Claire Francisco

Luís Miguel Santos

Nilma Vanessa Harilal

Ricardo Viais

Mestrado de Bioquímica

Estrutura e Função de Proteínas

2011/2012

Efeito da indução da IGFBP-3 pela MS-275

Linhas celulares de hepatoblastomas: HepG2 e HuH6

HepG2 + MS-275 (24h)

Aumento da acetilação das histonas H3 e H4

Perda de viabilidade

24h

48h

controlos

controlos

Efeitos da indução da IGFBP-3 pela MS-275

Inibição da síntese DNA Indução da apoptose

6 µM MS-275

0 µM MS-275

Perda de viabilidade celular

Efeito da indução da IGFBP-3 pela MS-275

24h

48h

Secreção de IGFBP-3 aumentada pela MS-275

mRNA IGFBP-3 aumentada na presença de MS-275

Células HepG2

HuH6Secreção de IGFBP-3 indetectável

mRNA IGFBP-3 induzível pela MS-275

Efeito da indução da IGFBP-3 pela MS-275

Poço 1 e 5 – Imunoprecipitado de RNA pol IIPoço 2 e 6 – Controlo IgGPoço 3 e 7 – Histona H3 acetilada imunoprecipitadaPoço 4 e 8 – Histona H4 anti-acetil

Controlos positivos

Tratamento com MS-275 levou ao aumento de H3 acetilada

Imunoprecepitados negativos

Fraca associação

Histona H3 acetilda associa-se com o promotor da IGFBP-3, levando a um enhancement da transcrição

? Acho que

não percebi bem

este gráfico

Efeito da sub-regulação da IGFP-3 endógena

< 0,5 ng/mL

Células HepG2

Células HuH6

IGFBP-3 secretado indetectável

Transfecções com siRNA por electroporação

Células HepG2

Células HuH6

mRNA IGFBP-3 80% inferior com siRNA da IGFBP-3

90% inferior

Efeito da sub-regulação da IGFP-3 endógena

Células viáveis diminuiram com 6 µM MS-275

Perda de viabilidade revertida pela sub-regulação IGFBP-3 pelo siRNA

Sub-regulação IGFBP-3 pelo siRNA não tem efeito na viabilidade na ausência de MS-275