Fernanda Rocha

Gustavo Garcia

Tiago Medina

HIV X Imunoterapia

-HIV- (human imunodeficiency virus):

• Familia: Retroviridae

•Gênero: Lentivirus

•HIV-1 – (Subtipos de A-J)

•HIV-2

-Sintomas:-Semelhante gripe comum

HIV- Vírus da Imunodeficiência Humana

Partículas do HIV-1 na superfície de macrófagos infectados

Total: 33.3 million [31.4 million – 35.3 million]

Western & Central Europe

820 000[720 000 – 910 000]

Middle East & North Africa460 000

[400 000 – 530 000]

Sub-Saharan Africa22.5 million

[20.9 million – 24.2 million]

Eastern Europe & Central Asia1.4 million

[1.3 million – 1.6 million]

South & South-East Asia4.1 million

[3.7 million – 4.6 million]

Oceania57 000

[50 000 – 64 000]

North America1.5 million

[1.2 million – 2.0 million]

Central & South America1.4 million

[1.2 million – 1.6 million]

East Asia770 000

[560 000 – 1.0 million]Caribbean240 000

[220 000 – 270 000]

População infectada com HIV

Estimativa de novos casos de infecção pelo HIV

Western & Central Europe

31 00031 000[23 000 – 40 000]

Middle East & North Africa75 00075 000

[61 000 – 92 000]

Sub-Saharan Africa1.8 million1.8 million

[1.6 million – 2.0 million]

Eastern Europe & Central Asia

130 000 130 000 [110 000 – 160 000]

South & South-East Asia270 000270 000

[240 000 – 320 000]

Oceania45004500

[3400 – 6000]

North America70 000

[44 000 – 130 000]

Central &South America

92 00092 000[70 000 – 120 000]

East Asia82 00082 000

[48 000 – 140 000]

Caribbean17 000

[13 000 – 21 000]

Total: 2.6 million [2.3 million – 2.8 million]

Abaixo de 200 células/ml: Muito vulnerável, tratar imediatamente;

Entre 200 e 350 células/ml: Vulnerável, deve ser iniciado o tratamento

Entre 350 e 500 células/ml: Pouco vulnerável, pode começar a critério médico;

Acima de 500: Saudável, não precisa começar o tratamento.

Cinética da infecção pelo HIV

Nature Biotechnology 25, 1395 - 1402 (2007)/ Ann Intern Med. 1996 Apr 1;124(7):654-63.

Formas de terapias para o controle da infecção viral

Sistema Imune versus Infecção Viral

Nature Reviews Immunology 10, 11-23 (January 2010)

Propagação do HIV

Pontos de intervenção por drogas antivirais

Nature Biotechnology 25, 1395 - 1402 (2007)

Resposta imune durante infecção viral

-100µg/kg de IL7 por 9 dias

-ATR+ 100µg/kg de IL7 por 26 dias

8dpi – 10µg de IL7 ou PBS por 2 semanas

-3 ou 10 μg/kg de IL-7; 3x/semana por 16 dias

IL-7 administration drives T cell-cycle entry and expansion in HIV-infection

Objetivo: Verificar a atividade biológica da IL-7 recombinante humana administrada em pacientes infectados com HIV.

1 4 14 28 56

rhIL-7/placebo

toxicidade Teste para anticorpos anti-IL-7

A rhIL-7 é tóxica para pacientes infectados com HIV?

A concentração de 30 g/kg de rhIL-7 é a máxima tolerada pelos pacientes.

plasma

ELISA

Qual o perfil farmacocinético da rhIL-7 após seu único inóculo subcutâneo?

0.5, 1, 1.5, 2, 2.5, 4, 8, 12, 24, 48 e 72h

rhIL-7

Dose única

Os níveis de IL-7 no plasma aumentaram de modo dependente da dose. O perfil farmacocinético torna-se não linear com o aumento da

dose.

PlaceboPlacebo

IL-7 (3IL-7 (3g/Kg)g/Kg)

IL-7 (10IL-7 (10g/Kg)g/Kg)

IL-7 (30IL-7 (30g/Kg)g/Kg)

IL-7 (60IL-7 (60g/Kg)g/Kg)

Como os linfócitos circulantes se comportam após administração de rhIL-7?

PBMC

Citometria de Fluxo

0, 1, 2, 4, 14, 28 dias

rhIL-7

Dose única

Uma única dose de IL-7 induziu um aumento no número de linfócitos T CD4+ e CD8+ circulantes.

PBMC

Citometria de Fluxo

0, 1, 2, 4, 14, 28 dias

rhIL-7

Dose única

A administração da IL-7 induziu o aumento linfocitário de alguma sub-população específica?

O aumento de linfócitos foi predominante entre os linfócitos T de memória central.

PlaceboPlacebo

IL-7 (3IL-7 (3g/Kg)g/Kg)

IL-7 (10IL-7 (10g/Kg)g/Kg)

IL-7 (30IL-7 (30g/Kg)g/Kg)

IL-7 (60IL-7 (60g/Kg)g/Kg)

A administração de rhIL-7 induz proliferação de linfócitos?

Linfócitos

Proliferação celular

0, 1, 4, 14, 28 dias

rhIL-7

Ki67 proteína nuclear expressa em todas as fases do ciclo celular, exceto na fase de repouso

Dose única

Treg

A administração de rhIL-7 induziu os linfócitos T a entrarem em ciclo celular, exceto a subpopulação de células T reguladoras.

rhIL-7 induz proliferação e ativação de linfócitos?

PlaceboPlacebo

IL-7 IL-7

A administração de rhIL-7 induziu ativação dos linfócitos T no mesmo período que eles iniciaram ciclo celular.

A administração de rhIL-7 induz ativação de linfócitos?

Linfócitos

Ativação celular

0, 1, 4, 14, 28 dias

rhIL-7

Dose única

Qual o efeito da rhIL-7 sobre as células T CD8+ específicas ao antígeno viral?

PBMC

Citometria de Fluxo

0, 4, 28 dias

rhIL-7

Dose única

Uma única dose de rhIL-7 aumentou o recrutamento não seletivo de células T CD8+ de memória específicas ao antígeno em ciclo celular.

Tetrâmero + Peptídeos Citomegalovirus;Epstein-Barr virus;Influenza virus;HIV

Qual o efeito da rhIL-7 sobre os linfócitos B?

ImaturaImatura TransiçãoTransição

CD21CD21lowlow

CD21CD21highhigh

PBMC

Citometria de Fluxo

0, 4, 28 dias

rhIL-7

Dose única

O número de células B

circulantes não foi

alterado

A administração de rhIL-7 induziu a emergência de células B de imaturas para uma fase de transição.

ImaturImatur

aa

TransiçTransiç

ãoão

A IL-7 possui um perfil favorável para o desenvolvimento terapêutico para pacientes com HIV ou outras linfopenias.

MemóriMemóri

a a

centralcentral

Objetivo: Investigar o potencial terapêutico da IL-7 na infecção crônica pelo LCMV, na tentativa de reverter a exaustão celular.

O tratamento com IL-7 aumenta o número de células no baço durante a infecção com LCMV?

Infecção com o clone 13 - LCMV

8° dia

Tratamento com IL-7 ou PBS por 3

semanas

Quantificação do número de células no baço em diferentes dias

Houve aumento de linfócitos T CD4, T CD8 e linfócitos B após tratamento com IL-7

C57BL/6

O tratamento com IL-7 aumenta o número de células T CD8 específicas para o LCMV?

Infecção com o clone 13 - LCMV

8° dia

Tratamento com IL-7 ou PBS por 3

semanas

Citometria – células TCD8 específicas para TetGP33+, TetGP276+ e TetNP396+

A IL-7 promoveu o aumento de células T CD8 específicas para o LCMV

Remoção do baço(Marcação com tetrâmero)

O aumento no número de células também é observado em outros órgãos?

Infecção com o clone 13 - LCMV

8° dia

Tratamento com IL-7 ou PBS por 3

semanas

Histologia do fígado

Após o tratamento com IL-7, houve aumento no infiltrado de células totais e específicas para o vírus no fígado, cérebro, pulmões e rins

29° dia

Fígado

Citometria para TCD4 e TCD8 totais e específicas para os tetrâmeros

O aumento no número de células obtidas após o tratamento com IL-7 se traduz em ganho funcional?

Infecção com o clone 13 - LCMV

8° dia

Tratamento com IL-7 ou PBS por 3

semanas

Citometria – células TCD4 e TCD8 específicas para o vírus

29° dia

As células T CD4 e TCD8 expandidas pela IL-7 são funcionais.

... Células T de camundongos infectados com o clone 13 de LCMV possuem altos níveis de PD-1 (Barber et al., 2006).

Os níveis de PD-1 nas células T estão diminuídos após o tratamento com IL-7?

Infecção com o clone 13 - LCMV

8° dia

Tratamento com IL-7 ou PBS por 3

semanas

FACS - Expressão de PD-1 nas células TCD4 e TCD8

29° dia

O tratamento com IL-7 diminuiu a expressão de PD-1 nas células T CD4 e T CD8

Camundongos tratados com IL-7 eliminam eficientemente o vírus?

Infecção com o clone 13 - LCMV

8° dia

Tratamento com IL-7 ou PBS por 3

semanas

Titulação viral em vários dias – Contagem de placa viral

A IL-7 facilitou a eliminação viral dos reservatórios crônicos (baço, fígado, rins e cérebro)

Quais citocinas estão elevadas durante o tratamento com IL-7?Infecção com o

clone 13 - LCMV

8° dia

Tratamento com IL-7 ou PBS por 3

semanas

Dosagem de citocinas séricas - ELISA

Citocinas do padrão Th1 e Th17 estão aumentadas durante o tratamento com IL-7. IL-10 aumenta após a eliminação do vírus

O tratamento com IL-7 induz dano tecidual decorrente da resposta imune inflamatória?

Infecção com o clone 13 - LCMV

8° dia

Tratamento com IL-7 ou PBS por 3

semanas

Dosagem de AST e ALT no soro

O tratamento com IL-7 não aumenta os níveis séricos das enzimas indicativas de dano hepático

A produção de IL-22 está aumentada durante o tratamento com IL-7?

Infecção com o clone 13 - LCMV

8° dia

Tratamento com IL-7 ou PBS por 3

semanas

Dosagem de IL-22 no soro - ELISA

29° dia

O tratamento com IL-7 também aumenta a produção sérica de IL-22

O dano hepático limitado foi consequência do efeito citoprotetor da IL-22?

A IL-22 produzida durante o tratamento com IL-7 impede os danos celulares no fígado

Infecção com o clone 13 - LCMV

8° dia

Tratamento com IL-7 ou PBS por 3

semanas

FACS – Tregs no baço e no fígado

O tratamento com IL-7 altera o número de células T reguladoras?

O número absoluto de Tregs aumenta após o tratamento com IL-7, mas a frequência está diminuída em relação ao número total de células T

A depleção de Tregs durante o tratamento com IL-7 altera o número de células T totais e específicas para o LCMV?

A depleção de Tregs aumentou o número de células T CD4 e T CD8 totais e específicas para o vírus.

O aumento de células T em animais depletados de Tregs está relacionado com aumento de IL-2?

Dosagem de citocinas no soro

A maior produção de IL-2 induzida pelo tratamento com IL-7 promove o aumento no número de células T.

A depleção de Tregs durante o tratamento com IL-7 provocou danos hepáticos?

Dosagem de AST no soro

A depleção de células T reguladoras não provocou danos hepáticos

Socs3 é expresso durante a infecção crônica por LCMV?

Infecção crônica com o clone 13

- LCMV

Infecção aguda - cepa Armstrong

de LCMV

OU

Sorting das células T

Western Blotting – Expressão de Socs3

Socs3 é altamente expresso na infecção crônica causada por LCMV

O tratamento com IL-7 inibe a expressão de Socs3 durante a infecção crônica por LCMV?

Sorting das células T

Western Blotting – Expressão de Socs3

Infecção com o clone 13 - LCMV

8° dia

Tratamento com IL-7 ou PBS por 5

dias

A expressão de Socs3 nas células T foi inibida após tratamento com IL-7

Socs3 é o principal inibidor da resposta imune contra a infecção crônica por LCMV?

Infecção com o clone 13 - LCMV

Remoção do baço

Socs3wt/wtLck-Cre- Socs3fl/flLck-Cre+

Infecção com o clone 13 - LCMV

FACS – Células TCD8 específicas para

NP396, GP276 e GP33

Socs3 inibe a resposta imune específica contra o LCMV

As células T permanecem funcionais após a deleção condicional de Socs3?

Infecção com o clone 13 - LCMV

Remoção do baço

Socs3wt/wtLck-Cre- Socs3fl/flLck-Cre+

Infecção com o clone 13 - LCMV

FACS – Células TCD4 e TCD8 produtoras de

citocinas

As células T CD4 e TCD8 continuam funcionais na ausência de Socs3

O vírus é eliminado de órgãos reservatórios na ausência de Socs3?

A deficiência de Socs3 propiciou a eliminação viral de vários órgãos reservatórios

Conclusão