Extracção do ADN do Kiwi
Actividade experimental - extracção do ADN do kiwi
Maceração do kiwi
Depois de descascado, introduziu-se o kiwi na liquidificadora. Com a força centrífuga, as células que constituem a polpa do fruto são dissociadas dos tecidos a que pertencem e pode haver destruição da sua estrutura (parede e membrana celular).
Actividade experimental - extracção do ADN do kiwi
Destruição das paredes e membranas celulares
Para ajudar a romper membranas celulares (incluindo as membranas nucleares) removendo os lípidos das suas estruturas, juntou-se detergente ao kiwi e sal para neutralizar proteínas e estabilizar o ADN.
Sal
Detergente
Actividade experimental - extracção do ADN do kiwi
Separação dos fragmentos celulares das moléculas de ADN através de 2 filtrações:
1ª com papel de filtro
2ª com algodão hidrófilo
Obteve-se um filtrado.
Actividade experimental - extracção do ADN do kiwi
Aglutinação das moléculas de ADN com separação dos restantes constituintes do filtrado
Ao filtrado juntou-se álcool com a formação de duas fracções: uma alcoólica e outra aquosa.
Sendo o ADN insolúvel em álcool, precipitou e formou uma massa filamentosa esbranquiçada.
Álcool
Filtrado
Actividade experimental - extracção do ADN do kiwi
Sendo o ADN insolúvel em álcool, precipitou e formou uma massa filamentosa esbranquiçada.
Actividade experimental - extracção do ADN do kiwi
Extracção do precipitado para coloração
Com a ajuda de gaze, procedeu-se à filtração do precipitado.
Actividade experimental - extracção do ADN do kiwi
Coloração do ADN
Utilizando a técnica de Feulgen (ADN em água destilada, ADN em HCl, ADN em água destilada e ADN em reagente de Schiff) não se obtiveram os resultados esperados: “flóculos carmins”.
Com a aplicação de verde de metilo ao ADN (experimentando), obteve-se apenas um contraste como evidencia a figura.
ADN
Actividade experimental - extracção do ADN do kiwi
Discutindo os resultados...
Tendo em conta que os procedimentos foram seguidos com rigor, a coloração não terá sido bem evidente por alteração da qualidade do corante utilizado (?...)
•Concluindo ...
Recomenda-se a repetição de todo o processo de coloração com a utilização de outros reagentes (o corante do protocolo - reagente de Schiff, bem como de outros corantes com afinidade com o ADN - verde de metilo, azul de metileno, água iodada...) para identificação e destaque do ADN extraído.