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Genética Bacteriana e Clonagem
Universidade de Santo AmaroUniversidade de Santo AmaroFaculdade de BiomedicinaFaculdade de Biomedicina
Microbiologia Básica e Clínica Microbiologia Básica e Clínica II
É responsável pelo armazenamento e É responsável pelo armazenamento e transmissão da informação biológicatransmissão da informação biológica
DNA DNA Ácido Desoxirribonucleico
GGCC
AATT
TT
TT
AA
AA
GGCC
5`5`
3`3` 5`5`
3`3`
DNADNAEstrutura Estrutura PrimáriaPrimária
CROMOSSOMO
Dupla fita circular Tamanho varia de acordo com o tipo de bactéria Escherichia coli – 4,6 milhões de bases (850 x maior que a célula) Difuso na região nucleóide Genes para o metabolismo e ciclo vital Constituído por partes codificantes Ausência de Introns
O cromossomo dos procariontes é circular
Localização do DNALocalização do DNA
Eucariotos x ProcariotosEucariotos x Procariotos
Meio com glicoseMeio com glicose
(lacL) gene repressor (lacP) gene promotor (lacO) gene operador(lacZ) β-galactosidase•(lacY)lactose-permease•(lacA) tiogalactosídeo-transacetilase
Sem glicose e com lactoseSem glicose e com lactose
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A Bactéria como ferramentaA Bactéria como ferramenta
Clonagem MolecularClonagem Molecular
Estrutura básica de um plasmídeo-vetor
RTRT
AAAAAAAA AAAAAAAAAACT GGCA TCGT
AACT GGCA TCGT
Clonagem MolecularRNA
ds cDNA
ds cDNA
cDNA
TecidoTecido
Am
pA
mprr
ORIORI
Am
pA
mprr
ORIORI
cDNAcDNA
PLASMÍDIO DNARECOMBINANTE
VETORESVETORES
Seleção das bactérias transformadas
Bactérias que não receberam o DNA (inserto) Bactérias que não receberam o DNA (inserto) crescem formando colônias azuis (presença do crescem formando colônias azuis (presença do gene LacZ) enquanto aquelas que foram gene LacZ) enquanto aquelas que foram transformadas crescem incolores.transformadas crescem incolores.
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