Acta Cirúrgica Brasileira - Vol 18 (6) 2003 - 553

Modelo experimental de esplenectomia laparoscópica em ratos

Introdução

Desde o desenvolvimento da cole-cistectomia laparoscópica em 1987, houveentusiasmo considerável na aplicação detécnicas “minimamente invasivas” paratratar outras desordens abdominais e torá-cicas. A motivação para o desenvolvi-mento da técnica laparoscópica é proveruma alternativa segura e efetiva quereduza o desconforto e do paciente, osserviços de internamento e os custoshospitalares.1

A cirurgia experimental tem sido areferência para que novas técnicas, comoa laparoscopia, sejam aperfeiçoadas 2. Avídeo-cirurgia requer habilidades técnicasmais complexas: uma apurada coordena-ção motora, destreza para realizar movi-mentos de terceira dimensão num campo

bidimensional e transferir a sensibilidadetátil para manipulação através do instru-mental específico 3. Tradicionalmente,animais de grande porte como cães eporcos são utilizados na laparoscopiaexperimental por apresentarem o tamanhoe anatomia compatível com um homem deestatura mediana. Entretanto esses ani-mais apresentam alto custo, dificuldadeem acomodação em pequenos biotérios esão pouco utilizados em pesquisas imu-nológicas 4 . Existem trabalhos internacio-nais, 2-4 descrevendo a técnica laparoscó-pica em ratos, utilizando instrumental maisacurado ao diminuto campo operatório eque por conta dessa adaptação são dis-pendiosos. 7-11

Como não foram encontrados mode-los de esplenectomia laparoscópica naliteratura nacional, buscamos desenvolver

um modelo que atendesse aos baixoscustos, fácil manejo, utilização de materialconvencional de humanos adultos e quefosse útil em pesquisas imunológicas eoncológicas.

Métodos

Os experimentos foram aprovadospela Comissão de Ética da Escola Bahianade Medicina e Saúde Pública (E.B.M.S.P. -BA) e obedeceram os preceitos do Colé-gio Brasileiro de Experimentação Animal(COBEA).

Para o presente estudo, foram utiliza-dos 35 ratos Rattus norvegicus albinusda linhagem Wistar, procedentes do bioté-rio da E.B.M.S.P. - BA, pesando 250 +/- 50g, com idade média de 3 meses sendo to-dos machos. Os animais foram colocados

13 – INFORME TÉCNICO

Modelo experimental de esplenectomia laparoscópica em ratos1

Vanessa Alves Costa2

Fabrício Mascarenhas de Oliveira2

Lúcio Couto de Oliveira Jr2

Mario Castro Carreiro3

Pedro Guimarães4

Costa VA, Oliveira FM, Oliveira Jr LC, Carreiro MC, Guimarães P. Modelo experimental de esplenectomia laparoscópicaem ratos. Acta Cir Bras [serial online] 2003 Nov-Dez;18(6). Disponível em URL: http://www.scielo.br/acb.

RESUMO – Objetivo: Desenvolver um modelo de esplenectomia laparoscópica em ratos. Métodos: Foram utilizadostrinta e cinco ratos machos ( Rattus Norvegicus Albinus, linhagem Wistar), pesando 250 +/- 50 g .Os animais foramanestesiados com cetamina e xylazina e foi estabelecido pneumoperitônio de CO2 com pressão de 7 mmHg, atravésda agulha de Veress. Após pneumoperitônio, dois trocateres de 5 mm e um de 11mm foram alocados na paradeabdominal obedecendo a triangulação. O ligamento gastroesplênico foi dissecado para mobilização do baço. Osvasos hilares foram dissecados e eletrocoagulados utilizando a pinça “Maryland” e o gancho “HooK”. Um “endobag”adaptado, foi utilizado para retirar o orgão da cavidade abdominal. Resultados :Um animal (2,86%) morreu naindução anestésica. Após um período de observação de oito dias, trinta animais sobreviveram (85,7 %) e quatro(11,42%) Morreram no pós-operatório imediato. Em relação às complicações, Aderências intra-abdominais foramencontradas em 25,71% dos animais (n=9). Conclusão: A esplenectomia laparoscópica é um modelo factível porconta da baixa taxa de mortalidade além do baixo custo para treinamento da técnica.

DESCRITORES – Cirurgia laparoscópica. Esplenectomia. Ratos.

1. Trabalho realizado na Escola Bahiana de Medicina e Saúde Pública (EBMSP).2. Acadêmicos de Medicina da EBMSP.3. Professor Adjunto IV da Universidade Federal da Bahia (UFBA). Coordenador da Disciplina de Técnica Operatória e Cirurgia Experimental da

UFBA.4. Professor Adjunto da Disciplina de Técnica Operatória e Cirurgia Experimental da UFBA. Doutor pela Universidade Federal de São Paulo - Escola

Paulista de Medicina (UNIFESP - EPM).

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Costa V A e col.

em gaiolas individuais, medindo20X30X40 cm, aclimatados durante 15 diasa uma temperatura de 25º C, em períodosde 12 horas luz e 12 horas escuridão comração e água livres. Todos os animaisforam avaliados no intra-operatórioquanto à presença ou não de hemorragiacontrolável. Após um período de 8 dias,os animais foram avaliados quanto aopeso e à presença ou ausência de: áreasde hemorragia, abscessos intra-abdominais, aderências e deiscência desutura.

Pré-operatório

Cerca de oito horas antes do procedi-mento os animais foram colocados emjejum, e anestesiados por via intra-peri-toneal com cetamina (7%) e xilasina (0.3%)na proporção de 2: 1 mL, com 0,2 mL/100 gde peso da solução. Em seguida, foramposicionados na mesa cirúrgica em decú-bito dorsal, tricotomizados e submetidosa antissepsia.

Ato operatório

Após a colocação dos campos, foifeita uma incisão de 0,5 cm a quatro cm dorebordo costal direito na linha axilaranterior, e com auxílio de duas pinças Allisa agulha de Veress puncionou a cavidadeabdominal. O insuflador foi programadopara uma pressão máxima de 7mmHg 6 e amenor velocidade de fluxo (0,8L/mim) eentão foi acoplado à agulha de Veress apósos testes de segurança. Com o pneumope-ritônio estabilizado, a mesa de contençãofoi inclinada 45° para direita, favorecendoo acesso à loja esplênica.

A incisão da agulha de Veress foiampliada para alojar um trocáter de 11 mmcolocado no lugar da agulha e ancorado àsínfise púbica com fio linho 3-0.

O laparoscópio de 0° foi acoplado àcâmera e a fonte de luz e introduzido nacavidade abdominal. A punção dos doistrocáteres foi feita sob visualização destacâmera.

O segundo trocáter de 5 mm foi colo-cado por uma incisão de 0,5 cm abaixo doapêndice xifóide sendo observado atravésdo laparoscópio (Figura 1).

O terceiro trocáter puncionou a cavi-dade através de uma incisão de 0,5 cm nohipogástrio do animal inferiormente ao

primeiro trocáter cerca de 3 cm, obede-cendo a triangulação (Figura 2).

Uma pinça “Maryland” foi colocadano último trocáter para afastar as alças intes-tinais e localizar o baço. Através do segundotrocáter, uma pinça atraumática elevou obaço a fim de oferecer melhor exposição dasestruturas do hilo. O ligamento gastroesplê-nico foi dissecado e os vasos curtos gástri-cos foram cauterizados (Figura 3).

O órgão é elevado pela pinça atrau-mática e os vasos hilares superiores,centrais e inferiores foram delicadamentedissecados e cauterizados utilizando apinça “Maryland” e o “Hook” ou gancho(Figura 4).

Para retirada do órgão foi adaptadoum “endobag” de 3 cm, cortando-se odedo indicador de uma luva cirúrgica detamanho médio. O “endobag” foi pinçado,acoplado ao redutor e colocado às cegaspelo trocáter de 11 mm, de onde se retiroumomentaneamente a câmera.

Retomada a posição do laparos-cópio, a peça foi colocada dentro do“endobag”, (Figura 5) e o conjunto foi reti-rado da cavidade abdominal, através daampliação de um dos sítios dos trocáteresde 5 mm.

Depois da retirada do órgão, a cavi-dade abdominal foi inspecionada quantoa possíveis focos hemorrágicos que foramhemostasiados por eletrocoagulação. Ostrocáteres foram retirados sob a visãobidimensional do laparoscópio e a paredeabdominal foi suturada em dois planos.

Pós-operatório

Os animais foram recolocados emgaiolas individuais e, observados duranteoito dias, nas mesmas condições já citadas(ver método). Após um período deobservação de oito dias os animais foramsacrificados em uma câmara fechada cométer etílico a 50% e submetidos a necrópsia.

FIGURA 2 – Posicionamento dos trocáteres quanto à triangulação.

FIGURA 1 – Imagens concomitantes da colocação do segundo trocáter. A esquerda visão externa ea direita visão interna.

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Modelo experimental de esplenectomia laparoscópica em ratos

Resultados

As esplenectomias laparoscópicasforam realizadas em média de 40 +/- 8minutos e não houve necessidade deconversão para técnica aberta. A taxa deletalidade durante a indução anestésicafoi de 2,86% (n=1). Os outros 34 animaisestavam vivos após o término doprocedimento e as hemorragias no intra-operatório foram facilmente controladascom o eletrocautério. No decorrer doperíodo de observação de 8 dias, quatroanimais morreram (três no segundo dia eum terceiro dia), nesses animais foramencontradas hemorragias intr abdominais, com taxa de mortalidade no pós-operatório imediato de 11,42%.

Ao término do período de observa-ção a taxa de sobrevida foi de 85,71%(n=30). No oitavo dia de observação, amédia de perda de peso foi de 10,30 g(desvio padrão de +/- 6,84 g). Nas necrop-sias realizadas foram encontrados noveanimais com áreas de aderência (25,71%)envolvendo estômago e intestino. Em

nenhum dos animais foram observadosabscessos, hemorragia intra-abdominal oudeiscências de suturas.

Discussão

Atualmente, tem sido significante oaumento do número de procedimentoslaparoscópicos capazes de oferecer aospacientes poucas complicações operató-rias, menor tempo de hospitalização, menordesconforto no pós-operatório, menortempo de reabilitação e melhor resultadoestético. A despeito desses benefícios aindahá dúvidas sobre o tratamento laparoscópicode doenças malignas e hematológicas.1,8,12.Por conta das limitações nos ensaiosclínicos, é necessário um modelo animaladequado para estudos nos aspectosoncológicos e imunológicos ligados àcirurgia laparoscópica.8

O modelo murino apresentado semostrou eficiente para o treinamento dacirurgia laparoscópica por possibilitar ocirurgião trabalhar num campo diminuto,o que requer um refinamento da sua técni-

FIGURA 5 – Colocação da peça em “endobag” artesanal para retirada dacavidade.

FIGURA 3 – Dissecção do ligamento gastroesplênico à esquerda e, na seqüência, cauterização dosvasos curtos do estômago.

FIGURA 4 – Visão laparoscópica da dissecção completa do hilo esplênicocom o “Hook”.

ca. É claro que inicialmente,o treinamentodeve começar em simuladores para possi-bilitar o manejo com o instrumental. Pas-sada essa fase inicial, o cirurgião já podedesenvolver sua habilidade em ratos quesão animais de fácil manejo, baixo custo,boa tolerância a procedimentos cirúrgicose são os mais estudados fisiologicamen-te.4 Além disso, esse modelo experimentalpode ser reproduzido para estudos sobreo impacto da técnica laparoscópica naimunologia, nas doenças hematológicase oncológicas 15.

Este modelo de esplenectomia apre-sentou uma taxa de mortalidade compatí-vel com a discrição do modelo Giuffrida ecol. 10 no qual, apesar da pequena amos-tra, apenas um dos seis ratos esplenecto-mizados morreu.

Para ser economicamente viável, estemodelo de treinamento utilizou o instru-mental videolaparoscópico usual da cirur-gia em humanos adultos, ao contrário deoutros estudos que usam mesas de con-tenção adaptadas ao laparoscópio, instru-mental de calibre reduzido, ópticas de

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Costa V A e col.

Costa VA, Oliveira FM, Oliveira Jr LC, Carreiro MC, Guimarães P. Na experimental model of laparoscopic esplenectomyin rats. Acta Cir Bras [serial online] 2003 Nov-Dec;18(6). Available from URL: http://www.scielo.br/acb.

ABSTRACT – Purpose: To describe a model of laparoscopic esplenectomy in rats. Methods: Thirty-five male ratsRattus Norvegicus Albinus Wistar weighing 250 +/- 50 g were used in this study. The animals were insufflated withPCO

2 of 7 mmHg through a Veress needle. After the pneumoperitoneum, two 5 mm and a 11 mm trocars were passed

through the abdominal wall, so as to form a triangular geometrical figure. The spleen was approached directly bydissection of the gastrosplenic ligament. Hilar vessels were blunty dissected close to the spleen using Maryland andHook. A bag was then introduced into the abdominal cavity and the spleen slipped inside. The organ could beremoved through a port of site. Results: One animal (2,86%) died at the anaesthetic induction. After an eight-dayobservation period, 30 animals survived (85,7%) and four (11,42%) died immediately after the surgery. In relation tocomplications, nine rats showed adhesions in left upper quadrant. Conclusions: This laparoscopic splenectomy isfeasible and it is an excellent training model. Besides low cost and easy availability, the rat model requires lessfinancial efforts.

KEY WORDS – Laparoscopic surgery. Splenectomy. Rat.

Conflito de interesse: nenhumCorrespondência: Fonte de financiamento: nenhumaVanessa Alves CostaRua Professor Sabino Silva, 282/60140155250 Salvador - BAnessa@lognet.com.br Data do recebimento: 25/08/2003

Data da revisão: 19/09/2003Data da aprovação: 02/10/2003

diferentes angulações, além de artros-cópios e broncoscópios.3,4,7-11,13,14

Concluímos que esse modelo deesplenectomia laparoscópica em ratos éfactível. As hemorragias que aconteceramno pós-operatório imediato estão de acordocom os riscos de sangramentos em estru-turas ricamente vascularizadas como é opedículo esplênico e exigem uma criteriosarevisão de hemostasia, Giuffrida e col 7

utilizaram gaze para conter o sangramentoresidual em seu modelo de esplenectomia oque achamos desnecessário já que oeletrocautério é eficaz e a introdução da gazefaz vazar o pneumoperitônio, perdendocampo visual e prolongando o tempocirúrgico. Os achados de aderência podemser explicados pela eletrocoagulação dosvasos esplênicos e pela contigüidade entreo pedículo esplênico e os outros órgãos doquadrante superior direito como estômago,intestino e rim direito.

A taxa de incidência das aderênciasintra-abdominais foi menor daquelasdescritas na literatura, provavelmenteporque os outros modelos 3,7,10 utilizaram“endoloop” para ligar o pedículo vascular.Optamos por preterir esse instrumentoneste procedimento por conta da proximi-dade entre a cauda do pâncreas e o hiloesplênico e que, através de uma ligadura,favorecêssemos a formação de abscessospancreáticos como descreveu Guiffrida ecol. 7 em seu modelo experimental

Por conta do risco de sangramentono pós-operatório imediato, sugerimos umperíodo de treinamento prévio em simula-dores e um maior cuidado na manipulaçãode estruturas extremamente vasculariza-das e delicadas de pequenos animais.

Conclusão

A esplenectomia laparoscópica emratos é possível e pode ser utilizada empesquisas e treinamento da técnica lapa-roscópica.

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