22
CENTRO UNIVERSITÁRIO CESMAC MIKAELLY CORREIA DE ARAÚJO O DNA COMO FERRAMENTA DE IDENTIFICAÇÃO HUMANA E A SUA IMPORTÂNCIA NO TRABALHO DA PERÍCIA CRIMINAL MACEIÓ AL 2018/1

O DNA COMO FERRAMENTA DE IDENTIFICAÇÃO HUMANA E A … DNA como ferrament… · The present work aimed to address the importance of the use of deoxyribonucleic acid (DNA) in the

  • Upload
    others

  • View
    0

  • Download
    0

Embed Size (px)

Citation preview

Page 1: O DNA COMO FERRAMENTA DE IDENTIFICAÇÃO HUMANA E A … DNA como ferrament… · The present work aimed to address the importance of the use of deoxyribonucleic acid (DNA) in the

CENTRO UNIVERSITÁRIO CESMAC

MIKAELLY CORREIA DE ARAÚJO

O DNA COMO FERRAMENTA DE IDENTIFICAÇÃO

HUMANA E A SUA IMPORTÂNCIA NO TRABALHO DA

PERÍCIA CRIMINAL

MACEIÓ – AL

2018/1

Page 2: O DNA COMO FERRAMENTA DE IDENTIFICAÇÃO HUMANA E A … DNA como ferrament… · The present work aimed to address the importance of the use of deoxyribonucleic acid (DNA) in the

MIKAELLY CORREIA DE ARAÚJO

O DNA COMO FERRAMENTA DE IDENTIFICAÇÃO

HUMANA E A SUA IMPORTÂNCIA NO TRABALHO DA

PERÍCIA CRIMINAL

Trabalho de conclusão de curso

apresentado como requisito final, para

conclusão do curso de Biomedicina do

Centro Universitário Cesmac, sob a

orientação da professora Dra. Gabriela

Souto Vieira de Mello e coorientação do

professor Msc. Moezio de Vasconcellos

Costa Santos Filho.

MACEIÓ – AL

2018/1

Page 3: O DNA COMO FERRAMENTA DE IDENTIFICAÇÃO HUMANA E A … DNA como ferrament… · The present work aimed to address the importance of the use of deoxyribonucleic acid (DNA) in the
Page 4: O DNA COMO FERRAMENTA DE IDENTIFICAÇÃO HUMANA E A … DNA como ferrament… · The present work aimed to address the importance of the use of deoxyribonucleic acid (DNA) in the
Page 5: O DNA COMO FERRAMENTA DE IDENTIFICAÇÃO HUMANA E A … DNA como ferrament… · The present work aimed to address the importance of the use of deoxyribonucleic acid (DNA) in the

AGRADECIMENTOS

Agradeço primeiramente a Deus pela oportunidade da vida e pelo

conhecimento disponibilizado. Agradeço aos meus familiares e amigos que me

apoiaram desde o início desta jornada. Agradeço a professora Gabriela Souto

Vieira de Mello por ter aceitado me orientar. Agradeço ao professor Moezio de

Vasconcellos Costa Santos Filho pela coorientação e por ter despertado o

interesse pela área, e a professora Yáskara Veruska Ribeiro Barros pelo auxilio

na melhoria do trabalho.

Page 6: O DNA COMO FERRAMENTA DE IDENTIFICAÇÃO HUMANA E A … DNA como ferrament… · The present work aimed to address the importance of the use of deoxyribonucleic acid (DNA) in the

O DNA COMO FERRAMENTA DE IDENTIFICAÇÃO HUMANA E A SUA IMPORTÂNCIA NO TRABALHO DA PERÍCIA CRIMINAL DNA AS A HUMAN IDENTIFICATION TOOL AND ITS IMPORTANCE IN THE WORK OF FORENSIC SCIENCE

Mikaelly Correia de Araújo do curso de Biomedicina do Centro Universitário Cesmac, sob a orientação da professora Dra. Gabriela Souto Vieira de Mello e coorientação do professor Msc. Moezio de Vasconcellos Costa Santos Filho. [email protected]

O presente trabalho objetivou abordar a importância do uso do ácido desoxirribonucleico (DNA) na elucidação de um de crime, os principais passos de análise de DNA e seu uso em criminalística. Realizou-se um levantamento bibliográfico do tema relevante. O estudo do DNA obtido a partir de vestígios biológicos é um instrumento importante para combater a criminalidade e a impunidade, uma vez que gera evidências, em sua maioria irrefutáveis, que podem ser utilizadas para absolver ou incriminar uma pessoa. Assim, para que a técnica de identificação de DNA seja totalmente construída, a amostra biológica a ser analisada deve ser corretamente escolhida, coletada, transportada e armazenada. Este é um dos papéis dos especialistas criminais e cientistas forenses. Daí a importância de estudos e treinamento sobre a coleta apropriada e o uso do DNA como evidência forense. PALAVRA-CHAVE: DNA Forense. Pericia. Preservação. ABSTRACT

The present work aimed to address the importance of the use of deoxyribonucleic acid (DNA) in the elucidation of a crime, the main steps of DNA analysis and its use in criminalistics. A bibliographic survey of the relevant topic was carried out. The study of DNA obtained from biological traces is an important tool to combat crime and impunity, since it generates evidence, mostly irrefutable, that can be used to acquit or incriminate a person. Thus, for the DNA identification technique to be fully constructed, the biological sample to be analyzed must be correctly chosen, collected, transported and stored. This is one of the roles of criminal experts and forensic scientists. Hence the importance of studies and training on the appropriate collection and use of DNA as forensic evidence.

KEYWORDS: Forensic DNA. Expertise. Preservation.

Page 7: O DNA COMO FERRAMENTA DE IDENTIFICAÇÃO HUMANA E A … DNA como ferrament… · The present work aimed to address the importance of the use of deoxyribonucleic acid (DNA) in the

SUMÁRIO

1 INTRODUÇÃO ............................................................................................... 6

2 METODOLOGIA ............................................................................................ 8

3 DESENVOLVIMENTO ................................................................................... 9

3.1 Identificação humana e criminalística ..................................................... 9

3.2 Coleta de materiais biológicos ................................................................. 11

3.3 Métodos de extração do DNA forense ..................................................... 12

3.4 Amplificação e análise do DNA ................................................................ 14

4 CONSIDERAÇÕES FINAIS ........................................................................... 17

5 REFERÊNCIAS............................................................................................... 18

Page 8: O DNA COMO FERRAMENTA DE IDENTIFICAÇÃO HUMANA E A … DNA como ferrament… · The present work aimed to address the importance of the use of deoxyribonucleic acid (DNA) in the

6

1 INTRODUÇÃO

A identificação humana sempre foi uma grande imprescindibilidade

social, onde para isso foram executadas pesquisas e estudos para estabelecer

os métodos e protocolos mais confiáveis. Em várias circunstancias onde há um

desastre em massa, como em acidentes, guerras, distúrbios sócio-políticos, é

de extrema importância a identificação das vítimas, que tem por objetivo, tentar

amenizar a dor e o sofrimento entre os parentes das vítimas e para esta

finalidade a análise genética destaca-se, gerando resultados bastante fieis e

precisos (DHANARDHONO et al., 2013).

O ácido desoxirribonucleico (DNA) é muito utilizado na elucidação de

crimes, uma vez que ele pode ser coletado e isolado em locais de crime onde

normalmente encontram-se materiais biológicos que podem ser em grandes ou

pequenas quantidades, podendo estar contaminado ou não por outras

substâncias (ZITKIEWICZ et al., 2012).

Nos seres humanos, animais e vegetais, o DNA genômico é encontrado

no núcleo das células, organizado na forma de cromossomos. Cada

cromossomo é formado por uma única molécula de DNA, com vários milhões

de pares de bases. Nos humanos, o núcleo das células somáticas possui 46

cromossomos (44 cromossomos autossômicos e 2 sexuais) e nas células

germinativas (óvulos e espermatozoides) 23 cromossomos, sendo 22

cromossomos autossômicos e um sexual (VELHO et al., 2013) (SILVA, 2006).

Esta biomolécula é formada pela ligação de unidades individuais

denominadas de nucleotídeos, onde cada nucleotídeo é formado por uma

molécula de pentose, um grupo fosfato, e uma base nitrogenada. Existe mais

de quatro tipos de bases nitrogenadas, sendo a guanina, timina, citosina e

adenina encontradas no DNA. Estas bases organizam-se em uma dupla hélice

obedecendo ao pareamento: adenina pareia com timina e guanina com citosina

(BUDOWLE, 2013).

Apesar de todas as pessoas possuírem DNA, o conteúdo informacional

que se faz presente em determinadas sequências de bases varia entre os

indivíduos, tornado capaz a identificação humana. O código genético humano

conta com um total de 3.164.700.000 bilhões de pares de bases, porem 99,6%

do DNA é igual entre todos os indivíduos, no entanto as variações que ocorrem

Page 9: O DNA COMO FERRAMENTA DE IDENTIFICAÇÃO HUMANA E A … DNA como ferrament… · The present work aimed to address the importance of the use of deoxyribonucleic acid (DNA) in the

7

nos 0,4% restantes permitem a variabilidade genética, com isso é comprovado

que não podem haver duas pessoas com o mesmo material genético, exceto

gêmeos monozigóticos (BUDOWLE, 2013).

As variações genéticas são denominadas de marcadores moleculares, e

através de algumas técnicas de biologia molecular, a análise destes

marcadores possibilita o estabelecimento do perfil genético de um indivíduo

(HOFSTATTER, 2013).

Os peritos ou cientistas forenses tem como função desenvolver e aplicar

técnicas de análise de amostras que ajudem na interpretação dos resultados.

As investigações feitas nos locais dos crimes são importantes para pesquisar

vestígios biológicos para serem analisados e com isso obter um resultado. O

DNA é o material mais analisado nas investigações criminais, pois ele

apresente uma maior resistência ao meio ambiente e maior facilidade de

manuseio, características que o tornam ferramenta fundamental na elucidação

de crime e identificação humana (SANTOS, 2014).

O estudo do DNA obtido de vestígios biológicos é um importante

instrumento de combate à criminalidade e à impunidade, uma vez que gera

provas, na grande maioria das vezes irrefutáveis, e que podem ser utilizadas

para inocentar ou incriminar uma pessoa. Assim, para que a técnica de

identificação pelo DNA seja plenamente construída, a amostra biológica a ser

analisada deve ser corretamente escolhida, coletada, transportada,

armazenada e processada. Este é um dos papeis dos peritos criminais e dos

cientistas forenses. Daí a importância dos estudos e formação sobre uma

coleta adequada, e extração e análise do DNA utilizado como prova forense.

O presente trabalho teve como objetivo, analisar a importância do DNA

na resolução dos casos forenses e caracterizar os métodos mais utilizados

para análise genômica através de uma revisão de literatura.

Page 10: O DNA COMO FERRAMENTA DE IDENTIFICAÇÃO HUMANA E A … DNA como ferrament… · The present work aimed to address the importance of the use of deoxyribonucleic acid (DNA) in the

8

2 METODOLOGIA

A metodologia consistiu no levantamento bibliográfico nos bancos de

dados Scielo, Biblioteca Digital Brasileira de Teses e Dissertações (BDTD) e

Google Acadêmico. Foram utilizados artigos e livros relacionados à

criminalística forense para a elaboração do texto e bibliografias. Os termos

utilizados na pesquisa foram DNA forense, análise de DNA, importância do

DNA para a Perícia e o levantamento foi feito a partir do ano de 2006 até os

dias atuais com pesquisas realizadas em português e inglês.

Page 11: O DNA COMO FERRAMENTA DE IDENTIFICAÇÃO HUMANA E A … DNA como ferrament… · The present work aimed to address the importance of the use of deoxyribonucleic acid (DNA) in the

9

3 DESENVOLVIMENTO

3.1 Identificação humana e criminalística

Por volta do ano de 1869 Friedrich Miescher, um bioquímico suíço,

descobriu o ácido nucleico, e com isso começaram a serem realizadas as

primeiras extrações de DNA, mas foi apenas no início do século XX que a

existência de dois ácidos nucleicos foi revelada: o ácido desoxirribonucleico e o

ácido ribonucleico (RNA) pelo bioquímico Albrecht Kossel. O DNA contém o

gene enquanto que o RNA serve como agente intermediário na atividade do

gene (GROCHOCKI; QUEIROZ, 2011). Atualmente a identificação humana faz

o uso do DNA para diversos tipos de casos como testes de paternidade, crimes

sexuais e homicídios (SCHUMM et al., 2013).

Nas células humanas podemos encontrar dois tipos de DNA, sendo eles:

DNA mitocondrial que é encontrado nas mitocôndrias e o DNA nuclear que se

encontra no cromossomo do núcleo. O DNA nuclear é linear e tem

aproximadamente 3 bilhões de pares de bases e é protegido por histonas

(BORGES-OSÓRIO; ROBINSON, 2013).

O DNA mitocondrial possui forma circular com fita dupla e possui mais

que 16.000 pares de bases, possui poucos genes, 37 no total, sendo 13 genes

codificadores de proteínas, 22 para RNA transportadores e 2 para as

subunidades ribossômicas. Este DNA é considerado como um genoma

compacto, pois raramente possui sequências repetitivas O DNA mitocondrial é

de grande importância para as análises forenses, pois ele é utilizado para

amostras como ossos, cabelos, dentes e em grandes desastres como

incêndios, explosões e queda de aviões onde já não se consegue fazer uso do

DNA nuclear (VIEIRA ,2011).

Antes da utilização do DNA, as análises eram feitas a partir de sinais de

nascença, arcada dentaria, melanina, anomalias genéticas, cor dos olhos e

tipagem sanguínea para os fatores ABO e RH, porém estas análises não

ofereciam uma boa precisão, pois seu índice de exclusão era muito baixo. O

primeiro teste de DNA para investigação de paternidade era feito através do

sistema HLA, entretanto o resultado era apenas 89% de certeza, o que gerava

muitas batalhas na justiça. Então na década de 80 um geneticista britânico

Page 12: O DNA COMO FERRAMENTA DE IDENTIFICAÇÃO HUMANA E A … DNA como ferrament… · The present work aimed to address the importance of the use of deoxyribonucleic acid (DNA) in the

10

chamado Alec Jeffrey desenvolveu um sistema que ele nomeou de “DNA finger

print” ou “impressão do DNA” (SCORSIN, 2000).

O DNA pode ser extraído a partir das amostras biológicas que são

encontradas no local do crime, como sangue, bulbo capilar, urina, sêmen e

outros vestígios deixados no local. A coleta dos diferentes tipos de amostras

biológicas varia de acordo com a cena do crime. Nos crimes sexuais destaca-

se a coleta do sêmen, considerado o material biológico mais comumente

investigado em casos de crimes sexuais, onde o DNA é extraído dos

espermatozoides. Nas cenas do crime a identificação do sêmen pode ser feita

através do teste com brentamina, que através de uma reação colorimétrica

destaca o sêmen com uma coloração púrpura, já no corpo delito, este material

biológico pode ser recuperado através dos fluidos vaginais ou anais da vítima

(VIEIRA, 2011).

Nos casos em que ocorre a contaminação do sêmen com outro material

biológico, incluindo o sêmen de um segundo agressor, a análise de regiões de

microssatélites existente no cromossomo Y permite a identificação do número

de amostras existentes (VIEIRA, 2011).

O cromossomo X possui maior vantagem em sua aplicação, pois em

testes de exclusão de paternidade, onde a amostra do suposto pai não está

presente, é analisado o DNA dos parentes mais próximos para que seja feito

uma reconstrução do seu perfil genético para que seja realizada uma análise

deste material. Porém para que esta análise seja irrefutável, há uma

necessidade de que vários parentes genotipados sejam utilizados nessa

investigação (SANTOS, 2014).

Com o advento do DNA, foi exposta a probabilidade de se examinar o

possível elo genético entre os possíveis pais, estando vivos ou mortos, em

crianças, recém-nascidos e ate no útero da mãe. Para que o teste seja

realizado, em primeiro lugar deve-se fazer o isolamento da amostra que será

investigada, e que em grande parte dos casos é realizado através de uma

amostra de sangue, pois proporciona uma maior quantidade e qualidade do

DNA, mas também podem ser utilizadas amostras de células da mucosa bucal

unha, pele, bulbo capilar e etc (SCORSIN, 2000).

Em casos de estupro é realizada uma análise para estabelecer o vínculo

genético de paternidade, onde a mulher é considerada a mãe biológica do filho,

Page 13: O DNA COMO FERRAMENTA DE IDENTIFICAÇÃO HUMANA E A … DNA como ferrament… · The present work aimed to address the importance of the use of deoxyribonucleic acid (DNA) in the

11

pois não há dúvidas diante deste vínculo biológico. Para a identificação do pai

é realizada uma investigação com os alelos paternos, que por obrigatoriedade

devem ser herdados pelos filhos, e através de cálculos estatísticos é

determinado o índice de paternidade (BUTLER, 2014).

3.2 Coleta de materiais biológicos

A escolha do material a ser analisado depende de como ele foi

encontrado e do seu estado de conservação, pois a forma como foi coletada, a

conservação e preservação do local do crime são de grande importância em

um tribunal, ocasionando assim resultados mais fidedignos. Os testes

moleculares requerem uma pequena quantidade de amostra biológica,

entretanto é requerido uma quantidade mínima para cada tipo de amostra que

permita a extração do DNA (LEITE et al, 2013).

A preservação dos vestígios biológicos durante a coleta é de grande

importância, e deve se ter um cuidado para que o material não seja

contaminado ou sofra alterações de fatores ambientais como aumento de

temperatura, variação de luminosidade e outros fatores que podem acarretar

quebra e alteração dos nucleotídeos, impossibilitando a utilização do DNA

(LEITE et al, 2013).

As amostras podem ser encontradas em diversas condições, o sangue

pode ser encontrado de forma liquida, seca ou congelada, comum em locais

frios, ou aderida a alguma superfície, exemplo: paredes, roupas, móveis,

instrumento utilizado no crime, corpo da vítima. O sêmen, da mesma forma que

o sangue, pode ser encontrado em forma liquida ou seca e fica aderido

normalmente em roupas intimas corpo da vítima, roupa de camas e dentre

outros. O acondicionamento de materiais biológicos molhados ou úmidos,

devem ocorrer em sacos plásticos estéreis e devem ser mantidos por no

máximo 2 horas, se for possível, é aconselhável que o material seque para que

só depois seja acondicionado (LEITE et al, 2013).

As amostras de sangue em estado líquido devem ser coletadas com

seringas ou pipetas estéreis descartáveis e armazenadas em um tubo estéril

contendo EDTA para que não haja uma coagulação, sob refrigeração. Na

forma seca, em roupas, lençóis ou outro objeto, a amostra deve ser enviada na

forma em que foi encontrada, já quando são encontradas em paredes ou

Page 14: O DNA COMO FERRAMENTA DE IDENTIFICAÇÃO HUMANA E A … DNA como ferrament… · The present work aimed to address the importance of the use of deoxyribonucleic acid (DNA) in the

12

qualquer outra peça que não possa ser enviada ao laboratório, o sangue deve

ser raspado (PARADELA, 2006).

O cabelo pode ser encontrado de forma isolada ou em tufos, na cama, mãos da

vítima, escovas de cabelo e é de grande importância que eles sejam

encontrados com bulbo, já a saliva que pode conter presença de células da

mucosa pode ser encontrada em forma liquida ou seca, em lenços, copos,

gomas de mascar e cigarro. A saliva não possui material genético, o que será

utilizado para a realização dos testes, serão as células da mucosa que estão

presentes na saliva. Este tipo de amostra biológica pode ser encontrado na

forma líquida ou seca, se encontrada no estado liquido deve ser coletada,

armazenada em recipientes estéreis, conservada em ambiente refrigerado e

sem iluminação (PARADELA, 2006)

3.3 Métodos de extração do DNA forense

A escolha da técnica de extração do DNA depende do tipo de amostra

coletada e do estado no qual foi encontrado. Os métodos de extração

consistem na quebra celular, precipitação das proteínas e isolamento do DNA

(BUTLER, 2012).

Uma das técnicas mais utilizadas na genética forense é a de extração

orgânica que utiliza o Fenol e Clorofórmio para promover uma remoção do

precipitado de proteínas, promovendo assim o isolamento do DNA. Este

método apresenta baixo custo e um grande grau de pureza do DNA, porém é

muito demorado e possui um grande grau de toxicidade. Para que se tenha

acesso ao DNA, é feita uma quebra celular para que sejam removidos restos

celulares, desproteinação do extrato celular e uma desnaturação, onde ocorre

a separação das proteínas do extrato celular e inativação das proteínas. Depois

de desnaturado as proteínas são removidas com uso de fenol e clorofórmio, e

após esse processo o DNA é purificado e recuperado. As limitações desta

técnica são pelo seu grande grau de toxicidade, podendo os seus solventes

serem encontrados no DNA a ser analisado (LEITE et al., 2013).

Outra técnica bastante utilizada é a de resina magnética, onde a resina

se liga ao DNA e os outros elementos da amostra irão permanecer em solução

aquosa. Esta resina possui o poder de atrair as moléculas de DNA, e mesmo

que haja uma grande quantidade de componentes celulares ela apenas se

Page 15: O DNA COMO FERRAMENTA DE IDENTIFICAÇÃO HUMANA E A … DNA como ferrament… · The present work aimed to address the importance of the use of deoxyribonucleic acid (DNA) in the

13

ligará ao DNA predestinado. A principal desvantagem desta técnica consiste na

necessidade de uma quantidade relevante grande da amostra para que a

resina consiga se ligar, e esse método é bem mais caro em relação aos outros

(LEITE et al, 2013).

Em vestígios resultantes de crimes sexuais, é verificado uma

modificação da extração orgânica devido a maior dificuldade de extração do

DNA dos espermatozoides comparado às células epiteliais da parede vaginal.

Esse procedimento separa a fase de quebra celular em duas: a primeira mais

branda, na qual sucede a lise das membranas celulares das células epiteliais

femininas, adquirindo a porção não espermática, e a segunda, mais resistente,

onde sucede a quebra das células espermáticas, adquirindo a porção

espermática (BONACCORSO, 2004).

A técnica de extração que utiliza a resina magnética é aplicada para

fazer uma captura do DNA, visto que esta resina possui uma capacidade

específica de ligação ao DNA, deste modo, mesmo que exista uma quantidade

em excesso do DNA em questão, a resina só terá afinidade por uma

determinada quantidade do DNA. As principais desvantagens desta técnica são

a necessidade de uma quantidade relativamente grande da amostra para que

esta resina consiga se ligar e esse o custo mais elevado do método em relação

aos demais (LEITE et al., 2013).

A técnica de Salting out tem a finalidade de ajudar na separação de um

solvente orgânico em água e aperfeiçoar as extrações em solventes orgânicos

apolares. As características físico-químicas desta amostra e o sal que será

utilizado irá determinar a eficiência deste procedimento. Que consiste na

adição de um sal inorgânico à uma solução aquosa e um dissolvente orgânico

que seja capaz de se misturar em água formando um sistema bifásico. Esta

técnica apresenta uma grande vantagem, pois tem capacidade de ser usada

em um grande conjunto de amostras, oferecendo melhores valores de

recuperação das amostras e apresentando uma grande variedade de sais

disponíveis (BORDIN et al, 2015).

Page 16: O DNA COMO FERRAMENTA DE IDENTIFICAÇÃO HUMANA E A … DNA como ferrament… · The present work aimed to address the importance of the use of deoxyribonucleic acid (DNA) in the

14

3.4 Amplificação e análise do DNA

Depois que o DNA é extraído e quantificado, ele deve ser amplificado.

Essa amplificação é realizada por intermédio da Reação em Cadeia da

Polimerase (PCR, do inglês polymerase chain reaction), que consiste na

utilização da enzima DNA polimerase e é capaz de reproduzir múltiplas

moléculas de fita dupla de DNA em um ciclo com três etapas (CORTE-REAL,

2015).

A PCR é realizada em um equipamento chamado de termociclador,

neste equipamento serão adicionados tubos com presença de reagentes como

Primers, ezimas DNA polimerase, solução de cloreto de magnésio, molécula de

DNA a ser duplicada, desoxirribonucleotídeos trifosfato e solução tampão

(BRUNO, 2017)

Desnaturação é a primeira etapa, e ocorre a uma temperatura de

aproximadamente 95°C e consiste na separação da fita, o segundo passo é o

anelamento onde vai ocorrer a uma temperatura entre 65°C e 50°C e vai

possibilitar que os primers se hibridizem com DNA. Os iniciadores, ou primers,

possuem uma sequência de 1 a 60 nucleotídeos complementares à fita alvo,

fazendo com que se liguem apenas na região específica da molécula de DNA

para a qual foi designado. O terceiro passo é o de extensão, onde a

temperatura aumenta para 72°C permite que a DNA polimerase sintetize novas

fitas de DNA. As três etapas se repetem por cerca de 30 ciclos, produzindo ao

final milhões de cópias do DNA de interesse (HEPP et al, 2017).

Ao final de todo procedimento são produzidas milhões de cópias de uma

determinada região definida pelos primers do DNA original. Esta técnica é

considerada sensível e específica, e pode ser feito uma análise do DNA de

qualquer espécie (HEPP et al, 2017).

Eletroforese em gel também é utilizada, e é uma técnica que possibilita

uma visualização do DNA pela separação das moléculas através de um campo

elétrico. O procedimento consiste na utilização de uma técnica gel de agarose

ou poliacrilamida, é solução que tenha capacidade de produzir eletricidade e

mantenha o pH constante. O polo positivo atrai a molécula de DNA, e ele vai

percorrer por todo o gel (ZAHA et al, 2014).

Page 17: O DNA COMO FERRAMENTA DE IDENTIFICAÇÃO HUMANA E A … DNA como ferrament… · The present work aimed to address the importance of the use of deoxyribonucleic acid (DNA) in the

15

Para que o procedimento seja rápido, a quantidade de nucleotídeos

deve ser baixa, pois quanto menos nucleotídeos houver mais rápido ele ira

percorrer pelo gel. No gel de poliacrilamida são utilizados corantes de nitrato de

prata e que ficam em coloração preta quando entram em contato com o DNA.

O gel de poliacrilamida tem grande eficiência na separação de fragmentos

pequenos de DNA, possui uma alta capacidade de resolução e é bastante

utilizado em casos forenses por sua rapidez e precisão, porém a preparação do

gel é mais complicada e de difícil manuseio. Já no gel de agarose são

utilizados o gelRed, SYBR green e brometo de etídeo, que possibilita uma

visualização do DNA quando exposto a uma luz ultravioleta, porém possui uma

capacidade em resolução bem menor em comparação com o gel de

poliacrilamida, mas apresenta um alcance bem maior na separação (ZAHA et

al, 2014) (LEITE et al., 2013).

A escolha do gel que será utilizado para que seja feita uma a analise vai

depender totalmente do tamanho dos fragmentos de DNA que deverá ser

visualizado. Devido à diferença no tamanho dos poros dos géis, o gel de

agarose é utilizado para que seja feita a separação de fragmentos maiores que

variam de 0,2 kb a 50 kb e o gel de poliacrilamida é utilizado para separar os

fragmentos menores de até 1kb (TODESCATTO, 2014).

A técnica das enzimas de restrição consiste na manipulação do DNA

que foi extraído fazendo a utilização das enzimas de restrição. As enzimas de

restrições podem ser obtidas de alguns microrganismos e tem o papel de fazer

fragmentos na fita dupla do DNA em pontos que exibem uma sequência

específica de nucleotídeos, denominado de sítios de corte. (WATSON, et al.,

2009).

Podem-se encontrar diversos tipos de enzimas de restrição, e cada tipo

identifica uma combinação de nucleotídeo, consentido aos cientistas a efetuar

cortes de maneira planejada. A EcoRI, isolada de Escherichia coli cepa RY13,

com sítio 5-GAATTC-3, a HaeIII, isolada de Haemophilus aegypticus, com o

sitio de corte 5-GGCC-3 e a Alu I, isolada da bactéria Arthrobacter luteus, cujo

sítio de corte é 5-AGCT-3 são exemplos de alguns tipos de enzimas de

restrição. (WATSON, et al., 2009).

As enzimas de restrição são muito utilizadas em técnicas de biologia

molecular com diferentes objetivos, como o de realizar manipulações genéticas

Page 18: O DNA COMO FERRAMENTA DE IDENTIFICAÇÃO HUMANA E A … DNA como ferrament… · The present work aimed to address the importance of the use of deoxyribonucleic acid (DNA) in the

16

para a criações de moléculas de DNA recombinante, o mapeamento genético,

a clonagem de genes para diagnostico por RFLP de mutações associadas a

doenças e para diferenciar cepas de microrganismo ou variantes virais

(BRUNO, 2017).

As ligases são enzimas que fazem a junção das partículas de DNA que

foram cortadas com as enzimas de restrição compatíveis, executando uma

combinação entre os fragmentos de DNA de organismos diferentes. A

utilização da ligase junto com a enzima de restrição possibilita um misto de

sequências de DNA de diferenciadas espécies e esta técnica é conhecida

como tecnologia do DNA recombinante. (WATSON, et al., 2009).

Page 19: O DNA COMO FERRAMENTA DE IDENTIFICAÇÃO HUMANA E A … DNA como ferrament… · The present work aimed to address the importance of the use of deoxyribonucleic acid (DNA) in the

17

4 CONSIDERAÇÕES FINAIS

O campo de análise do DNA está progredindo continuamente, tanto nas

áreas científicas, de pesquisas ou na área tecnológica. Os testes de DNA são

de grande importância para que os peritos criminais possam oferecer

resultados mais corretos, porém, para que haja uma fidelidade o material a ser

analisado deve ser coletado de forma cuidadosa para que não haja qualquer

tipo de contaminação da amostra.

Para se obter êxito na análise, é preciso que haja um isolamento na

cena do crime e que nenhum vestígio seja contaminado, pois o DNA é muito

sensível e qualquer descuido pode ocasionar uma contaminação causando

assim resultados infiéis. O DNA tem um papel muito importante em processos

de identificação humana no qual tem grande utilidade na análise de DNA para

casos forenses. O levantamento bibliográfico realizado neste trabalho indicou

que o campo da identificação humana através da análise do DNA tem crescido

exponencialmente e tem se tornado uma ferramenta de extrema importância na

obtenção de resultados mais fidedignos.

Page 20: O DNA COMO FERRAMENTA DE IDENTIFICAÇÃO HUMANA E A … DNA como ferrament… · The present work aimed to address the importance of the use of deoxyribonucleic acid (DNA) in the

18

REFERÊNCIAS

BONACCORSO, N.S. Análise Forense de DNA. São Paulo. 24p. 2004.

BORDIN, D. et al. Técnicas de preparo de amostras biológicas com

interesse forense. Scientia Chromatographica, v. 7, p. 125-143, 2015.

BRUNO, A. N. Biotecnologia II: Aplicações e Tecnologias. Artmed Editora, 2017.

BUDOWLE, B; Encode and its first impractical application Investigative

Genetics , 4:4, 2013

BUTLER, J. M. Advanced topics in forensic DNA typing: interpretation.

Academic Press, 2014.

BUTLER J.M, Hill C.R. Biology and genetics of new autosomal STR loci

useful for forensic DNA analysis. Forensic Sci. Rev 24:15, 24p, 2012

CORTE-REAL, F, VIEIRA, D.N . Princípios de genética forense. Imprensa da Universidade de Coimbra, Coimbra University Press, 2015.

DHANARDHONO, T et al. DNA profiling of disaster victim identification in

Trenggalek shipwreck case. Forensic Science International: Genetics

Supplement Series 4:5-6, 2013.

GROCHOCKI, T.M; QUEIROZ, P.M; Análise do DNA em vestígios

encontrados na cena de crime por meio de microssatélites. Brasília, 2011.

LEITE, V. S. et al. Uso das técnicas de biologia molecular na genética

forense. Derecho y Cambio Social, v. 10, n. 34, p. 21, 2013.

HOFSTATTER, P.P; Identificação humana por DNA mitocondrial. Brasília, 2013. HEPP, D; DE NONOHAY, J. S. A importância das técnicas e análises de

DNA. ScientiaTec, v. 3, n. 2, p. 114-124, 2017

Page 21: O DNA COMO FERRAMENTA DE IDENTIFICAÇÃO HUMANA E A … DNA como ferrament… · The present work aimed to address the importance of the use of deoxyribonucleic acid (DNA) in the

19

MARTINS, C, A, P. Quantificação de DNA por PCR em Tempo Real em

diferentes Amostras Forenses. 2017.

PARADELA, E. R; FIGUEIREDO, A. L. de S; SMARRA, A. L. S.. A identificação

humana por DNA: aplicações e limites. In: Âmbito Jurídico, Rio Grande, IX, n.

30 jun ,2006.

SANTOS, S.M; Identificação Humana como Ferramenta de Investigações

Criminais: Estudo de Frequências Alélicas de Marcadores de Interesse

Forense no Estado de Pernambuco. Recife, 2014.

SCHUMM, J.W; GUTIERREZ, U.M.C; TAN, E; SELDEN, R; A 27 Locus STR

Assay to Meet All United States and European Law Enforcement Agency

Standards. J Forensic Sci 58:6, 2013

SCORSIN, D. R. A. A análise em DNA na investigação de paternidade,

2000.

SILVA, L. A. F.; PASSOS, N. S. DNA forense: coleta de amostras biológicas

em locais de crime para estudo do DNA. 2. ed. Maceió: Ed UFAL, 2006.

VELHO, J. A; GEISER, G. C; ESPÍNDULA, A. Ciências Forenses: Uma

Introdução às Principais Áreas da Criminalística Moderna. Campina. Millenium,

2013.

TODESCATTO, C. Obtenção de fermento lático endógeno para produção

de queijo típico da mesorregião sudoeste do Paraná. Dissertação de

Mestrado. Universidade Tecnológica Federal do Paraná, 2014.

VIEIRA, S. Genética Forense. São Paulo, 2011.

ZITKIEWICZ, E et al. Current genetic methodologies in the identification of

disaster victims and in forensic analysis. J Appl Genetics 53:41–60, 2012.

Page 22: O DNA COMO FERRAMENTA DE IDENTIFICAÇÃO HUMANA E A … DNA como ferrament… · The present work aimed to address the importance of the use of deoxyribonucleic acid (DNA) in the

20

ZAHA, A. FERREIRA, H. B.; PASSAGLIA, L. M. P. Biologia Molecular Básica.

5. ed. Porto Alegre: Artmed, 2014.

WATSON, J.D; MYERS, R.M; CAUDY, A.A; WITKOWSKI, J.A. DNA

Recombinante Genes e Genomas. 3. Ed. Porto Alegre: Artmed, 2009.