AVALIAÇÃO HISTOLÓGICA DA RESPOSTA DO TECIDO …server05.pucminas.br/teses/Odonto_RiosFG_1.pdf · 2014-11-28 · FICHA CATALOGRÁFICA ... implantados no dorso do rato..... 64 FIGURA

PONTIFÍCIA UNIVERSIDADE CATÓLICA DE MINAS GERAIS

Faculdade de Odontologia

AVALIAÇÃO HISTOLÓGICA

DA RESPOSTA DO TECIDO CONJUNTIVO DE RATOS

À IMPLANTES DE DENTES HUMANOS

AFETADOS PELA DOENÇA PERIODONTAL CRÔNICA,

BIOMODIFICADOS PELO EDTA 24%.

FERNANDO GONÇALVES RIOS

Belo Horizonte

2004

Fernando Gonçalves Rios

AVALIAÇÃO HISTOLÓGICA

DA RESPOSTA DO TECIDO CONJUNTIVO DE RATOS

À IMPLANTES DE DENTES HUMANOS

AFETADOS PELA DOENÇA PERIODONTAL CRÔNICA,

BIOMODIFICADOS PELO EDTA 24%.

Belo Horizonte

2004

Dissertação apresentada ao Curso de Mestrado em Clínicas Odontológicas da Faculdade de Odontologia da Pontifícia Universidade Católica de Minas Gerais, como parte dos requisitos para obtenção do Título de Mestre em Clínicas Odontológicas com ênfase em Periodontia. Orientador: Prof. Dr. José Bento Alves Co-orientador: Prof. Dr. Elton Gonçalves Zenóbio.

FICHA CATALOGRÁFICA Elaborada pela Biblioteca da Pontifícia Universidade Católica de Minas Gerais

Rios, Fernando Gonçalves R586a Avaliação histológica da resposta do tecido conjuntivo de ratos `a implantes de dentes humanos afetados pela doença periodontal crônica, biomodificados pelo EDTA 24% / Fernando Gonçalves Rios. – Belo Horizonte, 2005. 102f. :il. Orientador: Prof. Dr. José Bento Alves Co-orientador: Prof. Dr. Elton Gonçalves Zenóbio Dissertação (mestrado) – Pontifícia Universidade Católica de Minas Gerais, Faculdade de Odontologia. Bibliografia. 1. Periodontia. 2. Ácido etilenodiaminotetraacetico. 3. Doença periodontal. I. Alves, José Bento. II. Zenóbio, Elton Gonçalves. III. Pontifícia Universidade Católica de Minas Gerais. Faculdade de Odontologia. IV. Título. CDU: 616.311.2

Bibliotecária – Eunice dos Santos – CRB 6/1515

FACULDADE DE ODONTOLOGIA Coordenação do Programa de Mestrado em Odontologia

AVALIAÇÃO HISTOLÓGICA DA RESPOSTA DO TECIDO CONJUNTIVO DE RATOS À IMPLANTES DE DENTES HUMANOS AFETADOS PELA DOENÇA PERIODONTAL CRÔNICA, BIOMODIFICADOS PELO EDTA 24%.

FERNANDO GONÇALVES RIOS

ORIENTADOR: Prof. Dr. José Bento Alves CO-ORIENTADOR: Prof. Dr. Elton Gonçalves Zenóbio

COMPOSIÇÃO DA BANCA EXAMINADORA:

1- Prof. Dr. José Bento Alves – PUC MINAS 2- Profª. Dra. Helenice de Andrade Marigo Grandinetti – PUC MINAS 3- Profª. Dra. Marília Costa Gomes – UFMG

DATA DA APRESENTAÇÃO DA DEFESA: 15 de dezembro de 2004

A comissão examinadora aprovou esta dissertação

Belo Horizonte, 15 de dezembro de 2004

Aos meus pais, Raimundo e Therezinha,

que com amor e carinho, acompanhando, orientando meus passos e servindo-me

de exemplo, me proporcionaram, sem medir esforços, as condições necessárias

para minha formação pessoal e profissional.

A minha esposa Adriana,

pelo amor, alegrias, atenção, apoio, compreensão diária e estímulo.

Ao meu filho André,

razão maior de nossas vidas,

faz com que reencontremos o verdadeiro sentido da vida.

AGRADECIMENTOS ESPECIAIS

A Deus,

sempre presente em todos os momentos.

Aos meus irmãos, Marcos e Simone,

pelo estímulo e carinho constantes.

Ao Prof. Dr. José Bento Alves,

pela orientação e pela competência, para que eu pudesse transformar meu ideal em

realização.

Ao Prof. Dr. Elton Gonçalves Zenóbio,

pela coorientação, sempre tranqüila, clara, segura e presente, importantíssima para

a realização deste estudo.

Ao Prof. Dr. Fernando de Oliveira Costa,

pelas contribuições, estímulo, e generosidade.

Ao Prof. Dr. Roberval de Almeida Cruz,

pela competência e dedicação na luta incessante para melhorar cada vez mais o

nosso curso.

Ao Prof. Wilson Batista Mendes,

responsável pelo meu ingresso na docência e por estimular-me nesta jornada.

Ao Prof. Ricardo Resende Pereira da Silva,

pelo estímulo e apoio ao meu crescimento profissional.

A colega Josiene Kelli Oliveira Souza Vasconcelos,

pelo estímulo, apoio, amizade e contribuições.

A Profa. Dra. Gerluza Aparecida Borges da Silva,

pelas contribuições, pelo estímulo e pela ajuda.

AGRADECIMENTOS

Ao Prof. Dr. Marco Souza Pinto de Carvalho, pelo apoio ao meu crescimento profissional. Ao Prof. Dr. Sergio Carvalho Costa, pelo estímulo e apoio ao meu crescimento profissional. Aos Professores do mestrado da PUC-MG, pela contribuição na minha formação profissional. Aos colegas de Mestrado Vânia, Trícia, Leda e os demais colegas das outras áreas de concentração que com os vinte e quatro meses de bom convívio, amizade e colaboração que tivemos, tornou o curso mais prazeroso. Aos Professores Dr. Humberto Pereira Oliveira e Dra. Zélia Falcão Almeida da Escola de Veterinária - UFMG pelas contribuições prestadas. Ao Pedro, tratador de animais do ICB-UFMG que com sua experiência ajudou a realizar esse estudo. A Dra. Rosa e ao Sr. Arlindo do Centro Tecnológico de Minas Gerais pelas contribuições prestadas. Ás secretárias Angélica, Silvânia e Fátima que com toda eficiência nos auxiliaram durante o curso. À técnica de laboratório da patologia da Pontifícia Universidade Católica de Minas Gerais, Reni, que com sua experiência ajudou a realizar esse estudo. Às bibliotecárias da Faculdade de Odontologia da UFMG e da PUC-MG pela colaboração e eficiência. Às pessoas que tornaram possível a realização desse trabalho. Aos participantes dessa pesquisa, meu respeito e consideração, pois foram de suma importância para a realização desse estudo.

“Há verdadeiramente duas coisas diferentes: saber e crer que sabe.

A ciência consiste em saber; em crer que sabe está a ignorância.”

Hipócrates

LISTA DE FIGURAS

FIGURA 1 Processo de lavagem dos dentes com soro fisiológico utilizando escova dental infantil..................................................

56

FIGURA 2 Processo de RAR.......................................................................

57

FIGURA 3 Material utilizado na RAR........................................................... 57

FIGURA 4 Dente sendo lavado com soro após RAR................................... 57

FIGURA 5 Dente fixado em suporte de plástico para ser seccionado......... 58

FIGURA 6 Material utilizado para seccionamento dos dentes..................... 58

FIGURA 7 Obtenção dos fragmentos. a)Secção transversal do 1/3 apical; b)Secção longitudinal VL; c)Secção longitudinal MD; d)Vista ápico-coronal da raiz seccionada; e)Secção transversal cervical; f) Fragmentos obtidos após secção de um dente.........

59

FIGURA 8 Dimensão dos fragmentos radiculares obtidos........................... 59

FIGURA 9 Estojo e seringa do EDTA da Biodinâmica®............................... 60

FIGURA 10 Fragmento radicular sendo condicionado com EDTA da Biodinâmica® ..............................................................................

60

FIGURA 11 Estojo e frasco do EDTA da Biora®............................................ 61

FIGURA 12 Fragmento radicular sendo condicionado com EDTA da Biora®

61

FIGURA 13 Frasco do EDTA da JHS®........................................................... 62

FIGURA 14 Fragmento radicular sendo condicionado com EDTA da JHS®.. 62

FIGURA 15 Fragmento radicular recebendo soro fisiológico em uma bolinha de algodão......................................................................

63

FIGURA 16 Fragmento sendo lavado com soro fisiológico após condicionamento.........................................................................

64

FIGURA 17 Fragmentos após o condicionamento preparados para serem implantados no dorso do rato.....................................................

64

FIGURA 18 Rattus norvegicus, Albinus, Holtzman...................................... 75

FIGURA 19 Esquema do posicionamento dos fragmentos no rato................ 67

FIGURA 20 Procedimento de biópsia das amostras...................................... 69

FIGURA 21 Corte histológico, transversal, obtido da amostra pertencente ao grupo I, com 15 dias de reparo. Nota Coloração H.E., aumento 400X.............................................................................

76

FIGURA 22 Corte histológico, transversal, obtido da amostra pertencente ao grupo II, com 15 dias de reparo. Nota Coloração H.E., aumento 400X.............................................................................

76

FIGURA 23 Corte histológico, transversal, obtido da amostra pertencente ao grupo III, com 15 dias de reparo. Nota Coloração H.E., aumento 400X.............................................................................

77

FIGURA 24 Corte histológico, transversal, obtido da amostra pertencente ao grupo IV, com 15 dias de reparo. Nota Coloração H.E., aumento 400X.............................................................................

77


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LISTA DE TABELAS

TABELA 1 Espécimes condicionados com EDTA fabricado pela Biodinâmica®............................................................................

60

TABELA 2 Espécimes condicionados com EDTA fabricado pela Biora®..

61

TABELA 3 Espécimes condicionados com EDTA fabricado pela JHS®....

62

TABELA 4 Espécimes que receberam RAR e, em uma bolinha de algodão, soro fisiológico...........................................................

63

TABELA 5 Relação do número de dentes e ratos com os períodos e grupos de experimento............................................................

66

LISTA DE ABREVIATURAS

AAP – American Academy of Periodontology

AD – Anterior Direito

AE – Anterior Esquerdo oC – Graus Celsius

cm – Centímetro

DP – Doença Periodontal

EDTA – Ácido etilenodiaminotetracético

EMS® – Electro Medical Systems

g – Grama

G1 – Grupo 1

G2 – Grupo 2

G3 – Grupo 3

G4 – Grupo 4

ICB – Instituto de Ciências Biológicas

IHB – Instrução de higiene bucal

JHS® – Jane, Hermeto e Sheila Laboratório Químico Ltda.

LDH – Lactato desidrogenase

MD – Mésio-Distal

MEV – Microscópio Eletrônico de Varredura

Mg – Miligrama

ML – Microscopia de Luz

ml – Mililitro

mm – Milímetro

µµµµm – Micrômetro

P-15 – Polipeptídio 15

PD – Posterior Direito

PE – Posterior Esquerdo

Ph – potencial Hidrogeniônico

PUC-MG – Pontifícia Universidade Católica de Minas Gerais

RAR – Raspagem e Aplainamento Radicular

SEM – Scanning Eletron Microscopic

TCA – Ácido tricloroacético

TEM – Transmission Electron Microscopic

UFMG – Universidade Federal de Minas Gerais

VL – Vestíbulo-Lingual

RESUMO

O tratamento periodontal envolve uma série de procedimentos que visam a

estabelecer uma superfície radicular biocompatível com os tecidos periodontais

circunjacentes. A remoção da smear layer, a exposição das fibras colágenas e

constituintes da matriz orgânica do cemento e da dentina, por meio da utilização de

condicionadores com ação quelante, podem conduzir ou induzir a uma reparação

periodontal mais favorável. Nesse contexto, este estudo, por meio da microscopia

de luz (ML), avaliou a resposta do tecido conjuntivo de ratos à biomodificação

radicular realizada pelo ácido etilenodiaminotetracético (EDTA) gel, 24%. Foram

selecionados 24 dentes humanos extraídos de áreas acometidas por doença

periodontal crônica. Após a raspagem e aplainamento, a raiz foi seccionada

longitudinalmente em 4 espécimes, totalizando 96 espécimes que foram distribuídos,

por dente, aleatoriamente em grupos: G1, EDTA trissódico (Biodinâmica®), G2,

EDTA dissódico (Biora®), G3, EDTA dissódico (JHS®) e G4 (controle, soro

fisiológico). Os 4 diferentes espécimes foram introduzidos no tecido conjuntivo do

dorso de um mesmo animal. As biópsias foram realizadas com períodos

experimentais de 15, 30 e 60 dias e analisadas. Os resultados demonstraram em

todos os grupos, independentemente do período de reparo, que os fragmentos

radiculares estavam circundados por um tecido conjuntivo fibroso organizado em

forma de cápsula fibrosa, com fibras dispostas paralelamente às superfícies

radiculares. Os grupos 1 e 3 apresentaram células e fibras em contato com a

superfície radicular, sugestivo de inserção fibrosa, sendo que o grupo 3 além de

demonstrar um íntimo contato de células e fibras com a superfície radicular,

apresentou células (com núcleos volumosos e vesiculosos com nucléolos evidentes)

imersas na matriz extracelular, sugestivas de um aumento da atividade de síntese

protéica. Esses resultados sugerem que o condicionamento radicular cria uma

superfície biocompatível, favorecendo o processo de inserção de fibras. Já o grupo

controle não apresentou áreas de íntimo contato de fibras e células com a superfície

radicular e a presença de um infiltrado inflamatório na periferia dos vasos

sangüíneos foi observado. Em nenhum dos quatro grupos foi observado a presença

de reabsorção radicular.

SUMMARY

Periodontal therapy involves a series of procedures to establish biocompatible

root surface by surrounded periodontal tissues. Smear layer removal by means of

use quelant conditioning will expose collagen fibers and organic matrix components

of cement and dentin, that can lead or induce a most suitable periodontal repair.

In that context, by means of light microscope, this study assessed the rat connective

tissue response of etilenodiaminotetracetic acid (EDTA) gel 24% root biomodification.

Twenty-four humans tooth extractions with chronic periodontal disease and without

previous periodontal treatment were selected. After scaling and root planning,

longitudinal roots sections were made and four similar specimens size were obtained.

Summing 96 specimens. Aleatoric specimens were then distributed by tooth in four

groups: G1, EDTA trisodium (Biodinâmica®), G2, EDTA disodium (Biora®), G3, EDTA

disodiun (JHS®) and G4, (control, sterile saline solution). Four different specimens

were introduced into the only one animal back connective tissue. The samples (root

fragment with connective tissue) were biopsied after 15, 30 e 60 experimental days

and analyzed by means of light microscope. Independently of the healing period the

results presented in all groups that the root fragments were surrounded by a

conjunctive fibrous tissue organized in the shape of a fibrous capsule. The groups I

and III presented cells and fibrous in contact with the roof surface suggesting fibrous

insertion. The group III besides showing a close contact of cells and fibrous with the

roof surface, also presented cells (with a bulk and vesiculous nucleus with evident

nucleolus) immersed on the extracellular matrix, suggestive of a grow on the activite

protein synthesis. These results suggest that the root conditioning creates a

biocompatible surface favoring the insertion of fibrous. On the other hand the control

group didn’t show areas of close contact of fibrous and cells with the roof surface, but

presented inflammatory infiltrated. Root reabsorption presence was not found in none

of the four studied groups.

SUMÁRIO

1 INTRODUÇÃO ............................................................................................ 16

2 LITERATURA CONSULTADA ................................................................... 19

2.1 Considerações sobre o modelo de estudo ......................................... 19

2.2 Aspectos conceituais da doença periodontal ..................................... 20

2.3 Considerações sobre a terapêutica da doença periodontal .............. 21

2.3.1 Biomodificação da superfície radicular ................................................. 24

2.3.1.1 Ácido cítrico ....................................................................................... 25

2.3.1.2 Ácido fosfórico ................................................................................... 33

2.3.1.3 Tetraciclinas ....................................................................................... 35

2.3.1.4 Edta .................................................................................................... 41

3 OBJETIVOS ............................................................................................... 54

3.1 Objetivo Geral......................................................................................... 54

3.2 Objetivos Específicos............................................................................. 54

4 MATERIAIS E MÉTODOS .......................................................................... 55

4.1 Comitê de ética e pesquisa ................................................................... 55

4.2 Obtenção dos espécimes ...................................................................... 55

4.3 Preparação dos espécimes ................................................................... 63

4.4 Preparação dos animais ........................................................................ 65

4.5 Biópsia dos tecidos ............................................................................... 68

4.6 Preparo das amostras para estudo na ML.......................................... 69

4.7 Microtomia .............................................................................................. 70

4.8 Coloração com hematoxilina e eosina ................................................. 71

4.9 Avaliação no ML...................................................................................... 73

5 RESULTADOS ........................................................................................... 74

5.1 Análise descritiva por meio da ML ....................................................... 74

6 DISCUSSÃO ............................................................................................... 82

7 CONCLUSÃO.......................................................................................... 83

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS ............................................................. 89

ANEXOS ........................................................................................................ 97

1 INTRODUÇÃO

A terapia periodontal envolve uma série de procedimentos que visam a

estabelecer, na superfície radicular acometida pela doença periodontal, a

biocompatibilidade com os tecidos periodontais circunjacentes, pré-requisito para a

regeneração periodontal (MENDES et al. 1998). Os procedimentos de raspagem e

aplainamento radicular, associados à manutenção de um adequado controle de

placa pelo paciente, mostram-se imprescindíveis para se alcançar esse objetivo

(O’LEARY, 1986).

As superfícies radiculares afetadas pela doença periodontal apresentam-se

hipermineralizadas (SELVIG & HALS, 1977); Contêm citotoxinas lipopolissacárides

derivadas das paredes das bactérias gram-negativas (ALEO et al. 1974; DALY,

1982); Sofrem invasão bacteriana no cemento e podem também apresentar

bactérias nos túbulos dentinários radiculares (ADRIAENS et al. 1988). Essas

alterações, quando presentes, tornam as superfícies radiculares biologicamente

incompatíveis com tecidos periodontais circunjacentes (ALEO, DERENZIS &

FARBER, 1975)

A raspagem e o aplainamento radicular têm sido os atos mecânicos mais

utilizados para a remoção de cálculos, depósitos bacterianos e cemento

contaminado por bactérias e seus produtos (JONES & O’LEARY, 1978). No entanto,

apesar da instrumentação mecânica ser um meio efetivo na melhora da saúde do

periodonto (NAGY, 1998), quando utilizada sozinha, pode remover

aproximadamente 95% dos cálculos da superfície radicular (YUNKA et al. 1997).

Essa técnica resulta na produção de uma smear layer, camada de 3 a 10µm de

espessura (BLOMLÖF, BLOMLÖF & LINDSKOG, 1997c) . Essa camada possui

remanescente de cálculo, cemento contaminado e placa subgengival (EICK et al.

1970) que serve como barreira física entre os tecidos periodontais e a superfície

radicular e inibe a formação de nova inserção conjuntiva (POLSON et al. 1984;

HANES et al. 1988).

Diante dessas considerações, a utilização de condicionadores químicos,

associados à terapia mecânica, tem sido realizada com diferentes objetivos, entre os

quais induzir a osteogênese e a cementogênese, acelerando a inserção de fibras

(REGISTER, 1973; REGISTER & BURDIC, 1975), remover as endotoxinas (FINE et

al. 1980), eliminar microorganismos remanescentes (DALY, 1982), inibir a migração

apical do epitélio (POLSON & PROYE, 1983), favorecer a ligação dos fatores

reguladores da regeneração com a superfície radicular (NISHIMURA et al. 1989),

melhorar as condições para a formação e adesão do coágulo de fibrina e aumentar a

resistência da ferida à tensão (WKESJÕ, NILVÉUS E SELVIG, 1992), proporcionar a

abertura dos túbulos dentinários e expor as fibras colágenas e a matriz orgânica do

cemento ou dentina (CHAVES et al. 1993), eliminar a camada de smear layer

resultante da instrumentação mecânica da raiz e deixar a raiz compatível com os

tecidos adjacentes (BLÖMLOF, BLOMLÖF E LINDSKOG, 1997c).

Os condicionadores têm sido empregados, na terapia periodontal,

principalmente, com dois objetivos: remover a smear layer em um curto espaço de

tempo (POLSON et al. 1984; LASHO, O`LEARY & KAFRAWY, 1983; BLÖMLOF &

LINDSKOG, 1995b; BLÖMLOF, 1996) e expor as fibras colágenas por meio da

remoção seletiva de minerais presentes na superfície radicular (POLSON et al. 1984;

LASHO, O`LEARY & KAFRAWY, 1983; BLÖMLOF & LINDSKOG, 1995;

STERRETT, DHILLON & MURPHY, 1995).

O condicionamento com agentes de baixo pH, tais como o ácido cítrico as

tetraciclinas e o ácido fosfórico, podem alterar as fibras colágenas da estrutura

dentinária, transformando-as em grânulos (não preserva a integridade das fibras

colágenas) (BLÖMLOF & LINDSKOG, 1995b). Isso contrasta com os

condicionadores de pH neutro, como o ácido etilenodiaminotetracético (EDTA), o

qual quela o cálcio da hidroxiapatita e expõe fibras de colágeno intactas (BLÖMLOF

& LINDSKOG, 1995b). Além do mais, o condicionamento com ácidos em pH neutro

parece preservar a vitalidade dos tecidos periodontais adjacentes os quais têm o

potencial de contribuírem com a regeneração periodontal (BLÖMLOF et al. 1996).

Portanto, sugere-se que o agente quelante (EDTA) seria a melhor escolha por

preservar a integridade das fibras colágenas expostas, anteriores à colonização

celular, do que os agentes de baixo pH que alteram a vitalidade dos tecidos

circunjacentes, diminuindo o potencial regenerativo periodontal (BLÖMLOF et al.

1995).

Diante das afirmações, bem como das controvérsias encontradas na literatura

quanto à efetividade do tratamento químico como medida coadjuvante à

instrumentação mecânica da superfície radicular, julgou-se oportuno fazer uma

revista prévia da literatura mais recente a respeito dos principais condicionadores

propostos para esta finalidade, com ênfase no EDTA. Assim como o subseqüente

desenvolvimento de um estudo experimental in vivo, que por meio da microscopia de

luz, procurou avaliar a resposta do tecido conjuntivo às superfícies de implantes

radiculares de dentes humanos, extraídos de áreas acometidas pela doença

periodontal crônica, após receberem tratamento mecânico e químico por diferentes

marcas de EDTA 24%.

2 LITERATURA CONSULTADA

2.1 Considerações sobre o modelo de estudo

As pesquisas envolvendo seres humanos não podem ser realizadas

rotineiramente na avaliação de métodos terapêuticos ou no estudo da etiopatogenia

das doenças, existindo, assim, a necessidade da utilização de formas alternativas

para a obtenção desse conhecimento. Essa necessidade tem feito crescer a procura

por modelos laboratoriais e em animais, tentando mimetizar o que possivelmente

ocorre no ser humano. Nesse sentido, os modelos que utilizam animais são

preponderantes na comunidade científica. Esses modelos possuem similaridades

biológicas, que contribuem para a sua utilização no estudo de processos fisiológicos

ou patológicos no homem (SUSIN & ROSING, 2002). Assim, da mesma forma como

é difícil extrapolar os achados dos animais para o homem, visto que, como afirmava

Allmon (1971), segundo Klausen, (1991), man is not a giant rat, é igualmente

imprudente ignorar as muitas similaridades que os cientistas têm demonstrado

(KLAUSEN, 1991). Dessa forma, os princípios biológicos fundamentais que são

delineados nos estudos em animais podem ter aplicação no homem (SUSIN &

ROSING, 2002).

Além dos aspectos já abordados, a possibilidade de se modificar

pontualmente uma variável e observar suas repercussões são, sem dúvida, um

grande atrativo para o uso desses modelos experimentais. Embora essa abordagem

seja uma simplificação muito grande do que pode estar ocorrendo na realidade, em

muitos casos é a única forma de se estudar o papel de uma variável no modelo

proposto. A escolha de um modelo animal passa pela análise dos seus pros e

contras, visto que nenhum modelo será perfeito.

A utilização do rato constitui-se numa alternativa de custo relativamente

reduzido, de fácil obtenção e manuseio. Adicionalmente a esse fato, existe entre

esses animais e o homem uma similaridade anatômica, histológica e bioquímica dos

tecidos periodontais, bem como uma similaridade histopatológica e, em parte,

microbiológica no que diz respeito às doenças periodontais, justificando a escolha

desse animal como modelo experimental (SUSIN & ROSING, 2002).

2.2 Aspectos conceituais da doença periodontal

A doença periodontal compreende um grupo de condições inflamatórias dos

tecidos de suporte dos dentes, cujo fator etiológico primário são bactérias

específicas que se aderem às superfícies dentárias e à região do sulco gengival,

dentre as bactérias, se destacam as Porphyromonas gingivalis, Actinobacillus

actinomycetencomitans, Bacteróides forsythus, Prevotela intermedia, Campylobacter

rectus, Treponema sp, Peptostreptococus micros, Eikenella corrodens,

Fusobacterium nucleatum, Eubactérium sp, Streptococus intermedium entre outras

(SOCRANSKY et al. 1998). A etiopatogenia da doença periodontal representa um

processo multifatorial e apesar dessas bactérias periodontopatogênicas serem

agentes essenciais para o desenvolvimento da doença periodontal, existe ainda a

necessidade de ocorrer um desequilíbrio entre a resposta imune do hospedeiro e a

agressão microbiana para ocorrer a doença periodontal (GENCO, R. J. 1992), que

geralmente representa uma condição contínua com episódios curtos de

exacerbação, intercalados por períodos de inatividade em sítios localizados

(GOODSON et al. 1982).

A agressão bacteriana deve-se, principalmente, à ação de suas toxinas sobre

os tecidos periodontais, desencadeando uma série de respostas imunes do

hospedeiro, as quais exacerbam o processo inflamatório tecidual, podendo levar a

uma progressão mais rápida da doença periodontal (OFFENBACHER, COLLINS &

ARNOLD, 1993).

As superfícies radiculares expostas à doença periodontal sofrem alterações

histopatológicas como a adsorção de cálcio, fósforo e flúor, ficando

hipermineralizadas e a absorção de matéria orgânica citotóxica incluindo

lipopolissacárides, derivada das paredes das bactérias gram-negativas (ALEO et al.

1974; SELVIG & HALS 1977; DALY, 1982), sofrem invasão bacteriana no cemento e

podem, também, apresentar bactérias nos túbulos dentinários radiculares

(ADRIAENS et al. 1988) podendo ser significantes na sua progressão (ALEO et al.

1974).

2.3 Considerações sobre a terapêutica da doença periodontal

O tratamento da doença periodontal é realizado por meio da raspagem e

aplainamento radicular (RAR) meticulosos, combinado com instrução de higiene

bucal (IHB) intensa e personalizada (AAP, 1999). Essa etapa do tratamento,

denominada “terapia inicial” ou “procedimentos básicos” destina-se à eliminação dos

fatores irritantes locais e é considerada uma das fases mais importantes do

tratamento periodontal (LANG & LOE, 1993;).

Por definição, “raspagem dental” é o processo por meio do qual se elimina o

cálculo da superfície do dente a partir do epitélio juncional e “aplainamento radicular”

é o processo pelo qual o cálculo residual e porções de cemento ou dentina são

removidos, proporcionando uma superfície lisa, resistente e limpa (PATTISON &

PATTISON, 1988). Esse procedimento é também chamado de instrumentação

mecânica do dente que tem o objetivo de limpar e descontaminar a superfície

radicular para obter uma superfície biologicamente aceitável para a adaptação dos

tecidos e uma possível nova inserção (BIAGINI et al. 1988).

Em muitos casos, o único tratamento requerido é a instrumentação radicular

sem acesso cirúrgico (LANG & LOE, 1993), porém, existem certas limitações para a

realização da instrumentação radicular sem acesso cirúrgico como em casos onde

temos profundidade de sondagem maior que 5 mm relacionada a regiões de

molares, podendo estar associada a áreas de lesões de furca, presença de

concavidades ou fissuras na superfície radicular, o que poderia acarretar na

presença de maior quantidade de depósitos de cálculo residuais (CAFESSSE,

SWEENEY & SMITH, 1986).

Outros fatores também podem estar relacionados com a limitação da

instrumentação radicular sem acesso cirúrgico, como depósitos de cálculo

localizados na base de bolsas periodontais profundas e estreitas, morfologia da

bolsa periodontal, anatomia radicular, dimensão do instrumento periodontal utilizado,

e habilidade e experiência profissional (CAFFESSE, SWEENEY & SMITH, 1986).

Essas características anatômicas dificultam a instrumentação radicular,

propiciando, assim, contínuo acúmulo de biofilme bacteriano subgengival, levando a

um insucesso da instrumentação radicular e a reparação periodontal, constatado

clinicamente pela presença de sinais clínicos de inflamação e bolsas periodontais

persistentes (CAFESSSE, SWEENEY & SMITH, 1986; MAGNUSSON et al. 1984).

Assim, em determinadas situações, precisa-se associar a instrumentação

radicular ao acesso cirúrgico, por meio de retalho periodontal mucoperiosteal,

possibilitando a visualização e facilitando o acesso à área da superfície radicular a

ser instrumentada (MAGNUSSON et al. 1984).

Portanto, raspagem e aplainamento radicular, com ou sem o acesso cirúrgico,

têm sido os atos mecânicos mais utilizados para a remoção de cálculos, depósitos

bacterianos e cemento contaminado por bactérias e seus produtos (ALEO et al.

1975; JONES & O’LEARY, 1978). Mas, apesar da instrumentação mecânica ser um

meio efetivo para melhorar a saúde do periodonto (JONES & O’LEARY, 1978;

NAGY, 1998), quando utilizada sozinha, essa técnica resulta em uma smear layer,

(EICK et al. 1970; HANES, O`BRIEN & GARNICK, 1991) que inibe a regeneração

dos tecidos periodontais (POLSON et al. 1984; HANES, POLSON & FREDERICK,

1988).

Com a finalidade de regenerar cemento, ligamento periodontal e osso

alveolar, surgiu na década de 80 o conceito da Regeneração Tecidual Guiada (RTG)

(NYMAN et al. 1982; GOTTLOW et al. 1984).

Atualmente, terapias utilizando biomodificadores de resposta celular como o

Plasma Rico em Plaquetas, o Poli peptídeo P-l5 (PepOen®), a Matriz Derivada do

Esmalte (Endogain®), ou ainda, a associação de fatores de crescimento, são

estudadas com o intuito de estimular a complexa regeneração do periodonto.

Como a regeneração periodontal objetiva a formação de novo cemento,

ligamento periodontal e osso alveolar, a melhor terapia seria aquela capaz de

recuperar ao máximo todos os tecidos perdidos. Além disso, em condições nas quais

a perda de inserção comprometa a estabilidade do dente, uma terapia que promova

uma maior regeneração pode ser a única maneira de salvar o dente (BLÖMLOF et

al. 1996)..

Assim, em um protocolo regenerativo, o condicionamento radicular que

remova o smear layer e exponha fibras colágenas (matriz orgânica do cemento e

dentina) pode ser um procedimento importante na regeneração dos tecidos

periodontais (BLÖMLOF et al. 1996).

2.3.1 Biomodificação da superfície radicular em periodontia

No final do século XIX, Younger, (1893) e Stewart (1895) segundo Blömlof, et

al. (1996) já descreviam métodos para tratamento da pyorrhea alveolaris, os quais

utilizavam substâncias ácidas no interior da bolsa periodontal após a realização da

raspagem, com o objetivo de promover a desmineralização da superfície radicular.

Esse procedimento favoreceria, segundo impressões pessoais do autor, a formação

de um tecido conjuntivo “firme e estável quanto à sua inserção”.

Urist (1971) e Register (1972) segundo Register & Burdic, (1975)

demonstraram que novo osso e cemento poderiam ser induzidos a se formarem na

superfície de transplantes alógenos de osso ou matriz de dentina que havia sido

desmineralizado in vitro por ácidos.

Baseando-se nos trabalhos anteriormente citados, Register (1973) foi um dos

pioneiros a utilizar ácido (hidroclorídrico), passivamente, durante 15 minutos, no

tratamento periodontal. Após o afastamento do retalho, remoção de osso alveolar,

de cemento e de ligamento periodontal, realizou-se o condicionamento da dentina,

de dois macacos, dois cães e um gato. Os dentes, submetidos à desmineralização,

apresentaram, à microscopia de luz, cementogênese e osteogênese avançada após

6 semanas, ao passo que no controle houve cementogênese incompleta, com

pouco ou nenhum reparo ósseo. Houve reabsorção dentinária prolongada em cerca

de 10% dos dentes, sem haver, no entanto, reações pulpares.

2.3.1.1 Ácido cítrico

O ácido cítrico é um dos condicionadores químicos associado à terapia

mecânica e o mais investigado ao longo das últimas três décadas por suas

diferentes funções, que são:

a) ELIMINAR MICROORGANISMOS REMANESCENTES E REMOVER

ENDOTOXINAS

Daly (1982) estudou o efeito antibacteriano do ácido cítrico com pH1 aplicado

durante 3 minutos, por meio da imersão de raízes acometidas pela doença

periodontal, sem a realização prévia de raspagem e aplainamento radicular. Ele

observou uma expressiva redução no número de colônias formadas, como resultado

da aplicação do ácido cítrico, sendo que 55% e 30% dos meios de cultura aeróbicos

e anaeróbicos, respectivamente, apresentaram completa ausência de crescimento

bacteriano e nas culturas que apresentaram crescimento de colônias ele reduziu em

95% os aeróbicos e 80% os anaeróbicos.

Fine et al. (1980) procurando caracterizar o material removido, por ação de

agentes químicos, da superfície radicular de dentes humanos com doença

periodontal (DP) e sem DP após à raspagem, ou após raspagem e aplainamento

radicular, utilizaram um dos 4 diferentes tipos de soluções: água destilada, água

fenolada 90%, ácido cítrico pH 1,8 ou ácido tricloroacético 5% (TCA). Observaram

que o TCA e o ácido cítrico removeram mais cálcio e mais material tóxico da

superfície radicular que as demais substancias utilizadas. A caracterização indicou a

presença de endotoxina no material removido da superfície radicular de dentes com

DP.

b) ACELERAR A CEMENTOGÊNESE COM NOVA INSERÇÃO CONJUNTIVA;

Os primeiros estudiosos, a utilizar o ácido cítrico em periodontia, foram

Register & Burdick (1975), que avaliaram os ácidos hidroclorídrico, láctico, cítrico,

fosfórico, tricloroacético, fórmico, e um agente desmineralizador conhecido por RDO

(ácidos, formaldeído, agentes umectantes etc). Os resultados histológicos, em

animais (50 cães e 15 gatos), evidenciaram discreta nova inserção, com

cementogênese, porém, sem haver um reparo completo como ocorreu nas

superfícies radiculares desmineralizadas. A partir deste estudo, os autores

selecionaram o ácido cítrico com pH1, aplicado ativamente por 2 a 3 minutos, como

agente desmineralizador a ser avaliado clinicamente.

Nalbadian & Cote (1982) observaram por meio de análise histométrica, uma

maior espessura, maior área e extensão de cemento neoformado e inserção

conjuntiva quando o ácido cítrico foi utilizado pH1 por 4 minutos, passivamente, em

cavidades retangulares preparadas em dentina radicular, em fenestrações criadas

em 5 cães, sem comunicação com o sulco gengival.

c) INIBIR A MIGRAÇÃO APICAL DO EPITÉLIO

Polson & Proye (1982) avaliaram doze dentes que foram extraídos de quatro

macacos e após a remoção do cemento e ligamento periodontal foram

condicionados com ácido cítrico com pH1, durante 3 minutos. Após lavagem com

solução salina, foram imediatamente reimplantados em seus alvéolos. A avaliação

histológica apos 1, 3, 7 e 21 dias demonstrou que, no grupo tratado com ácido

cítrico, observou-se inicialmente a deposição de uma zona de fibrina contendo

leucócitos polimorfonucleares e eritrócitos, sem haver a migração apical do epitélio

juncional, mesmo nos períodos subseqüentes, ao contrário dos dentes não

submetidos ao condicionamento ácido. Após 21 dias, uma nova inserção de tecido

conjuntivo sem evidência de cementogênese foi observada. No entanto, extensas

áreas de reabsorção radicular foram observadas na porção intra-alveolar da raiz.

Em um estudo semelhante, Polson & Proye (1983) extraíram 24 dentes, sem

DP, de 4 macacos e os reimplantaram, após RAR somente ou RAR seguida pela

aplicação de ácido cítrico pH1 por 3 minutos e observaram histologicamente, com

1, 3, 7 e 21 dias de reparo a interação entre a fibrina e fibras colágenas na superfície

radicular por meio de uma técnica de coloração especial para difenciá-las. Quando o

ácido cítrico foi aplicado, uma camada de fibrina intimamente adaptada à superfície

radicular foi observada nos períodos iniciais que ao longo do tempo foi substituída

por fibras colágenas inseridas à superfície radicular, sem evidências de formação

cementária. Nesse grupo teste não houve migração apical do epitélio juncional, que

permaneceu, em todos os períodos examinados, próximo à junção cemento-esmalte.

No grupo controle, uma distribuição semelhante de fibrina na superfície radicular foi

observada somente com 1 dia de reparo. Nos demais períodos, ocorreram intensa

migração do epitélio juncional, vindo a localizar-se até apicalmente à crista óssea

alveolar.

Em estudo, in vitro, utilizando células gengivais bovinas em meio de cultura,

foi observado que o ácido cítrico, pH1, quando aplicado sobre a superfície radicular,

foi capaz de atrasar a migração epitelial entre o tecido conjuntivo e a superfície

radicular, o que poderia favorecer a ocorrência de nova inserção (Larjava et al.

1988).

d) AUMENTAR O POTENCIAL QUIMIOTÁTICO PARA FIBROBLASTOS NA

SUPERFÍCIE RADICULAR.

Nishimura et al. 1989 estudando o potencial quimiotático do ligamento

periodontal, cemento e dentina para os fibroblastos gengivais humanos obtidos de

premolares, sem DP, indicados à exodontia por motivos ortodônticos. Observaram

que os substratos derivados do cemento superficial apresentaram alta atividade

quimiotática para fibroblastos gengivais humanos comparados aos demais

substratos. A desmineralização aumentou o potencial quimiotático dos substratos

(cemento profundo e dentina). A inibição da fibronectina não resultou em uma

diminuição significativa na quimiotaxia o que suporta a hipótese de que a

fibronectina pode tem um importante papel na dispersão e /ou ancoragem de

fibroblastos e não na quimiotaxia.

e) MELHORAR AS CONDIÇÕES PARA A FORMAÇÃO E ADESÃO DO

COÁGULO E AUMENTAR A RESISTÊNCIA DA FERIDA À TENSÃO

A aderência, orientação, proliferação e atividade de síntese das células do

ligamento periodontal e a adesão de uma espessa rede de fibrina à superfície da

raiz, foram favorecidas quando houve condicionamento ácido da superfície radicular

(Zaman et al. 2000).

Caffesse et al. (1987), ao avaliarem proliferação celular em superfícies

radiculares tratadas com retalho de Widman modificado, ácido cítrico com pH1,

durante 3 minutos, seguido de 1ml de fibronectina autógena em 3 macacos,

observaram uma maior proliferação celular, principalmente nas primeiras 2 semanas,

com um rápido desenvolvimento de uma rede de fibrina unindo o tecido conjuntivo

gengival ao dente e osso alveolar quando do emprego de fibronectina.

e) PROPORCIONAR A ABERTURA DOS TÚBULOS DENTINÁRIOS E EXPOR AS

FIBRAS COLÁGENAS E A MATRIZ ORGÂNICA DO CEMENTO OU DENTINA

Em 1993, Chaves et al. examinaram à microscopia eletrônica de varredura o

efeito da aplicação do ácido cítrico, in vitro, em dentes com DP. Os resultados

demonstraram que a aplicação do ácido cítrico por 3 minutos (pH1) na superfície

radicular após a RAR desmineralizou a superfície radicular, abriu os canalículos

dentinários e expôs fibras colágenas. No grupo que recebeu somente a RAR havia

presença de smear layer, ilhas espalhadas de cemento e ausência de fibras

colágenas do cemento ou dentina.

h) ESTUDO EM HUMANOS

A possibilidade de obtenção de nova inserção em dentes de humanos

afetados pela doença periodontal foi investigada por Albair et al. (1982). Neste

estudo, vinte e dois dentes (incisivos superiores e pré-molares) que seriam extraídos

por razões protéticas em oito pacientes, foram tratados com cirurgia a retalho total,

raspagem vigorosa da superfície radicular e aplicação de uma solução de ácido

cítrico com pH 1 durante 5 minutos. Estes dentes foram removidos em bloco (dente

com tecido mole) após 6 a 15 semanas e submetidos à análise histológica por meio

de microscopia ótica e microscopia eletrônica de varredura. Os resultados

demonstraram que no grupo teste, 6 dos 9 espécimes tratados exibiram evidências

de uma nova inserção conjuntiva, com fibras dispostas perpendicularmente à

superfície radicular, inseridas sempre sobre cemento e nunca diretamente sobre

dentina.

Estudando a influência do condicionamento ácido da raiz, quando da

realização de retalho posicionado lateralmente no tratamento de recessões

gengivais, Common & McFall Jr. (1983) criaram defeitos do tipo recessão em

incisivos inferiores de 5 pacientes, os quais estavam indicados para extração. Após

a realização de retalho total, as raízes foram raspadas e receberam, no grupo teste,

a aplicação de ácido cítrico com pH1 durante 2 minutos. Após o condicionamento

radicular, o retalho foi posicionado lateralmente para recobrimento da recessão.

Após 1, 2, 4, 12 e 20 semanas, os dentes foram extraídos em bloco para avaliação

histológica. Nos dentes tratados com o ácido cítrico, observou-se formação de novo

cemento juntamente com nova inserção, ao passo que no grupo controle, houve a

formação de um epitélio juncional longo estendendo-se até a demarcação apical do

defeito. Desta forma, os autores concluem que a desmineralização da superfície

radicular com ácido cítrico acelera e favorece os processos de cementogênese e de

nova inserção em dentes tratados com retalho posicionado lateralmente.

Caffesse et al. (1988) avaliaram os efeitos da desmineralização da raiz com

solução saturada de ácido cítrico (pH 1) por 3 minutos e aplicação de fibronectina

autógena durante a realização de retalhos de Widman modificado em 29 pacientes

portadores de doença periodontal moderada a avançada, em comparação ao grupo

controle, tratado somente com retalho de Widman modificado. Os parâmetros

clínicos foram reavaliados após 1 ano, revelando que ambos os procedimentos

levaram à reduções significantes na profundidade de sondagem e ganho de inserção

clínica, com resultados estatisticamente superiores para o grupo teste, onde o

número de sítios que tiveram ganho de inserção clínica de 2mm foi, também,

estatisticamente superior. Esses resultados sugerem que o uso de ácido cítrico

juntamente com a fibronectina mostra-se promissor na promoção de nova inserção.

Em contraposição a esses estudos, anteriormente relatados, Stahl & Froum

(1977) não conseguiram observar evidências de cementogênese e nova inserção

em sete dentes de dois pacientes portadores de doença periodontal, os quais foram

tratados com raspagem e aplainamento radicular, seguido da aplicação de ácido

cítrico com pH 1 durante 2 minutos, e removidos em bloco após 16 semanas para

análise histológica. O fechamento da bolsa periodontal se deu por meio da formação

de epitélio juncional longo aderido à superfície radicular.

Contrapondo-se, também, aos achados preliminares a respeito do potencial

do ácido cítrico em acelerar o processo de cementogênese e de nova inserção, em

humanos (paciente de 63 anos), Kashani et al. (1984), após tratarem, quatro dentes

acometidos por doença periodontal com retalho total, aplainamento radicular e

aplicação de ácido cítrico com pH 1 durante 5 minutos em uma das hemifaces

vestibular de cada dente, não observaram cementogênese nem nova inserção,

sendo que o reparo ocorreu em ambos os lados com a formação de um epitélio

juncional longo, quando analisados histologicamente, por meio da remoção em

bloco, após 3 meses do tratamento.

Cole et al. (1980) avaliaram a possibilidade de obtenção de nova inserção em

superfícies radiculares afetadas pela doença periodontal. Utilizaram 9 dentes em 6

pacientes, apresentando cálculo subgengival e profundidade de sondagem superior

a 6 mm, os quais estavam indicados para extração. Após afastamento de um retalho

total, demarcação da porção mais apical de cálculo subgengival, remoção do cálculo

e do cemento radicular, o ácido cítrico foi aplicado passivamente durante 5 minutos.

Os dentes tratados foram removidos em bloco após 4 meses e submetidos à análise

histológica, a qual revelou algum grau de regeneração do tecido conjuntivo ao longo

da superfície radicular em todos os dentes, incluindo novo cemento na porção mais

apical. Os autores concluíram que a regeneração dos tecidos periodontais em uma

superfície afetada pela doença periodontal é um evento biologicamente possível,

sem estabelecer, no entanto, se o condicionamento ácido da raiz é um pré-requisito

para a obtenção de uma nova inserção.

O efeito da aplicação de ácido cítrico no reparo dos tecidos periodontais foi

avaliado clinicamente por Moore et al. (1987). Dezoito pares de sítios periodontais

em região anterior de 12 pacientes foram empregados e tratados, no grupo teste,

com cirurgia a retalho e aplicação de ácido cítrico com pH 0,6 durante 3 minutos, e

com aplicação somente de solução salina no grupo controle. Após 3 e 9 meses, os

parâmetros clínicos profundidade de sondagem, perda de inserção, recessão e

volume de fluido gengival foram reavaliados, não revelando diferenças clinicamente

e estatisticamente significantes entre os dois grupos. Concluíram que não

observaram benefícios adicionais à utilização do ácido cítrico associado à cirurgia

em dentes anteriores.

A utilização de uma solução saturada de ácido cítrico durante 3 minutos sobre

superfície radicular de dentes que apresentavam defeitos intra-ósseos, tratados pela

técnica de regeneração tecidual guiada, não promoveu benefícios adicionais em

relação à utilização isolada da membrana de politetrafluoretileno expandido, quando

Kersten et al. (1992) reavaliaram os sítios tratados após 12 meses, constatando uma

igual redução na profundidade de sondagem, ganho de inserção clínica e

preenchimento do defeito ósseo.

2.3.1.2 Ácido fosfórico

O ácido fosfórico tem sido utilizado principalmente em dentística restauradora

para remoção do smear layer. A sua utilização tem sido efetiva nas concentrações

de 10 a 37%. Em periodontia, tem sido utilizado com dois objetivos principais:

remover o smear layer e expor a matriz orgânica do cemento e da dentina (expor as

fibras colágenas).

Biagini et al. (1992) avaliaram, in vitro, o crescimento de fibroblastos gengivais

humanos sobre fragmentos radiculares normais e afetados pela doença periodontal

que não receberam raspagem e aplainamento radicular, submetidos à aplicação de

ácido fosfórico a 37% (pH2) durante 1 minuto ou ácido cítrico a 18% (pH2) durante

45 segundos. Os resultados demonstraram que no grupo tratado com ácido

fosfórico, os fibroblastos se encontravam tipicamente alongados e dispostos

paralelamente à superfície radicular, ao passo que no grupo tratado com ácido

cítrico, os fibroblastos perderam sua forma alongada, adquirindo bordas com

aspecto poligonal e prolongamentos citoplasmáticos irregulares, com uma densidade

celular reduzida. Assim, a utilização do ácido fosfórico resultou em uma proliferação

de fibroblastos mais efetiva que a utilização do ácido cítrico.

Blömlof & Lindskog (1995a) compararam a textura superficial da dentina de

56 dentes de 7 macacos, submetida ao condicionamento ácido com ácido cítrico pH

1, ácido fosfórico a 37% (pH 1) e EDTA a 24% (pH 7) por 20 segundos e por 3

minutos, à microscopia eletrônica de varredura. Os autores concluíram que os

ácidos deixam a superfície radicular com aspecto de erosão e exposição de fibras

colágenas com aspecto granular, sugerindo que a integridade das fibras não foram

preservadas. E outro resultado desfavorável à utilização do ácido fosfórico e do

ácido cítrico foi a possibilidade de comprometer a vitalidade das células dos tecidos

periodontais, ao inibir a atividade da enzima lactato desidrogenase, em estudos

realizados em macacos

a) ESTUDOS EM HUMANOS

Heritier (1983) avaliou, por meio da microscopia eletrônica de transmissão, a

formação de nova inserção em dois incisivos centrais superiores de uma paciente

com 72 anos de idade, os quais estavam programados para extração. Os dentes

apresentavam bolsas de 6 mm e foram submetidos à realização de um retalho total,

remoção de placa e cálculo utilizando instrumentos manuais e ultra-sônico, e

delimitação de uma área retangular de 5x3mm com uma fresa esférica, onde todo o

cemento foi removido por meio de desgaste com fresa cilíndrica diamantada. A

seguir, um gel de ácido fosfórico com pH 1,3 foi aplicado por 1 minuto, irrigando-se

posteriormente com água e reposicionando-se o retalho por meio de sutura. Os

dentes foram extraídos após 42 dias, procedendo-se à avaliação histológica. Os

resultados demonstraram a ocorrência de nova inserção conjuntiva, com deposição

de cristais de cemento sobre a matriz dentinária, com intensa síntese de fibrilas

colágenas e sua incorporação ao tecido cementóide.

2.3.1.3 Tetraciclinas

Wikesjo et al. (1986) avaliaram a capacidade de adsorção e liberação do

cloridrato de tetraciclina marcada, em diferentes concentrações, à superfície

dentinária, bem como o aspecto morfológico da superfície dentinária após

condicionamento com estas soluções por meio da microscopia eletrônica de

varredura. As soluções com concentrações superiores a 50mg/ml mostraram os

maiores valores de adsorção. Valores acima da concentração inibitória mínima

(3,3µg/ml em água destilada e 3,7µg/ml no sangue), para a maioria das bactérias

patogênicas, foram mantidas por períodos de, no mínimo, 48horas. Por meio da

análise microscópica, as superfícies radiculares mostraram-se livres de smear layer

e com exposição dos túbulos dentinários à semelhança do que normalmente se

observa com o ácido cítrico. O emprego do cloridrato de tetraciclina no

condicionamento da superfície radicular demonstrou vantagens como: a) adsorção à

superfície radicular e conseqüentemente substantividade, mantendo o efeito

antimicrobiano por um tempo mais prolongado; b) inibição da colagenase; c)

remoção da smear layer e exposição de fibras colágenas, podendo vir a favorecer o

processo de regeneração periodontal.

A utilização da tetraciclina aplicada topicamente em cirurgias periodontais

regenerativas também foi objeto de estudo de Claffey et al. (1987). Inicialmente

foram criados defeitos periodontais em 2 cães, removendo-se o osso alveolar até

6mm abaixo da junção cemento esmalte, expondo esta região ao meio bucal, na

ausência de controle de placa. Três meses depois, os dentes foram tratados com

raspagem e aplicação de uma solução aquosa de cloridrato de tetraciclina a 1%

(pH2,6) por 5 minutos, seguido de irrigação com solução salina. Nesse estudo, não

houve um grupo controle. Após seis meses, os animais foram sacrificados para

análise histológica, a qual revelou áreas de reabsorção radicular e de anquilose

próximas à junção cemento-esmalte em todos os espécimes, assim como a

formação de nova inserção e neoformação óssea abaixo deste limite.

Wikesjo et al. (1988) estudaram o reparo de defeitos de furca criados

cirurgicamente, nos quais, após um período de acúmulo de placa de seis semanas,

14 cães foram submetidos à terapia periodontal cirúrgica regenerativa, empregando-

se ácido cítrico pH1 por 3 minutos ou cloridrato de tetraciclina 100mg/ml por 5

minutos, aplicados por meio de gotejamento contínuo, seguindo-se ou não da

aplicação de fibronectina. Após 12 semanas, os animais foram sacrificados para

análise histológica e histométrica, revelando que o ácido cítrico e a tetraciclina

apresentaram potencial semelhante de indução de nova inserção conjuntiva, assim

como ocorrência de reabsorção radicular e anquilose. A aplicação de fibronectina à

superfície radicular desmineralizada não favoreceu uma maior nova inserção

observando-se inclusive resultados estatisticamente inferiores quando da utilização

de cloridrato de tetraciclina e fibronectina, em comparação ao ácido cítrico

isoladamente, por meio da análise histométrica.

Bal et al.(1990) conduziram um estudo, por meio de microscopia eletrônica de

varredura, para avaliar a influência da raspagem e condicionamento ácido da

superfÍcie radicular com ácido cítrico pH1 ou com cloridrato de tetraciclina durante 3

minutos, sobre a formação inicial do coágulo. Após o tratamento, as raízes foram

recolocadas no interior do seu alvéolo e removidas após 0, 1 e 3 minutos, sendo

submetidas à análise ultra-microscópica, a qual revelou que a formação de fibrina

mostrou-se mais avançada nos espécimes tratados com cloridrato de tetraciclina do

que com ácido cítrico.

Uma comparação do aspecto morfológico da dentina radicular, submetida à

raspagem e tratamento com ácido cítrico pH1 ou cloridrato de tetraciclina a 0,5%

(pH3,2) durante 5 minutos, foi realizada por Hanes et al. (1991). Utilizando-se

microscopia eletrônica de varredura, os autores constataram que o ácido cítrico foi

capaz de remover a smear layer e provocar a exposição de um maior número de

túbulos dentinários, causando possivelmente uma desmineralização da dentina

peritubular. Por outro lado, a tetraciclina não removeu a smear layer em todos os

casos, permanecendo pequena quantidade de debris na entrada dos túbulos. Além

disso, a exposição superficial de fibrilas colágenas no grupo tratado com tetraciclina

foi menos freqüente do que com o emprego do ácido cítrico. Desta forma,

concentrações mais elevadas de cloridrato de tetraciclina podem ser necessárias

para se remover a smear layer produzida pela instrumentação.

A topografia da superfície radicular de terceiros molares recentemente

extraídos, submetidos á raspagem e aplicação de uma solução saturada de ácido

cítrico ou de cloridrato de tetraciclina (100 mg/ml) por 30, 60, 120 ou 240 segundos,

por meio de gotejamento ou de esfregação ativa, foi objeto de avaliação do estudo

realizado por Labahn et al. (1992). Por meio da microscopia eletrônica de varredura,

os resultados demonstraram um maior poder de penetração do ácido cítrico e uma

maior abertura de túbulos dentinários do que com o cloridrato de tetraciclina, sendo

que o grau de desmineralização mostrou-se diretamente proporcional ao tempo de

aplicação, não havendo diferenças quanto a forma de aplicação.

O emprego de soluções saturadas de ácido cítrico (pH1) ou de cloridrato de

tetraciclina por 5 minutos em superfícies radiculares de 30 dentes de 22 pacientes

portadores de doença periodontal avançada mostrou resultados semelhantes entre

os dois grupos, com abertura dos túbulos dentinários pela remoção da smear layer e

exposição de uma rede de fibras colágenas, ao contrário do grupo de dentes

tratados somente com raspagem, segundo estudo empregando microscopia

eletrônica de varredura realizado por Lafferty et al. (1993).

Os efeitos da aplicação tópica de cloridrato de tetraciclina 10 mg/ml pH3 e

100 mg/ml (pH2), durante 1 e 4 minutos, por meio de esfregação suave, em

superfícies radiculares de dentes recém extraídos de 10 pacientes portadores de

doença periodontal foram avaliados, por meio de microscopia eletrônica de

varredura, por Trombelli et al. (1995). Os resultados demonstraram que no grupo

controle houve a formação de smear layer irregular e amorfo. Nos grupos tratados

com cloridrato de tetraciclina por 1 minuto observou-se uma superfície relativamente

livre de smear layer, mas com alguns túbulos parcialmente obliterados. Nos grupos

tratados com cloridrato de tetraciclina por 4 minutos houve ampla exposição de uma

rede de fibras colágenas, independente da concentração da solução empregada. Os

autores concluem que as alterações induzidas na superfície radicular de dentes

afetados pela doença periodontal após aplicação de cloridrato de tetraciclina

mostraram-se mais dependentes do tempo de aplicação do que da concentração.

A capacidade de remoção de smear layer e de exposição de fibras colágenas

de diferentes tipos de tetraciclina foi investigada por Madison & Hokett (1997), por

meio da microscopia eletrônica de varredura. Oitenta e dois fragmentos dentinários

obtidos de dentes extraídos por doença periodontal foram submetidos à aplicação de

cloridrato de tetraciclina (pH1.6), doxiciclina (pH2.2), minociclina (pH3.8), sumicina

(pH4.4) e solução salina, durante 0.5, 1, 3, 5 e10 minutos. Dentre as tetraciclinas

avaliadas, o cloridrato de tetraciclina demonstrou a maior capacidade de remoção de

smear layer e de abertura de túbulos dentinários, mesmo após um curto período de

aplicação por 30 segundos. A doxiciclina e a minociclina removeram smear layer

após 5 a 10 minutos de aplicação, de maneira estatisticamente superior a sumicina e

à solução salina, porém com menor eficiência que o cloridrato de tetraciclina.

O efeito da concentração e do tempo de aplicação do cloridrato de tetraciclina

no grau de desmineralização da dentina foi estudado por Sterrett et al. (1997).

Fragmentos dentinários obtidos de 3 molares bovinos foram preparados e

submetidos à aplicação de soluções de cloridrato de tetraciclina nas seguintes

concentrações: 0, 25, 50, 75, 100, 125 e 150 mg/ml, aplicadas durante 1, 3 ou 5

minutos. Foi utilizado como controle positivo uma solução de ácido cítrico a 30%. A

quantidade de íons cálcio removida pela aplicação das diferentes soluções de

cloridrato de tetraciclina, expressa em partes por milhão, foi determinada

empregando-se análise de espectrofotometria de absorção atômica. Os resultados

demonstraram que as soluções de cloridrato de tetraciclina nas concentrações de

75, 100. 125 e 150 mg/ml removeram quantidades estatisticamente iguais de íons

cálcio quando aplicadas por 3 ou 5 minutos, superiores quando comparadas com a

aplicação destas soluções por 1 minuto. No entanto, a remoção de íons cálcio pela

solução de ácido cítrico a 10% foi 3 a 5,5 vezes maior do que com o uso do

cloridrato de tetraciclina. Assim, o emprego de solução de cloridrato de tetraciclina a

75 mg/ml por 3 minutos é igualmente efetiva na aplicação de soluções com maior

concentração ou por maior tempo de aplicação, no que diz respeito à remoção de

smear layer, sendo, porém, bem menos efetiva do que o ácido cítrico.

Em 2000, Isik et al. verificaram in vivo as características ultramicroscópicas da

superfície radicular de 48 fragmentos radiculares obtidos de 20 terceiros molares

impactados, os quais foram submetidos ao aplainamento radicular com fresa

diamantada e condicionados com soluções de cloridrato de tetraciclina nas

concentrações de 0, 10, 25,50, 75, 100, 125 e 150 mg/ml durante 1, 3 e 5 minutos.

Os resultados demonstraram que as soluções de cloridrato de tetraciclina com

concentrações variando de 50 a 150 mg/ml exibiram abertura estatisticamente

significante dos túbulos dentinários, independente do tempo de aplicação utilizado.


Alger et al. (1990) avaliaram histologicamente a formação de nova inserção

em superfícies radiculares de 18 dentes de 4 pacientes portadores de doença

periodontal, os quais foram tratados por meio de cirurgia a retalho, raspagem e

aplicação de cloridrato de tetraciclina na concentração de 100 mg/ml durante 3

minutos, com ou sem aplicação subseqüente de fibronectina, na concentração de 10

mg/mI, durante 5 minutos. Foi feita uma marcação com fresa, na altura no nível da

crista óssea, para posterior análise histométrica. Após extração em bloco aos 90

dias de experimento, os resultados demonstraram que no grupo controle, tratado

apenas com raspagem, não ocorreu formação cementária, havendo migração

epitelial em sentido apical, atingindo a região da marca apical. No grupo tratado

apenas com tetraciclina, houve neoformação cementária em 3 dos 7 espécimes,

com nova inserção ou apenas adaptação do tecido conjuntivo, limitados à região da

marca apical, considerando-se, portanto, como sendo apenas uma reinserção. No

grupo tratado com tetraciclina e fibronectina, houve migração do epitélio apicalmente

sem nova inserção em 4 dos 5 espécimes. Os autores concluem que a aplicação

adicional de fibronectina às superfícies radiculares desmineralizadas pela tetraciclina

não favoreceu, e, sim, aparentemente inibiu, o processo de nova inserção.

2.3.1.4 EDTA

Nos anos 80, iniciou-se a utilização do EDTA na periodontia com o objetivo de

biomodificar a superfície radicular. Anteriormente, o EDTA já era utilizado pela

endodontia, associado ao preparo de conduto radiculares e em laboratórios de

histologia para desmineralização de tecidos duros, previamente à microtomia. O

EDTA tem ação seletiva sobre cátions bivalentes, entre eles, os íons cálcio,

agregando-os em sua molécula por um processo demoninado complexação

(BASTOS NETO, 2002).

A reação de complexação é uma atração eletrostática entre um íon e um

agente quelante, EDTA, de modo que não há transferência de elétrons entre eles. O

EDTA possui em sua molécula átomos ligantes, ou quelantes que se ligam a íons

metálicos ou alcalinos terrosos que, no caso da odontologia, é o cálcio e o

magnésio, presente na parte inorgânica dos tecidos dentários. Outras características

desse produto químico são que as soluções de EDTA podem ter pH neutro ou

próximo do neutro: entre 7,0 e 7,4. O processo de quelação, embora novo na

odontologia, tem sido usado há bastante tempo pela engenharia, na remoção de

depósitos minerais em canos de água das redes hídricas urbanas e na medicina,

para dissolução de cálculos renais e remoção de placas calcificadas na parede das

artérias. Além disso, compostos quelados são encontrados na natureza, como a

hemoglobina sangüínea, e na clorofila das plantas (BASTOS NETO, 2002).

Os primeiros autores a estudar o EDTA, em periodontia, foram Lasho,

O´Leary & Kafrawy (1983) que avaliaram o efeito de 5 condicionadores sobre a

superfície radicular de dentes acometidos pela doença periodontal. Os fragmentos

radiculares após RAR, foram divididos em 5 grupos, os quais receberam os

seguintes tratamentos: 1) ácido cítrico saturado (pH1) por 3 minutos 2) EDTA

dissódico 15% (pH7,1) durante 5 minutos; 3) hipoclorito de sódio durante 5 minutos,

seguida da aplicação de ácido cítrico a 5% por 30 segundos; 4) hipoclorito de sódio

por 5 minutos; 5) deoxicolato de sódio a 2% por 1 minuto, lavagem com água

destilada por 1 minuto, seguida da aplicação de fração IV de Cohn a 5% por 1

minuto. O grupo controle foi tratado com solução salina. Os resultados analisados à

MEV, demonstraram que nos grupos tratados com hipoclorito de sódio seguido de

ácido cítrico, acido cítrico e EDTA houve remoção e exposição de numerosas fibras

colágenas. Os demais agentes não se mostraram capazes de remover efetivamente

a smear Iayer, bem como de expor fibras colágenas da superfície radicular.

Pitaru & Melcher (1987) estudaram o efeito da desmineralização da superfície

radicular de dentes suínos, que após RAR, condicionamento com EDTA a 12%,

durante 30 minutos, e introdução em cultura de fibroblastos, foram examinados à

microscopia de luz, e eletrônica de transmissão, após 20 e 30 dias de experimento.

Nas superfícies condicionadas, os fibroblastos foram encontrados aproximadamente

perpendiculares às superfícies radiculares com processos celulares envolvendo as

fibras colágenas expostas da superfície radiculares. Nas superfícies, que receberam

somente a RAR, material fibrilar, estava orientado paralelamente á superfície

radicular. Estas observações são sugestivas de que a superfície radicular

biomodificada, que foi o substrato para a cultura de fibroblastos, pode favorecer,

morfologicamente, a expressão dos fibroblastos.

Blömlof & Lindskog (1995a) compararam a textura da superfície dentinária e a

colonização celular e tecidual, após diferentes condicionamentos, variando o agente

condicionador, modo e tempo de aplicação. No estudo, in vitro, foi utilizado ácido

cítrico pH 1, ácido fosfórico pH1 e EDTA 24% pH7, que foram aplicados, passiva e

ativamente, em dentina de macacos. Os resultados, da aplicação passiva,

independentemente do tempo, demonstraram, no grupo controle, a presença de

smear layer e nos demais grupos, a sua ausência. Os ácidos promoveram uma

superfície finamente granulada quase lisa, independente do tempo de

condicionamento com aplicação passiva. A utilização do EDTA evidenciou uma

estrutura fibrosa, mais pronunciada após 3 minutos de aplicação passiva. Utilizando

o condicionamento ativo, por 20 segundos, os ácidos promoveram uma superfície

finamente granulada. Já o EDTA, apresentou grande número de fibras na superfície

dentinária. Na aplicação ativa, por 3 minutos, os ácidos promoveram superfícies com

crateras e aspecto granular com exposição ocasional de fibras. Contrariamente aos

ácidos, o EDTA promoveu a exposição de um grande número de fibras sem a

presença de crateras. No experimento em macacos, foram utilizados ácido fosfórico

e EDTA aplicados por 3 minutos e os resultados demonstraram que: o EDTA

promoveu uma significante proliferação de fibroblastos na área testada e o ácido

fosfórico promoveu uma pequena proliferação de fibroblastos. Foi possível observar

que o EDTA (pH neutro) foi mais seletivo na remoção de minerais da superfície

dentinária, expondo a matriz colágena.

Blömlof & Lindskog (1995 b) avaliaram os efeitos da aplicação de agentes

condicionadores de baixo pH (ácido cítrico e ácido fosfórico), ambos com pH1 e de

pH neutro (EDTA a 24%), todos na forma líquida, aplicados por 20 segundos e 3

minutos, sobre a vitalidade celular dos tecidos periodontais. A atividade da enzima

lactato-desidrogenase (LDH), uma enzima envolvida na glicólise anaeróbia para a

obtenção de energia, foi determinada em retalhos periodontais e em ligamento

periodontal de 16 pré-molares de 8 macacos. O ácido cítrico e o ácido fosfórico

provocaram uma redução na atividade da enzima LDH, ao contrário dos grupos

controle e tratado com EDTA a 24%. Sugere-se, então, que o uso de substâncias de

baixo pH pode comprometer, ao menos temporariamente, a atividade das células

dos tecidos periodontais.

Blömlof et al. (1996) investigaram, por meio da análise histométrica, o

processo de reparo periodontal em deiscências produzidas artificialmente. As raízes

foram tratadas com solução salina e ácido cítrico (pH1) durante 3 minutos ou com

EDTA a 24% (pH7) durante 8 minutos. Após 8 semanas de experiência, observou-se

uma menor recessão periodontal e menor bolsa periodontal, menor extensão de

epitélio juncional maior extensão de cemento e nova inserção quando o EDTA foi

utilizado em relação ao grupo controle. Quando comparado com o ácido cítrico, o

EDTA exibiu menor recessão gengival e bolsa periodontal, bem como maior nova

inserção histológica total. Os autores ressaltam que o EDTA pode favorecer o

processo de reparo, sem comprometer a vitalidade das células adjacentes do

ligamento periodontal. Além disso, a exposição da matriz colágena dentinária

induzida pelo EDTA, agente de pH neutro, pode servir para a retenção de

substâncias biologicamente ativas empregadas na regeneração periodontal.

Blömlof, Blömlof & Lindskog (1996) estudaram a capacidade de remoção de

smear layer e exposição de fibras colágenas de um gel de EDTA a 24%, aplicado

subgengivalmente, por 2 minutos, após a raspagem e aplainamento radicular RAR.

Foram utilizados 24 dentes que apresentavam doença periodontal os quais foram

divididos em 4 grupos: 1) controle, apenas RAR, seguido de exodontia, 2) exodontia

e imersão em solução de tripsina a 1%, por 20 minutos, com a finalidade de remoção

do coágulo para melhor visualização da superfície radicular; 3) aplicação de gel de

EDTA, seguido de irrigação com solução salina previamente à exodontia; 4)

aplicação de gel de EDTA, como no grupo anterior, seguido de exodontia e imersão

em solução de tripsina. A análise, por meio de MEV, demonstrou abertura de túbulos

dentinários e exposição de fibras colágenas no grupo tratado com gel de EDTA e

imersão em solução de tripsina 1%, concluindo-se que o uso deste gel após a

instrumentação da superfície radicular pode favorecer o processo de reparo .

Blömlof (1996) destaca em outro estudo, por meio da MEV, a maior

capacidade do EDTA a 24% (pH 7) em promover a exposição de fibras colágenas

em dentes afetados (16 dentes humanos) e não afetados pela doença periodontal

(16 dentes de macacos), em comparação com o ácido cítrico e o ácido fosfórico,

ambos com pH1, aplicados durante 3 minutos na superfície radicular. Nos

espécimes tratados com agentes de pH baixo, as superfícies aparentaram um

aspecto de erosão, com exposição de fibras colágenas demonstrando um aspecto

granulado, sugerindo que a sua integridade não foi preservada.

Blömlof, Blömlof & Lindskog (1997a) avaliaram a utilização simultânea da

instrumentação ultrasônica, com o EDTA 24% como agente irrigador na remoção da

smear layer e na exposição de fibras colágenas, utilizado-se ponta convencional e

ponta modificada, na qual o agente irrigador é levado até a extremidade desta ponta.

Constatou-se uma remoção mais efetiva da smear layer e maior exposição de fibras

colágenas quando do emprego da ponta modificada e do EDTA a 24% como agente

irrigador. O uso do EDTA a 24% com a ponta convencional levou à remoção da

smear layer da região cervical, porém de maneira pouco efetiva na região mais

apical. Desta forma, os autores concluem ser possível combinar instrumentação e

condicionamento da superfície radicular em um único procedimento.

Avaliando o efeito da aplicação de soluções com diferentes concentrações de

EDTA (1.5%, 5%, 15% e 24%) durante 2 minutos na remoção de smear layer e na

exposição de fibras colágenas da dentina de 12 dentes humanos acometidos pela

doença periodontal, Blömlof, Blömlof & Lindskog (1997 b) observaram, por meio de

MEV, uma remoção mais efetiva de smear layer e exposição de fibras colágenas, as

quais demonstraram um arranjo tridimensional, quando do emprego da solução

saturada de EDTA (24%), em comparação às demais concentrações testadas. Os

autores ressaltam que a remoção da smear layer necessita de um tempo mais curto

de aplicação do EDTA, ao passo que a exposição de fibras colágenas requer a

dissolução do substrato sólido adjacente, necessitando de maior tempo de

condicionamento.

A formação de smear layer após diferentes métodos de instrumentação da

superfície radicular e sua remoção por meio da aplicação de um gel de EDTA foram

avaliadas à MEV por Blömlof, Blömlof & Lindskog (1997 c). Vinte e quatro dentes

humanos com doença periodontal foram extraídos e submetidos à instrumentação

ultra-sônica, instrumentação manual ou com instrumentos rotatórios. A seguir,

metade de cada dente foi condicionada com um gel de EDTA a 24% por 2 minutos,

seguido de lavagem durante 3 minutos, e a outra metade serviu como controle. Os

resultados demonstraram que, independente do método empregado para

instrumentação da raiz, houve a formação de smear layer, a qual foi removida de

maneira eficiente pelo gel de EDTA 24%, havendo exposição de fibras colágenas da

dentina em diversos graus.

Bergenholtz & Babay (1998) avaliararam, in vitro, a textura da superfície

radicular de dentes humanos acometidos pela doença periodontal, submetidos à

diferentes agentes condicionadores: solução salina, cloridrato de tetraciclina com pH

1,80, solução saturada de ácido cítrico com pH1 e EDTA a 8% pH neutro em

diferentes formas de aplicação. Os resultados demonstraram que os

condicionadores ácidos e quelantes desmineralizaram a interface do cemento com a

dentina, removendo parcialmente o cemento e expondo a dentina subjacente. Os

autores observaram que a esfregação tende a romper o arranjo de fibras colágenas,

ao passo que a embebição tende a conferir à dentina uma aparência fibrilar e

sugeriram que a aplicação ativa de soro fisiológico ou de condicionador por 10

segundos, seguida da utilização de EDTA, passivamente, por quarenta segundos,

modificará a superfície radicular para uma textura adequada para a regeneração

periodontal.

Sampaio (1999) estudou a eficácia de detergentes e do EDTA na remoção de

smear layer de superfícies radiculares submetidas à raspagem e aplainamento

radicular, por meio da microscopia eletrônica de varredura. Foram utilizados

terceiros molares inclusos e pré-molares extraídos por razões ortodônticas, os quais

foram tratados com solução fisiológica, lauril sulfato de sódio, detergente de

mamona, Plax® ou EDTA 24% por diferentes tempos de aplicação. Os resultados

revelaram que o EDTA 24% foi capaz de remover de maneira mais eficiente a

camada de smear layer do que os demais agentes testados, independentes do

tempo de aplicação utilizado.

Zaman et al. (2000) avaliaram, in vitro, a aderência e orientação de células do

ligamento periodontal sobre dentina e cemento de superfícies radiculares após

condicionamento químico das mesmas. Após a RAR, as amostras foram divididas

em quatro grupos, de acordo com a substância empregada: 1) Ácido cítrico (pH 1,2);

2) EDTA 24% (pH 7,04); 3) Cloridrato de tetraciclina 100 mg/ml (pH 2) e 4) Somente

RAR. As soluções foram aplicadas por meio da imersão por 03 minutos. A avaliação

dos resultados foi realizada utilizando a microscopia de contraste de fase após 1, 3 e

7 dias e revelou que não houve diferenças na orientação e aderência das células do

ligamento periodontal entre o cemento e dentina em nenhum dos grupos testes que

foram superiores ao controle.

Babay (2001) avaliou, in vitro, a inserção de fibroblastos em dentes com

doença periodontal, biomodificados por RAR e diferentes condicionadores

radiculares. Os espécimes foram divididos em 3 grupos de 12 espécimes cada. As

superfícies radiculares foram aplainadas com cureta Gracey 7/8, ultra-som EMS® ou

ultra-som Amdent® e, posteriormente, tratadas com solução salina, ácido cítrico,

tetraciclina hidroclorídrica ou EDTA. Os espécimes foram colocados em meio de

cultura de fibroblastos humanos por 72 horas e examinados à MEV. O número de

fibroblastos foi significativamente maior nos grupos tratados com ácido cítrico,

tetraciclina e EDTA do que os espécimes que só receberam raspagem. Haviam mais

fibroblastos inseridos em superfície rugosa do que em superfície lisa.

Pilatti (2001) avaliou o grau de remoção de smear layer da superfície

radicular, por meio do emprego de gel de EDTA em diferentes concentrações,

tempos e formas de aplicação. Dentes humanos extraídos foram submetidos à

remoção do cemento com broca diamantada e aplainamento radicular com cureta.

As amostras obtidas receberam aleatoriamente a aplicação de gel de EDTA nas

seguintes concentrações: controle, 5%, 10%, 15%, 20% e 24%. Para cada grupo

experimental os tempos de aplicação empregados foram de 1, 2 ou 3 minutos. Os

produtos testados foram aplicados de maneira passiva ou ativa (esfregação com

pincel). A seguir, as amostras foram desidratadas e metalizadas para a obtenção de

fotomicrografias em microscópio eletrônico de varredura, as quais foram avaliadas,

adotando-se um índice de remoção da smear layer proposto por Sampaio (1999). Os

resultados demonstraram que os géis de EDTA removeram a smear layer nos

grupos tratados, contrariamente o que foi observado no grupo controle. O gel de

EDTA a 5% proporcionou uma remoção mais efetiva da smear layer do que as

demais concentrações avaliadas, quando aplicados de maneira passiva. Não houve

diferenças estatisticamente significantes entre as concentrações avaliadas, quando

aplicadas ativamente. O tempo de aplicação de 3 minutos mostrou-se superior ao

tempo de 1 minuto. Exceto para o gel de EDTA a 5%, a aplicação ativa mostrou-se

superior à aplicação passiva para as demais concentrações avaliadas. Pode-se

concluir que o tratamento químico da superfície radicular com gel de EDTA, aplicado

de maneira ativa durante 3 minutos, pode favorecer a remoção da smear layer

produzida durante a raspagem e aplainamento radicular.

Bastos Neto (2002) analisou, em microscopia eletrônica de varredura,

superfícies radiculares de dentes humanos hígidos e acometidos pela doença

periodontal antes e após os tratamentos de raspagem e aplainamento radicular e

condicionamento com ácido cítrico e EDTA. Para tal, foram utilizados 14 dentes

humanos, sendo dois hígidos e doze extraídos por perda de suporte periodontal. Os

dentes foram preparados para que, de cada raiz, se obtivessem dois corpos de

prova. Pode-se observar que: grupo 1 – os fragmentos provenientes de dentes

hígidos, que não receberam tratamento, apresentaram uma superfície com grânulos

regulares, representando as fibras do ligamento periodontal rompidas durante a

exodontia. Não havia alterações cementárias ou áreas sem cemento; grupo 2 – os

fragmentos dos dentes contaminados pela doença periodontal, que não receberam

tratamento, apresentaram massas de cálculo bastante poroso, margeado por regiões

de cemento de aparência normal e áreas de reabsorção cementária; grupo 3 - as

superfícies dos fragmentos contaminados, raspadas com curetas manuais,

apresentaram smear layer cobrindo os tecidos dentários; grupo 4 – os fragmentos

provenientes de dentes contaminados, que foram raspados e condicionados com

ácido cítrico (solução líquida a 37% e pH 1), não apresentaram smear layer. As

estruturas do cemento e da dentina podiam ser observadas e fibras colágenas foram

expostas; grupo 5 – os fragmentos provenientes de dentes contaminados, que foram

raspados e condicionados com EDTA (solução líquida a 24% e pH 7,2),

apresentaram smear layer, que cobria parcialmente as estruturas cementárias e

dentinárias; grupo 6 – os fragmentos provenientes de dentes contaminados, que

foram raspados e condicionados com EDTA (gel a 24% e pH 7,1, não apresentaram

smear layer. O EDTA gel foi tão efetivo na remoção do smear layer e na exposição

de fibras colágenas quanto o ácido cítrico.


Mayfield et al. (1998) avaliaram clinicamente a utilização de um gel de EDTA

a 24% coadjuvante ao tratamento cirúrgico de defeitos intra-ósseos de 36 pacientes.

No grupo teste, após debridamento dos defeitos e raspagem e aplainamento

radicular, a superfície radicular foi condicionada com um gel de EDTA a 24% por 3

minutos. Os parâmetros clínicos foram reavaliados após 6 meses, revelando

reduções significativas na profundidade de sondagem, na profundidade dos defeitos

ósseos e ganho de inserção clínica em relação ao período inicial, sem diferenças

estatisticamente significantes entre os dois grupos experimentais.

Nagy et al. (1998) avaliaram o efeito de um gel de EDTA associado à

instrumentação mecânica. Quinze dentes de 5 pacientes que apresentaram doença

periodontal foram instrumentados na superfície da raiz mésio-bucal com o auxílio do

gel EDTA, gel placebo ou, somente, instrumentado. O tempo, facilidade e número de

golpes da instrumentação foram anotados. Por meio do MEV, as topografias das

superfícies tratadas foram avaliadas e demonstraram uma efetiva remoção do

cálculo nos grupos tratados sem diferenças entre eles. O tempo, número de golpes e

facilidade de remoção foram similares em todos os grupos tratados e não houve

dano aos tecidos moles ou duros. Os autores concluíram que a utilização do gel não

se mostrou efetiva quando associada à RAR.

Procurando avaliar a eficácia clínica do condicionamento ácido da superfície

radicular com o gel de EDTA a 24% no tratamento periodontal não cirúrgico, Blömlof

et al. (2000a) trataram 91 pacientes, sendo 41 pacientes com doença periodontal

não tratada e 50 pacientes envolvidos em programa de manutenção. Sob anestesia

local, realizou-se raspagem e aplainamento radicular e irrigação com solução salina

por 20 segundos (controle) ou EDTA a 24% durante 2 minutos, seguido de irrigação

com solução salina por 20 segundos (teste). Presença de placa, sangramento à

sondagem, profundidade de sondagem e nível de inserção clínica foram

determinados, por meio de sondagem manual, no início do experimento e 6 meses

depois. Os resultados demonstraram que, apesar dos pacientes com doença

periodontal não tratada terem apresentado uma maior redução na profundidade de

sondagem e ganho de inserção clínica do que os pacientes do programa de

manutenção, não houve diferenças estatisticamente significantes entre os dois

grupos experimentais com relação aos parâmetros clínicos avaliados.

No mesmo ano, Blömlof et al. (2000b) investigaram a eficácia clínica do gel de

EDTA a 24% no tratamento periodontal cirúrgico em 68 pacientes (90 sítios)

acometidos pela doença periodontal. Previamente ao procedimento cirúrgico, assim

como após 3 e 6 meses, a presença de placa, sangramento à sondagem,

profundidade de sondagem e nível de inserção foram os parâmetros clínicos

avaliados, empregando-se uma sonda periodontal automatizada. Após o

levantamento de um retalho de espessura total, por meio de incisões intra-sulculares

e relaxantes, quando necessárias, as superfícies radiculares expostas foram

raspadas e aplainadas, e submetidas a um dos seguintes tratamentos, de maneira

aleatória: a) aplicação passiva de solução fisiológica com bolinha de algodão

durante 20 segundos; b) aplicação passiva de solução aquosa saturada de ácido

cítrico (pH 1) durante 20 segundos; c) aplicação de gel de EDTA a 24% durante 2

minutos. A seguir, as raízes foram lavadas abundantemente com solução salina e os

retalhos foram reposicionados e suturados. Assim como no estudo anterior, não

houve diferença estatisticamente significante entre os tratamentos avaliados quanto

à redução da profundidade de sondagem e ganho de inserção clínica.

3 OBJETIVOS

3.1 Objetivo Geral

O objetivo deste estudo foi avaliar histologicamente, por meio da microscopia

de luz, a resposta do tecido conjuntivo de ratos às superfícies de implantes

radiculares de dentes humanos afetados pela doença periodontal crônica e

biomodificados por meio da raspagem, aplainamento e condicionamento radicular

por três diferentes marcas comerciais de EDTA a 24%.

3.1 Objetivos específicos

Avaliar nos grupos de estudo, por meio da microscopia de luz, as

características do tecido conjuntivo segundo os parâmetros:

� Organização estrutural do tecido;

� Interface tecido conjuntivo-implante;

Observando-se:

- Características da disposição das fibras colágenas;

- Presença de infiltrado inflamatório;

- Presença de reabsorção radicular.

Identificar qual EDTA apresentou melhor resposta na biomodificação da

superfície radicular.

4 MATERIAIS E MÉTODOS

4.1 Comitê de Ética em Pesquisa

Este trabalho está de acordo com as normas e diretrizes da resolução que

regulamenta a pesquisa, sendo que o trabalho foi submetido e aprovado (com título

provisório) pelo Comitê de Ética em Pesquisa da Pontifícia Universidade Católica de

Minas Gerais em 9 de dezembro de 2003, conforme anexo 1.

Os pacientes, que concordaram em doar os dentes extraídos para serem

utilizados nessa pesquisa, preencheram e assinaram um Termo de Consentimento

Livre e Esclarecido de acordo com o anexo 2.

4.2 Obtenção dos espécimes

Vinte e quatro dentes, incisivos centrais superiores e caninos, humanos,

permanentes, foram obtidos de pacientes, com indicação para exodontia por doença

periodontal crônica avançada, que se encontravam em tratamento na Disciplina de

Periodontia e da Disciplina de Cirurgia da Faculdade de Odontologia da Pontifícia

Universidade Católica de Minas Gerais.

Os dentes utilizados nesse estudo preencheram os critérios de inclusão

adotados por Chaves et al. (1992), modificado: 1 – Perda de inserção maior que

5mm; 2 – Ausência de tratamento periodontal prévio; 3 – Evidência radiográfica de

pelo menos 30% de perda óssea alveolar; e 4 – Ausência de lesão cariosa na raiz.

Imediatamente após a exodontia, todos os dentes foram limpos com soro

fisiológico usando uma escova de dente infantil Stage 3 (Oral-B®, Estados Unidos)

nova, e armazenados em frascos individuais com soro fisiológico (figura 1).

FIGURA 1 – Processo de lavagem

dos dentes com soro fisiológico

utilizando escova dental infantil.

4.3 Preparação dos espécimes

Com apreensão manual pela coroa e suportados por uma gaze estéril,

embebida em soro fisiológico, os 24 dentes foram raspados e aplainados (figura 2).

As RAR foram feitas com uma cureta modelo Gracey, nova, número 5-6 (Hu-

Friedy® – Chicago). O número mínimo de 30 golpes com a cureta, sempre afiada, foi

padronizado. A cada RAR, o corte da cureta foi conferido em um bastão de plástico

(HuFriedy® – Chicago) e quando necessária, afiada com pedra índia, de granulação

fina (Norton® , Worcester – Estados Unidos ) ( figura 3).

FIGURA 2 – Processo de RAR.

FIGURA 3 – Material utilizado na RAR.

Após as RAR, os dentes foram abundantemente lavados com 20ml de soro

fisiológico (figura 4) e seccionados. Para permitir secções mais precisas e evitar

acidentes, os dentes foram fixados pela coroa em suporte plástico (figura 5), por

meio de uma resina acrílica autopolimerizável (JET-Clássico®, São Paulo).

FIGURA 4 –- Dente

sendo lavado com soro

após RAR.

FIGURA 5 – Dente fixado

em um suporte de plástico

para ser seccionado.

Primeiramente o 1/3 apical foi transversalmente seccionado (figura 7a). Em

seguida secções radiculares longitudinais mesio-vestibular e disto-lingualmente

foram realizadas( figuras 7a, 7b e 7c). Por ultimo, uma incisão transversal, na

cervical (figura 7f), foi realizada em cada dente resultando em 4 espécimes por dente

(figura 7e). Os cortes foram feitos com um disco diamantado de 0,22mm de

espessura (KG Sorensen® – Barueri) em baixa rotação na peça de mão duplicadora

modelo 3555 (KAVO®, Biberach - Alemanha) (figura 6). Os fragmentos tiveram suas

bordas arredondadas e apresentaram aproximadamente as seguintes dimensões: 5

x 3 x 1 mm (figura 8). As coroas e os terços apicais foram seccionados e

descartados.

FIGURA 6 – Material utilizados para o

seccionamento dos dentes.

FIGURA 7 – Obtenção dos fragmentos radiculares. a) Secção transversal do 1/3 apical; b)

Secção longitudinal VL; c)Secção longitudinal MD, d) vista ápico-coronal da

raiz seccionada; e) Secção transversal cervical; f) fragmentos obtidos após as

secções de um dente.

FIGURA 8 – Dimensões

dos fragmentos radicu-

lares obtidos.

Os espécimes foram aleatoriamente distribuídos entre os 4 grupos de

trabalho. O Grupo I foi constituído de 24 espécimes (tabela 1) condicionados com

EDTA fabricado pela Biodinâmica®(figuras 9 e 10).

TABELA 1

Espécimes condicionados com EDTA

fabricado pela Biodinâmica®

GRUPO I

24 ESPÉCIMES

MICROSCOPIA DE LUZ

15dias 30dias 60dias

BIODINAMICA®

24% - pH 8,7

8 8 8

FIGURA 9 – Estojo e seringa

do EDTA da Biodinâmica®.

FIGURA 10 – Fragmento radicular

sendo condicionado com EDTA da

Biodinâmica®.

Grupo II foi constituído de 24 espécimes (tabela2) condicionados com EDTA

fabricado pela Biora® (figuras 11 e 12).

TABELA 2

Espécimes condicionados com EDTA

fabricado pela Biora®

GRUPO II

24 ESPÉCIMES

MICROSCOPIA DE LUZ


BIORA®

24% - pH 7,2

8 8 8

FIGURA 11 – Estojo e frasco do

EDTA da Biora®.

FIGURA 12 – Fragmento

radicular sendo condicionado

com EDTA da Biora®.

Grupo III foi constituído de 24 espécimes (tabela 3) condicionados com EDTA

da JHS® (figuras 13 e 14).

TABELA 3

Espécimes condicionados com EDTA da JHS®

GRUPO III

24 ESPÉCIMES

MICROSCOPIA DE LUZ


JHS®

24% - pH 9,0

8 8 8

FIGURA 13 – Frasco

do EDTA da JHS® .


sendo condicionado com EDTA da

JHS®.

Grupo IV foi constituído de 24 espécimes (tabela 4) que receberam RAR e,

em uma bolinha de algodão, soro fisiológico (figuras 15).

TABELA 4

Espécimes que receberam RAR e

soro fisiológico em uma bolinha de algodão

GRUPO IV

24 ESPÉCIMES

MICROSCOPIA DE LUZ


Soro Fisiológico

8 8 8


recebendo soro fisiológico em uma

bolinha de algodão.

Um espécime de cada dente não foi condicionado por EDTA (recebeu, em uma

bolinha de algodão, soro fisiológico por 2 minutos passivamente). Cada um dos três

espécimes restantes, de cada dente, foi condicionado, durante dois minutos, com

uma marca comercial diferente do gel de EDTA, passivamente (simples aplicação

tópica, sem esfregar), na concentração de 24% que é apresentado comercialmente

pelos fabricantes. A superfície a ser condicionada foi secada com gaze estéril e o gel

foi aplicado com os bicos aplicadores que acompanham o produto. Após 2 minutos

de condicionamento a superfície foi lavada com soro fisiológico abundantemente

(20ml). Cada espécime, de um mesmo dente escolhido aleatoriamente, recebeu um

dos quatro tipos de tratamento e todos os quatro espécimes foram implantados no

dorso de um rato que recebeu número 1 e assim sucessivamente até o número 24

(tabela 5 – p.66).

FIGURA 16 – Fragmento sendo

lavado com soro fisiológico após

condicionamento.

FIGURA 17 – Fragmentos após

condicionamento preparados

para serem implantados no

dorso do rato.

4.4 Preparação dos animais

Foram utilizados 24 ratos (Rattus norvegicus, Albinus, Holtzman) - figura

18), adultos machos, com peso entre 180 a 200g, , provenientes do biotério do

Instituto de Ciências Biológicas da UFMG. Ratos machos foram escolhidos para se

eliminar as alterações hormonais associadas com o cio. Durante o período

experimental, os animais permaneceram acondicionados em gaiolas plásticas,

forradas com maravalhas, contendo cada uma o número máximo de quatro animais.

Os animais receberam alimentação sólida (Labina – Purina®, São Paulo) e água ad

libitum. Os animais foram pesados em uma balança eletrônica (Marte® A 100, São

Paulo) no início e no final do experimento para se calcular as doses dos

medicamentos – anestésicos e sedativos.

FIGURA 18 – Rattus norvegicus,

Albinus, Holtzman

TABELA 5

Relação do número de dentes e ratos com os períodos e grupos de experimento.

Para o procedimento cirúrgico, os animais foram anestesiados,

intramuscularmente, na coxa direita e esquerda com Zoletil®-Virbac, (Carros –

França) e xilazina®, cujas dosagens são respectivamente de 0,1ml e 0,01ml para

cada 100g de peso, respectivamente. Após a anestesia, procedeu-se a antissepsia,

feita com iodopovidona tópica (PVPI®, Porto Alegre), e tricotomia da região dorsal do

rato para facilitar o ato operatório. Os animais foram posicionados em decúbito

ventral e presos com esparadrapo em cada pata. Em cada rato foram feitas quatro

Dentes Dorso Microsc Período AE AD PD PE

1 Rato 1

2 Rato 2

3 Rato 3

4 Rato 4

5 Rato 5

6 Rato 6

7 Rato 7

8 Rato 8

15 dias

9 Rato 9

10 Rato10

11 Rato11

12 Rato12

13 Rato13

14 Rato14

15 Rato15

16 Rato16

30

dias

17 Rato17

18 Rato18

19 Rato 19

20 Rato20

21 Rato21

22 Rato22

23 Rato23

24 Rato24

ML

60

dias

G1

G2

G3

G4

incisões, de aproximadamente 6mm de comprimento, duas escapulares e duas

pélvicas, distando cerca de 2cm da linha mediana cada uma. Fez-se a divulsão do

tecido (10mm) com tesoura de ponta romba Metzenbaum curva (Quinelato® - Rio

Claro), formando 4 lojas cirúrgicas (figura 19). Em seguida, os fragmentos, após

receberem o tratamento proposto para cada grupo, foram introduzidos no tecido

subcutâneo com o auxílio de uma pinça anatômica (Quinelato® - Rio Claro),

obedecendo a mesma seqüência sempre escolhida para a posterior identificação

dos grupos (figura 19).

As bordas das feridas foram suturadas com agulhas montadas de 1,5cm com

fio mononylon 5-0 (Ethilon® - São José dos Campos) utilizando porta agulhas Crile

Wood (Quinelato® - Rio Claro).

FIGURA 19 – Esquema do posicionamento dos fragmentos no rato

Após os procedimentos cirúrgicos, os animais foram mantidos para descansar

na posição de decúbito ventral e monitorados até sua total recuperação. Seguindo-

se ao seu restabelecimento, os ratos foram colocados novamente nas gaiolas

plásticas, forradas com maravalhas contendo farinha de milho (Mucilon® - São José

do Rio Pardo) dissolvida em água proporcionando uma dieta de fácil mastigação

(somente nos 3 primeiros dias pós cirúrgico), além de água ad libitum. Durante o

período experimental, os ratos ficaram sob observação diária para verificação de

uma possível alteração macroscópica no local dos implantes.

4.5 Biópsia dos tecidos

Para realização das biópsias, os animais foram anestesiados e tricotomizados

em sua região dorsal, tendo sua área de implante dissecada, abrangendo suficiente

tecido circunjacente (figura 20). As amostras (fragmentos associados ao tecido

conjuntivo) mediam aproximadamente 10x10x4mm e foram acondicionadas em

frascos individuais rotulados contendo formol10% tamponado.

As amostras foram colhidas em três etapas, uma com 15 dias, outra com 30

dias e a ultima com 60 dias após serem implantadas nos ratos (tabela 5 – pág. 66).

Após a remoção dos tecidos, os animais foram sacrificados com o uso de uma

superdosagem de anestésico. Todos os procedimentos cirúrgicos foram realizados

no Laboratório de Biologia do Desenvolvimento do Instituto de Ciências Biológicas

da Universidade Federal de Minas Gerais.

FIGURA 20 – Procedimento de biópsia das

amostras.

4.6 Preparo das amostras para estudo na microscopia de luz

Após dois dias em solução de formol a 10%, as amostras, contendo as áreas

experimentais e controle, foram colocados em solução desmineralizadora de EDTA a

10% pH 7,2 (Vetec® – Duque de Caxias), por 28 dias sendo esta renovada

semanalmente. O controle da desmineralização foi feito pela técnica da agulha.

Posteriormente a desmineralização, as amostras foram preparadas para estudos

histológicos microscópicos, procedendo-se ao processamento do material nas

etapas seguintes:

a) Desidratação: desidratação do tecido em série crescente de álcool etílico

(70%,80%,90%,95%, absoluto I, absoluto II, absoluto III), (Synth® –

Diadema), com um tempo de 30 minutos cada banho.

b) Diafanização: diafanização do tecido em três banhos de xilol (Synth

Diadema), com duração de 30 minutos cada banho.

b) Infiltração: foram realizados três banhos em parafina a 60oC em estufa

(Fanem® modelo 35 SE ® – São Paulo), com duração de 30 minutos cada

banho. Após o último banho o material foi incluído em parafina histológica

(Synth® – Diadema). A preparação dos espécimes foi realizada no

Laboratório de Biologia do Desenvolvimento do Instituto de Ciências

Biológicas da Universidade Federal de Minas Gerais.

4.7 Microtomia

Os blocos de parafina contendo as peças anatômicas foram preparados para

adaptação ao micrótomo através da retirada do excesso do material de inclusão com

uma lâmina para micrótomo resultando numa forma trapezoidal. Os blocos foram

identificados por etiquetas de papel afixadas por meio da liquefação da parafina com

uma espátula para cimento nº 24 (Duflex® – São Paulo) aquecida em lamparina à

álcool.

Após a fixação dos blocos ao micrótomo (Leica® modelo RM2125RT – China)

e o ajuste da sua posição procedeu-se à confecção de cortes longitudinais seriados

com 5 µm de espessura compreendendo desde o início do fragmento associado ao

tecido conjuntivo. Os cortes foram coletados em banho histológico a 45oC com um

pincel de ponta fina (Tigre® n.00 – São Paulo) e fixados em lâminas de vidro com

ponta fosca de 25,4 x 76,2 mm de dimensão por 1,0 mm a 1,2 mm de espessura

(Bioslide® – São Paulo) previamente identificadas segundo o seu número de série e

o bloco de origem. Os cortes fixados foram mantidos em estufa (Quimis® – Diadema)

a 60oC por uma noite sendo em seguida armazenados em caixa de madeira forrada

com papel toalha absorvente e guardados à temperatura ambiente.Toda a fase de

microtomia foi realizada no Laboratório de Patologia da Faculdade de Odontologia

da Pontifícia Universidade Católica de Minas Gerais.

4.8 Coloração com hematoxilina e eosina (H.E.)

As lâminas para microscopia contendo os cortes histológicos fixados foram

retiradas das caixas de madeira e acondicionadas em porta lâminas de vidro para

coloração histológica procedendo-se sua coloração segundo as etapas seguintes:

- imersão em xilol (1) por 30 minutos;

- imersão em xilol (II) por 30 minutos;

- imersão em xilol (III) por 30 minutos;

- imersão em álcool etílico absoluto (1) por 2 minutos;

- imersão em álcool etílico absoluto (II) por 2 minutos;

- imersão em álcool etílico absoluto ( por 2 minutos;

- imersão em álcool etílico a 90% por 2 minutos;



- lavagem em água corrente por 10 minutos;

- imersão em solução de hematoxilina por 1 minuto e 30 segundos;

- lavagem em água corrente por 10 minutos;

- imersão em solução de eosina por 10 minutos;

- lavagem rápida em água corrente;

- imersão em álcool etílico a 70% por 1 minuto;

- imersão em álcool etílico a 80% por 1 minuto;



- imersão em álcool etílico absoluto (III) por 2 minutos;

- imersão em álcool etílico absoluto (II) por 2 minutos;

- imersão em álcool etílico absoluto (1) por 2 minutos;

- imersão em xilol (III) por 2 minutos;

- imersão em xilol (II) por 2 minutos;

- imersão em xilol (1) por 10 minutos.

O xilol, o álcool etílico e a eosina utilizados nesta fase pertenciam a marca

comercial Synth® (Diadema) enquanto que a hematoxilina pertencia a marca

comercial Reagen® (Rio de Janeiro).

Após a coloração cada corte histológico recebeu uma gota da solução

resinosa (Entellan®, Darmstadt) para montagem rápida em microscopia e foram

recobertos por lamínula com 24 x 50 mm de dimensão (Corning® – Cidade do

México) evitando-se o acúmulo de bolhas. Logo em seguida as lâminas montadas

foram acondicionadas em pranchetas de madeira e armazenadas em estufa

(Fanem® – São Paulo) a 60oC durante uma noite para secagem. A etapa de

coloração por H.E. foi realizada no Laboratório de Biologia do Desenvolvimento do

Instituto de Ciências Biológicas da Universidade Federal de Minas Gerais.

4.9 Avaliação no ML

Os cortes histológicos foram analisados em microscópio de luz (Olympus,

Japão) modelo BX 50 em toda a sua extensão no aumento 400 X.

Na análise microscópica foram avaliados os parâmetros de organização

estrutural do tecido e Interface tecido conjuntivo-implante observando-se as

características da disposição das fibras colágenas, a presença de infiltrado

inflamatório e a presença de reabsorção radicular. As lâminas que permitiram essa

avaliação foram separadas para posterior obtenção de imagens fotográficas bem

como para análise histológica descritiva.

5 RESULTADOS

5.1 Análise descritiva por meio da ML

No grupo I, os fragmentos foram biomodificados pela raspagem, aplainamento

radicular e condicionamento com gel de EDTA Trissódico, 24%, pH 8,7, aplicado de

forma passiva, fabricado pela Biodinâmica® e posteriormente, lavados,

abundantemente, com 20ml de soro fisiológico. Observou-se, em todos os períodos

de reparo (15, 30 e 60 dias), a presença de tecido conjuntivo fibroso organizado em

forma de cápsula circundando o fragmento com fibras dispostas paralelamente à

superfície radicular. Observou-se, também, áreas de células sugestivas de

granulócitos e fibras em intimo contato com a superfície radicular, sugestiva de

inserção fibrosa. Células inflamatórias isoladas, com núcleos de cromatina

condensada, sugestivas de linfócito, foram ocasionalmente encontradas. Não foi

encontrada a presença de reabsorção radicular. Figuras: 21, 25 e 29.

No grupo II, os fragmentos foram biomodificados pela raspagem,

aplainamento radicular e condicionamento com gel de EDTA dissódico, 24%, pH 6,7,

aplicado de forma passiva, fabricado pela Biora® e posteriormente, lavados,




superfície radicular. A presença de fibras e células justapostas ao cemento,

raramente foi encontrada. Células inflamatórias isoladas, com núcleos de cromatina

condensada, sugestivas de linfócitos, foram ocasionalmente encontradas. Não foi

observada a presença de reabsorção radicular. Figuras: 22, 26 e 30.

No grupo III, os fragmentos foram biomodificados pela raspagem,

aplainamento radicular e condicionamento com gel de EDTA dissódico 24%, pH 9,

aplicado de forma passiva, fabricado pela JHS® e posteriormente, lavados,




superfície radicular. Observou-se, também, áreas com células (com núcleos

volumosos e vesiculosos com nucléolos evidentes, imersos em uma matriz

extracelular com fibras conjuntivas finas) e fibras em intimo contato com a superfície

radicular, sugestiva de inserção fibrosa. Células inflamatórias isoladas, com

nucléolos de cromatina condensada, sugestivas de linfócito, foram ocasionalmente

encontradas. Não foi observada a presença de reabsorção radicular. Figuras: 23, 27

e 31.

No grupo IV, os fragmentos foram tratados pela raspagem, aplainamento

radicular e aplicação de soro fisiológico em uma bolinha de algodão, passivamente

por 2 minutos. Observou-se, em todos os períodos de reparo (15, 30 e 60 dias), a

presença de tecido conjuntivo fibroso organizado em forma de cápsula circundando

o fragmento com fibras dispostas paralelamente à superfície radicular, sem áreas de

intimo contato de fibras e células com a superfície radicular. A presença de um

infiltrado inflamatório crônico na periferia dos vasos sangüíneos foi observado. Não

foi encontrada a presença de reabsorção radicular. Figuras: 24, 28 e 32.

FIGURA 21 – Corte histológico, transversal, obtido da amostra

pertencente ao grupo I, com 15 dias de reparo.

Nota Coloração H.E., aumento 400X.


pertencente ao grupo II, com 15 dias de reparo.



pertencente ao grupo III, com 15 dias de reparo.



pertencente ao grupo IV, com 15 dias de reparo.


























6 DISCUSSÃO

A obtenção da biocompatibilidade das superfícies radiculares acometidas pela

doença periodontal, aos tecidos circunjacentes, é pré-requisito para se regenerar os

tecidos periodontais (MENDES, 1982). Os procedimentos de RAR, associados à

manutenção de um adequado controle de placa pelo paciente se mostram

imprescindíveis para se alcançar esse objetivo (O’LEARY, 1986).

A instrumentação mecânica resulta na formação de smear layer na superfície

radicular (EICK et al., 1970; HANES et al., 1991), independentemente da técnica

realizada: curetas manuais, ultra-som e pontas diamantadas (BLÖMLOF, BLÖMLOF

& LINDSKOG, 1997c). A formação do smear layer, segundo Blömlof (1996), inibe a

adesão e migração celular sobre a superfície radicular inibindo a regeneração dos

tecidos periodontais (NALBADIAN & COTE, 1982; POLSON et al., 1984; HANES et

al., 1988).

Estudos experimentais in vitro, comparando condicionadores ácidos (ácido

cítrico, ácido fosfórico e tetraciclinas) com o quelante, EDTA, pH neutro, (LASHO et

al., 1983; BLÖMLOF & LINDSKOG, 1995 a,b; BLÖMLOF, 1996; BERGENHOLTZ &

BABAY, 1998; BASTOS NETO, 2002) demonstraram que tanto os ácidos quanto o

EDTA são efetivos na remoção do smear layer e exposição das fibras colágenas.

Entretanto, o EDTA mostrou-se mais seletivo na exposição das fibras colágenas do

que o ácido cítrico e o ácido fosfórico, ambos com pH1, os quais apresentaram

tendência em remover parte da matriz orgânica dentinária, além de conferirem à

superfície radicular um aspecto de erosão (BLÖMLOF & LINDSKOG, 1995a). Além

disso, estudos in vitro, de Blömlof (1995b), utilizando microscopia de luz, mostraram

que ao contrário dos grupos tratados com agentes de baixo pH, como o ácido cítrico

e o ácido fosfórico, que apresentaram redução na atividade da enzima tecidual

lactato-desidrogenase (LDH), o EDTA 24% não prejudicou a viabilidade celular, de

acordo com estudos.

Zaman et al. (2000) demonstraram in vitro que, tanto o ácido cítrico, pH1 e o

cloridrato de tetraciclina pH2 quanto o EDTA 24%, pH7, favoreceram a uma maior

aderência e orientação de fibroblastos sobre cemento e dentina, em comparação ao

grupo tratado apenas com raspagem e aplainamento radicular.

Assim, a utilização do EDTA vem sendo investigada, visando obter melhores

resultados nos procedimentos periodontais regenerativos, com a utilização de um

agente químico mais biocompatível com os tecidos periodontais, capaz de

biomodificar a superfície radicular, sem prejudicar as células remanescentes do

ligamento periodontal e da porção interna do retalho. O EDTA, neutro, age por

quelação, mostrando-se efetivo na remoção da smear layer e exposição das fibras

colágenas da matriz orgânica do cemento e da dentina (LASHO et al. 1983;

BLÖMLOF & LINDSKOG, 1995 a,b; BLÖMLOF, 1996; BLÖMLOF et al. 1996 a, 1997

a, b, c; BERGENHOLTZ & BABAY, 1998; BABAY, 2001; SAMPAIO, 1999; PILATTI,

2001; BASTOS NETO, 2002).

O grau de desmineralização da superfície radicular promovido pelo EDTA e,

conseqüentemente, remoção do smear layer e exposição de fibras colágenas

dependem de fatores como concentração, pH, consistência, tempo e forma de

aplicação do condicionador utilizado. Dentre as diversas concentrações testadas, in

vitro, o EDTA 24%, em pH neutro, na consistência de gel, aplicado por 2 minutos,

passivamente, se mostrou efetivo na remoção do smear layer e na exposição de

fibras colágenas, em estudos (BLÖMLOF, BLÖMLOF & LINDSKOG,1996;

BLÖMLOF, BLÖMLOF & LINDSKOG, 1997c; BASTOS NETO, 2002).

Com relação à técnica de aplicação do gel de EDTA 24%, Pilatti (2001)

demonstrou que a aplicação ativa do gel de EDTA 24% foi mais efetiva em remover

a smear layer dos orifícios dos canalículos dentinários do que a aplicação passiva do

mesmo gel. Entretanto, Bergenholtz & Babay, (1998) verificaram em seus

experimentos que a aplicação ativa tenderia a romper o arranjo de fibras colágenas

e que a embebição (forma passiva) conferiria à dentina uma aparência fibrilar. Isso

pode ser observado na bula do EDTA fabricado pela Biora® (anexo 3), a qual

preconiza a aplicação de forma passiva.

Os resultados do presente estudo demonstraram em todos os grupos,

independentemente do tempo de reparo, que os fragmentos radiculares estavam

circundados por tecido conjuntivo fibroso organizado em forma de cápsula fibrosa

com fibras dispostas paralelamente à superfície radicular, mas o efeito do

condicionamento, pelo gel de EDTA 24%, demonstrou uma variabilidade na resposta

do tecido conjuntivo às diferentes marcas comerciais utilizadas.

Sendo assim, o grupo I e III, condicionados com EDTA 24% com pH 8,7 e 9

respectivamente, apresentaram, em todos os períodos de reparo, células e fibras em

contato com a superfície radicular, sugestivo de áreas com inserção fibrosa. Sendo

que o grupo III além de demonstrar um intimo contato de células e fibras com a

superfície radicular, apresentou células (com núcleos volumosos e vesiculosos com

nucléolos evidentes) imersas nas matrizes extracelulares, sugestivas de um

aumento da atividade de síntese protéica. Esses resultados sugerem que o

condicionamento determine uma superfície biocompatível, favorecendo o processo

de inserção de fibras. A justificativa para esses resultados é a maior efetividade de

quelação que o EDTA, com pH 8,7 e 9, apresentam em complexar o cálcio que é

superior aos condicionadores EDTA com pH neutro (KOLTHOFF & ELVING, 1959).

A afirmação de que o EDTA com pH 8,7 a 9 é muito alcalino e poderia prejudicar a

superfície radicular e os tecidos circunjacentes, deve ser considerada, mas deve-se

lembrar que o pH ótimo do fibroblasto esta entorno de 7,2 variando de 6,6 a 7,8

(HAM & MCEEHAM, 1979; MCATEER & DOUGLAS, 1979) segundo Bömlof &

Lindskog, 1995b e estes valores estão mais próximos do pH do EDTA do que o pH

1, utilizado na maioria dos condicionadores ácidos. Portanto, a utilização do EDTA

com pH 9 seria menos irritante às superfícies radiculares e aos tecidos

circunjacentes à área operada do que a utilização de ácidos com pH 1.

Considerando o grupo II, a rara presença de fibras e células justapostas ao

cemento, esses resultados estão de acordo com os estudos, in vivo, obtidos em

humanos, em que a utilização do gel de EDTA 24%, pH neutro, não resultou na

formação de nova inserção (MAYFIELD et al., 1998; BLÖMLOF et al., 2002 a, b). É

sugestivo que no grupo II tenha ocorrido somente a remoção da smear layer como

ocorreu nos estudos de Pilatti, (2001) que utilizou o gel de EDTA 24%, pH neutro,

aplicado passivamente, nos períodos tempos de 1 e 3 minutos, trocada a cada 1

minuto, onde verificou que em todas aplicações somente o smear layer foi

removido, contrariando os achados de Blömlof, Bömlof & Lindskog (1996; 1997c) e

Bastos Neto (2002) que observaram uma remoção mais efetiva de smear layer e

exposição de fibras colágenas, as quais demonstraram um arranjo tridimensional,

quando se utilizava gel de EDTA (24%).

Em relação à avaliação da presença de reabsorção radicular, não foi

detectada em nenhum grupo, independentemente do período de reparo. Esse

achado difere dos resultados obtidos por Register (1973), Polson & Proye (1982),

Clafey et al. (1987) e Wikesjo et al. (1988) que observaram reabsorções radiculares

após a utilização de condicionadores ácidos. No entanto, assemelha-se, com os

experimentos de Heritier. (1976) Blömlof et al. (1996) que não relataram a presença

de reabsorção em raízes condicionadas.

Quanto à presença de infiltrado inflamatório, os grupos I, II, e III,

apresentaram células inflamatórias isoladas, com nucléolos de cromatina

condensada, sugestivas de linfócito, que foram ocasionalmente encontradas,

independentemente do período de reparo. Entretanto no grupo IV a presença de um

infiltrado inflamatório na periferia dos vasos sangüíneos foi observada em todos os

períodos de reparo. Esses resultados sugerem que o condicionamento radicular

(diminuiu a patogenicidade e aumentou a biocompatibilidade) tenha removido smear

layer e diminuído a irritação ao tecido conjuntivo. De acordo, portanto, com os

estudos de Fine et al. (1980) que relatou que condicionadores químicos removem

endotoxinas e com o estudo de Oliveira, Passanesi & Taga (1999) que obtiveram

resultado semelhante quando avaliaram a resposta do tecido conjuntivo de ratos, às

superfícies radiculares de fragmentos de dentes humanos com doença periodontal,

após tratamento com RAR associada à desmineralização e fator de crescimento

derivado de plaquetas.

Em relação, ainda, ao grupo IV observou-se a ausência de células e fibras

justapostas às superfícies radiculares, achados que concordam com os estudos de

Hanes et al. (1991), confirmando a presença de irritantes no smear layer .

Apesar de estudos (Bömlof & Lindskog, 1995a; Bömlof, Bömlof & Lindskog,

1996; Bömlof, 1996 BASTOS NETO, 2002 ), in vitro, terem demonstrado a

capacidade do EDTA em remover a smear layer e expor fibras colágenas,

divergências ainda existem quanto à eficácia clínica desse procedimento. Blömlof et

al. (1996) observaram menor recessão gengival, menor extensão de bolsa

periodontal e maior extensão de nova inserção histológica com o uso de EDTA a

24%, comparado ao grupo controle e ao grupo tratado com ácido cítrico pH 1, após

análise histométrica dos dentes extraídos. Por outro lado, Mayfield et al. (1998) não

encontraram vantagens no emprego coadjuvante de gel de EDTA a 24% quando do

tratamento cirúrgico de defeitos intra-ósseos, no que diz respeito à redução da

profundidade de sondagem, ganho de inserção e redução da profundidade dos

defeitos ósseos após 6 meses de acompanhamento. Em estudos recentes

realizados por Blömlof et al. (2000a, b) tanto no tratamento periodontal cirúrgico

quanto não cirúrgico não se conseguiu demonstrar superioridade do tratamento

químico com gel de EDTA 24%, em relação ao grupo controle, na redução da

profundidade de sondagem e ganho de inserção clínica.

Diante do que foi discutido, novos estudos utilizando EDTA, com diferentes

potenciais hidrogeniônicos, formas de aplicação e tempos experimentais, são

necessários, para que se alcance uma efetiva remoção do smear layer radicular,

exposição de matriz orgânica e resposta reparativa tecidual mais favorável e

previsível.

7 CONCLUSÃO

- O condicionamento realizado pelas três diferentes marcas comerciais de

gel de EDTA 24% sugeriu uma diminuição na toxicidade da superfície radicular, pois

independentemente dos períodos de reparo, uma presença ocasional de células

inflamatórias foi observada nos grupos testes, diferindo do grupo controle, que

apresentou infiltrado inflamatório mais intenso.

- A utilização do EDTA 24% com pH alcalino (8,7 e 9) demonstrou maior

efetividade na biomodificação da superfície radicular do que em pH neutro, pois

foram observadas, nos G I e G III, áreas com células e fibras em intimo contato com

as superfícies radiculares, sugestivas de inserção fibrosa, demonstrando um

resultado superior ao G II, onde a presença de fibras e células justapostas ao

cemento, raramente foi encontrada.

- A utilização do EDTA gel, 24%, não resultou em reabsorção radicular.

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS*

ADRIAENS, P.A. et al. Ultrastructural observations on bacterial invasion in cementum and radicular dentin of periodontally diseased human teeth. J Periodontol, Chicago, v. 59, n. 8 p. 493-503, Aug. 1998. ALBAIR, W.B., COBB, C.M. & KILLOY, W.J. Connective tissue attachment to periodontally diseased roots after citric acid desnineralization. J Periodontol, Chicago, v. 53, n. 8, p. 515-526, Aug. 1982. ALEO, J.J. et al. The presence and biologic activity of cementum-bound endotoxin. J Periodontol, Chicago, v. 45, n.9, p. 672-675, Sep. 1974. ALEO, J.J., DERENZIS, F.A. & FARBER, P.A. A in vitro attachment of human gingival fibroblasts to root surfaces. J Periodontol, Chicago, v. 46, n. 11, p. 639-645, Nov. 1975. ALGER, F.A. et al. The histologic evaluation of new attachment in periodontally diseased human roots treated with tetracycline hydrochloride and fibronectin. J Periodontol, Chicago, v.61, n.7, p.44, July 1990. ALLMON, H.B. Man is not a giant rat. In: KLAUSEN, B. Microbiological and imunological aspects of experimental periodontal disease in rats: a review article. J Periodontol, Chicago, v. 62, n. 1, p. 59-73, Jan. 1991. AMERICAN ACADEMY OF PERIODONTOLOGY REPORTS. The pathogenesis of periodontal diseases. J Periodontol, Chicago, v. 70, n. 4, p. 457-470, Apr. 1999. BABAY, N. Attachment of human gingival fibroblasts to periodontally involved root surface following scaling and/or etching procedures: A scanning electron microscopy study. Braz Dent J, v. 12, n. 1, p. 17-21.Oct. 2001. BAL, B., EREN, K. & BALOS, K. Effects of various root surface treatments on initial clot formation: a scanning electron microscope study. J Níhon Univ Sch Dent, Tokyo, v. 32, n.4, p. 281-293, DEC. 1990. BASTOS NETO, F. V. R. Análise em microscopia Eletrônica de Varredura de Superfícies Radiculares Antes e Após Raspagem e condicionamento com Ácido Cítrico e EDTA. 2002. 99f. Dissertação (Mestrado) - Faculdade de Odontologia de Bauru da Universidade de São Paulo, Bauru. * De acordo com o padrão PUCMinas de Normalização de Janeiro de 2004.

BERGENHOLTZ, A. & BABAY. N. Scanning electron microscopy of the root surface texture of extracted periodontally diseased teeth following various etching and chelating regimens. Int J Periodontics Rest Dent, Lombard, v. 18, n. 2, p. 171-179, Feb. 1998. BIAGINI, G. et al. in vitro growth of periodontal fibroblasts on treated cementum. Quintessece Int. Ilinois, v. 23, n. 5, p.335-340, May 1992. BLÖMLOF, L. et al. New atachment in monkeys with experimental periodontitis with and without removal of the cementum. J Clin Periodonlol, Copenhagen, v. 14, n.3, p.136-143, Mar. 1987. BLÖMLOF, J. & LINDSKOG, S. Root surface texture and early cell and tissue colonization after different etching modalities. Eur J Oral Sci, Cambridge, v. 103, n.1, p.17-24, Jan. 1995a. BLÖMLOF, J. & LINDSKOG, S. Periodontal tissue-vitality after different etching modalities. J Clin Periodontol, Copenhagem, v. 22, n. 6, p. 464-468, Jun. 1995b. BLÖMLOF, J. et al. Long-time etching at low pH jeopardizes periodontal healing. J Clin Periodonlol, Copenhagen, v. 22, n.6, p. 459-463, JUN. 1995. BLÖMLOF. J. Root cementum appearance in healthy monkeys and periodontitis-prone patients after different etching modalities. J Clin Periodonlol, Copenhagen, v.23, n.1, p. 12-18, Jan. 1996. BLÖMLOF, J.P.S., BLÖMLOF, L.B. & LINDSKOG, S.F. Smear removal and collagen exposure after non-surgical root planning followed by etching with an EDTA gel preparation. J Periodontol, Chicago, v. 67, n. 9, p. 84l-845, Sept. 1996. BLÖMLOF, J. et al. Root surface etching at neutral pH promotes periodontal healing. J Clin Periodonlol, Copenhagen, v. 23, n.1 p.50-55, Jan. 1996. BLÖMLOF, J., BLÖMLOF, L. & LINSKOG, S. Ultrasonic subgingival root planing and EDTA etching in a one-step procedure. Swed Dent J, Stockholm, v.21, p213-219, 1997a. BLOMLÖF, J.P.S., BLOMLÖF, L.B. & LINDSKOG, S.F. Effect of different concentrations of EDTA on smear removal and collagen exposure in periodontally-affected root surfaces. J Clin Periodont, Copenhagen, v. 24, n. 8, p. 534-537, Aug. 1997b. BLOMLÖF, J.P.S., BLOMLÖF, L.B. & LINDSKOG, S.F. Smear layer formed by different root planning modalities and it´s removal by ethylenediaminetetracetic acid gel preparation. Int J Perio Rest Dent, v. 17, n. 3, p. 243-249, Jun. 1997c. BLÖMLOF, J. et al. A clinical study of root surface conditioning with an EDTA gel. I. Non surgical periodontal treatment. Int J Periodontics Restorative Dent, Lombard, v. 20, n. 6, p.561-565, Dec. 2000a.

BLÖMLOF, L. et al. A clinical study of root surface conditioning with an EDTA gel. II. Surgical periodontal treatment. Int J Periodontics Restorative Dent, Lonbard, v. 20, n. 6, p. 567-573, Dec. 2000b. CAFFESSE, R. G., SWEENEY, P.L. & SMITH, B.A. Scaling and root planning with and without periodontal flap surgery. J Clin Periodontol., v. 13, n.3, p. 205-210, Mar. 1986. CAFFESSE R.G. et al. Cell proliferation after flap surgery. root conditioning and fibronectin application. J Periodontol, Chicago, v. 58, n. 10, p. 661-666, Oct. 1987. CAFFESSE, R.G. et al. Clinical evaluation of the use of citric acid and autologous fibronectin in periodontal surgery. J Periodontol, Chicago, v. 59, n. 9, p. 565-569, Sep. 1988. CHAVES, E. et al. The effect of citric acid application on periodontolally involved root surfaces. An in vivo light microscopic study. Int J Periodontics Restorative Rent, Lonbard, v. 12, n.3, p. 219-229, Mar. 1992. CHAVES, E. et al. The effect of citric acid application on periodontally envolved root surfaces.II. An in vivo scanning electron microscopic study. Int J Periodontics Restorative Dent, Lonbard, v. 13, n.2, p. 189-196, Feb. 1993. CLAFFEY, N. et al. Topical application of tetracycline in regenerative periodontal surgery in beagles. Acta Odonlol Scand, Oslo, v. 45, n.3, p. 141-146, Jun 1987. COLE, R.T. et al. Connective tissue regeneration to periodontally diseased teeth. A histological study. J Periodontol Res, Copenhagen, v. 15, n.1, p. 1-9, Jan. 1980. COMMON, J. & MCFALL JR, T. The effects of citric acid on attachment of laterally positioned flaps. J Periodontol, Chicago, v. 54, n. 1, p. 9-18, Jan. 1983. DALY, C.G. Antibacterial effect of citric acid treatment of periodontotally diseased root surfaces in vitro. J Clin Periodont, Copenhagen, v. 9, n.5, p. 386-392, Set. 1982. EICK, J.D. et al. Scanneing Electron Microscopy of Cut Tooth Surfaces and Identification of Debris by Use of the Electron Microprobe. J Dent Res., v. 49, n. 6, p.1359-1368, Nov-Dec. 1970. FINE, D.H. et al. Preliminary characterization of material eluted from the roots of periodontally disease teeth. J Periodontol Res, Copenhagem v. 15, n.1, p. 10-19, Jan. 1980. GENCO, R. J. Host Responses in Periodontal Diseases: Current Concepts. J Periodontol, Chicago, v. 63, n.5, p. 338-355, Apr. 1992. GOODSON, J.M. et al. Patterns of progression and regression of advanced destructive periodontal disease. J Clin Periodontol, Copenhagen, v. 9, n.6, p. 472-481, Nov. 1982.

GOTTLOW, J. et al. New attachment formation as the result of controlled tissue regeneration. J Clin Periodontol, Copenhagen, v. 11, n. 8, p. 494-503, Aug. 1994. HANES, P.J., POLSON, A.M. & FREDERICK, G.T. Initial wound healing attachments to demineralized dentin. J Periodontol. Chicago, v. 59, n. 3, p. 176-183, Mar. 1988. HANES P.J., O’BRTEN, N.J. & GARNICK, J.J. A morphological comparison of radicular dentin following root planning and treatment with citric acid or tetracycline HCL. J Clin Periodontol, Copenhagen, v. 18, n.9, p. 660-668, Out. 1991. HAM, R. & MCEEHAM, W. Media and growth requirements. In: BLÖMLOF, J. & LINDSKOG, S. Periodontal tissue-vitality after different etching modalities. J Clin Periodontol, Copenhagem, v. 22, n. 6, p. 464-468, Jun. 1995b. HERITIER, M. Ultrastructural study of new connective tissue attachment following phosphoric acid application on human root dentin. J Periodontol, Chicago, v. 54, n.9, p. 515-521, Sep. 1983. ISIK, A.G. et al. A comparative scanning electron microscopic study on flue characteristics of demineralized dentin root surface using different tetracycline HCl concentrations and application times. J Periodontol, Chicago, v. 71, n. 2, p. 2l9-225, Feb. 2000. JONES, W.A. & O’LEARY, T.J. The effectiveness of in vitro root planning in removing bacterial endotoxin from the roots of periodontally involved teeth. J Periodontol, Chicago, v. 49, n. 7, p. 337-342, Jul. 1978. KASHANI, H.G., MAGNER, A.W. & STAHL, S.S. The effect of root planning and citric acid applications on flap healing in humans. A histologic evaluation. J Periodontol, Chicago, v. 55, n. 12, p. 679-683, Dec. 1984. KERSTEN, B.G. et al. Healing of the intrabony periodontal lesion following root conditioning with citric acid and wound closure including an expanded PTFE membrane. J Periodontol, Chicago, v. 63, n. 11, p. 876-882, Nov. 1992. KLAUSEN, B. Microbiological and imunological aspects of experimental periodontal disease in rats: a review article. J Periodontol, Chicago, v. 62, n. 1, p. 59-73, Jan. 1991. KOLTHOFF, I.M. & ELVING, P.J. Treatise On Analitical Chemistry. v. 1. New York: Interscience Publishers, INC. 1959. 809 p. LABAHAN, R. et al. Root dentin morphology after different mode of citric acid and tetracycline hydrochloride conditioning. J Periodontol, Chicago, v. 63, n. 4, p 303-309, Apr. 1992.

LAFFERTY. I.A., GIIER, M.E. & GRAY, J.L. Comparative SEM study on the effect of acid etching with tetracycline HCl or citric acid on instrumented periodontally involved human root surfaces. J Periodontol, Chicago, v. 64, n.8, p. 689-693, Aug. 1993. LANG, N.P. & LÖE, H. Clinical management of periodontal disease. Periodontology 2000, v. 2, p. 128-139, Fev. 1993. LARJAVA, H. et al. Effect of citric acid on the migration of epithelium on root surfaces in vitro. J Periodontol, Chicago, v. 59, n. 2, p. 95-99, Feb. 1988. LASHO, D.J., O’LEARY, T.J. & KAFRAWY, A.H. A scanning electron microscope study of the effects of various agents on instrumented periodontally involved root surfaces. J Periodontol, Chicago, v. 54, n. 4, p. 2l0-220, Apr. 1983. MAGNUSSON, I. et al. Recoloniation of subgingival microbiota following scaling in deep pockets. J Cin Periodontol., v. 11, n. 3, p. 193-207, Mar. 1984. MADISON, J.G. & HOKETT, S.D. The effects of different tetracyclines on the dentin root surface of instrumented, periodontally involved human teeth: a comparative scanning electron microscope study. J Periodontol, Chicago, v. 68, n. 8, p. 739-745, Aug. 1997. MAYFIELD, L. et al. Root conditioning using EDTA gel as adjunct to surgical therapy for the treatment of intraosseous periodontal defects. J Clin Periodontol, Copenhagen, v. 25, n. 9, p. 707-714, Oct. 1998. MCARTEER, J.A. & DOUGLAS, W.J. Monolayer culture techniques. In: BLÖMLOF, J. & LINDSKOG, S. Periodontal tissue-vitality after different etching modalities. J Clin Periodontol, Copenhagem, v. 22, n. 6, p. 464-468, Jun. 1995b. MENDES, G. et al. Condicionamento radicular com ácido cítrico. Rer. ABO Nac. v.6, n. 1. p. 24-28. Fev-Mar. 1998. MOORE, J.A., ASHLEY, F.P. & WATERMAN, C.A. The effect on healing of the application of citric acid during replaced flap surgery. J Clin Periodontol, Copenhagen, v. 14, n.3, p. 130-135, Mar. 1987. NAGY, R. J. et al. The effect of a single course of a calculus-softening scaling and root planning gel. A scanning electron microscopic study. J Periodontol, Chicago, v.69, n. 7, p. 806-811, Jul. 1998. NALBADIAN, J. & COTE, N. Direct histological comparison of periodontal wound healing in the beagle dog with and without citric acid conditioning. J Periodontal Res, Copenhagen, v. 17,n.6, p. 552-562, Nov. 1982. NISHIMURA, K. et al. The chemoattractive potency of periodontal ligament, cementum and dentin for human gingival fibroblasts. J Periodont Res, Copenhagen, v. 24,n.2, p. 146-148, Mar. 1989.

NYMAN, S. et al. New attachment following surgical treatment of human periodontal disease. J Clin Periodontol., v. 4, n. 9, p. 290-296, Jul. 1982. O’LEAR.Y. T.J. The impact of research on scaling and root planing. J Periodontol, Chicago, v. 57, n. 2, p. 69-75, Feb. 1986. OLIVEIRA, M. D. B. et al. Rat connective tissue response to implant of human dental root treated with citric acid and human recombinant platelet derived growth factor- BB. Rev. FOB, v. 7, n. 1/2, p. 73-78, Jan/Jun. 1999. OFFENBACHER, S., COLLINS, J. G. & ARNOLD, R.R. New clinical diagnostic strategies based on the pathogenesis of disease. J Periodontal Res, Copenhagen, v. 28, n.6 , p. 523-535, Nov. 1993. PATTISON, G. L. & PATTISON, A. M. Instrumentação em periodontia – orientação clínica. São Paulo: Panamericana, 1988. 345p. PILATTI, G. L. Estudo “in vitro” da capacidade de remoção da smear layer da superfície radicular com o uso do gel de EDTA. Influência da concentração, tempo e forma de aplicação. 2001. l39f. Tese (Doutorado em Periodontia) – Faculdade de Odontologia de Araraquara, Universidade Estadual Paulista, Araraquara. PITARU, S. & MELCHER, A. H. Organization of an oriented fiber systen in vitro by human gingival fibroblasts attached to dental tissue: Relationship between cells and mineralized and demineralized tissue. J Periodontal Res, Copenhagen, v. 22, n. 1, p. 6-13, Jan. 1987. POLSON, A.M. & CATON, J. Factors influencing periodontal repair and regeneration. J Periodontol, Chicago. v. 53, n. 10, p. 617-625, Out. 1982. POLSON, A.M. et al. The production of a root surface smear layer by instrumentation and its removal by citric acid. J Periodontol, Chicago, v. 55, n. 8, p. 443-446, Aug. 1984. POLSON, A.M. & PROYE, M.P. Effect of root surface alterations on periodontal healing. II. Citric acid treatment of the denuded root. J Clin Periodontol, Copenhagen, v. 9, n.3, p. 162-169, Mar. 1982. POLSON, A.M. & PROYE, M.P. Fibrin linkage: a precursor for new attachment. J Periodontol, Chicago, v.54, n.3, p.141-147, Mar. 1983. REGISTER, A.A. Bone and cementum induction by dentin, dernineralized in situ. J Periodontol, Chicago, v. 44, n. 1, p. 49-54, Jan. 1973. REGISTER, A.A. & BURDICK, F.A. Accelerated reattachment with cement to dentin, demineralized in situ. I. Optimum range. J Periodontol, Chicago, v. 46, n. 11, p. 646-655, Nov. 1975.

REGISTER, A.A. & BURDICK, F.A. Accelerated reattachment with cement to dentin, demineralized in situ. II.Defect Repair. J Periodontol, Chicago, v. 47, n. 9, p. 497-505, Sep. 1975. REGISTER,A.A. et al . Human Bone induction by dentin matriz. In: REGISTER, A.A. & BURDICK, F.A. Accelerated reattachment with cement to dentin, demineralized in situ. I. Optimum range. J Periodontol, Chicago, v. 46, n. 11, p. 646-655, Nov. 1975. SAMPAIO, J.E.C. Eficiência de detergentes e EDTA na remoção da “smear layer” de superfícies radiculares submetidas a raspagem e aplainamento. Analise por meio da microscopia eletrônica de varredura. 1999. 73f. Tese (Livre-Docência) - Faculdade de Odontologia de Araraquara, UNESP, Araraquara. SELVIG,K.A. & HALS, E. Periodontally disease cementum studied by correlated microradiography, electron probe analysis and electron microscopy. J Periodontol, Chicago, v. 12, n. 5, p. 419-429, Sep. 1977. SOCRANSKY, S.S. et al. Microbial Complexes in subgingival plaque. J Clin Periodontol, Copenhagem, v. 25, n. 2, p. 134-144, Fev. 1998. STAHL, S.S. & FROUM, S.J. Human clinical and histologic repalr responses following the use of citric acid in periodontal therapy. J Periodontol, Chicago, v. 48, n. 5, p. 261-266, May 1977. STERRETT, J.D. & MEJRPHY, H.J. Citric acid burnishing of dentinal root surfaces. A scanning electron microscopy report. J Clin Periodontol, Copenhagem, v. 16, n.2 p.98- 104, Fev. 1989. STERRETT, J.D., DHILLON, M. & MURPHY, H.J. Citric acid dernineralization of cementum and dentin: the effect of application pressure. J Clin Periodontol, Copenhagem, v. 22, n.6, p. 434-441, Jun. 1995. STERRETT, J.D. et al. Tetracycline demineralization of dentin: the effects of concentration and application time. J Clin Periodontol, Copenhagem, v. 24, n.7, p. 457-463, Jul. 1997. STEWART, H.T. Partial removal of cementum and decalcification of tooth in treatment of pyorrhea alveolares. In: BLÖMLOF, J. et al. Root surface etching at neutral pH promotes periodontal healing. J Clin Periodonlol, Copenhagen, v. 23, n.1 p.50-55, Jan. 1996. SUSIN, C. & RÖSING, C.K. O rato como modelo para estudos das repercussões do estresse nas doenças. Revista de Periodontia, São Paulo, v. 13, n. 6, p. 05-10, Nov. 2002. TROMBELLI, V.P. et al. Effectt of tetracycline HCl on periodontally-affected human root surfaces. . J Periodontol, v. 66, n. 8, p. 685-691, Aug . 1995.

URIST, M.R. Surface –Decalcifified Allogeneic Bone Implants. In: REGISTER, A.A. & BURDICK, F.A. Accelerated reattachment with cement to dentin, demineralized in situ. I. Optimum range. J Periodontol, Chicago, v. 46, n. 11, p. 646-655, Nov. 1975. WIKESJO, U.M.E. et al. A biochemical approach to periodontal regeneration: Tetracicycline treatment condictions dentin surfaces. J Periodontal Res, Copenhagen, v. 21, n.4, p. 322-329, Jul 1986. WIKESJO, U.M.E. et al. Repair of periodontal furcation defects in beagle dogs following reconstructive surgery including root surface demineralization with tetracycline hydrochloride and topical fibronectin application. J Clin Periodonlol, Copenhagem, v. 15, n.1, p. 73-80, Jan. 1988. WIKESJÖ, U.M.E., NILVÉUS, R.E. & SELVIG, K.A. Significance of early healing events on periodontal repair: a review. J Periodontol, v. 63, n. 3, p. 158-165, Mar. 1992. YOUNGER, W.J. Some of the latest phases in implantation and other operations. In: BLÖMLOF, J. et al. Root surface etching at neutral pH promotes periodontal healing. J Clin Periodonlol, Copenhagen, v. 23, n.1 p.50-55, Jan. 1996. YUKNA, R.A. et al. Clinical evaluation of the speed and effectiveness of subgingival cauculus removal on single-rooted teeth with diamond- coated ultrasonic tips. J Periodontol, v. 68, n. 5, p. 436-442, may 1997. ZAMAN, K.U. et al. A study of attached and oriented human periodontal ligament ceils to periodontally diseased cementum and dentin after demineralizing with neutral and low pH etching solution. J Periodontol, Chicago, v. 71, n. 7, p. 1094-1099, Jul. 2000.

ANEXO 1

ANEXO 2

ANEXO 3

ANEXO 4

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