO

Ana Teresa Mancini PimentaOrientador: Prof. Dr. Antonio Luiz Rodrigues-JúniorDissertação de Mestrado apresentada em 14/11/2008

Foi desenvolvido um estudo ecológico com o obje-tivo de descrever a incidência da co-morbidade aids/ tuber-culose no Estado de São Paulo, no período de 1996 a 2005,segundo sua distribuição espacial. A base territorial utiliza-da foram os 645 municípios do Estado, agrupados em 63microrregiões de acordo com a divisão do IBGE; os coefici-entes de incidência de aids e da co-morbidade aids/ tuber-culose foram empregados como medidas das doenças. OIDH e seus componentes IDH-L, IDH-E e IDH-R foram cal-culados para cada microrregião como indicadores de de-senvolvimento humano das populações. No período estu-dado, foram notificados 81.841 casos de aids; 16.759 casosde co-morbidade aids/ tuberculose com uma taxa de ataquede 21,60% e 733 casos suspeitos de tuberculose. Obser-vou-se que 65,49% dos casos de aids notificados eram dosexo masculino; a faixa etária em que ocorreu a maior pro-porção (61,46%) do número de notificações foi entre 25 e

39; houve maior proporção de transmissão heterossexual(52,81%); quanto à escolaridade, a maioria dos casos(53,42%) apresentou entre 1 e 7 anos; as microrregiões comos maiores coeficientes de incidência (casos por 100.000habitantes acima de 14 anos) foram Ribeirão Preto (490,41),Barretos (489,42), São José do Rio Preto (464,08), Santos(459,22) e Caraguatatuba (402,84). Dos casos notificadoscom a co-morbidade, 73,92% eram do sexo masculino; pes-soas com idade entre 25 e 44 anos foram as mais acometi-das (77,09%); 57,10% apresentavam escolaridade entre 1 e7 anos; as microrregiões com os maiores coeficientes deincidência (casos por 100.000 habitantes acima de 14 anos)foram Santos (136,35) Caraguatatuba (88,67) São Paulo(87,45), São José dos Campos (72,64) e Ribeirão Preto (70,97).A microrregião de São Paulo (0,835) apresentou o maiorvalor de IDH; Nhandeara (0,843) o maior IDH-L; São Josédos Campos (0,897) o maior IDH-E; São Paulo (0,835) omaior IDH-R; as microrregiões ao sul/ sudoeste do Estadoapresentaram os menores valores do IDH e de seus compo-nentes. O padrão de distribuição espacial da aids e da co-morbidade aids/ tuberculose foram diferentes do padrãodo IDH e seus componentes.

GEOEPIDEMIOLOGIA DA CO-MORBIDADE AIDS/ TUBERCULOSE NO ESTADO DE SÃO PAULO,BRASIL - DE 1996 A 2005

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Thaise Lucena SilvaOrientador:a Profª. Drª. Amábile Rodrigues Xavier MançoDissertação de Mestrado apresentada em 27/11/2008

O envelhecimento populacional presente na maioriados países na atualidade inclusive no Brasil, tem sido asso-ciado ao aumento das quedas que estão se tornando cadavez mais frequentes e sendo consideradas como um impor-tante problema de saúde pública. O presente estudo reali-zado na Associação dos Aposentados de Catanduva e Re-gião tiveram como objetivo estudar as alterações de equilí-brio e marcha em idosos e as associações com quedas.Foram pesquisados 200 idosos de ambos os sexos, comidade igual e superior a 60 anos. O método utilizado foi umaentrevista contendo perguntas abertas e fechadas, e paraavaliação cognitiva foi aplicado o mini-exame do estadomental (MEEM) e a escala de avaliação de desempenhofísico de membros inferiores (SPPB), com o intuito de ava-

liar o equilíbrio, marcha e a força destes membros. Para aanálise dos dados foi utilizado o procedimento GENMODdo programa computacional SAS versão nove, sendo con-siderado um nível de significância de 5% ao testar hipóte-ses e um intervalo de confiança de 95%%. Os resultadosmostraram que 51% dos idosos sofreram quedas nos últi-mos 6 meses, os fatores de risco encontrados como signifi-cantes foram: idade de 70 a 74anos (p=0,04) e de 75 a 79anos(p ≤ 0,01), residir sozinho (p ≤ 0,01), não possuir compa-nheira (p=0,01), uso de medicamentos (p= 0,05), número demedicamentos de 3 a 4 (p= 0,04) e 5 ou mais (p=0,01), pre-sença de fraqueza muscular (p ≤ 0,01), largura dos passospequenos (p=0,08), assimetria da marcha p=(0,09), presen-ça de problemas nos pés (p=0,07), uso de aparelho de audi-ção (p ≤ 0,01). Os resultados indicam a importância de umaequipe multidisciplinar, como medidas preventivas, visan-do diminuir as quedas possibilitando uma melhora das ati-vidades básicas da vida diária (ABVDs), dessa forma tor-nando o idoso mais independente.

ALTERAÇÃO DO EQUILÍBRIO E MARCHA EM IDOSOS E OCORRÊNCIA DE QUEDAS

meiras, médicos e dentistas). As concepções de velhicevariaram em função da formação, idade e experiência devida dos entrevistados, sendo apresentadas como: fase desabedoria e experiência de vida; evolução natural do corpohumano; estado de espírito; fase que se assemelha ao mun-do infantil; fase de decadência ou solidão; e melhor idade.Há a compreensão por parte dos profissionais entrevista-dos, de que a velhice é um conjunto bio-psico-social-espi-ritual, sendo manifestadas pelos mesmos as dificuldadesencontradas em prestar uma assistência de qualidade nes-te cenário tão complexo. Demonstraram também, os seussentimentos (medo e ansiedade) frente ao próprio proces-so de envelhecimento, como consequência da cultura e dasociedade em que vivem, onde ser idoso é visto de formanegativa. As concepções sobre idoso, velhice e envelheci-mento, apresentadas pelos entrevistados, indicam a dimen-são do quanto esses profissionais encontram-se despre-parados para enfrentar o grande desafio de melhorar o aten-dimento oferecido pelo serviço de saúde, principalmente,em se levando em consideração o aumento acentuado donúmero de idosos neste país.

Angélica Maria Jabur BimbatoOrientador: Prof. Dr. Antônio Carlos Duarte de CarvalhoDissertação de Mestrado apresentada em 28/11/2008

Diversas mudanças têm ocorrido no perfil demográ-fico do Brasil, passando o envelhecimento populacional aser uma realidade e não mais uma expectativa. Muitos sãoos mitos, conceitos e concepções sobre idoso, velhice eenvelhecimento existentes em nossa sociedade, assim comomeios legais que regem sobre os direitos e deveres da pes-soa idosa (Programa Nacional de Saúde do Idoso, Estatutodo Idoso e Pacto pela Vida 2006). Objetivando analisar asrepresentações de velhice presentes entre os profissionaisque atuam nos Núcleos de Saúde da Família I, III, IV e V doCentro de Saúde Escola da Faculdade de Medicina de Ri-beirão Preto - Universidade de São Paulo (CSE – FMRP/USP) e as possíveis implicações para o serviço de saúde,realizamos este estudo, utilizando-se da abordagem quali-tativa por meio de entrevistas semi-estruturadas, com de-zenove profissionais que atuam nesses Núcleos (agentescomunitários de saúde, auxiliares de enfermagem, enfer-

A REPRESENTAÇÃO DE VELHICE ENTRE OS PROFISSIONAIS QUE ATUAM NOS NÚCLEOSDE SAÚDE DA FAMÍLIA

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Marilia Alessi Guena de CamargoOrientadora: Profª. Drª. Daniela Saes SartorelliDissertação de Mestrado apresentada em 08/12/2008

Objetivos: Identificar fatores associados ao alcan-ce das metas de um programa de intervenção no estilo devida em Nipo-Brasileiros de Bauru, SP.

Metodologia: Os fatores associados ao alcance dasmetas (perda de peso de 5%, prática de 150 minutos deatividades físicas semanal, consumo alimentar com teor degordura saturada inferior a 10% das calorias totais, consu-mo diário de 400g de frutas, verduras e legumes), após 12meses de intervenção foram investigados em modelos deregressão logística ajustados. As avaliações do estilo devida e perfil de saúde foram conduzidas no início do estudoe após 12 meses de seguimento.

Resultados: No total, 458 nipo-brasileiros, 56% dosexo feminino, 84% de 2ª geração, idade média (DP) de 60(11) anos foram analisados. Foram incluídos nos modelosmúltiplos para cada desfecho investigado os indivíduoscom excesso de peso (n=329), que reportaram não terem ohábito da prática de 150 minutos de atividades físicas se-manal (n=278), consumo alimentar com teores de gordurasaturada superior a 10% das calorias totais (n=107) e con-

sumo diário inferior a 400g de frutas, verduras e legumes(n=265). Após 12 meses, 11% dos indivíduos com excessode peso alcançaram a meta de perda de peso, 24, 55 e 16%dos participantes alcançaram as metas de prática de ati-vidades físicas, teor da dieta de gordura saturada e consu-mo de frutas, verduras e legumes, respectivamente. Apósajuste por variáveis de confusão, maior razão de chance[OR (95%)] para o alcance da meta de perda de peso foiverificada entre mulheres [2,4 (1,3; 4,5)], e menor razão dechance entre portadores de diabetes, hipertensão edislipidemia [0,4 (0,1; 0,8)] e indivíduos classificados emestágio de mudança de pré-contemplação / contemplaçãopara redução do consumo de carnes vermelhas [0,4 (0,2;0,9)]. Os participantes de 2ª geração apresentam menor ra-zão de chance para o alcance da meta do consumo de fru-tas, verduras e legumes [0,3 (0,1; 0,9)]. Nenhuma associa-ção foi verificada para as metas da prática de atividadesfísicas e de gordura saturada.

Conclusões: Entre os Nipo-Brasileiros, as estratégiasdo programa de intervenção no estilo de vida foram maiseficientes no alcance das metas entre as mulheres, indivíduosde 1ª geração, não portadores de morbidades e participan-tes classificados nos estágios de mudança de ação/manu-tenção para a redução do consumo de carnes vermelhas.

FATORES PREDITORES DO ALCANCE DAS METAS DO PROGRAMA DE INTERVENÇÃO NO ES-TILO DE VIDA EM NIPO-BRASILEIROS DE BAURU - SP

grupos de 30 voluntários cada, sendo que um grupo rece-beu tratamento fisioterápico e odontológico e o outro rece-beu apenas o tratamento odontológico. A medida da quali-dade de vida foi obtida pelo questionário genérico SF-36Medical Outcome Study-Mos Short From Health Survey,em duas ocasiões: uma no início do tratamento e outra nofinal. Os resultados mostram que os pacientes que fizeramum tratamento interdisciplinar apresentaram escores maiselevados em todos os domínios do questionário: capacida-de funcional, limitação por aspectos físicos, dor, estadogeral de saúde, vitalidade, aspectos sociais, aspectos emo-cionais e saúde mental. No grupo que recebeu tratamentoapenas odontológico, verificou-se melhora apenas no do-mínio relacionado a dor. O questionário SF-36 foi um instru-mento adequado, de aplicação relativamente rápida e defácil uso para avaliação da qualidade de vida em pacientescom DTM. Sendo assim os resultados apontam para a im-portância do trabalho multidisciplinar e as contribuiçõesque a fisioterapia pode oferecer a fim de proporcionar umamelhor qualidade de vida em pacientes com DTM.

Maíra de Oliveira VianaOrientador: Prof. Dr. Jair Lício Ferreira SantosDissertação de Mestrado apresentada em15/12/2008

A disfunção temporomandibular (DTM) é respon-sável por uma sintomatologia de difícil diagnóstico e trata-mento, estando cada vez mais presente em um número con-siderável de indivíduos, trazendo prejuízos nas atividadesdiárias, no sono e na alimentação, o que resulta em impactonegativo na qualidade de vida do paciente. A fisioterapiautiliza inúmeros recursos com a finalidade normalizar a fun-ção do sistema estomatognático e proporcionar uma me-lhora na qualidade de vida desses indivíduos. O objetivogeral da pesquisa foi avaliar a influência da fisioterapia namelhoria dos sintomas e na qualidade de vida sob a pers-pectiva de pacientes portadores de DTM. O estudo foi re-alizado com 60 pacientes de ambos os sexos, com idadevariando entre 18 a 70 anos com diagnóstico de DTM aten-didos na clínica da Faculdade de Odontologia de RibeirãoPreto (FORP-USP). Os pacientes foram divididos em dois

A INFLUÊNCIA DA FISIOTERAPIA NA PROMOÇÃO DA QUALIDADE DE VIDA EM PACIENTESCOM DISFUNÇÃO TEMPOROMANDIBULAR

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RESUMOS DE DISSERTAÇÕES DE MESTRADO E TESES DE …revista.fmrp.usp.br/2009/vol42n1/teses_4%BAtrim_08.pdf · ponentes dos rafts, tais como: a LAT e os gangliosídeos derivados do