1

PREFIXO

Tera

Giga

Mega

Kilo

Hecto

Deca

-

Deci

Centi

Mili

Micro

Nano

Pico

Femto

Atto

SÍMBOLO

T

G

M

k

h

da

-

d

c

m

n

p

f

a

POTÊNCIA

1012

109

106

103

102

101

100

10-1

10-2

10-3

10-6

10-9

10-12

10-15

10-18

DECIMAL

1.000.000.000.000,0

1.000.000.000,0

1.000.000,0

1.000,0

100,0

10,0

0

0,1

0,01

0,001

0,000001

0,000000001

0,000000000001

0,000000000000001

0,000000000000000001

Você identificou problemas com

algumas metodologias, os quais que

foram associados a utilização do novo

lote de solução salina (NaCl) 0,9%.

1) O que poderia ter acontecido no

preparo do reagente de modo a

torná-lo inadequado ao uso?

2) Proponha procedimento(s) para

que o fato não se repita

NaCl

0,9%

Proponha um “rótulo” para a solução preparada.

2

1 Mol ........ PM (gramas) ....... 1 Litro

NaCl PM = 23 (Na) + 35,5 (Cl) = 58,5

1 Mol ........ 58,5 g ....... 1000 mL (1L)

Solução 0,9 g% = 0,9 g/dL = 9g/L

X Mol ........ 9 g ....... 1000 mL (1L)

X = 0,1538 Mol/L ~ 0,154 mol/L

NaCl 0,154 mol/L ou 154 mmol/L

1 Mol ........ PM (gramas) ....... 1 Litro

reagentes

Sol. 1 mol/L

g/L

Solução 10% p/v

em CuSO4

CuSO4 anidro

CuSO4 .H2O

CuSO4 .5 H2O

160

178

250

10

9,4

6,4

1 Mol ........ PM (gramas) ....... 1 Litro

reagentes

Sol. 1 mol/L

g/L

Solução 10% p/v

em Na2HPO4

Na2HPO4 anidro

Na2HPO4 .7H2O

142

268,1

10

5,3

Cuidado com os nomes dos compostos químicos:

Qual o nome do fosfato acima?

Qual a relação de custo entre os saís de fosfato acima?

Soluções concentradas

ou

“Soluções stock”

Vantagens:

1. Maior estabilidade da solução;

2. Tempo de preparo da solução diluída menor;

3. Facilidade no preparo

Porque manter soluções

concentradas e diluí-las para uso ?

3

Dispondo de uma solução de NaOH 10 M,

preparar 250 mL de uma solução 0,02 M

C1.V1 = C2.V2

TEM QUER

C1 = NaOH 10 M

V1 = ?

V2 = volume final

250 mL

C2 = 0,02 M

10 M x V1 = 0,02 M x 250 mL

V1 = 0,5 mL

Custo e

pureza

GRAU DE PUREZA NOME USUAL

SUPERIOR SUPRAPUR,

Ultrapuro

ANALÍTICO p.a., AR, RA

FARMACÊUTICO DAB, USP, NF,

Farm.Bras.

QUIMICAMENTE

PURO

Puro, Puríssimo

COMERCIAL Industrial,

Purificado,

Prático, Técnico

Reagentes para aplicação específica:

ex: for molecular biology, for HPLC

4

Processo Sólidos

ionizadosdissolvidos

Orgânicos

dissolvidos

Gases

ionizadosdissolvidos

Particulados Bactérias Pirogênios

Endotoxinas

Destilação G-E G P E E E

Deionização E P E P P POsmose Reversa G G P E E E

Adsorção-Carbono P G-E P P P P

Filtração P P P E E P

Ultrafiltração P G P E E EOxidação UV P G-E P P G P

Legenda: E = excelente; G = Bom (good) e P = PobreRETIRADO DE:Americam Public Health Association Standard methods for the examination of water and wastwater., 18ed, Wa shington,

PRÉ-FILTROS

FILTROS

OSMOSE REVERSA

ULTRA-PURIFICAÇÃO

(Mili-Q, ELGA, Bernsted)

ULTRA-PURA

TIPO II (> 2 M/cm)

TIPO I (> 10 M/cm)

TIPO III (> 0,1 M/cm)

FILTRO

DESTILAÇÃO

DEIONIZAÇÃO

Resistência específica

(inverso da Condutividade)

Filtração

OSMOSE

Água

pura

Solução

salina

Membrana

semi-permeável

Pressão

Osmótica

OSMOSE REVERSA

Água

pura

Água

de alimentação

Membrana

semi-permeável

5

Osmose reversa

1 11

2

3

4 5 6

7

8

9

1 10

2

3

4 5 6

7

8

9

1 10

Especificações para Água Grau Reagente

TIPOS

Conteúdo microbiológico

pH

resistência específica

silicatos

partículas

matéria orgânica

I 10

N.A.

10

0,05

filtro 0,25 m

carvão ativo

II 103

N.A.

2

0,1

N.A.

N.A.

III N.A.

5-8

0,1

1,0

N.A.

N.A.

6

Usos e Estocagem da Água Grau Reagente

Tipo III: - Lavagem de vidraria

- Preparo de meios de cultura

- Histologia

Tipo II: - Ensaios laboratoriais gerais

Tipo I: - Determinação de traços de metais

- Dosagem de enzimas

- Dosagem de eletrólitos

Estocagem: não é estável, preparar o

necessário para uso

Água ultra-pura

1 cm

1 cm +

+ +

Fluxo de elétrons

Condutividade = microsiemens por centímetro = S/cm

Resistividade = megohm-centímetro = M-cm

É o recíproco da Condutividade

Forma mais conveniente de medição da

água pura

1

Condutividade

A 25ºC uma água totalmente pura apresenta:

Resistividade = 18,2 M -cm

Condutividade = 0,055 S/cm

=

7

A B C D-E F-2

F-1

F-3

A = fonte luminosa

B = seletor espectral

C = cubeta

D = detector - E = amplificador

F = registro 1 = analógico,

2 = digital,

3 = gráfico (informatizado)

Lei de Lambert: “ a proporção de energia radiante

absorvida por uma substância é independente da

intensidade da radiação incidente”

Lei de Beer: “ a absorção de energia radiante é

proporcional ao número total de moléculas que

absorvem no caminho da luz”

-log T = log It

Io = A = abc

I0 It

b

concentração

a

Transmitância (T) = It

I0

8

log I0

It = ABSORBÂNCIA (A)

It

I0 = 10-abc log

It

I0 = -abc log

I0

It = abc

It = I0 . 10-abc a

b

I 0 I t

c

Absorbância é diretamente proporcional à concentração.

Resumo:

I0 It It

I0 = T = 100% ou A = 0.000

AMOSTRA

I0 = 100% T It It

I0 = %T ou A da amostra

BRANCO Ajuste do equipamento

Leitura

reagente

Reagente + cromógeno

A luz incidente (I0) efetiva é aquela transmitida por

um “branco” ou “referência”

O “branco” deve ser idêntico à amostra em medição

exceto pela ausência da substância a ser medida.

Leitura do branco = I0 - outras perdas

Portanto: Intensidade absorvida = branco - It

Ajustar o equipamento em:

ZERO de ABSORBÂNCIA (ou 100% T)

Eliminar a “absorbância de fundo” ou

seja, aquela que não esta relacionada

ao que se deseja medir. CONCENTRAÇÃO

AB

SO

RB

ÂN

CIA

0

0.1

0.2

0.3

0.4

0.5

0.6

0 1 2 3 4 5

9

SPECTROQUEST UV SPECTROPHOTOMETER

DU® 800 UV/Visible Spectrophotometer Biochrom WPA S800 Visible Spectrophotometer

1. CARACTERÍSTICA PRÓPRIA DO MÉTODO

2. “QUALIDADE” DO EQUIPAMENTO

3. MANUTENÇÃO DO EQUIPAMENTO

LINEARIDADE

Solução de Sulfato de níquel hexahidratado a 4 ou 5% p/v

em ácido clorídrico 1% v/v. Esta solução é muito estável (anos) em frasco âmbar bem

fechada.

Branco: HCL 1% v/v .

mL NiSO4.6H2O

4% p/v

mL HCl

1% v/v

% Absorbância (nm)

400 700

0,5 1,5 25

1 1 50

1,5 0,5 75

2 0 100

Interpretação:

1. Com linearidade: lâmpada e sistema de

detecção estão bons.

usar os resultados para controle ao longo do

tempo do equipamento.

2. Sem Linearidade:

a. trocar a lâmpada e testar novamente:

se linear OK

b. se não for linear pode ser o detetor

chamar assistência técnica.

10

Concentração (%)

Absorbânc

ia

0

0.2

0.4

0.6

0.8

0 25 50 75 100

Curva com NiSO4.6H2O 5g/dL em HCl 1% v/v

400 nm

700 nm

LINEARIDADE

Comprimento de onda (nm)Absor

bância

0.15

0.25

0.35

0.45

0.55

0.65

505 510 515 520 525 530

ÁCIDO

BÁSICO

CALIBRAÇÃO ISOSBÉSTICA

Vermelho de Fenol aquoso 7 mg/L: 514 5 nm

Ponto

isosbéstico

518 nm

N

C NH2

O

O

OH HO

O-P-O-P-O

O O

O OH

O

OH HO

N

N

N

N

NH2

Adenina

D-Ribose D-Ribose

Pirofosfato

Nicotinamida

-PO3H2

(NADP+)

Nicotinamida Adenina Dinucleotídeo (NAD+)

N

C NH2

O forma reduzida

(NADH)

340 = 0,315 0,05 . 1

= 6,3 L.mmol-1.cm-1

NADH 0,05 mmol/L

cubeta = 1 cm

ESPECTRO DE ABSORÇÃO DO NADH e NAD

comprimento de onda (nm)

Ab

so

rbân

cia

0,315

0

0.2

0.4

0.6

0.8

1

1.2

240 260 280 300 320 340 360 380 400

NADH reduzido

NAD oxidado

11

I0 It a

TURBIDIMETRIA

NEFELOMETRIA

0º

90º 45º Dispersão da

luz para frente

0º

d < 0.1

d

d >

Efeito do tamanho das partículas na dispersão da

luz incidente em uma solução homogênea

45º 90º

0º

0º

A) Pequena

B) Grande

C) Muito Grande

Tamanho da Partícula

Rayleigh

Rayleigh-Debye

Mie

KAPLAN, Lawrence A. e PESCE, Amadeo J. Clinical chemistry. Theory,

analysis, correlation. 3 ed. Mosby: St. Louis, 1996.

Detecção de pequeno sinal

(amplificável) em um

background escuro = alta

sensibilidade

equipamento: nefelômetro,

aplicação dedicada à esta

técnica. Detecção de uma pequena

redução em um grande sinal

= sensibilidade limitada

equipamento:

espectrofotômetro “comum”

(os atuais permitem boa

sensibilidade) Fim da apresentação

12

Capilar de aspiração

da amostra

FOTOMETRIA DE EMISSÃO DE CHAMA:

K+ = K+ sinal

Cs sinal Na+ =

Na+ sinal

Cs sinal

Chama

fonte de luz

K+ Na+

Cs

ar

combustível

dreno

= monocromador = fotodetector

Princípio da Fotometria de Emissão de Chama

Emissão de luz

Chama

elétrons

Na+ = 589 nm (3p - 3s)

K+ = 767 nm (4p - 4s)

Li+ = 671 nm (2p - 2s)

Cs

Aproximadamente apenas

1 - 5% dos átomos presentes

na chama são excitados

Evaporação

Na+ +

Na0

Na+

Na+

Na+

Na2O

Dissociação

+

ELÉTRON

Oxidação

Solução Vapor

ESPECTROFOTOMETRIA DE ABSORÇÃO ATÔMICA

lâmpada

chama

monocromador detector

Sistema de

leitura

amostra

nebulizador

C2H2

fenda

Princípio

13

ELETRODOS ÍON-SELETIVOS [ISE]

pH/mV

eletrodo de

referência

externo

eletrodo de

referência

interno

eletrodo íon

seletivo

amostra

membrana

Eletrodos de membrana íon seletivo

- Vidro

Na+ Silicone/óxido de sódio/óxido de alumínio:

71:11:18

Silicatos de alumínio e lítio

K+ Dissolução de valinomicina em um solvente

adequado

Valinomicina