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UNIVERSIDADE FEDERAL DE PERNAMBUCO CENTRO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE DEPARTAMENTO DE CIÊNCIAS FARMACÊUTICAS PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM CIÊNCIAS FARMACÊUTICAS TEORES DE TANINOS E FLAVONÓIDES EM PLANTAS MEDICINAIS DA CAATINGA: AVALIANDO ESTRATÉGIAS DE BIOPROSPECÇÃO CLARISSA FERNANDA DE QUEIROZ SIQUEIRA RECIFE, 2011

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UNIVERSIDADE FEDERAL DE PERNAMBUCO

CENTRO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE

DEPARTAMENTO DE CIÊNCIAS FARMACÊUTICAS

PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM CIÊNCIAS FARMACÊUTICAS

TEORES DE TANINOS E FLAVONÓIDES EM PLANTAS MEDICINA IS

DA CAATINGA: AVALIANDO ESTRATÉGIAS DE BIOPROSPECÇÃO

CLARISSA FERNANDA DE QUEIROZ SIQUEIRA

RECIFE, 2011

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UNIVERSIDADE FEDERAL DE PERNAMBUCO

CENTRO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE

DEPARTAMENTO DE CIÊNCIAS FARMACÊUTICAS

PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM CIÊNCIAS FARMACÊUTICAS

TEORES DE TANINOS E FLAVONÓIDES EM PLANTAS MEDICINA IS

DA CAATINGA: AVALIANDO ESTRATÉGIAS DE BIOPROSPECÇÃO

CLARISSA FERNANDA DE QUEIROZ SIQUEIRA

Dissertação de mestrado apresentada ao Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas do Centro de Ciências da Saúde da Universidade Federal de Pernambuco. Área de atuação: Obtenção e avaliação de produtos naturais e bioativos

ORIENTADOR: Prof. Dr. Ulysses Paulino de Albuquerque

CO-ORIENTADORA: Profa. Dra. Elba Lúcia Cavalcanti de Amorim

RECIFE, 2011

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Siqueira, Clarissa Fernanda de Queiroz

Teores de tatinos e flavonóides em plantas medicinais da caatinga: avaliando estratégias de bioprospecção / Clarissa Fernanda de Queiroz Siqueira. – Recife: O Autor, 2011.

68 folhas: il., fig.; 30 cm.

Orientador: Ulysses Paulino de Albuquerque. Dissertação (mestrado) – Universidade Federal

de Pernambuco. CCS. Ciências Farmacêuticas, 2011.

Inclui bibliografia.

1. Compostos fenólicos. 2. Fitoquímica. 3.

Etnofarmacologia. I. Albuquerque, Ulysses Paulino de.

II.Título.

UFPE 615.32 CDD (20.ed.) CCS2011-160

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UNIVERSIDADE FEDERAL DE PERNAMBUCO

MEMBROS DA BANCA

____________________________________

Prof. Dr. Ulysses Paulino de Albuquerque - UFRPE

Presidente

____________________________________

Dr. Joabe Gomes de Melo - UFRPE

Membro titular

____________________________________

Profa. Dra. Cecília de Fátima Castelo Branco Rangel de Almeida - CESVASF

Membro titular

____________________________________

Profa. Dra. Ivone Antonia de Souza - UFPE

Suplente Membro Interno

____________________________________

Dra. Viviany Teixeira do Nascimento - UFRPE

Suplente Membro Externo

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UNIVERSIDADE FEDERAL DE PERNAMBUCO

Reitor

Amaro Henrique Pessoa Lins

Vice-reitor

Gilson Edmar Gonçalves e Silva

Pro-reitoria para assuntos de Pesquisas e Pós-Graduação

Anísio Brasileiro de Freitas Dourado

Diretor do Centro de Ciências da Saúde

José Thadeu Pinheiro

Vice- Diretor do Centro de Ciências da Saúde

Márcio Antônio de Andrade Coelho Gueiros

Chefe do Departamento de Ciências Farmacêuticas

Antônio Rodolfo de Faria

Vice-Chefe do Departamento Ciências Farmacêuticas

Dalci José Brondani

Coordenador do Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas

Nereide Stela Santos Magalhães

Vice-Coordenadora do Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas

Ana Cristina Lima Leite

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DEDICATÓRIA

Dedico este trabalho as pessoas que foram

fundamentais para a sua realização. Aos meus

pais, Valdemir e Silvanete Siqueira, que sempre

me apoiaram e deram forças para continuar

crescendo profissionalmente, ao meu irmão Felipe

Siqueira pelo apoio, a Joel, meu companheiro

sempre fiel, compreensivo e presente em todos os

momentos de dificuldade e aos meus sogros Joel

Torquato e Maria Da Paz pelo incentivo.

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AGRADECIMENTOS

Agradeço primeiramente a Deus, que me deu força para a realização deste trabalho e me

iluminou nos momentos mais difíceis.

Ao meu orientador Prof. Ulysses Paulino de Albuquerque, que sempre foi muito presente,

atencioso e compreensivo, me dando o prestígio de ser sua orientanda e a oportunidade de

adquirir mais conhecimento.

A minha co-orientadora Prof. Elba Lúcia Cavalcanti de Amorim pelo espaço cedido para

realização do meu trabalho e pelos ensinamentos.

À Universidade Federal de Pernambuco, mais especifiamente ao Programa de Pós-

Graduação em Ciências Farmacêuticas por ter me dado esta oportunidade.

Ao Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) pela

concessão da bolsa.

A toda a Comunidade do Carão pela receptividade, auxílio e exemplo de vida.

Aos meus grandes companheiros do Laboratório de Produtos Naturais Camila, Elvis,

Dani Sena, Dani Lima, Jenifer, Tassia e Ariane pelas palavras amigas e incentivadoras e

principalmente a Dani Cabral, Tadeu e Valerium no auxílio da realização das

quantificações.

Aos colegas do Laboratório de Etnobotânica Aplicada Washington, Fábio, Nelson e Joabe

pela ajuda na coleta do material vegetal e principalmente a Thiago pelo seu auxílio na

analise estatística.

Muito obrigada!!!!

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EPÍGRAFE

“A alegria está na luta, na tentativa,

no sofrimento envolvido e não na

vitória propriamente dita.”

(Mahatma Gandhi)

“Sonho que se sonha só é só um sonho

que se sonha só mas sonho que se

sonha junto é realidade”

(Raul Seixas)

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SUMÁRIO

Lista de tabelas

Resumo

Abstract

1. Introdução 12

2. Revisão de Literatura 16

2.1 Plantas Medicinais da Caatinta 17

2.2 Compostos Polifenólicos 18

2.3 Taninos 19

2.3.1 Generalidades e características químicas dos taninos 19

2.3.2 Determinação do teor de taninos 21

2.3.3 Atividade biológica dos taninos 23

2.4 Flavonóides 25

2.4.1 Gerenalidades e características químicas dos flavonóides 25

2.4.2 Determinação do teor de flavonóides 28

2.4.3 Atividade biológica dos flavonóides 29

3. Referências 33

4. Artigo: Teores de Taninos e Flavonóides em plantas medicinais 43

da Caatinga: avaliando estratégias de Bioprospecção

4.1 Introdução 44

4.2 Material e Métodos 46

4.3 Resultados e Discussão 51

4.4 Agradecimentos 54

4.5 Referências 55

5. Conclusão 67

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LISTA DE TABELAS

Tabela 1 - Plantas medicinais selecionadas a partir de um levantamento etnobotânico realizado na vegetação da Caatinga no estado de Pernambuco, Nordeste do Brasil.

64

Tabela 2 - Plantas medicinais analisadas com seus teores de Taninos (T) e Flavonóides (F) em amostra seca obtida a partir de um levantamento etnobotânico realizado na vegetação da Caatinga no estado de Pernambuco, Nordeste do Brasil.

65

Tabela 3 - Comparação entre a quantidade de Taninos e Flavonóides, de plantas medicinais selecionadas por estratégia etnodirigida na vegetação da Caatinga no estado de Pernambuco, Nordeste do Brasil.

66

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RESUMO

Ainda existem poucos estudos que permitam uma visão mais ampla da grande diversidade de espécies da Caatinga utilizadas na medicina popular. Dentre os bioativos destas plantas características da vegetação Caatinga que são utilizadas para fins terapêuticos estão os polifenóis, mais precisamente os taninos e os flavonóides. Esses compostos que servem de mecanismo de defesa para as plantas contra patógenos e herbívoros, exibem uma vasta gama de propriedades farmacológicas. Portanto, avaliou-se a relação entre os teores destes compostos fenólicos (taninos e flavonóides) com três grupos de indicações terapêuticas de plantas usadas popularmente na Caatinga: antimicrobiana, antidiabética e antidiarréica. Assim, a presente proposta foi baseada em uma pergunta norteadora: o teor de compostos fenólicos (taninos e flavonóides) guarda relação com grupos de plantas indicadas popularmente para afecções relacionadas com a atividade desses compostos? A seleção das plantas foi baseada em um levantamento etnobotânico realizado na comunidade do Carão, localizada no município de Altinho que fica a 163,1 km do Recife. Após secagem à temperatura ambiente, o material foi triturado e devidamente armazenado. Para doseamento dos taninos foi utilizada a técnica de Difusão Radial, e para quantificação de Flavonóides totais foi utilizado um ensaio baseado na complexação dos flavonóides em cloreto de alumínio. Foi observado que houve uma maior ocorrência de compostos tânicos no grupo das plantas indicadas como antimicrobianas podendo esta indicação terapêutica motivar pesquisas futuras por apresentar uma possível relação com este composto.

Palavras chave: Compostos fenólicos, fitoquímica, etnofarmacologia.

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ABSTRACT

Although there are few studies that allow a broader view of the great diversity of species of Caatinga used in folk medicine. Among these bioactive plant Caatinga vegetation characteristics that are used for therapeutic purposes are the polyphenols, specifically the tannins and flavonoids. These compounds serve as a defense mechanism for plants against pathogens and herbivores exhibit a wide range of pharmacological properties. Therefore, we evaluated the relationship between the levels of these phenolic compounds (tannins and flavonoids) and three groups of indications of plants popularly used in the Caatinga: antimicrobial, antidiabetic and antidiarrheal. Thus, this proposal was based on a guiding question: the content of phenolic compounds (tannins and flavonoids) is related groups of plants commonly indicated for conditions related to the activity of these compounds? The plant selection was based on an ethnobotanical survey conducted in the community of Man, located in the city of Altinho which is 163.1 km from Recife. After drying at room temperature, the material was crushed and stored properly. For assay of tannins we used the technique of radial diffusion, and quantification of total flavonoids was used a test based on the complexation of flavonoids in aluminum. It was observed that there was a higher occurrence of tannin compounds in the group of plants indicated as antimicrobial therapeutic indication this may motivate future research by presenting a possible relationship with this compound.

Keywords: Phenolic compounds, phytochemistry, ethnopharmacology.

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12 SIQUEIRA, C. F. de Q. Teores de taninos e flavonóides em plantas medicinais da Caatinga: Avaliando estratégias de bioprospecção

1. INTRODUÇÃO

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13 SIQUEIRA, C. F. de Q. Teores de taninos e flavonóides em plantas medicinais da Caatinga: Avaliando estratégias de bioprospecção

1. Introdução

O saber sobre plantas medicinais de diversas comunidades e grupos étnicos é muito

antigo, e por ser muitas vezes o único recurso terapêutico que possuem, até hoje vêm se

refletindo principalmente nas regiões mais carentes do país, como é o caso do Nordeste do

Brasil. Através da comercialização de plantas medicinais em feiras livres e mercados

populares e do cultivo em quintais residenciais, os efeitos benéficos dessas plantas são

divulgados e dessa forma há um aumento no seu consumo pela população (Maciel et al.,

2002).

Diversas são as espécies de plantas utilizadas no semiárido brasileiro para fins

terapêuticos, as quais desempenham um papel importante nas comunidades tradicionais

(Albuquerque et al., 2007). Na Caatinga (semiárido), vegetação natural que consiste de flora

tropical seca, que se caracteriza pela presença de espécies xerófitas e decíduas, ainda existe

poucos estudos que permitam uma visão mais ampla da grande diversidade destas espécies

(Albuquerque & Andrade, 2002; Monteiro et al., 2006 e Albuquerque et al., 2007).

Dentre as espécies largamente conhecidas da Caatinga e utilizadas na medicina

popular como também para a produção comercial de produtos fitoterápicos, Albuquerque et

al. (2007) aponta Myracrodruon urundeuva Allemão, com propriedades antiinflamatórias,

adstringentes, antialérgicas, antireumáticas e antiulcerogênicas (Nunes et al., 2008);

Amburana cearensis (Allemão) AC Smith, com atividade broncodilatadora, antimalárica,

antiprotozoária, antifúngica e antibacteriana (Morais et al., 2005); Erythrina velutina Willd.

com atividade sedativa, antimicrobiana, espasmolítica, antimuscarínica, depressora do

Sistema Nervoso Central e ansiolítica (Virtuoso et al., 2005; Ribeiro et al., 2006 e Centenaro

et al., 2009); Anadenanthera colubrina (Vell.) Brenan var. cebil (Griseb) Altschul com

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14 SIQUEIRA, C. F. de Q. Teores de taninos e flavonóides em plantas medicinais da Caatinga: Avaliando estratégias de bioprospecção atividade antitumoral (Moretão et al., 2003 e Moretão et al., 2004 ), e Sideroxylon

obtusifolium (Roem. & Schult.) T. D. Penn como antioxidante (Desmarchelier et al., 1999).

Os metabólitos vegetais que possuem grupamento fenólico em sua estrutura

apresentam um grande potencial farmacológico (Macedo et al., 2007). Esse é representado

por atividades como antimicrobiana (Amarowicz, et al., 2008; Hayet et al., 2008 e Tian et al.,

2009), hipoglicêmica e/ou antidiabética (Nomura et al., 2008; Aslan et al., 2006; Sharma et

al., 2008; Muthusamy et al., 2008; Klein et al., 2007 e Jung et al., 2006) e antidiarréica

(Venkatesan et al., 2005; Nwafor & Bassey, 2007; Mbagwu & Adeyemi, 2008 e Amabeoku,

2009).

Além das atividades farmacológicas citadas, compostos fenólicos, como taninos e

flavonóides, exibem propriedades antialérgicas, anti-ateroscleroses, antiinflamatórias,

antioxidantes, antitrombóticas, cardioprotetoras e vasodilatadoras (Falleh et al., 2008). Os

polifenóis são responsáveis por diminuir a mortalidade por estas doenças, cujo mecanismo

está relacionado com a sua propriedade antioxidante, regulando a quantidade de radicais

livres, bem como a de oxigênios reativos no organismo (Moller et al., 2009).

Estudos realizados com plantas medicinais da Caatinga demonstram que os

compostos fenólicos estão presentes em várias espécies, levando a crer que muitas atividades

terapêuticas popularmente atribuídas se devam a presença desses compostos (Almeida, et al.,

2005; Monteiro et al., 2006; Araújo et al., 2008 e Alencar et al., 2009).

Diante da problemática, a partir de um levantamento etnobotânico realizado em uma

comunidade da Caatinga no estado de Pernambuco, pretendeu-se estabelecer uma relação

quantitativa entre os teores de taninos e flavonóides e as espécies citadas para determinados

fins terapêuticos.

Para tanto, partiu-se da premissa que os teores desses compostos estariam

relacionados com grupos de indicações terapêuticas que fossem comuns a taninos e

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15 SIQUEIRA, C. F. de Q. Teores de taninos e flavonóides em plantas medicinais da Caatinga: Avaliando estratégias de bioprospecção flavonóides. Neste sentido, caso essa tendência se confirme, será possível predizer ou

direcionar estudos de bioprospecção para plantas medicinais da região.

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16 SIQUEIRA, C. F. de Q. Teores de taninos e flavonóides em plantas medicinais da Caatinga: Avaliando estratégias de bioprospecção

2. Revisão de Literatura

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17 SIQUEIRA, C. F. de Q. Teores de taninos e flavonóides em plantas medicinais da Caatinga: Avaliando estratégias de bioprospecção

2. Revisão de Literatura

2.1 Plantas medicinais da Caatinga

O uso popular de plantas medicinais pela humanidade vem acontecendo desde os

primórdios da civilização, sendo fundamentado no acúmulo de informações repassadas

oralmente através de sucessivas gerações (Franco & Barros, 2006). O conhecimento

tradicional sobre as mesmas é bastante difundido na população economicamente carente do

Nordeste do Brasil para a cura de suas diversas doenças (Matos et al., 2002).

Pesquisas recentes demonstram cada vez mais que existem diversas espécies de

plantas medicinais conhecidas na região da Caatinga do Nordeste brasileiro, refutando a idéia

de que esta região possui poucos recursos naturais, entretanto, muitas destas plantas ainda

não foram estudadas quanto à sua eficácia terapêutica (Desmachellier et al., 1999; Silva et al,

2006; Monteiro et al., 2006; Albuquerque et al., 2007; Araújo et al., 2008 e Silva et al.,

2009).

Ao longo dos séculos, plantas medicinais constituíram a base para tratamento de

diferentes doenças, mas na região da Caatinga, as afecções relacionadas ao sistema digestivo,

respiratório e geniturinário foram as que obtiveram, respectivamente, os maiores números de

citações de espécies referentes a tais doenças podendo ser provavelmente pelo fato de

estarem ligadas a problemas de saúde primários que muitas vezes podem ser facilmente e

eficazmente tratados com espécies medicinais (Albuquerque et al. 2007).

Dentre as plantas nativas da Caatinga que apresentam potenciais para estudos

farmacológicos e fitoquímicos, Albuquerque e colaboradores (2007) apontam Amburana

cearensis (Allemão) AC Smith, conhecida popularmente como imburana-de-cheiro, que é

indicada para cólica, diarréia, problemas intestinais, bronquite, sinusite, asma; Cereus

jamacaru DC., que é o mandacaru, utilizado para problemas respiratórios, hepáticos, úlceras,

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18 SIQUEIRA, C. F. de Q. Teores de taninos e flavonóides em plantas medicinais da Caatinga: Avaliando estratégias de bioprospecção constipação, hipertensão; Bauhinia cheilantha (Bong.) Steud o chamado mororó, indicado

para diabetes, asma, inflamação em geral, reumatismo, calmante; Libidibia ferrea (Mart. ex

Tul.) L. P. Queiroz (Caesalpinia ferrea Mart.), popularmente conhecida por jucá, sendo

indicada para bronquite, anemia, problemas renais, inflamações em geral, estresse, fadiga;

Caesalpinia pyramidalis Tul., a catingueira rasteira, utilizada para infecções respiratórias,

asma, gastrite, cólica, febre; Capparis jacobinae Moric. ex Eichler, o icó-preto ou icó-

verdadeiro, utilizada para problemas digestivos, doenças de pele, intoxicação, febre, diabetes;

Operculina spp., a chamada batata-de-purga, que entre suas diversas indicações são

utilizadas para asma, problemas cardiovasculares, laxativa, reumatismo; Cnidoscolus

phyllacanthus (Müll. Arg.) Pax & L. Hoffm., a urtiga branca, indicada para hemorróidas,

problemas renais, inflamações ovarianas, problemas de pele; Ziziphus joazeiro Mart. para

asma, pneumonia, tuberculose, inflamação, indigestão e Sideroxylon obtusifolium (Humb. ex

Roem. & Schult.) T.D. Penn., que é a quixaba, indicada para dores em geral, úlceras,

inflamação ovariana, cólica, diabetes e problemas renais.

As comunidades tradicionais possuem uma bagagem de grande valor sobre estas

plantas, porém este conhecimento vem sendo perdido com o tempo, quer devido à falta de

estudos e à influência direta da medicina ocidental moderna como aponta Franco & Barros

(2006) ou pela ausência de técnicas de manejo sustentável para seu uso, reduzindo

drasticamente a população de plantas como Schinopsis brasiliensis Engl., Myracroduon

urundeuva (Allemão) Fr. All. e Tabebuia aurea (Silva Manso) Benth. & Hook. f ex S. Moore)

(Silva & Albuquerque, 2005 e Almeida et al., 2005).

2.2 Compostos polifenólicos

Os compostos fenólicos, constituintes de um amplo e complexo grupo fitoquímico,

são produtos secundários do metabolismo vegetal que apresentam em sua estrutura um anel

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19 SIQUEIRA, C. F. de Q. Teores de taninos e flavonóides em plantas medicinais da Caatinga: Avaliando estratégias de bioprospecção aromático com uma ou mais hidroxilas, o que possibilita atuarem como agentes redutores,

exercendo proteção ao organismo contra o “stress” oxidativo (Melo et al., 2006). Ácidos

fenólicos, flavonóides e taninos são considerados os principais compostos fenólicos presentes

na dieta humana, exibindo na maioria das vezes propriedades farmacológicas (Moller et al.,

2009).

O consumo regular de polifenóis antioxidantes tem um efeito positivo no tratamento e

na prevenção de uma série de doenças, incluindo câncer, acidente vascular cerebral, doença

cardíaca coronária e doenças neurodegenerativas, como a doença de Alzheimer,

caracterizadas por danos oxidativos nas macromoléculas celulares, com consequente indução

de toxicidade e morte celular (Bonfili et al., 2008).

Dentre os compostos fenólicos, os taninos de alto peso molecular, classificados por

um alto grau de polimerização e/ou vários grupos de hidroxilas fenólicas, têm sido

apresentados por atuarem com eficácia de quinze a trinta vezes maior do que fenóis simples

como fontes antioxidantes na concentração de radicais peroxil (Close & Mc Arthu, 2002).

Muitas espécies produtoras de taninos são usadas na medicina popular para diferentes

finalidades e poucos estudos têm avaliado o potencial medicinal de tais substâncias

(Monteiro et al., 2005).

2.3 Taninos

2.3.1 Generalidades e características químicas dos taninos

Como metabólitos secundários, os taninos são compostos fenólicos de grande

interesse econômico e ecológico. Moller et al. (2009) citam que em 1962, Bate-Smith e

Swain definiram taninos como “compostos fenólicos solúveis em água, que possuem peso

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20 SIQUEIRA, C. F. de Q. Teores de taninos e flavonóides em plantas medicinais da Caatinga: Avaliando estratégias de bioprospecção molecular entre 500 e 3000 Dalton e que possuem, além das reações fenólicas usuais,

propriedades especiais, como a capacidade de precipitar alcalóides, gelatinas e outras

proteínas”.

São responsáveis pela adstringência de muitos frutos e plantas através da ligação

tanino-proteína (Pansera et al., 2003). Esta ligação ocorre, provavelmente, através de pontes

de hidrogênio entre os grupos fenólicos dos taninos e determinados sítios das proteínas,

fornecendo estabilidade a estas substâncias (Monteiro et al., 2005).

Do ponto de vista comercial, devido seu poder tanante e sua adstringência, atuam

sobre o colágeno retirando a água dos interstícios das fibras, contraindo os tecidos orgânicos

moles e transformando a pele dos animais em couro, para proporcionar maior resistência ao

apodrecimento (Gonçalves & Lelis, 2001). Também tornam os tecidos vegetais impalatáveis,

através da precipitação de proteínas salivares ou imobilização de enzimas, inibindo a invasão

de parasitas nos tecidos, bem como a ação de herbívoros (Paiva et al., 2002). Essas

propriedades podem ser responsáveis pela durabilidade de algumas madeiras (Mori et al.,

2003).

Foram divididos de acordo com suas estruturas em Galotaninos, que são formados

pelo ácido gálico esterificado por um poliol; Elagitaninos, formados por uma ligação

oxidativa de dois grupos galoil mais uma galotanina para formar o ácido

hexahidroxidifenílico (HHDP); Taninos Condensados, que são típicos dímeros, trímeros ou

polímeros de catequinas e epicatequinas e, Taninos Complexos, que são formados por

galotaninos ou elagitaninos juntamente com catequinas ou outros polifenóis menores (Moller

et al., 2009). Os galotaninos e elagitaninos reúnem-se numa classe chamada taninos

hidrolisáveis (Bonfili et al., 2008).

Os taninos, sejam hidrolisáveis ou condensados, são utilizados na indústria como

antioxidantes de sucos de frutas e bebidas, clarificantes de vinhos, corantes têxteis, na

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21 SIQUEIRA, C. F. de Q. Teores de taninos e flavonóides em plantas medicinais da Caatinga: Avaliando estratégias de bioprospecção produção de borrachas e como coagulantes e floculantes no tratamento de água (Pansera et

al., 2003).

2.3.2 Determinação do teor de taninos

Taninos são moléculas que apresentam uma grande variabilidade de estruturas, e,

como tanto, os taninos condensados como hidrolisáveis, possuem alta reatividade com

materiais oxidativos e complexação com macromoléculas, devido a isso, há uma grande

dificuldade no isolamento, identificação e quantificação destes (Monteiro et al., 2005).

Vários são os métodos para determinação do teor de taninos, tanto quantitativamente

quanto qualitativamente, baseados em suas habilidades (formação de complexos com

proteínas ou alcalóides, reação com seus anéis fenólicos e despolimerização) por reagirem ou

com todos os tipos de taninos ou com uma classe específica: taninos condensados,

galotaninos ou elagitaninos (Scalbert, 1991).

Para Agostini-Costa e colaboradores (1999), o fato das quantidades de compostos

fenólicos individuais presentes nas frutas serem geralmente baixas, estas têm sido referidas,

inespecificamente, como fenóis totais e, portanto, há uma série de dificuldades associadas a

sua quantificação, decorrentes, principalmente, da grande diversidade dos compostos

fenólicos, da presença de compostos interferentes e de métodos inespecíficos ou pouco

sensíveis.

A determinação dos compostos fenólicos totais, quando baseada no potencial

oxirredutométrico, pode ser feita mediante análises pelos métodos de Folin-Denis, cujo

reagente é, freqüentemente, substituído pelo reagente de Folin-Ciocalteau; pelo Azul da

Prússia que é recomendado para determinação de compostos fenólicos totais, por ser menos

susceptível à interferência de proteínas do que os reagentes Folin e pela Redução do Cloreto

Férrico (Agostini-Costa et al., 1999). Entretanto, alguns trabalhos indicam falta de

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22 SIQUEIRA, C. F. de Q. Teores de taninos e flavonóides em plantas medicinais da Caatinga: Avaliando estratégias de bioprospecção especificidade destes métodos, que são susceptíveis a interferência de outros compostos

ativos, como o ácido ascórbico, os tióis, o bissulfito, e outros constituintes como

aminoácidos, proteínas e xantinas naturalmente presentes em concentrações elevadas em

algumas espécies vegetais (Agostini-Costa et al., 2003).

Para solucionar este problema, pode-se usar o método da vanilina, que é específico

para uma classe limitada de compostos, podendo ser usado, seletivamente, para determinação

de taninos condensados, na presença de taninos hidrolisáveis e outros compostos fenólicos

(Agostini-Costa et al., 1999). Uma desvantagem relacionada ao método da Vanilina é o

desenvolvimento de falsos positivos (Agostini-Costa et al., 1999 e Agostini-Costa et al.,

2003).

Outros métodos disponíveis para determinação de compostos tânicos são os de

precipitação protéica, gravimetria e difusão radial, que são baseados na capacidade de

interação dos taninos hidrolisáveis e condensados com a polivinilpirrolidona e com proteínas,

tais como, gelatina e albumina bovina (Agostini-Costa et al., 1999).

Esses métodos baseados na precipitação de proteínas podem ser empregados para

determinação do teor de taninos em amostras ou para determinação de sua atividade

biológica, fornecendo excelentes resultados seja para taninos condensados ou hidrolisáveis

(Scalbert, 1991). Entretanto, se a proteína é adicionada em excesso, os resultados podem ser

comprometidos, pois este excesso ocasionará uma diminuição da precipitação dos complexos

proteína-tanino, havendo uma re-dissolução dos mesmos (Scalbert, 1991, Luck et al., 1994 e

Haslam, 1998). Como exemplo desses métodos tem-se Cromatografia Líquida de Alta

Eficiência - CLAE, a precipitação da solução, difusão em gel e precipitação por

Cromatografia em Camada Delgada – CCD (Agostin-Costa et al., 1999).

Neste trabalho, o doseamento dos taninos foi realizado pelo método de difusão radial,

baseado em Hagerman (1987). Este consiste em um teste bioquímico que determina taninos

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23 SIQUEIRA, C. F. de Q. Teores de taninos e flavonóides em plantas medicinais da Caatinga: Avaliando estratégias de bioprospecção com base na sua capacidade de se ligar a albumina sérica bovina (BSA). A especificidade da

ligação depende da natureza dos taninos e das proteínas (Hedkivist et al., 2000).

2.3.3 Atividade biológica dos taninos

Muitos taninos encontrados em plantas medicinais e alimentos têm sido muito

utilizados pelos seus efeitos benéficos, sem apresentarem toxicidade aparente (Okuda, 2005).

Taninos isolados de diversas plantas apresentaram atividades anti-hemorrágica,

antiinflamatória, antidiabética, diurética, anti-reumática, antitumoral, redutora de intoxicação

alcoólica, antisséptica, antihipertensiva, purgativa, inibidora de peroxidação lipídica,

antitumoral, antiulcerogênica, anti-histamínica e antimicrobiana (Pansera et al., 2003;

Oliveira et al., 2005; Klein et al., 2007; Muthusamy et al., 2008 e Amarowicz et al., 2008).

O efeito antitumoral ocorre devido à potencialização da defesa imunológica através

da ativação de macrófagos quando uma injeção de taninos é aplicada (Okuda, 2005). Já o

antiviral ocorre por uma inibição potencial dos monômeros e dímeros de taninos

hidrolisáveis sobre os vírus Herpes simples e HIV-1 da transcriptase reversa, bem como, por

sua atividade citotóxica contra o vírus Influenza tipo A2 e Cowpox (Tomczyk & Latté,

2009).

Plantas que possuem taninos em sua composição podem apresentar um efeito

antidiarréico (Rani et al., 1999; Panizi et al., 2002; Pansera et al., 2003; Fernandes et al.,

2005; Mbagwu & Adeyemi, 2008; Kamijo et al., 2008; Carretero et al., 2009; Amabeuco et

al., 2009; Sá et al., 2009 e Tian et al., 2009), pois, possuem a capacidade para formar

complexos macromoleculares com as proteínas a que se vinculam por meio de ligações de

hidrogênio, formando uma camada que faz com que a mucosa intestinal fique mais resistente

e reduza a secreção (Carretero et al., 2009). A formação desta camada na mucosa também

inibe o desenvolvimento de microorganismos, explicando a ação anti-séptica dos taninos, que

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24 SIQUEIRA, C. F. de Q. Teores de taninos e flavonóides em plantas medicinais da Caatinga: Avaliando estratégias de bioprospecção contribue para o tratamento de diarréia (Panizi et al., 2002 e Tian et al., 2009). A atividade

antimicrobiana pode não ser ativa em fungos, isto talvez porque algumas espécies de fungos

podem excretar tanase, que decompõe os taninos em pequenas moléculas, como o ácido

gálico, que pode apresentar limitada atividade antifúngica (Tian et al., 2009).

Não obstante, foi visto que taninos formam complexos irreversíveis com a prolina, o

que resulta na inibição da síntese protéica da parede celular (Dall’agnol et al., 2003).

Propuseram também que a atividade antibacteriana de taninos poderia ser devido à inibição

das enzimas microbianas extracelulares ou pela complexação de íons metálicos a partir do

crescimento bacteriano (Corrales et al., 2009).

Taninos são gastroprotetores pela mesma propriedade que são utilizados como

antidiarréicos, ou seja, pela capacidade de precipitar microproteínas no local da úlcera

formando uma película protetora impermeável para evitar absorção de substâncias tóxicas e

resistir ao ataque de enzimas proteolíticas (Pansera et al., 2003 e Nwafor & Bassey, 2007).

Pesquisas têm demonstrado que os taninos são utilizados, especialmente para tratar de

síndromes metabólicas como o diabetes, pelo fato de induzirem tanto o transporte ativo da

glicose pela insulina nos adipócitos, como também, inibirem a diferenciação destes, sendo

considerados uma alternativa para os diabéticos tipo II, já que a maioria dos fármacos

utilizados nesta patologia, ao contrário dos taninos, causam obesidade nos seus usuários

(Oliveira et al., 2005; Klein et al., 2007 e Muthusamy et al., 2008).

O fato dos taninos serem antihipertensivos, provavelmente é pela capacidade que

estes possuem de aumentar a síntese de óxido nítrico e relaxar segmentos vasculares pré-

contraídos com norepinefrina (Dwivedi, 2007). Além disso, Fabri et al. (2009) verificaram

que o potencial de redução dos taninos previne lesões hepáticas através da inibição da

formação de peróxidos lipídicos.

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25 SIQUEIRA, C. F. de Q. Teores de taninos e flavonóides em plantas medicinais da Caatinga: Avaliando estratégias de bioprospecção

2.4. Flavonóides

2.4.1 Generalidades e características químicas dos flavonóides

Flavonóides é um grupo de metabólitos secundários, de baixo peso molecular e estão

presentes em todas as plantas vasculares, muitas vezes em concentrações relativamente

elevadas (Sala et al., 2003 e Sharma et al., 2008). Eles participam de importantes funções no

crescimento, desenvolvimento e na defesa dos vegetais contra o ataque de microorganismos

patógenos e estão concentrados em sementes, frutos, cascas de caule, raízes, folhas e flores

(Bonfili et al., 2008). As principais fontes de flavonóides incluem frutos (uvas, cerejas, maçã,

groselhas, frutas cítricas, entre outros) e hortaliças (pimenta, tomate, espinafre, cebola,

brócolis, dentre outras folhosas), sendo seu consumo estimado na dieta humana entre um –

dois gramas por dia (Dornas et al., 2007).

Eles são primariamente reconhecidos como os pigmentos responsáveis pela explosão

de cores na estação do outono com muitas tonalidades de amarelo, laranja e vermelho nas

flores e nos alimentos (Sharma et al., 2008), e podem atuar como antioxidantes na fisiologia

vegetal (Close & Mc Arthu, 2002).

Um estudo realizado por Ferreres et al. (2009) apontou que os flavonóides atuam

protegendo algumas frágeis estruturas celulares, tais como cloroplastos, contra a radiação

UV. Em concordância com este resultado, Roleda (2009), revelou que num estudo realizado

por Kremb (2007) houve um aumento de receptores para a chalcona sintetase, enzima chave

envolvida na síntese dos flavonóides, numa espécie de alga verde após exposição aos raios

UV-B, apontando para a possibilidade dos flavonóides estarem realmente envolvidos na

proteção contra radiação UV em algas verdes.

Os flavonóides em geral, mas especialmente a quercetina, apresentam efeito protetor

contra a citotoxicidade, lesões no DNA e apoptose induzida por peróxido de hidrogênio, t-

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26 SIQUEIRA, C. F. de Q. Teores de taninos e flavonóides em plantas medicinais da Caatinga: Avaliando estratégias de bioprospecção butilhidroxiperoxidase e menadiona, entretanto, eles podem agir como pró-oxidantes e causar

efeitos citostáticos, induzindo lesões no DNA e a ativação da caspase (protease) levando a

apoptose celular (Smirnova et al., 2009). Sua ação, boa ou ruim, vai depender do tipo de

célula estudada e mais ainda da quantidade aplicada (Smirnova et al., 2009).

Quimicamente, são compostos polifenólicos biossintetizados a partir da via dos

fenilpropanóides e do acetato, são fenil-benzopironas (fenilcromonas) com uma classificação

estrutural baseada em um núcleo comum de três anéis (Nomura et al., 2008). A sua estrutura

básica consiste do difenilpropano, 15 átomos de carbono (C6-C3-C6), arranjados em três

anéis registrados como A, B e C, sendo dois anéis fenólicos substituídos (A e B) ligados

através de um anel heterocíclico pirano (anel C) no meio (Sala et al., 2003).

Os flavonóides são subdivididos de acordo com três grandes fatores: a natureza

química da molécula, a variação do número e distribuição dos grupos hidroxilas fenólicas ao

redor da molécula e os seus substituintes; ou ainda baseados num grupo oxi na posição 4,

uma ligação dupla entre os átomos de carbono 2 e 3 (C2-C3 ligação dupla), bem como a

presença de um grupo OH na posição 3 (3-OH) do anel C (Sala et al., 2003 e Bonfili et al.,

2008).

São amplamente distribuídos no reino vegetal com uma enorme diversidade de

estruturas o que talvez possa ser justificado pelo fato de 2% do total de carbono

fotosintetizado pelas plantas ser convertido em flavonóides (Alothman et al., 2009). Mais de

8.000 flavonóides já foram identificados sendo as suas subclasses as seguintes: flavonas,

flavonóis, flavanóis, chalconas, auronas, flavanonas, flavanas, antocianidinas,

leucoantocianidinas, proantocianidinas, isoflavonas e neoflavonóides (Sala et al., 2003).

Flavonas e flavonóis são de origem biossintética muito próxima, os flavonóis são, na

verdade, flavonas substituídas na posição C3 por uma hidroxila, e dessa forma ambos

possuem análises, sínteses e reações com bases teóricas comuns; as chalconas possuem

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27 SIQUEIRA, C. F. de Q. Teores de taninos e flavonóides em plantas medicinais da Caatinga: Avaliando estratégias de bioprospecção coloração amarelada, e, quimicamente, não apresentam anel C, enquanto que, as auronas

podem ser definidas como cetonas α-β-insaturadas onde tanto a carbonila quanto a porção

olefínica estão ligadas a grupamentos aromáticos (Dornas et al., 2007).

As antocianidinas são pigmentos vegetais responsáveis pelas cores laranja, azul, roxa

e tonalidades de vermelho, violeta encontrada em flores, frutos, folhas, caules e tubérculos de

plantas; as flavanonas são intermediárias biossintéticas da maioria das classes de flavonóides;

as flavanas, leucoantocianidinas e proantocianidinas fazem parte de uma classe de

flavonóides nos quais é possível encontrar estruturas oligomerizadas e, por fim, os

isoflavonóides apresentam uma variação estrutural não somente entre o número e

complexidade dos substituintes, mas também nos níveis de oxidação do anel, exercendo

efeito sobre o metabolismo de hormônios, diminuindo LDL (Lipoproteína de baixa

densidade) e aumentando HDL (Dornas et al., 2007).

Na natureza, flavonóides podem ocorrer como agliconas, glicosídeos ou como parte

de outras estruturas que contenham flavonóides, como as flavolignanas, porém,

freqüentemente ocorrem como glicosídeos (Behling et al., 2004 e Aura, 2008). A glicosilação

e o número de grupos OH influencia a afinidade dos flavonóides pelas membranas celulares e

a localização dos substituintes afeta sua estrutura, fluidez e permeabilidade, assim como o

grau de hidroxilação também influencia na absorção destes compostos (Bonfili et al., 2008).

Os flavonóides têm sido apresentados como captadores de espécies oxidativas, devido

a presença de um grupo orto-dihidroxi ou grupo catecol no anel-B (3’,4’-OH), que conferem

uma alta estabilidade ao radical formado e pela conjugação do anel B para o grupo 4-oxo

através da ligação dupla dos C2-C3, garantindo o deslocamento dos elétrons no anel B

(Bonfili et al., 2008 e Amaral et al., 2009).

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28 SIQUEIRA, C. F. de Q. Teores de taninos e flavonóides em plantas medicinais da Caatinga: Avaliando estratégias de bioprospecção

2.4.2 Determinação do teor de flavonóides

Antigamente, a cromatografia em camada delgada, a cromatografia com poliamida e

eletroforese eram as principais técnicas de separação fenólica e ainda hoje, a CCD

(Cromatografia em Camada Delgada) é utilizada para a análise de flavonóides como uma

rápida, simples e versátil metodologia para extratos vegetais (Andersen & Jordhein, 2006).

Uma característica que facilita a análise dos flavonóides é a presença do anel fenil,

um excelente cromóforo, que é ativado naturalmente por UV ou gama visível e fornece a

razão pela qual flavonóides são tão fáceis de serem detectados, pois seus espectros UV

fornecem informações estruturais consideráveis que podem distinguir o tipo de fenol e de

oxidação padrão (Andersen & Jordhein, 2006).

Atualmente, várias são as técnicas empregadas para detecção e quantificação de

amostras de plantas, como Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE), Cromatografia

Gasosa (CG), Cromatografia Liquida com Espectrofotometria de Massa (LC-MS),

Cromatografia em Camada Delgada (CCD) e Cromatografia Contracorrente Centrífuga de

Partição (CPC). A escolha do método e da estratégia depende da classe de flavonóides a ser

estudada (Andersen & Jordhein, 2006).

Sabe-se que o método mais preciso e exato para identificação e quantificação de

flavonóides em produtos naturais é a CLAE (Marcucci, 1995). Porém, espectrofotometria é

considerada uma técnica muito acessível, prática e menos onerosa (Amorim et al., 2008),

permitindo a análise rápida de numerosas amostras, em laboratórios geralmente modestos.

A partir de 1954, Harborne sugeriu o uso do cloreto de alumínio para a determinação

espectrofotométrica da presença de certos grupamentos químicos em flavonóides (Mabry et

al., 1970). Da década de 60 em diante, o composto passou a ser largamente empregado como

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29 SIQUEIRA, C. F. de Q. Teores de taninos e flavonóides em plantas medicinais da Caatinga: Avaliando estratégias de bioprospecção um reagente de desvios ("shift reagent") em espectrometria no UV-visível para a

determinação estrutural de flavonóides (Mabry et al., 1970; Markham, 1982).

O cátion alumínio forma complexos estáveis com os flavonóides em metanol,

ocorrendo na análise espectrofotométrica um desvio para maiores comprimentos de onda e

uma intensificação da absorção. Dessa maneira, é possível determinar a quantidade de

flavonóides, evitando-se a interferência de outras substâncias fenólicas, principalmente os

ácidos fenólicos, que invariavelmente acompanham os flavonóides nos tecidos vegetais. O

complexo flavonóide-Al absorve em comprimento de onda bem maior do que o flavonóide

sem a presença do agente complexante. Os ácidos fenólicos, mesmo os que formam

complexos com AlCl3, absorvem em comprimentos de onda muito inferiores, evitando-se

dessa maneira interferências nas medidas de absorbância (Woisky, 1996; Woisky & Salatino,

1998).

O uso do cloreto de alumínio para a determinação da quantidade de flavonóides totais

não é, no entanto, um procedimento isento de limitações. O método é preciso, porém pode

ser pouco exato; o valor que ele fornece pode ser diferente (geralmente inferior) em relação à

quantidade de flavonóides totais realmente presente na amostra analisada. No entanto, essa

limitação não reduz a validade do método para os propósitos do controle de qualidade.

2.4.3 Atividade biológica dos flavonóides

Os flavonóides têm uma ampla gama de atividades biológicas que decorrem em

grande parte de sua capacidade de se ligar a proteínas (Dall’Agnol et al., 2003). São

conhecidos por possuírem atividades anticarcinogênica, antioxidante, anti-bacteriana, anti-

doenças cardiovasculares, antialérgica, hepatoprotetora, antitrombótica, antiviral,

antiinflamatória, anti-agregante, contra alterações vasculares mediadas pelo óxido nítrico e

contra inibição da reabsorção óssea (Sala et al., 2003; Sharma et al., 2008; Bonfili et al.,

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30 SIQUEIRA, C. F. de Q. Teores de taninos e flavonóides em plantas medicinais da Caatinga: Avaliando estratégias de bioprospecção 2008; Hayet et al., 2008; Nomura et al., 2008 e Hollenberg et al., 2009). Todas estas ações

podem ser explicadas pela atividade antioxidante a qual possuem mecanismos que incluem a

inibição de enzimas envolvidas na formação de espécies reativas de oxigênio (COX, NADH

oxidase) ou a quelação de elementos traços (Fe++ e Cu++) (Sala et al., 2003). O requisito mais

importante para a atividade antioxidante parece ser a presença de um grupo catecol no anel B

(Nomura et al., 2008).

Entretanto, a promoção da saúde pelos flavonóides, com base nas suas propriedades

antioxidantes, foi recentemente contestada, pois as concentrações plasmáticas atingidas são

baixas e os metabólitos dos flavonóides tendem a ter menor atividade antioxidante, e,

portanto, tem-se sugerido que a proteção antioxidante dos compostos fenólicos pode ocorrer

antes da absorção, ou seja, dentro do estômago, intestinos e cólon, podendo assim

desempenhar um papel importante na proteção do trato gastrointestinal a partir de danos

oxidativos e, retardar o desenvolvimento de câncer no estômago, cólon e reto. Essa proteção

do trato gastrintestinal pode ser atribuída ao seqüestro de espécies reativas oxidativas, como

nitrogênio, cloro, geradas pelo próprio trato gastrintestinal ou por reações químicas dos

componentes da dieta no estômago (Amaral et al., 2009).

Além disso, alguns efeitos biológicos dos flavonóides, que só necessitam de pequenas

concentrações, também foram ligados a ações moduladoras na célula, por influenciar o

processo de transdução de sinais celulares. Por este mecanismo, alguns flavonóides têm a

capacidade de inibir mediadores pró-inflamatórios (Amaral et al., 2009).

Na atividade antiinflamatória, os flavonóides, possuem a capacidade de induzir a

mudança da estrutura dimérica para a monomérica da fosfolipasa A2 (PLA2) sintase, e dessa

forma, inibir o livre acesso do substrato para o sítio catalítico conduzindo a uma diminuição

acentuada ou inibição das atividades edematogênicas e miotóxicas desta enzima, indicando

seu uso potencial para suprimir a inflamação induzida pela PLA2 (Toyama et al., 2009). Esta

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31 SIQUEIRA, C. F. de Q. Teores de taninos e flavonóides em plantas medicinais da Caatinga: Avaliando estratégias de bioprospecção inibição ocorre de forma dose-dependente em ambas fosfolipases, secretória e citosólica

(Toyama et al., 2009). Ainda falando da atividade antiinflamatória, foi visto que wogonoside,

um flavonóide, exerce esta atividade através da inibição da liberação de histamina e

leucotrienos B4 (LTB4) dos mastócitos (Chen et al., 2009).

O efeito antimicrobiano dos flavonóides pode ser explicado pela capacidade destes

compostos formarem complexos com proteínas extracelulares e solúveis e com a parede

celular, impedindo desta forma o desenvolvimento dos microorganismos (Hayet et al., 2008).

A atividade antidiarréica dos flavonóides foi atribuída à sua capacidade de inibir a

motilidade intestinal e a secreção hidro-eletrolítica, que são conhecidas por serem alteradas

nesta condição intestinal. Experimentos in vitro e in vivo realizados por Venkatesan e

colaboradores (2005), demonstraram que flavonóides são capazes de inibir a resposta

secretora intestinal, induzida pela prostaglandina E2 e apresentam propriedades antioxidantes

que se presumem serem responsáveis pela inibição dos efeitos de várias enzimas, incluindo

as envolvidas no metabolismo do ácido araquidônico.

Flavonóides aumentam a produção de óxido nítrico (NO) pelo endotélio que é um

potente inibidor da adesão e agregação plaquetárias e trombose, assim como têm efeito

hipolipidêmico explicado por vários mecanismos sendo um deles o que envolve suas ações

no aumento da excreção de sais biliares nas fezes e o outro o que abrange a capacidade de

elevar a atividade do sistema microssomal hepático, aumentando conseqüentemente o

metabolismo lipídico. Segundo Dornas e colaboradores (2007), pelo fato dos flavonóides

combaterem tanto as espécies reativas de oxigênio (EROs) como a peroxidação lipídica, eles

combatem doenças cerebrovasculares.

Recentemente, foi mostrado que o extrato bruto da folha de Averrhoa carambola L.

enriquecido em flavonóide foi capaz de diminuir os níveis séricos de glicose em ratos

hiperglicêmicos de forma tão eficiente quanto à insulina, e há fortes indícios de que isto

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32 SIQUEIRA, C. F. de Q. Teores de taninos e flavonóides em plantas medicinais da Caatinga: Avaliando estratégias de bioprospecção ocorreu por um duplo mecanismo, caracterizando os flavonóides tanto como secretagogos de

insulina como agentes insulino-mimético (Cazarolli et al., 2009).

As EROs podem danificar o DNA e a multiplicação das células sem reparo

conduzindo a mutações, podendo resultar em tumor, além de interferir diretamente na

sinalização e crescimento celular. Alguns flavonóides podem exercer efeito antimutagênico e

promover atividade antitumoral com doses relativamente baixas, diferente de alguns

antioxidantes, que quando em excesso na forma livre podem exibir toxicidade aguda ou

carcinogenicidade (Dornas et al., 2007).

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33 SIQUEIRA, C. F. de Q. Teores de taninos e flavonóides em plantas medicinais da Caatinga: Avaliando estratégias de bioprospecção

3. Referências

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34 SIQUEIRA, C. F. de Q. Teores de taninos e flavonóides em plantas medicinais da Caatinga: Avaliando estratégias de bioprospecção 3. Referências

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41 SIQUEIRA, C. F. de Q. Teores de taninos e flavonóides em plantas medicinais da Caatinga: Avaliando estratégias de bioprospecção of asparagus racemosus wild root extracts in laboratory animals. J Pharm Pharmaceut Sci, v. 8, n. 1, p. 39-45, 2005. VIRTUOSO, S.; DAVET, A.; DIAS, J. F. G.; CUNICO, M. M.; MIGUEL, M. D.; OLIVEIRA, A. B. e MIGUEL, O. G.. Estudo preliminar da atividade antibacteriana das cascas de Erythrina velutina Willd., Fabaceae (Leguminosae). Revista Brasileira de Farmacognosia, v. 15, n. 2, p. 137-142, 2005. WOISKY, R. G.. Métodos de controle químico de amostras de própolis. São Paulo: Universidade de São Paulo, Dissertação (mestrado) - Faculdade de Ciências Farmacêuticas, 74 p., 1996. WOISKY, R. G. & SALATINO, A. Analysis of propolis: some parameters and procedures for chemical quality control. Journal of Apicultural Research, v. 37, n. 2, p. 99-105, 1998.

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42 SIQUEIRA, C. F. de Q. Teores de taninos e flavonóides em plantas medicinais da Caatinga: Avaliando estratégias de bioprospecção

4. Artigo –

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43 SIQUEIRA, C. F. de Q. Teores de taninos e flavonóides em plantas medicinais da Caatinga: Avaliando estratégias de bioprospecção

ARTIGO SUBMETIDO PARA PUBLICAÇÃO

Revista: Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine

Teores de Taninos e Flavonóides em plantas medicinais da Caatinga:

avaliando estratégias de Bioprospecção

Clarissa Fernanda de Queiroz Siqueira1, Daniela Lyra Vasconcelos Cabral1,

Tadeu José da Silva Peixoto Sobrinho1, Elba Lúcia Cavalcanti de Amorim1,

Joabe Gomes de Melo2, Thiago Antônio de Souza Araújo2 e Ulysses Paulino de

Albuquerque2*

1Departamento de Farmácia, Laboratório de Produtos Naturais, Universidade

Federal de Pernambuco, Brasil, 2Departamento de Biologia, Laboratório de

Etnobotânica Aplicada, Universidade Federal Rural de Pernambuco, Brasil.

Resumo

Contexto: Diversas são as espécies de plantas utilizadas por comunidades tradicionais no semiárido brasileiro. Uma ferramenta utilizada na busca por substância naturais que detenham ações terapêuticas é a abordagem etnofarmacologica. Entre estas substâncias ativas, os metabólitos vegetais que possuem grupamento fenólico em sua estrutura apresentam um grande potencial farmacológico. Objetivo: Pretendeu-se estabelecer uma relação quantitativa entre as espécies indicadas popularmente como antimicrobianas, antidiarréicas e antidiabéticas citadas no levantamento etnobotânico e o seu teor de taninos e flavonóides. Material e Métodos: A seleção das plantas foi baseada em um levantamento etnobotânico realizado na comunidade do Carão, localizada no município de Altinho no Nordeste do Brasil. Após secagem à temperatura ambiente, o material foi triturado e devidamente

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44 SIQUEIRA, C. F. de Q. Teores de taninos e flavonóides em plantas medicinais da Caatinga: Avaliando estratégias de bioprospecção armazenado. Para doseamento dos taninos foi utilizada a técnica de Difusão Radial, e para quantificação de Flavonóides totais foi utilizado um ensaio baseado na complexação dos flavonóides em cloreto de alumínio. Discussão e Conclusão: O grupo de plantas com indicação antimicrobiana apresentou uma maior ocorrência de taninos quando comparados aos outros grupos servindo de indício como uma possível relação entre esses compostos e esta atividade, seguindo a mesma tendência para o grupo de plantas com indicação antidiabéticas em relação aos flavonóides. Palavras chave: compostos fenólicos, etnofarmacologia, fitoquímica

Introdução

Durante séculos, vêm-se utilizando extratos de plantas como remédios populares

contra diversos problemas de saúde [1], sendo os produtos naturais a fonte de muitas drogas

clinicamente benéficas [2]. De acordo com Cox [3] a seleção dessas plantas com fins

medicinais pode ser realizada de duas maneiras: por seleção aleatória (na qual não são

levadas em consideração afinidades taxonômicas, contexto etnobotânico ou outras qualidades

intrínsecas) ou por seleção alvo que ocorre por meio de pesquisas filogenéticas (parentes

próximos das plantas conhecidas por conter compostos úteis são incluídos na amostra),

levantamentos ecológicos (plantas em habitats particular com hábitos de crescimento

determinado), ou levantamentos etnofarmacológicos (identificando plantas tradicionalmente

utilizadas para doenças específicas) [4].

É baixa a probabilidade de encontrar compostos úteis em seleções de plantas ao acaso

(uma em 10.000 mostra atividade promissora de interesse para os pesquisadores),

particularmente em áreas de alta biodiversidade, como é o caso da Caatinga [5]. Já

levantamentos etnobotânicos, segundo Farnsworth citado em [6], têm contribuído com 74%

de todos os medicamentos derivados de plantas [24]. Como exemplo, tem-se um estudo

realizado por Kaileh e colaboradores [1] numa comunidade tradicional palestina, que

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45 SIQUEIRA, C. F. de Q. Teores de taninos e flavonóides em plantas medicinais da Caatinga: Avaliando estratégias de bioprospecção selecionaram vinte e quatro plantas medicinais mencionadas no folclore medicinal ou

descritas em livros de literatura resultando em quatro potentes espécies citotóxicas. Em outra

pesquisa realizada no México, o resultado foi ainda mais satisfatório. Em 75% das plantas

que eram utilizadas principalmente para doenças de origem bacteriana no local estudado, foi

demonstrada a atividade antimicrobiana [7].

Como conseqüência, a abordagem etnofarmacológica tem recebido uma significativa

atenção nestes últimos anos [1]; inclusive vários estudos tem tido como finalidade contribuir

para o desenvolvimento desta ferramenta na busca por substância naturais de ação terapêutica

na região nordeste do Brasil [8 - 11]. Na referida região, o conhecimento tradicional sobre

plantas medicinais já se tornou parte integrante da prática médica popular, sendo utilizadas

por até 90% da população economicamente carente para a cura de seus problemas de saúde

[12].

A Caatinga, vegetação que ocorre na região semiárida tropical do Nordeste do Brasil,

tem fundamental importância na vida da população, pois oferece uma larga variedade de

recursos vegetais e animais para sobrevivência dos que lá habitam [8, 9, 13 - 16]. Entre estes

subsídios estão as plantas medicinais que associadas ao conhecimento tradicional são a base

da medicina popular brasileira [10].

Entre as espécies vegetais utilizadas na Caatinga na medicina popular, muitas

apresentam compostos fenólicos em sua composição, levando a crer que as atividades

terapêuticas popularmente atribuídas podem estar associadas com a presença desses

compostos [8, 17 - 19]. Compostos com grupamento fenólico em sua estrutura, apresentam

um grande potencial farmacológico [20], que é representado por atividades como

antimicrobiana [21 - 23], hipoglicêmica e/ou antidiabética [24 - 29] e antidiarréica [30 - 33].

Estudos têm revelado que os fenóis aparecem em 100% de um grupo de plantas

medicinais já estudadas na Caatinga [17, 19]. Além disso, em algumas espécies que têm um

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46 SIQUEIRA, C. F. de Q. Teores de taninos e flavonóides em plantas medicinais da Caatinga: Avaliando estratégias de bioprospecção alto valor de uso para as comunidades locais, tais compostos aparecem em elevadas

concentrações suportando muitas vezes as indicações terapêuticas localmente atribuídas [8].

Dessa forma, esta pesquisa se debruça diante do seguinte questionamento: o teor de

compostos fenólicos (taninos e flavonóides) guarda relação com grupos de plantas indicadas

popularmente para afecções relacionadas com a atividade desses compostos? Parte-se da

premissa que há uma forte relação entre os altos teores destes compostos e as espécies nativas

da Caatinga selecionadas a partir de um levantamento etnobotânico. Caso essa tendência se

confirme, será possível predizer ou direcionar estudos de bioprospecção para plantas

medicinais da região.

2. Material e Métodos

2.1 Levantamento de dados

A pesquisa se baseou em um levantamento etnobotânico realizado pela equipe do

Laboratório de Etnobotânica Aplicada (LEA) da UFRPE, que resultou na construção de um

banco de dados com informações sobre as espécies vegetais utilizadas pela comunidade. Esta

pesquisa foi desenvolvida na zona rural do município de Altinho que está localizado no

agreste central de Pernambuco, distante 163,1 km do Recife, com área total de 454,486 km², e

clima semi-árido quente [34]. Neste estudo, após procedimentos legais como a assinatura do

Termo de Consentimento Livre e Esclarecido por todas as pessoas maiores de dezoito anos da

comunidade (ver [35]), foram coletadas informações etnobotânicas que foram divididas em

três etapas: na primeira foi realizado um levantamento geral sobre o uso e o conhecimento das

plantas medicinais com a comunidade, na segunda, foram selecionados especialistas locais

baseados na qualidade e na quantidade de informações fornecidas por estes na etapa inicial.

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47 SIQUEIRA, C. F. de Q. Teores de taninos e flavonóides em plantas medicinais da Caatinga: Avaliando estratégias de bioprospecção Na terceira e última etapa, foi aplicada a técnica da lista livre aos especialistas, que consiste

em coletar informações a partir de um domínio específico de conhecimento [8, 19, 36 - 39].

2.2 Seleção de plantas para o estudo

Para a seleção das plantas, inicialmente buscou-se na literatura as atividades

farmacológicas que eram comuns às categorias de metabólitos secundários que aqui foram

selecionadas: taninos e flavonóides. Dentre as várias atividades dos compostos fenólicos,

foram identificadas: atividade antimicrobiana [21 - 23], antioxidante, antiinflamatória,

antidiarréica [30 - 33], cardioprotetoras, hipoglicemiantes e/ou antidiabéticas [24 - 29].

Posteriormente, identificaram-se quais destas atividades, que eram comuns aos taninos

e flavonóides, estavam presentes como indicações terapêuticas das plantas medicinais

inventariadas na Comunidade do Carão a partir do levantamento etnobotânico mencionado.

Realizou-se uma filtragem no banco de dados deste levantamento etnobotânico geral, tendo

como critério de inclusão de que todas as espécies deveriam ser nativas na Caatinga (quando

são nativas da América do Sul) [9]; e que possuíssem as atividades terapêuticas selecionadas,

o que totalizou 25 plantas (Tabela 1). Na comunidade foram citadas 12 espécies que possuíam

indicação antimicrobiana, porém apenas nove delas eram nativas; da mesma forma, 20

possuíam indicação antidiarréica e apenas 10 atendiam aos critérios e finalmente de nove que

possuíam indicação antidiabéticas e/ou hipoglicemiante apenas seis foram selecionadas

seguindo o mesmo raciocínio (ver tabela 1).

Após a escolha das espécies aleatórias (30), houve a formação dos quatro grupos para

análise dos teores de compostos fenólicos:

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48 SIQUEIRA, C. F. de Q. Teores de taninos e flavonóides em plantas medicinais da Caatinga: Avaliando estratégias de bioprospecção � Grupo 1: Seleção aleatória de 10 plantas citadas, baseadas no levantamento geral, que

serviram de grupo controle;

� Grupo 2: Seleção de nove plantas com suposta atividade antimicrobiana, com base no

levantamento geral;

� Grupo 3: Seleção de 10 plantas com suposta atividade antidiarréica, com base no

levantamento geral;

� Grupo 4: Seleção de seis plantas com suposta atividade hipoglicêmica e/ou antidiabética,

com base no levantamento geral.

2.3 Determinação dos teores de compostos fenólicos

2.3.1 Preparação das Amostras

As amostras das plantas foram coletadas de acordo com o levantamento geral

etnobotânico realizado pela equipe do LEA, no qual se encontram as partes específicas das

plantas utilizadas pela comunidade, para cada indicação terapêutica. Cada amostra conteve no

mínimo três indivíduos da mesma espécie que foram misturados para comporem uma única

amostra. Após a secagem em temperatura ambiente as amostras foram trituradas em triturador

industrial e padronizadas em agitador eletro-magnético e tamises Tecnal obtendo-se

granulometria de 60 Mesh.

2.3.2 Doseamento dos teores de taninos

Os taninos foram quantificados através do método de difusão radial de Hagerman

[40] adaptado por Cabral e colaboradores, [41]. Assim, para a preparação do gel, foi utilizado

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49 SIQUEIRA, C. F. de Q. Teores de taninos e flavonóides em plantas medicinais da Caatinga: Avaliando estratégias de bioprospecção uma solução de 50 mM de ácido acético e 60 µM de ácido ascórbico, ajustando-se o pH em 5

com a adição de acetato de sódio, na qual foi adicionada agarose (tipo I) (Sigma-Aldrich)

1%. Posteriormente, a mistura foi levada ao aquecimento, sob agitação, até o ponto de

ebulição, para que houvesse uma completa homogeinização da agarose. Após resfriamento (+

45ºC), foi adicionada a albumina sérica bovina (BSA) fração V livre de ácidos graxos

(Sigma-Aldrich) na concentração de 0,1%. Alíquotas de 10 mL foram distribuídas em placas

de Petri com 9 cm de diâmetro que foram colocadas sobre uma superfície nivelada para que

fossem formadas camadas uniformes do gel. Após solidificação total do gel, foram feitos

poços com capacidade de aproximadamente 8 µL, distando 2 cm um do outro e das bordas

das placas com um perfurador de 4 mm de diâmetro.

Amostras (100mg pulverizada) foram submetidas à extração em 1 ml de uma mistura

metanol:água 50% (v/v) durante uma hora a temperatura ambiente. Três alíquotas sucessivas

de 8 µL do extrato formado foram aplicadas, com auxílio de micropipetas, diretamente nos

poços. Após completa absorção pelo gel das alíquotas dos extratos, as placas foram seladas

com parafilme e incubadas a 30 ºC por 120 h. O extrato contendo tanino após reação com a

albumina produz um precipitado opaco na forma de disco, do qual o diâmetro ao quadrado é

proporcional à concentração de taninos no extrato [28]. Para a construção da curva padrão

utilizou-se 5 alíquotas diferentes de uma solução a 25mg/mL de ácido tânico. Utilizou-se o

programa Corel Draw© X3 Versão 13 para medir os diâmetros dos anéis formados.

2.3.3 Doseamento dos teores de Flavonóides totais

A quantificação dos flavonóides foi baseada em Amorim e colaboradores [42] que

utilizaram uma metodologia que consiste num teste espectrofotométrico a 420nm, que foi

considerado preciso, exato e reprodutível, além de acessível e facilmente executável.

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50 SIQUEIRA, C. F. de Q. Teores de taninos e flavonóides em plantas medicinais da Caatinga: Avaliando estratégias de bioprospecção

Foram pesados 500 mg de cada amostra vegetal e foram transferidos para erlenmeyers

de 50 mL. Em seguida foram adicionados 25 mL de metanol:água 80%. A mistura foi então

aquecida em placa de aquecimento a temperatura de 80ºC + 5ºC por trinta minutos. Passados

os trinta minutos, o extrato foi filtrado em papel de filtro e transferido para balão volumétrico

de 50 mL.

O material contido no filtro foi lavado com 25 mL de metanol e novamente filtrado no

mesmo balão, completando-se o volume deste com metanol. Desta solução, foi pipetado 0,5

mL e transferido para balão volumétrico de 25 mL. Nestes balões foram adicionados 0,6 mL

de ácido acético glacial, 10 mL de solução piridina-metanol (2:8) e 2,5 mL de uma solução

metanólica de cloreto de alumínio a 5%. Foi utilizada água destilada para completar o volume

do balão. Após intervalo de 30 minutos em repouso à temperatura ambiente, foram realizadas

as leituras das absorbâncias em espectrofotômetro a 420 nm em cubetas de quartzo.

Para a preparação do padrão, foram colocados 6,0 mL de metanol em balões

volumétricos de 10 mL e em seguida 5,0 mg de Rutina. Para uma total dissolução do padrão

no solvente, esta solução foi mantida durante cinco minutos em banho de ultra-som. Foi

adicionado metanol para completar o volume final do balão. Desta solução, foram retiradas

alíquotas de 0,1, 0,25, 0,5, 1,0, 2,5 e 3,75 µg/mL e transferidas para balões volumétricos de

25 mL.

A cada balão foram acrescentados 0,6 mL de ácido acético glacial, 10,0 mL da

solução de piridina 20% e 2,5 mL da solução metanólica de cloreto de alumínio a 5%,

completando-se o volume com água destilada. Após 30 min de repouso em temperatura

ambiente, as leituras das absorbâncias foram realizadas a 420 nm em cubetas de vidro.

A solução branco foi preparada em balão volumétrico de 25 mL, utilizando-se todos

os reagentes anteriores (exceto extrato ou padrão), e suas leituras em espectrofotômetro a 420

nm, como solução-branco, foram efetuadas para zerar o aparelho.

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51 SIQUEIRA, C. F. de Q. Teores de taninos e flavonóides em plantas medicinais da Caatinga: Avaliando estratégias de bioprospecção

2.4 Análise dos dados

Os teores de taninos e flavonóides de cada grupo de plantas foram comparados

estatisticamente entre si por meio do teste de Kruskal-Wallis. Já a proporção desses

compostos, entre plantas do mesmo grupo, foi realizada por meio do teste G de Williams

baseado em Araújo e colaboradores [8] que considerou para este teste os teores de taninos

alto quando > 10% e baixo quando < 10%, e de flavonóides alto quando > 1% e baixo quando

< 1%. Entretanto, foi percebido que para difusão radial o percentual de taninos decresce em

quase a metade [41], então para nossa análise, foi considerado que os teores de taninos seriam

altos quando > 5% e baixo quando < 5%. Admitiu-se em todas as análises um poder de

decisão de α < 0,05. Todas as análises foram realizadas por meio do Software BioEstat 4.0

[43].

3. Resultados e Discussão

A comparação das médias dos teores de taninos não foi significativa em nenhum dos

grupos de indicações terapêuticas estudados quando comparados ao grupo controle. Apesar disto,

o valor absoluto das médias do grupo das espécies indicadas popularmente como

antimicrobianas (x = 3,74 ± 4,78) e antidiarréicas (x = 2 ± 2,37) apresentaram maiores

médias do que o grupo das plantas que foram escolhidas de forma aleatória (x = 1,09 ± 1,79).

A ausência da significância estatística pode ser explicada pelos desvios padrões terem valores

maiores que os das próprias médias.

Estudos têm apontado que os taninos possuem atividade antidiarréica comprovada

[23, 32, 33, 44 - 49] assim como antimicrobiana [50, 51], e apesar da diferença em teor destes

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52 SIQUEIRA, C. F. de Q. Teores de taninos e flavonóides em plantas medicinais da Caatinga: Avaliando estratégias de bioprospecção dois grupos não ser significativa, no nosso estudo, em relação ao grupo de plantas aleatórias,

estes compostos são mais concentrados em plantas com essas indicações [8, 17 - 19].

O grupo de plantas antimicrobianas apresentou proporcionalmente uma maior

ocorrência de plantas com altos teores de compostos tânicos quando comparado ao grupo

controle (p < 0,0001; G = 29,77), ao grupo de plantas antidiarréicas (p < 0,0004; G=12,75) e

ao grupo de plantas antidiabéticas (p < 0,0001; G = 68,33). Adicionalmente, foi o grupo que

obteve a maior média de teores entre os quatro grupos analisados, mesmo com o fato das

nove espécies contidas neste grupo, cinco não apresentarem registro deste composto.

Contudo, Alencar e colaboradores [37] identificaram este composto em quatro destas cinco

espécies, Amburana cearensis (Allemão) AC Smith, Ziziphus joazeiro Mart, Erythrina

velutina Willd. e Maytenus rigida Mart., podendo esta discordância ser explicada pelo fato

das metodologias utilizadas serem diferentes.

Mimosa tenuiflora (Willd.) Poir., conhecida popularmente como jurema-preta, foi a

espécie que obteve maior teor de taninos (12,58) (Tabela 2). Na comunidade, é utilizada por

sua propriedade antimicrobiana que já foi farmacologicamente comprovada [52 - 54], sendo

os compostos tânicos possivelmente os responsáveis por maior parte desta atividade [54].

Diferentemente do que foi visto, Araújo e colaboradores [8] identificaram

Anadenanthera colubrina (Vell.) Brenan and Myracrodruon urundeuva Allemão, e não

Mimosa tenuiflora (Willd.) Poir., como as espécies detentoras dos maiores teores de taninos.

Na sua análise foi realizada a quantificação de taninos pelo método da precipitação da caseína

para identificar se plantas com indicações antiinflamatórias e/ou cicatrizantes estavam

relacionadas com a presença destes compostos. A discordância dos resultados quanto às

espécies com maiores teores de taninos pode ser justificada pelo fato dos métodos utilizados

serem baseadas em diferentes propriedades químicas destes compostos tânicos [41].

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53 SIQUEIRA, C. F. de Q. Teores de taninos e flavonóides em plantas medicinais da Caatinga: Avaliando estratégias de bioprospecção

O fato das plantas indicadas popularmente como antimicrobianas, quase 50% delas,

possuírem uma maior ocorrência de taninos frente ao grupo das plantas aleatórias, elucida a

idéia de que grupos de indicações terapêuticas específicas podem servir como critério para

encontrar espécies da Caatinga com altos teores desses compostos. Tal observação foi

verificada por Araújo e colaboradores [8] frente às espécies indicadas como antiinflamatórias

e/ou cicatrizantes nesta mesma região.

Em relação à presença de flavonóides, em todas as espécies comuns a nossa análise e

a de Alencar e colaboradores [37], foi verificado uma concordância de 100%. Porém, da

mesma forma que não foram observadas diferenças significativas entre as médias dos grupos de

indicações terapêuticas para os taninos, também não foram observadas para os flavonóides

(Tabela 3). No entanto, as médias dos grupos de plantas antidiabéticas (x = 1,32 ± 1,22) e

antidiarréicas (x = 0,94 ± 0,94) foram ligeiramente superiores a do grupo controle (x = 0,849 +

0,91).

Nenhum dos grupos das indicações terapêuticas estudadas apresentou proporcionalmente

maior ocorrência de flavonóides quando comparados ao grupo de plantas aleatórias. O grupo

de plantas antidiarréicas obteve a mesma proporção de espécies com altos teores de

flavonóides que o grupo controle, e ambos apresentaram uma maior ocorrência destes

compostos frente às plantas antimicrobianas (p < 0,0001; G = 21,33).

O grupo de plantas indicadas para diabetes também apresentou uma maior ocorrência

de flavonóides quando comparadas as plantas antimicrobianas (p = 0,0002; G = 13,42), sendo

esta indicação no nosso estudo, a que menos se relacionou com estes compostos apesar da

literatura comprovar a presenças de flavonóides em plantas que possuem atividade antimicrobiana

[55 - 57]. Já são conhecidas comprovações farmacológicas das atividades antidiabética [56, 61] e

antidiarréica [59 - 61] devido a presença de flavonóides em espécies vegetais.

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54 SIQUEIRA, C. F. de Q. Teores de taninos e flavonóides em plantas medicinais da Caatinga: Avaliando estratégias de bioprospecção

Diferente do esperado, devido ao pequeno número de espécies que compõem o grupo das

plantas antidiabéticas, este grupo foi o que apresentou maior média de teores de flavonóides em

relação às outras indicações estudadas. Além disso, apresentou a espécie que obteve maior teor

desses compostos (4,94) (Tabela 2), Bauhinia cheilantha (Bong.) Steud que popularmente

está relacionada com esta indicação terapêutica. Silva et al. [62], num estudo realizado sobre

a composição química e potencial farmacológico de plantas do gênero Bauhinia, cita que esta

atividade é comprovada cientificamente nesta espécie quando utilizado seu extrato

metanólico (600 mg/kg) em ratos com diabetes induzida por aloxano.

Desta forma, podemos concluir que em relação aos teores de flavonóides nenhuma das

indicações populares pode vir a ter preferência no que diz respeito a encontrar altos teores destes

compostos em espécies vegetais. Porém, pelo fato do grupo das plantas com indicação

antimicrobiana possuir uma maior proporção de plantas com altos teores de taninos em relação ao

grupo controle e às outras indicações terapêuticas estudadas, pode servir de indício para futuras

análises que tenham como objetivo encontrar espécies com altos teores deste composto que

parece estar relacionado localmente com esta atividade.

Agradecimentos

Os autores agradecem ao CNPq (“edital universal") pelo apoio financeiro a estudante de

mestrado Clarissa Fernanda de Queiroz Siqueira e os subsídios a Ulysses Paulino de

Albuquerque. A Ariane Gaspar Santos e Alexandre (morador da comunidade) pela ajuda na

coleta do material vegetal, a Valerium Thijan Nobre de A. e Castro e Camila Castelo B. R. de

Almeida pelo auxílio na realização da parte experimental, e a todos os membros do

Laboratório de Produtos Naturais pelo apoio e incentivo.

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64 SIQUEIRA, C. F. de Q. Teores de taninos e flavonóides em plantas medicinais da Caatinga: Avaliando estratégias de bioprospecção Tabela 1: Plantas medicinais selecionadas a partir de um levantamento etnobotânico realizado na vegetação da Caatinga no estado de Pernambuco, Nordeste do Brasil.

Grupo: Indicação

Nome Científico Nome Local / Órgão Parte utilizada

Grupo I: Schinopsis brasiliensis Engl. Baraúna Casca

Hymenaea courbaril L. Jatobá Casca

Handroanthus impetiginosus (Mart. ex DC.) Mattos (Tabebuia impetiginosa (Mart. ex DC.)

Standl.)

Pau d’arco roxo Casca

Cereus jamacaru P. DC. Mandacaru Cladódio

Capparis jacobinae Moric. ex Eichler Incó Folha Serjania lethalis A. St.-Hil. Ariú Raiz

Manihot glaziovii Muel. Arg. Maniçoba Casca Nicotiana glauca Graham Pára-raio Folha

Solanum aculeatissimum Jacq. Gogóia Raiz

Seleção aleatória

Crateva tapia L. Trapiá Casca Grupo II: Amburana cearensis (Allemão) A.C. Smith. Imburana açu Casca

Ziziphus joazeiro Mart. Juazeiro Casca Anadenanthera colubrina (Vell.) Brenan Angico / preto Casca

Erythrina velutina Willd. Mulungu Casca Maytenus rigida Mart. Bom nome Casca

Mimosa tenuiflora (Willd.) Poir. Jurema lisa Casca Caesalpinia pyramidalis Tul. Catingueira rasteira Casca

Myracrodruon urundeuva Allemão Aroeira Casca

Antimicrobiana

Guapira laxa (Netto) Furlan Piranha Casca Grupo III: Libidibia ferrea (Mart. ex Tul.) L. P. Queiroz

(Caesalpinia ferrea Mart.) Jucá Casca

Caesalpinia pyramidalis Tul Catingueira rasteira Casca Lantana camara L. Chumbinho Folha

Croton blanchetianus Baill. Marmeleiro Casca Croton rhamnifolius Willd. Velame Folha Eugenia uvalha Cambess. Ubaia Casca Spondias tuberosa Arruda Umbu Casca

Croton argyroglossum Baill. Rama branca/ Velame branco

Casca

Ziziphus joazeiro Mart.. Juazeiro Folha

Antidiarréica

Cedrela odorata L. Cedro Casca Grupo IV: Bauhinia cheilantha (Bong.) Steud. Mororó branco Folha

Croton argyroglossum Baill. Rama branca/ Velame branco

Casca

Spondias tuberosa Arruda Umbu Casca Tillandsia usneoides (L.) L. Salambaia comprida/

Samambaia Planta toda

Erythrina velutina Willd. Mulungu Casca

Hipoglicêmicas e/ou

Antidiabética

Maranta divaricata Roscoe Cana de macaco Casca

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65 SIQUEIRA, C. F. de Q. Teores de taninos e flavonóides em plantas medicinais da Caatinga: Avaliando estratégias de bioprospecção Tabela 2 – Plantas medicinais analisadas com seus teores de Taninos (T) e Flavonóides (F) em amostra seca obtida a partir de um levantamento etnobotânico realizado na vegetação da Caatinga no estado de Pernambuco, Nordeste do Brasil.

Group: Indication

Scientific name Popular name F T

Group I: Schinopsis brasiliensis Engl. Baraúna 2.55 5.53 Hymenaea courbaril L. Jatobá 0.46 2.35

Handroanthus impetiginosus (Mart. ex DC.) Mattos (Tabebuia impetiginosa (Mart. ex DC.) Standl.)

Pau d’arco roxo 0.1 -

Cereus jamacaru P. DC. Mandacaru 0.2 - Capparis jacobinae Moric. ex Eichler Inço 1.29 -

Serjania lethalis A. St.-Hil. Ariú 0.05 1.21 Manihot glaziovii Muel. Arg. Maniçoba 0.3 1.89

Nicotiana glauca Graham Pára-raio 1.6 - Solanum aculeatissimum Jacq. Gogóia 1.91 -

Random selection

Crateva tapia L. Trapiá 0.03 -

Group II: Amburana cearensis (Allemão) A.C. Smith. Imburana açu 0.33 - Ziziphus joazeiro Mart. Juazeiro 0.14 -

Anadenanthera colubrina (Vell.) Brenan Angico / preto 0.39 8.24 Erythrina velutina Willd. Mulungu 0.21 -

Maytenus rigida Mart. Bom nome 0.3 - Mimosa tenuiflora (Willd.) Poir. Jurema lisa 0.2 12.58

Caesalpinia pyramidalis Tul. Catingueira rasteira 0.65 6.01 Myracrodruon urundeuva Allemão Aroeira 2.95 6.88

Antimicrobial

Guapira laxa (Netto) Furlan Piranha 0.04 -

Group III: Libidibia ferrea (Mart. ex Tul.) L. P. Queiroz (Caesalpinia ferrea Mart.)

Jucá 0.49 6.24

Caesalpinia pyramidalis Tul Catingueira rasteira 0.65 6.01 Lantana camara L. Chumbinho 3.72 -

Croton blanchetianus Baill. Marmeleiro 0.47 2.47 Croton rhamnifolius Willd. Velame 2.71 - Eugenia uvalha Cambess. Ubaia 0.72 1.68 Spondias tuberosa Arruda Umbu 2.26 1.51

Croton argyroglossum Baill. Rama branca/ Velame branco

0.23 -

Ziziphus joazeiro Mart.. Juazeiro 1.75 -

Antidiarrheal

Cedrela odorata L. Cedro 0.21 2.09

Group IV: Bauhinia cheilantha (Bong.) Steud. Mororó branco 4.94 1.82 Croton argyroglossum Baill. Rama branca/

Velame branco 0.23 -

Spondias tuberosa Arruda Umbu 2.26 1.51 Tillandsia usneoides (L.) L. Salambaia

comprida/ Samambaia

0.3 -

Erythrina velutina Willd. Mulungu 0.21 -

Hypoglycemia and / or

antidiabetic

Maranta divaricata Roscoe Cana de macaco 0.02 -

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66 SIQUEIRA, C. F. de Q. Teores de taninos e flavonóides em plantas medicinais da Caatinga: Avaliando estratégias de bioprospecção Tabela 3 – Comparação entre a quantidade de Taninos e Flavonóides, de plantas medicinais selecionadas por estratégia etnodirigida na vegetação da Caatinga no estado de Pernambuco, Nordeste do Brasil.

Grupos / Indicações

Taninos (média + erro

padrão)

Flavonóides (média + erro

padrão)

Proporção de espécies com alto vs baixo teor de taninos

Proporção de espécies com alto vs baixo teor

de flavonóides

Aleatórias 1,09 + 1,79 0,849 + 0,91 10,00 / 90,00 a 40,00 / 60,00 a

Antimicrobianas 3,74 + 4,78 0,28 + 0,17 44,44 / 55,56 b 11,11 / 88,89 b

Antidiarreicas 2,0 + 2,37 0,94 + 0,94 20,00 / 80,00 a 40,00 / 60,00 a

Antidiabéticas 0,55 + 0,86 1,32 + 1,95 0,00 / 100,00 c 33,33 / 66,67 a Medias ou proporções seguidas da mesma letra na coluna não diferem entre si, a 5% de probabilidade, por meio do teste de Kruskal-Wallis.

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67 SIQUEIRA, C. F. de Q. Teores de taninos e flavonóides em plantas medicinais da Caatinga: Avaliando estratégias de bioprospecção

5. Conclusões

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68 SIQUEIRA, C. F. de Q. Teores de taninos e flavonóides em plantas medicinais da Caatinga: Avaliando estratégias de bioprospecção 5. Conclusões

Existem poucas pesquisas relacionadas a investigações fitoquímicas de plantas

nativas da Caatinga, e, portanto este estudo teve o intuito de contribuir para a identificação de

recursos com potencial de aplicações medicinais, dando significativa importância ao

ecossistema predominante da região Nordeste.

Além do mais, permitiu elucidar a relação entre os teores de compostos fenólicos com

as indicações terapêuticas avaliadas, demonstrando que plantas medicinais selecionadas da

comunidade do Carão, em Altinho na Caatinga conhecidas e/ou usadas para atividade

antimicrobiana apresentaram uma maior ocorrência de compostos tânicos, podendo esta

indicação terapêutica motivar pesquisas futuras por apresentar uma possível relação com este

composto.