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Biotecnologia - Histórico e Tendências Rafael Almudi Villen Centro Universitário do Instituto Mauá de Tecnologia, Escola de Engenharia Mauá, Praça Maua 1, 09580-900, São Caetano do Sul, SP. Fax: (11) 4239 3131 INTRODUÇÃO Várias foram as sugestões apresentadas visando dar uma definição para Biotecnologia. Uma delas, proposta pelo prof. Antônio Paes de Carvalho, é suficiente para alcançar o objetivo de tomar conhecimento do que hoje se entende por Biotecnologia: “o conjunto de conhecimentos técnicos e métodos, de base científica ou prática, que permite a utilização de seres vivos como parte integrante e ativa do processo de produção industrial de bens e serviços” As várias tentativas de definição existentes mostram nitidamente que se trata, portanto, de um campo de trabalho multidisciplinar, tendo a Biotecnologia por base de ramos de conhecimento que poderiam ser classificados de Fundamentais, ao lado de outros que poderiam ser agrupados sob a designação genérica de Engenharias. Se é verdade, por um lado, que a Biotecnologia, somente passou a ser considerada altamente prioritária há relativamente pouco tempo, também é verdade, por outro lado, que processos biotecnológicos vêm sendo utilizados desde a mais remota antiguidade. A utilização em maior escala da chamada Biotecnologia “moderna” teve como ponto de partida a síntese química do DNA (ácido desoxiribonucleico) realizada por Kornberg em 1967, que denominou de “revolução genética” às novas técnicas de manipulação genética: DNA recombinante e hibridoma. HISTÓRICO

Biotecnologia Historico e Tendências

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Biotecnologia - Histrico e TendnciasRafael Almudi VillenCentro Universitrio do Instituto Mau de Tecnologia,Escola de Engenharia Mau, Praa Maua 1,09580-900, So Caetano do Sul, SP.Fax: (11) 4239 3131INTRODUOVrias foram as sugestes apresentadas visando dar uma definio para Biotecnologia. Uma delas, proposta pelo prof. Antnio Paes de Carvalho, suficiente para alcanar o objetivo de tomar conhecimento do que hoje se entende por Biotecnologia: o conjunto de conhecimentos tcnicos e mtodos, de base cientfica ou prtica, que permite a utilizao de seres vivos como parte integrante e ativa do processo de produo industrial de bens e serviosAs vrias tentativas de definio existentes mostram nitidamente que se trata, portanto, de um campo de trabalho multidisciplinar, tendo a Biotecnologia por base de ramos de conhecimento que poderiam ser classificados de Fundamentais, ao lado de outros que poderiam ser agrupados sob a designao genrica de Engenharias.Se verdade, por um lado, que a Biotecnologia, somente passou a ser considerada altamente prioritria h relativamente pouco tempo, tambm verdade, por outro lado, que processos biotecnolgicos vm sendo utilizados desde a mais remota antiguidade.A utilizao em maior escala da chamada Biotecnologia moderna teve como ponto de partida a sntese qumica do DNA (cido desoxiribonucleico) realizada por Kornberg em 1967, que denominou de revoluo gentica s novas tcnicas de manipulao gentica: DNA recombinante e hibridoma.HISTRICOO uso da Biotecnologia teve o seu incio com os processos fermentativos, cuja utilizao transcende, de muito, o incio da era Crist, confundindo-se com a prpria histria da humanidade. A produo de bebidas alcolicas pela fermentao de gros de cereias j era conhecida pelos sumrios e babilnios antes do ano 6.000 a.C. Mais tarde, por volta do ano 2.000 a. C., os egpcios, que j utilizavam o fermento para fabricar cerveja, passaram emprega-lo tambm na fabricao de po.Outras aplicaes como a produo de vinagre, iogurte e queijos so, de h muito, utilizadas pelo ser humano.Entretanto, no eram conhecidos os agentes causadores das fermentaes que ficaram ocultos por 6 milnios. Somente no sculo dezessete, o pesquisador Antom Van Leeuwenhock, atravs da visualizao em microscpio, descreveu a existncia de seres to minsculos que eram invisveis a olho nu.Foi somente 200 anos depois que Louis Pasteur , em 1876, provou que a causa das fermentaes era a ao desses seres minsculos, os microrganismos, caindo por terra a teoria, at ento vigente, que a fermentao era um processo puramente qumico.Foi ainda Pasteur que provou que cada tipo de fermentao era realizado por um microrganismo especfico e que estes podiam viver e se reproduzir na ausncia de ar.Posteriormente, em 1897, Eduard Buchner, demonstrou ser possvel a converso de acar em alcool, utilizando clulas de levedura maceradas, ou seja, na ausncia de organismos vivos.Paradoxalmente que possa parecer, foram as grandes guerras mundiais que motivaram a produo em escala industrial de produtos advindos de processos fermentativos.A partir da primeira guerra, a Alemanha, que necessitava de grandes quantidades de glicerol para a fabricao de explosivos, desenvolveu atravs de Neuberg, um processo microbiolgico de obteno desse alcool, tendo chegado a produzir 1.000 toneladas do produto por ms. Por outro lado, a Inglaterra produziu em grande quantidade a acetona para o fabrico de munies, tendo essa fermentao contribudo para o desenvolvimento dos fermentadores industriais e tcnicas de controle de infeces.Foi, todavia, a produo de antibiticos o grande marco de referncia na fermentao industrial.. A partir de 1928, com a descoberta da penicilina por Alexandr Fleming, muitos tipos de antibiticos foram desenvolvidos no mundo.Na dcada de 40, durante a segunda guerra mundial, os antibiticos passaram a integrar os processos industriais fermentativos, principalmente nos Estados Unidos, basendo-se inicialmente na sntese da penicilina e, posteriormente, da estreptomicina.Foi, todavia, a partir da dcada de 50 que a Biotecnologia, com a descoberta da sntese qumica do DNA, e com as tcnicas de manipulao gentica:DNA recombinante, fuso celular ou hibridoma, passou de fato a existir.A tcnica do DNA recombinante envolve a criao sinttica de novos organismos vivos, com caractersticas no encontradas na natureza, formadas pela hibridizao em nvel molecular do DNA. Essa tcnica permite, por exemplo, o enxerto de genes humanos que determinam a produo de insulina em um microrganismo. Isso leva a produzir a industrialmente insulina humana, substituindo, com grande vantagens, a insulina bovina ou suna empregadas no tratamentos de diabticos.A tcnica de hibridoma possibilitou a manipulao gentica a nvel das clulas vivas onde duas ou mais clulas so fundidas para formar novos microrganismos. Na prtica, clulas animais que produzem anticorpos so incorporadas a outras malignas ou perniciosas resultando em uma nova que se torna eficiente produtora de anticorpos.A tabela 1 mostra os principais marcos histricos no avano cientfico e tecnolgico da Biotecnologia.PerodoAcontecimento

6.000a. C.bebidas alcolicas (cerveja e vinho) so produzidas por sumrios e babilnios

2.000 a.C.panificao e bebidas fermentadas so utilizadas por egpcios e gregos

1875 d. C.Pasteur mostra que a fermentao causada por microrganismos

1880-1910surgimento da fermentao industrial (cido lctico, etanol, vinagre)

1910-1940sntese de glicerol, acetona e cido ctrico

1940-1950antibiticos so produzidos em larga escala por processos fermentativos

1953estabelecida a estrutura do DNA

1073incio da engenharia gentica

1982insulina humana produzida

Tabela 1: Marcos no Desenvolvimento da BiotecnologiaAtualmente crescente o ritmo de desenvolvimento do setor, mantendo, inclusive, uma acentuada relao de interao com diversos outros setores da cincia e tecnologia tais como: biologia molecular, fisiologia, microbiologia, engenharia qumica, engenharia ambiental, etc. como mostrado na figura 1.

Figura 1 - Multidisciplinaridade da BiotecnologiaUSOSA Biotecnologia encontra muitas e diferentes aplicaes importantes em vrios segmentos de atividade:AgriculturaMineraoPecuriaSadeIndstriaSuas aplicaes na indstria constituem o objetivo principal da chamada Biotecnologia Industrial.AgriculturaCultura de TecidosInformaes do cincia de que a seleo e reproduo de plantas superiores por mtodos convencionais tm sido utilizados desde os tempos antigos considerando a necessidade de produzir quantidades crescentes de alimentos e matrias primas para a indstria.Uma das reas mais promissoras na Biotecnologia a da cultura de tecidos. uma rea j antiga, datando dos anos 20, mas que s alcanou progressos razoveis a partir do fim da dcada de 60.Nos tecidos e clulas cultivadas in vitro pode-se introduzir alteraes por ao de agentes fsicos ou qumicos com maior eficincia do que em plantas inteiras. Assim, as taxas de alteraes podem ser grandemente aumentadas e, a partir dessas culturas, pode-se conseguir a regenerao de plantas com caractersticas diferentes. Existe tambm a possibilidade de fuso de clulas com caractersticas diferentes, possibilitando ou novos tipos de combinao, ou combinao de material gentico de clulas provenientes de espcies muitas vezes diferentes. Uma das vantagens que atravs dessa tcnica pode-se gerar um grande nmero de material clonado em curto espao de tempo e em ambientes reduzidos, sendo ainda indicada para a eliminao de doenas.Fixao de NitrognioO nitrognio, sendo um dos nutrientes fundamentais para as plantas, participa da composio das molculas de protena e clorofila, alm de desempenhar uma funo chave no processo de diviso celular. Assim, uma adequada nutrio em nitrognio fundamental para o crescimento vigoroso das plantas.Uma das possibilidades de fornecimento de nitrognio s plantas atravs da fixao biolgica, por microrganismos, utilizando o nitrognio existente no ar.Esses fixadores de nitrognio, denominados inoculantes, podem ser usados em leguminosas, gramneas, florestas, ambientes aquticos, etc.Controle Biolgico de PragasSo inegveis os danos que os insetos/pragas causam agricultura. A monocultura e o uso indiscriminado de produtos qumicos - defensivos agrcolas - eliminam os inimigos naturais que existem em culturas diversificadas, provocando o desequilbrio ecolgico nas reas de plantio, gerando condies propcias para o aparecimento de pragas alm de aumentar a sua resistncia.Os microrganismos patognicos aos insetos/pragas so adequados reduo especficas, enquanto que os predadores naturais e insetos benficos so preservados ou podem se desenvolver, estabelecendo o equilbrio natural. Portanto, os inseticidas microbiolgicos so considerados como uma forma alternativa de controle de pragas.Entre esses podem ser mencionados:- fungos - cigarrinha da folha da cana-de-acar;- vrus - granulose da broca da cana-de-acar; lagarta da laranja;- parasitas moscas: broca da cana-de-acar; vespas: broca da cana-de-acar;- bactrias: toxinas - lagarta do algodo e legumes moscas domsticas e bicheiras. moscas azuis e verdes, moscas das frutasSementesA melhoria da produtividade agrcola pode ser conseguida mediante o uso de sementes melhoradas geneticamente. Produtos como a batata , cacau, caf, cana-de-acar, arroz, cebola, laranja, milho, soja e tomate tiveram progresso na produo agrcola nos ltimos anos atravs do melhoramento gentico e seleo de cultivos de maior produtividade e resistncia a fatores ambientais.MineraoLixiviao Bacteriana de MinriosO estudo e aperfeioamento dos processos de concentrao de metais em geral tem contribudo significativamente para o aproveitamento de minrios.No campo da metalurgia extrativa, mais especificamente da hidrometalurgia, a lixiviao bacteriana de minrios vem merecendo crescente ateno como alternativa para os processos convencionais. Analogamente a lixiviao convencional, baseia-se na solubilidade dos metais em solues adequadas por meio de reaes qumicas e tambm de reaes bioqumicas.Cobre, urnio e zinco so exemplos de minerais que podem ser recuperados atravs de lixiviao bacteriana.PecuriaInseminao ArtificialA tcnica de inseminao artificial em bovinos teve um rpido crescimento a partir de meados da dcada de 70.O Estado de So Paulo de longe o estado brasileiro mais importante na produo e comercializao de smem bovino participando com mais de 60% em relao ao total do Pas.Como impactos decorrentes da inseminao artificial podem ser citados:- aumento da produtividade na produo leiteira- liberao de reas antes ocupadas com pastagens para outra atividades agrcolas.Transferncia de EmbriesO estudo de transferncia de embries novo no Pas, tendo sido iniciado no final da dcada de 70.O que se transfere no o embrio propriamente dito, mas o zigoto, que uma massa de clulas no diferenciadas. A transferncia de embries na seleo de mes de produtoras e reprodutores, na propagao de raas com caractersticas raras de produtividade, no aumento do percentual de caractersticas genticas e na diminuio do intervalo entre geraes.SadeAntibiticosOs antibiticos so empregados no combate a infeces causadas por microrganismos, notadamente bactrias, tanto no organismo humano como no animal e vegetal.. So usados tambm no controle de infeces em determinados processos fermentativos. Os antibiticos se constituem no grupo de maior importncia econmica, entre os produtos obtidos por fermentao.Atualmente existem mais de 5.000 tipos diferentes de antibiticos conhecidos, tendo sido a sua produo grandemente impactada pelo melhoramento gentico dos microrganismos utilizados.Dentre os produtos industrializados a maior contribuio comercial provm das penicilinas e cefalosporinas.Protenas reguladoras do metabolismoA produo dessas macromolculas por microrganismos, teve grande impulso com as pesquisas do DNA recombinante.Os principais produtos so: insulina humana, interferon, hormnio de crescimento humano, peptdios neuroativos,, etc. Desses frmacos, o que se encontra em estgio tecnolgico mais avanado a insulina, fundamental na regulao do teor de glicose no sangue, sendo usada na terapia de pacientes com diabetes.Transformao de esteridesA cortisona, descoberta no incio da dcada de 30, e suas propriedades no combate artrite reumtica, levou pesquisa do desenvolvimento de muitos compostos similares, hoje industrializados e comercializados.Inicialmente, a sntese da cortisona era feita por via qumica. Posteriormente, algumas das etapas principais da sntese passaram a ser realizadas por microrganismos o que proporcionou substancial barateamento no custo final.Outros produtos como hidrocortisona, testosterona, albumina humana, gama globulina, e fator anti - hemoflico esto sendo produzidos e comercializados.VacinasAs vacinas representam um importante instrumento no controle de doenas infecciosas. Muitas doenas podem ser evitadas pela imunidade induzida como a poliomielite, a varola e o sarampo.As vacinas podem ser de origem viral, bacteriana, protozoria e mesozoria.A Biotecnologia, atravs da tcnica do DNA recombinante, tem envidado esforos no desenvolvimento de novos agentes imunizantes para influenza tipos A e B, herpes, polio e hepatite A e B,Vacinas de origem bacteriana, para diversos tipos de meningite, tem sido produzidas por meio de fermentao, bem como o componente pertussis da vacina trplice.Processos FermentativosA fermentao como processo industrial apresenta hoje uma importncia crescente em setores chaves da economia.Assim , que mais de 300 empresas por todo o mundo produzem e comercializam produtos obtidos atravs de processos fermentativos, tendo sido a produo em escala industrial de bens, atravs de processos microbiolgicos, iniciada a partir da primeira guerra mundial.Atualmente, existem mais de uma centena de produtos viveis de serem obtidos atravs da via fermentativa.EnzimasAs enzimas so molculas de protenas que tm a funo de catalisar reaes, sendo produzidas por microrganismos.Foi somente na primeira metade do sculo XIX que surgiram as primeiras evidncias cientficas de que os microrganismos possuem substncias qumicas capazes de catalisarem reaes qumicas (Payen Persaz em 1883).A principal fonte de obteno de enzimas so os microrganismos, embora muitas enzimas de aplicao industrial tenham sua origem nos tecidos animal ou vegetal: renina, obtida do estmago de bezerros e papana, obtida do mamo, por exemplo.Os principais tipos de enzimas comercializados atualmente so as proteases, glucoamilase, a-amilase e glicose isomerase.A tabela 2 mostra os principais tipos de enzimas bem como o seus principais usos.ENZIMAAPLICAO

proteasequebra de molculas de protena

amilase e amiloglucosidasesacarificao do amido

catalaseeliminao da gua oxigenada no processamento de alimentos

glicose isomeraseproduo de isoglicose

invertaseinverso da sacarose

lactasedesdobramento da lactose

lipasedesdobramento de leos e gorduras

celulasedesdobramento da celulose

glicose oxidaseremoo da glicose

Tabela 2 - Principais Tipos de Enzimas e Suas Aplicaescidos OrgnicosDentre os cidos orgnicos que podem ser produzidos por processos fermentativos destacam-se: o cido actico, o cido ctrico e o cido lctico, os trs de largo uso industrial, principalmente na rea de alimentos, com a funo de acidulantes.AminocidosOs aminocidos constituem a unidade bsica das protenas, O ser humano necessita basicamente de 20 aminocidos para as suas necessidades de metabolismo e desenvolvimento orgnico. Destes, oito no so sintetizados pelo organismo necessitando, pois, serem ingeridos atravs de alimentos.Entretanto, dois aminocidos revestem - se de especial importncia: a metionina e a lisina, dado ao fato de no se encontrarem presentes nos cereais. A metionina no foi obtida por processos fermentativos, porm 80% da lisina produzida obtida por via microbiolgica. Outros importantes aminocidos sintetizados por via fermentativa: cido glutmico , cido asprtico, triptofano.VitaminasTradicionalmente utilizadas como suplemento alimentar para o ser humano e animais, as vitaminas so, em sua maioria, sintetizadas quimicamente. Entretanto, algumas delas como as do complexo B, notadamente a B2, so produzidas por biosntese microbiana.BiopolmerosComercialmente entende-se por biopolmeros determinados polissacardeos excretados por microrganismos. Os principais biopolmeros encontrados no mercado so as gomas xantana e as dextranas. As primeiras representam a maior parte do mercado, sendo aplicadas como aditivos em alimentos: estabilizantes de suspenso lquidas e genelatizantes.SolventesTrs so os principais solventes orgnicos produzidos por microrganismos: etanol, butanol e acetona. Destes, o etanol se reveste de especial importncia no contexto brasileiro pelo seu destaque no segmento da economia.Bebidas AlcolicasAs bebidas alcolicas so to antigas quanto a humanidade e numerosas como sua s etnias.Fencios, assrios, babilnios, hebreus, egpcios, chineses, germanos, gregos e romanos mencionaram-nas e cada povo tem praticamente as suas, a partir das fontes naturais prprias de acares e produtos amilceos como: frutas, cana-de-acar, milho, trigo, arroz, batata, centeio, aveia, cevada, e mesmo razes e folhas.Deve-se lembrar, alis, de que esses produtos de fermentao alcolica originavam-se na antigidade de processos expontneos de fermentao e que s em poca mais recente comeara a ser usados nas indstrias, para a sua fabricao, os modernos mtodos da Biotecnologia..As bebidas alcolicas podem ser classificadas em :- fermentadas: cerveja, vinho saqu, sidra, etc.- fermento - destiladas: aguardente, rum, usque, conhaque, vodca, gim, etc.MicrorganismosO primeiro processo industrial para a produo de microrganismos teis ao homem constituiu-se na produo de levedura para panificao.O uso de protena unicelular - SCP (sigle cell protein) para a nutrio animal tem-se mostrado mais atraente que para a ingesto humana haja visto que ocorrem problemas quanto digestibilidade, pelo ser humano, da grande quantidade de cidos nucleicos componentes da SCP.Todavia, muitas indstrias tm construdo fbricas para a produo de protenas unicelular nos ltimos anos, principalmente na Europa, Estados Unidos e Japo.AlimentosInmeros so os produtos alimentcios modificados ou produzidos atravs de processos fermentativos.Alguns como queijos, iogurte, etc. so utilizados pela humanidade h mais de 2.000 anos;Picles, azeitonas, po, chucrute so outros alimentos que tem a participao de processos biolgicos em sua obteno.A EXPERINCIA BRASILEIRAA aplicao de cincias biolgicas no Brasil remonta a meados do sculo passado. Notadamente tcnicas laboratoriais e de campo em microbiologia - uma disciplina precursora da moderna Biotecnologia - foram aplicadas por pesquisadores como Piraj da Silva e Pedro Severiano de Magalhes..No decurso da segunda metade do sculo XIX, trabalhos pioneiros foram desenvolvidos em vrias modalidades da microbiologia dentre os quais merecem destaque a bacteriologia, micologia, protozoologia, fitopatologia e virologia.Na primeira metade do sculo XX registrou-se atuao marcante de pesquisadores tais como: Carlos Chagas, Vital Brasil, Oswaldo Cruz, Adolfo Lutz, Emlio Ribas, Rangel Pestana, dentre outros no campo do combate e profilaxia de graves molstias que atingiam a populao brasileira.Atualmente, a continuidade desse esprito cientfico est presente nas equipes de pesquisas dos Institutos Oswaldo Cruz, Biofsica e Microbiologia no Rio de Janeiro, Biolgico, Agronmico de Campinas, Adolfo Lutz, Butant e Pasteur em So Paulo.Na dcada de 40, a Biotecnologia clssica atraiu o esprito empreendedor de cientistas da Universidade de Viosa, Minas Gerais, que fundaram uma empresa pioneira, a Sementes Agroceres, objetivando produzir sementes de milho hbrido a partir de material gentico selecionado no Pas.A Brasil Sul Agropecuria, na dcada de 60, voltou-se produo e seleo de sementes forrageiras e pesquisa gentica para a obteno de hbridos de sorgos granferos forrageiros e de milho doce para o consumo humano.A Agroflora Reflorestamento e Agropecuria, dedicou-se pesquisa e produo de sementes melhoradas e seleo de variedades de plantas adaptadas a diferentes condies sazonais.Atualmente existem no Pas cerca de meia centena de instituies de pesquisa e empresas comerciais atuando em Biotecnologia.TENDNCIASAs nova tcnicas de engenharia gentica esto promovendo uma reavaliao de quase todos os processos industriais que empregam tcnicas ou produtos biolgicos.A relao entre as tcnicas de engenharia gentica e processos industriais pode ser observada esquematicamente na Figura 2.

Figura 2. A Nova BiotecnologiaA engenharia gentica aplica Biotecnologia , alm de substituir processos e produtos tradicionais, apresenta grandes perspectivas de melhorar o bem estar da populao por meio de melhores solues para problemas de sade, alimentao, energia, materiais e meio ambiente.A Tabela 3, a seguir, fornece uma indicao parcial da aplicao comercial da nova Biotecnologia s necessidades da sociedade.REAAPLICAO POTENCIAL

Sade- remdios e vacinas mais eficazes commaior grau de pureza e a um custo menor- diagnstico, preveno e tratamentodedoenas genticas

Alimentos- novos produtos processos alimentcios mais eficientes- melhor rendimento e qualidade na produo agropecuria

Energia- maior eficincia na converso de biomassa em combustveis- menor consumo energtico em processos industriais- aumento na recuperao de petrleo

Materiais- menor custo na produo de produtos qumicos com matrias - primasde biomassa- extrao econmica de minerais de baixo teor

Meio Ambiente- alternativas biolgicas herbicidas e pesticidas- tratamento de detritos txicos

Tabela 3 - Aplicaes Comerciais Futuras da Nova BiotecnologiaA Tabela 3 demonstra a amplitude e a profundidade de mudanas que devero advir com o uso da nova Biotecnologia. Na rea da sade, o desenvolvimento de produtos teraputicos para o tratamento de herpes, cncer, hepatite, artrite e outras doenas vislumbra solues novas. Em outras aplicaes da Biotecnologia sade, essas tcnicas novas permitem meios baratos e mais sensveis para diagnosticar gravidez, doenas venrias e outras condies que atualmente requerem testes de laboratrio complexos e caros.Adicionalmente , essas tcnicas possibilitam a dosagem especfica de produtos farmacuticos para determinados rgos do corpo.Na rea de materiais, produtos de qumica fina para medicina e alimentao podem ser produzidos por microrganismos novos, que tornam possveis transformaes complexas em uma nica etapa.A nova Biotecnologia um instrumento poderoso , podendo substituir vasto nmero de processos industriais atualmente empregados e criando com isso novas e melhores solues para uma grande gama de problemas.