Universidade de São Paulo- USP

Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto

Pós Graduação em Imunologia Básica e Aplicada

Ativação de linfócitos B

Ribeirão Preto- SP

Dra. Daniela Carlos Sartori

Histórico da descoberta

dos anticorpos

1890: Primeiro indício de utilização de

anticorpos “Bala mágica” 1975:

Hibridomas

Antitoxinas: neutralizar a toxina diftérica

Emil Adolf Von Behring

Corynebacterium diphteriae

Composto que atua apenas no causador da enfermidade, sem afetar o hospedeiro = Receptores específicos

Paul Erlich Imortalização de linfócitos B por meio da fusão com células de mieloma

Georges Kohler e Cesar Milstein

Anticorpos: do alemão “antikorper”

Histórico da descoberta dos anticorpos

Fases da resposta imune adaptativa Linfócitos B (humoral): os linfócitos B foram assim chamados porque, em pássaros,

foram encontradas maduros em um órgão denominado bursa de Fabricius.

Linfócitos T (celular): os linfócitos T surgem na medula óssea, migram e amadurecem no timo; por isso receberam essa denominação.

Maturação e recirculação de linfócitos T e B

Baço e linfonodos

Segregação dos linfócitos T e B nos OLP

Folículos linfóides: zonas de células B (primários e secundários) Córtex parafolicular: zonas de células T -

Vias de acesso dos antígenos

Linfócitos B naives foliculares

(recirculantes)

Subpopulações de células B

Asplenia congênita: suscetibilidade de S. pneumoniae e H. influenzae

Reconhecimento de antígenos não-proteicos (T independentes)

Igα Igβ: moléculas invariantes que contém ITAM

Polissacarídeos, lipídeos e ácidos nucleicos

múltiplos epítopos idênticos

ITAM: motivo de ativação do imunorreceptor baseado em tirosina

Papel do CD21/CR2 e TLR

Sinal 1: ligação do BCR ao antígeno Sinal 2: moléculas ligadas ou expressas por patógenos

1) C3d: fragmento do SC se liga ao receptor (CR2/CD21) e induz transdução via CD19 2) PAMP: padrões moleculares associados a patógenos: LPS (TLR4) Flagelina (TLR5) RNA (TLR7) DNA não metilado (TLR9)

Sinalização intracelular

1) Sobrevivência de célula B: • aumento da expressão de proteínas anti-apoptóticas (Bcl-2)

2) Proliferação : • Estágio G1 do ciclo celular • Aumento do tamanho • Conteúdo de RNA citoplasmático e organelas

3) Diferenciação: • Plasmócitos secretores de anticorpos (IgM) • Baixa afinidade •Sem ou pouca troca de Isótipo (IgM-IgG)

FcµRI: receptor da IgM MZB: Célula B da zona marginal (menor ativação e produção de IgM)

Infeçção com C. rodentium (bactéria gram-negativa)

Expansão clonal • Um única célula B:

• Aproximadamente 5 mil células secretoras de anticorpos

• 1012 moléculas de anticorpos por dia

proliferação e destruição dos microrganismos

Expressão de IL-2 e do receptor

Reconhecimento de antígenos proteicos (T dependentes)

MHC II-TCR

CD40-CD40L

Endocitose e internalização

do antígeno

Apresentação do antígeno e ligação do

CD40-CD40L

vários epítopos diferentes

Sequência de eventos (cooperação B-T)

Linfócitos T: reconhecem antígenos processados (peptídeos) peptídeos apresentados pelas DC Linfócitos B: reconhecem antígenos na conformação nativa

Ativação inicial e Migração de células B e células T auxiliares

CXCL13 (CXCR5)

CCL19,CCL21 (CCR7)

Mecanismos de ativação de linfócito B (extra-folicular)

Ligação CD40-CD40L (Célula B): 1) Translocação de fator de transcrição 2) Síntese proteica, proliferação e produção de anticorpos IgM (vida curta) 3) Expressão da desaminase induzida por ativação (AID)

Primeira e segunda fase da resposta humoral

Primeira fase: extrafolicular

Segunda fase: intra-folicular (centro germinativo)

Diferenciação de Linfócitos T foliculares (LTfh)

1) Dependente de DC: expressão de CXCR5 (CXCL13) e migração para folículo linfóide 2) Dependente de LB: diferenciação da LTfh via interação do ligante de ICOS (LB) com ICOS (LT)

Células dendríticas foliculares (FDC)

Não expressam MHC II Expressam CR1, CR2 e CR3 e receptores Fc

Produção de anticorpos extra-folicular Formação de Imunocomplexos

Folículo primário Linfonodo

Centro germinativo (4-7 dias): por células B em proliferação e células T antígeno-específicas que fornecem auxílio indispensável às células B (folículos secundários).

Segunda fase da resposta humoral (centro germinativo)

Zona escura: centroblastos em intensa proliferação Zona clara: centrócitos diferenciados

Maturação de afinidade

Região constante

Região variável

CDR 1

CDR 2

CDR 3

Regiões hipervariáveis

É o processo de aumento da afinidade de anticorpos a um determinado antígeno como resultado da mutação somática dos genes V das Ig

(antígenos proteicos)

Hipermutação somática

Adenina

Guanina

Timina

Citosina

É o processo de mutação que ocorre nas regiões V dos genes de Ig em nos centroblastos induzida pela citidina-deaminase

induzida por ativação (AID)

Representação do centro germinativo

Centroblastos (zona escura): redução de sIg (IgM ou IgD) e aumento da expressão de CXCR4 (retenção)

Centrócitos (zona clara): aumento da expressão de CXCR5 e aumento da expressão de sIg (superfície)

Respostas de linfócitos B (centro germinativo)

Ausência de FDC e Tfh

Presença de FDC e Tfh

Reentrada acíclica

1) Cada etapa de mutação: expressão de um novo receptor 2) Ligação ao antígeno 3) Ciclos adicionais de divisão e volta a expressar CXCR4 (centroblasto) 4) Novo processo de mutação e seleção

Seleção positiva de células B (centro germinativo)

Sobrevivência de células com receptores de alta afinidade: 1) Reconhecimento antigênico induz a expressão de proteínas anti-apoptóticas (Bcl-2)

2) Preferência na endocitose e apresentação do antígeno para LTfh (centro germinal)

Seleção e Diferenciação

Recombinação de troca

Sµ Sε Sα Sγ

•: Região de troca (Sequencias repetidas)

Estímulo: CD40-CD40L e citocinas

Mudança de isótipo

Alterações na estrutura do anticorpo

Geração de plasmoblastos e plasmócitos

Plasmoblastos

Plasmócitos

Destino das células efetoras (plasmócitos) e de memória

1) Linfócitos efetores (Plasmócitos): Medula óssea (BAFF-BCMA) 2) Linfócitos memória: OLS ou circulantes

Imunodeficiência de super-IgM

-Caracteriza-se por produção defeituosa de isótipos IgG e

IgA com produção acentuada de IgM.

-Mutações: gene que codifica a molécula efetora CD40L

em linfócitos T ou defeitos genéticos na deaminase induzida

por ativação (AID) ou uracil N-glicosilase (UNG).

-Defeitos : anormalidades na imunidade humoral

e mediada por células.

Manifestações clínicas: Início entre 1 e 2 anos de vida.

Infecções bacterianas respiratórias recorrentes, virais e

fúngicas

Antigenicidade versus Imunogenicidade

Antigenicidade: é a capacidade de combinar especificamente ao BCR e TCR (antígenos)

Imunogenicidade: indução de resposta imune (imunógenos). Todas as

moléculas com imunogenicidade possuem antigenicidade, mas o contrário não é verdadeiro.

Efeito hapteno-carreador

Reconhecimento de peptídeo pelo BCR (epítopo conformacional-hapteno)

Endocitose (carreador-proteína) e apresentação

de peptídeo (epítopo linear)

Secreção de anticorpos específicos

para determinantes conformacionais

(mesma especificidade da Ig membrana)

Resposta de anticorpo específica

para a proteína natural

Vacinais Conjugadas

Eventos celulares e moleculares

Células efetoras: plasmócitos

5.000 células: 1012 moléculas de anticorpos

por dia Células de memória

Resposta humoral primária e secundária

Recapitulando...