AZUL DE CRESIL BRILHANTE

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LB 172061 - Rev 02 – 06/2014 Responsável técnico: Elisa Hizuru Uemura - CRFPR 4311

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1. FINALIDADE Solução corante para contagem de reticulócitos. 2. INTRODUÇÃO Os eritrócitos são células que após passarem pelo processo de maturação, perdem o núcleo. Algumas células conservam vestígios de material nuclear, em especial o RNA, são os chamados reticulócitos. 3. IMPORTÂNCIA CLÍNICA

A presença de reticulócitos no sangue periférico é um sinal inequívoco de produção de células vermelhas. Assim a contagem de reticulócitos é usada para se avaliar a capacidade da medula óssea em produzir novas células vermelhas, em casos de anemias hemolíticas e hemorragias. 4. AMOSTRA - Tipo de amostra A amostra usada consiste sangue total coletado com EDTA ou com citrato de sódio, isento de hemólise. - Armazenamento e estabilidade da amostra A amostra deve ser processada o mais rapidamente possível após coletada, do contrário, manter em geladeira (2-8oC) por até 24h. - Critérios de rejeição Rejeitar amostras que se apresentem hemolisadas, coaguladas (mesmo com micro-coágulos). - Precauções e cuidados especiais Todas as amostras devem ser manipuladas com extrema cautela, pois podem veicular diversas doenças infecto-contagiosas (hepatite, SIDA etc.). Seu descarte deve ser feito preferencialmente após sua autoclavação devendo-se evitar seu descarte diretamente no meio ambiente. Igual cuidado se recomenda no descarte de outros materiais como ponteiras plásticas, agulhas e seringas. 5. INFORMAÇÕES GERAIS SOBRE O PRODUTO a- Princípio

O sangue total é diluído em azul de cresil brilhante, e a diluição é usada para fazer esfregaços hematológicos aonde serão contados os reticulócitos. b- Reagentes

- Solução a 1% de azul cresil brilhante em solução fisiológica (NaCl a 0,85%) com 0,4% de citrato de sódio. c- Armazenamento e estabilidade O material deve ser mantido em temperatura ambiente, em local fresco, seco e isento da incidência direta de luz solar, permanecendo assim estável até a data de validade expressa em rótulo, desde que isento de contaminação química ou biológica. e- Precauções e cuidados especiais

- Manter os frascos sempre bem fechados; - O reagente destina-se ao uso diagnóstico in vitro, não devendo ser ingerido ou entrar em contato com a pele, olhos e mucosas. 6. MATERIAL NECESSÁRIO (porém não fornecido) - Lâminas para microscopia; - Pipetas sorológicas e micropipetadores; - Banho-maria 37oC; - Microscópio. 7. PROCEDIMENTO TÉCNICO a- Preparar a diluição do sangue total homogeneizado em azul cresil brilhante, usando o seguinte critério baseado no hematócrito: - para hematócrito até 30%: 12 gotas de sangue para 3 gotas de corante; - para hematócrito entre 30-45%: 9 gotas de sangue para 3 gotas de corante; - para hematócrito superior a 45%: 6 gotas de sangue para 3 gotas de corante; b- Colocar em Banho-Maria a 37°C por 20 minutos; c- Homogeneizar e preparar um esfregaço hematológico com a diluição; d- Deixar secar e a lâmina estará pronta para a leitura (para uma melhor visualização, recomenda-se contra-corar por um método hematológico como panótico, Giensa etc.). e- Observar ao microscópio e contar o número de reticulócitos (eritrócitos com um filamento escuro de RNA em se interior) relativos a 1000 eritrócitos.

8. CÁLCULOS - Dividindo-se por 10 o número de reticulócitos contados em 1000 eritrócitos obtém-se o percentual de reticulócitos; Ex. contaram-se 50 reticulócitos para cada 1000 eritrócitos indicando, portanto 5% de reticulócitos. Supondo a contagem absoluta de 4,5 milhões de eritrócitos por µL, 5% de reticulócitos representam 225.000 reticulócitos/µL. 9. RESULTADOS - Expressar os resultados em percentual ou em reticulócitos por µL. - Valores de referência: 0,56 - 2,72% (24.000-84.000/µL). 10. LIMITAÇÕES DO MÉTODO Normalmente há interferências fisiológicas em pacientes submetidos a grandes transfusões. A dificuldade em se visualizar os reticulócitos pode ser contornada realizando-se uma coloração de fundo (panótico, Giensa etc.). Uma causa de erro comum é não se obedecer os critérios de diluição pelo hematócrito da amostra. 8. CONTROLE DA QUALIDADE Recomenda-se a aferição constante do material com amostras clínicas. A periodicidade do controle fica a ser estabelecida conforme a rotina do laboratório. Resultados anormais devem ser criteriosamente estudados, e até que sejam esclarecidas as causas, os resultados não devem ser liberados. 9. GARANTIA DA QUALIDADE

A Laborclin obedece ao disposto na Lei 8.078/90 - Código de Defesa do Consumidor. Para que o produto apresente seu melhor desempenho, é necessário: - que o usuário conheça e siga rigorosamente o presente procedimento técnico; - que os materiais estejam sendo armazenados em condições adequadas; - que os equipamentos e demais acessórios necessários estejam em boas condições de uso, manutenção e limpeza. Antes de ser liberado para venda, cada lote do produto é submetido a testes específicos, que são repetidos periodicamente até a data de vencimento expressa em rótulo. Os certificados de análise de cada lote podem ser obtidos junto ao site www.laborclin.com.br. Em caso de dúvidas ou outras informações, contatar o SAC - Serviço de Assessoria ao Cliente através do telefone 0800-410027 ou pelo e-mail sac@laborclin.com.br. Quaisquer problemas que inviabilizem uma boa resposta do produto, que tenham ocorrido comprovadamente por falha da Laborclin serão resolvidos sem ônus ao cliente, conforme o disposto em lei. 10. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS 1. Oliveira Lima, Antonio et al.: Métodos de laboratório aplicados à clínica,

6ª edição. Rio de Janeiro, Guanabara Koogan, 1985. 2. Moura, Roberto A. et al: Técnicas de laboratório, 3ª edição.S. Paulo, Livraria Atheneu, 1992. 11. REGISTRO NA ANVISA: 100.970.10.105 12. APRESENTAÇÃO 620477 - AZUL CRESIL BRILHANTE-RETICULOC.-FR100mL