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Coloração CelularNeurofisiologia
2010/2011
Ciências Biomédicas Universidade da Beira Interior
UBI
Grupo 5:Alexandra Soares 24016Elisabete Costa 23460Paulo Machado 21598Raquel Fernandes 22771
• As estruturas celulares apresentam um fraco contraste óptico.
Observação muito difícil
• Alguns componentes celulares têm a capacidade de absorver certos corantes, enquanto que outros não.
• Destacar algumas estruturas celulares por contraste com as restantes.
SOLUÇÃO: Coloração Celular.
Corantes Orgânicos
( mais usados)
Corantes Naturais
• Carmim;• hematoxilina;• Orceína;
Ácidos
•Extraídos de animais ou plantas.Básicos
Neutros
Corantes Artificiais
• Eosina;• azul de metileno;
• Fucsina;• vermelho neutro;• verde iodo.
Ácidos•Sintetizados em laboratório a partir de derivados da anilina;
• Específicos para a coloração
de determinadas estruturas celulares.
Básicos
Neutros
Quaisquer dos componentes dos tecidos ou órgãos que reajam com um corante básico são chamados basófilos, que significa ter afinidade por bases. As estruturas que reagem
com um corante ácido são chamadas acidófilas, que significa ter afinidade por ácidos.
Os corantes ligam-se aos tecidos devido à presença de radicais aniónicos ou catiónicos nas moléculas do corante, que reagem com os radicais de carga oposta
presentes nos componentes celulares, através de interacções electrostáticas.
Corantes básicos interagem com os
componentes celulares ácidos(carga eléctrica
negativa)
Corantes básicos interagem com os
componentes celulares básicos(carga eléctrica
positiva)
•radicais fosfato dos ácidos nucléicos ( DNA e RNA ); •radicais fosfato e carboxila dos
proteoglicanos;•carboxilas presentes nos polissacarídeos
ácidos (ácido hialurônico);•proteínas ácidas.
•proteínas ricas em aminoácidos básicos.
COLORAÇÃO DE HEMATOXILINA E EOSINA• Coloração permanente;• Principal técnica de coloração de tecidos em histologia;
• Este tipo de coloração permite diferenciar: →partes basófilas (pela hematoxilina);→partes eosinófilas (pela eosina)
Hematoxilina tem atracção pelas substâncias ácidas dos tecidos, como as proteínas (ricas em radicais amina), como os núcleos e o retículo endoplasmático rugoso e
ácidos nucleicos.
Eosina, sendo acidófila, apresenta coloração predominante pelo citoplasma, fibras de colagénio e outras estruturas compostas de substâncias com carácter básico.
NOTA: Quando utilizado o corante ácido eosina nos cortes de tecidos, as substâncias coradas são muitas vezes referidas também como eosinófilas em alternância com o termo acidófilo.
• Coloração de cortes de tecidos por hematoxilina evidenciará com uma cor azul as estruturas celulares. (NÚCLEO)
• A coloração pela eosina evidenciará com uma cor rósea as estruturas celulares. (CITOPLASMA)
Cerebelo:1-camada granulosa;2-células de purkinje;3-camada molecular.
NÚCLEO
CITOPLASMA
COLORAÇÃO E MONTAGEM:
•Desparafinização•Re-hidratação•Coloração•Diferenciação•Desidratação•Clarificação•Montagem
Coloração CelularNeurofisiologia
2010/2011
Ciências Biomédicas Universidade da Beira Interior
UBI
Alexandra Soares 24016Elisabete Costa 23460Paulo Machado 21598Raquel Fernandes 22771
Antes do processo de coloração, na fase da impregnação ocorre a substituição do xilol pela parafina.
1.DESPARAFINAÇÃO:• Xilol
2.RE-HIDRATAÇÃO:• Etanol absoluto• Etanol 95%• Etanol 70%• Água
3.COLORAÇÃO e DIFERENCIAÇÃO:• Hematoxilina • Água• Diferenciador (etanol + HCl)• Água• Etanol 70%• Eosina
4.DESIDRATAÇÃO:• Etanol 70%• Etanol 95%• Etanol 100%
5.CLARIFICAÇÃO:• Xilol
6.MONTAGEM:• Colocar 1-2 gotas de meio de montagem sobre a fatia;• Colocar a lamela sobre o meio de montagem, exercendo uma ligeira pressão sobre ela;• Deixar secar.
CORPÚSCULOS DE NISSL:
• São acumulações basófilas, que se encontram no citoplasma de algumas células nervosas.
• Os corpúsculos de Nissl são constituídos por retículo endoplasmático rugoso e encontram-se no pericário e na primeira porção das dendrites, não é possível encontrá-los nos axónios .
Franz Nissl, neurólogo alemão (1860-1919)
• Têm uma grande afinidade com os corantes básicos, o que leva à obtenção de uma coloração intensa permitindo um bom estudo histológico.
COLORAÇÃO DE NISSL
Corpúsculos de NisslNúcleo
PericárioProlongamentos
Este tipo de coloraçãopermite visualizar:
Coloração selectiva desenvolvida por Nissl baseia-se na coloração por anilina usada para marcar grânulos extra nucleares de RNA.
Diferença entre coloração H&E e coloração de Nissl:
THE END