Upload
nelson-de-lacerda-clementino
View
224
Download
0
Embed Size (px)
Citation preview
Eletroforese
Faculdade de BiomedicinaDisciplina de Instrumentação Laboratorial
Definição:
Separação de moléculas em um campo elétrico de acordo com o tamanho, forma ou a carga elétrica.
Tem aplicações nas áreas de análises clínicas, moleculares e genéticas.
Aplicações da eletroforese
1 – detectar a presença de um gene no DNA de um indivíduo
2 – testes de paternidade
3 – diagnóstico de anemias (exemplo: anemia falciforme)
4 – diagnóstico de deficiências de anticorpos (imunoglobulinas)
5 – controle da qualidade do DNA e RNA que serão analisados
Etapas da eletroforese• Extração e purificação do material;• Aplicação do material em um suporte: gel de
agarose, acrilamida, acetato de celulose;• Imersão deste suporte em uma solução tampão
que permita a transmissão da corrente elétrica;• Aplicação da corrente elétrica em intensidade e
tempo adequados,• Visualização dos resultados.
Cuba e fonte para eletroforese
Tipos de gel: AgaroseUsados para separar moléculas de DNA e RNA de acordo com seu tamanho. Podem ser usadas diferentes concentrações de agarose. Normalmente utiliza-se a 2%
Eletroforese de DNA
Tipos de gel: Poliacrilamida
Usados para separar pedaços de DNA de tamanhos muito pequenos e proteínas.
Acetato de celulose
Utilizado para separar diferentes tipos de hemoglobinas de acordo com sua carga elétrica.
Esquema da eletroforese de hemoglobina
Corrente elétrica
As amostras de DNA, RNA e proteína migram para o pólo positivo, pois são carregadas negativamente.
Certifique-se da posição do gel e a direção da eletroforese!
Tampão de corrida
• Para amostras de DNA e RNA o tampão deve ser o mesmo utilizado para diluir a agarose (TAE ou TBE).
• Para amostras de hemoglobina utiliza-se o tampão Tris em pH 8,5 (alcalino) ou tampão agarose pH 6,5 (ácido).
Análise dos resultados
A visualização das diferentes bandas depende de coloração específica.DNA e RNA = brometo de etídeo ou SYBR greenProteínas = azul de coomassie e prata
DNA e RNA
• Marcadores de tamanho para DNA e RNA
DNA corado com SYBR green
Marcador de tamanho (100 pares de base)
Proteínas