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Aula prática de coloração de Gram
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Microbiologia Bsica
Aula prtica
Dr. Deivid Batisto
2015
Objetivos:
Observao de bactrias
Preparao de esfregao
Tcnicas de colorao:
Coloraes simples (azul de metileno)
Coloraes diferenciais (Colorao de Gram)
Tcnicas de colorao
o Permitem revelar a forma, a dimenso e os componentes das clulas bacterianas, bem como, os aspetos bioqumicos da
sua estrutura.
o Permitem observar clulas bacterianas em microscopia de campo claro.
o Como o ndice de refrao do protoplasma bacteriano difere muito pouco do meio circundante, difcil o exame
direto de preparaes no coradas, a no ser que se utilizem
tcnicas especiais de iluminao.
Tcnicas de colorao
Preparao do esfregao
Fixao do esfregao
Colorao
Observao ao microscpio
Preparao e fixao do esfregao
o Preparado sobre uma gota de gua
abrangendo uma superfcie de 1 cm2
o As lminas usadas podem ser lavadas com uma
mistura de lcool-ter (1:1)
o Fixao pelo calor em movimentos circulares.
o Evitar aquecer demasiado a preparao para
no destruir as clulas
Em caso de incndio.
Cobertor
Extintor
NO APAGAR O FOGO
COM GUA
Manter a calma!! os movimentos rpidos alimentam a combusto
Tapar o frasco
e a lamparina
Azul de metileno
Mtodo de colorao simples utilizao de um nico
corante.
Corante bsico ou catinico - fixado pelas estruturas
mais negativas da clula como os cidos nucleicos e
a parede celular das bactrias
Colorao com azul de metileno
1. Corar com azul de metileno durante 1 minuto
2. Lavar com gua
3. Secar com cuidado e observar ao microscpio
http://www.bigroom.org/wordpress/?m=200704
http://www.apsnet.org/education/IntroPlantPath/PathogenGroups/bacteria/text/fig12.htm
Colorao de Gram
Gram + Gram -
Colorao diferencial
Distingue bactrias Gram + de bactrias Gram-
Indispensvel na identificao bacteriana
Bactrias Gram+ e Gram- Composio diferente da parede celular
Gram+: Parede homognea e espessa, formada
essencialmente por peptidoglicano, baixa quantidade de
lipoprotenas.
Gram-: Parede fina, camada de peptidoglicano fina,
camada externa complexa, formada por lipoprotenas e
polissacardeos
Colorao de Gram
Violeta de
cristal
1 minuto
Lugol
(iodo)
1 minuto
lcool
Acetona
30-60 segundos
Safranina
ou Fucsina
30-60 segundos
dH2O dH2O
Trabalho a realizar:
oIsolamento de colnias:
Repicagem (riscado em placa)
oPreparao de esfregao a partir de meio lquido e
slido
oTcnicas de colorao:
Colorao de Gram