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Eduardo Campos dos Santos [email protected] Bioinformática e Investigação Criminal aula 1

Bioinformática e Investigação Criminal - edusantos.eti.bredusantos.eti.br/mcampos/bioinfo_forense_edusantos_aula_01.pdf · [email protected] Bioinformática e Investigação

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Eduardo Campos dos [email protected]

Bioinformática e Investigação Criminal

aula 1

O curso

● Plano de Ensino● Fundamentos de biologia molecular e genética● Principais Técnicas de DNA profiling● Cálculos estatísticos e confiabilidade

● Critérios de Avaliação● Estudo dirigido: questionário e debate (50%)● Leitura e resenha de artigos (50%)

Conteúdo

● Material biológico como evidências● Material coletado → Célula → Núcleo e

Mitocôndrias → DNA → Cromossomos → polimorfismos (VNTR, STR, SNP)

● RFLP, PCR, eletroforese, sequenciamento● Loci definidos no: CODIS, SWGDAM, ENFSI● Cálculos estatísticos e confiabilidade● Perspectivas

Coleta de evidências

● sangue● saliva● cabelo (com/sem bulbo)● unha● pele● sêmen

● insetos● bactérias

Conteúdo de DNA em amostrasTipo de amostra Quantidade de DNA

Sangue 30.000 ng/mLmancha de 1 cm2 200 ngmancha de 1 mm2 2 ng

Sêmen 250.000 ng/mLlíquido vaginal pós-coito 0 - 3.000 ng

Cabelobulbofio

1 - 750 ng/hair1 - 12 ng/hair

SalivaUrina

5.000 ng/mL

1 - 20 ng/mL

Onde está o DNA?

O DNA nuclear

O DNA mitocondrial

Nucleotídeos

O que é o DNA?

Duplicação do DNA

Código genético

Cromossomos humanos

Alelos, homozigose e heterozigose

Polimorfismos e suas consequências

● Tipos de Polimorfismo● de sequência● de comprimento

● Suas consequências● RFLP – Restriction Fragment Length Polymorphism● VNTR – Variable Number Tandem Repeat● STR – Short Tandem Repeat● SNP – Single Number Polymorphism

Uma mutação de único nucleotídio é considerada um SNP se ela ocorrer em, no mínimo, 1% da população.

Single Nucleotide Polymorphism(SNP)

RFLPmutação em um sítio de restrição

RFLP – Restriction Fragment Length Polymorfism

VNTRs

STRs

Comparação entre VNTRs e STRs

● VNTRssegmentos de DNA contendo cerca de 10 a 70 pares de base repetidos, mais frequentes próximos aos telômerose.g. D1S80 VNTR: unidade de repetição de 16pb, alelos conhecidos com 14 a 40 repetições

● STRsunidades de repetição com cerca de 1 a 5 pares de base, mais distribuída por todo o cromossomo mais frequentes que os VNTRs e com maior variaçãoe.g. D18S51 STR: unidade de repetição AGAA, alelos conhecidos com 8 a 27 repetições

Regiões hipervariáveis de interesse forense

Segunda ParteTécnicas de DNA Typing

RFLPRestriction

Fragment Length Polymorfism

Simulação – material interativo

/Users/eduardo/Documents/vbox_linux/forensic_DNA/apresentacao_pics/material_terceiros/tdc02_int_creatednafp2/tdc02_int_creatednafp2.html

RFLP

Visualize em um navegador o arquivo:tdc02_int_creatednafp2.html

Outro exemplo

RFLP versus PCR

Comparação: RFLP, VNTR, STR

RFLP

VNTR

STR

16-70 bp

2-4 bp

Restriction Site PCR Primer

Para a próxima aula

● Breve revisão● Discussão sobre o Estudo Dirigido 01● Continuação sobre PCR, VNTR, STR● Cálculos de probabilidades● Análise do mtDNA● Sequenciamento pelo método de Sanger● Seleção e distribuição de artigos para resenha

e apresentação