trabalhoo mestrado

7/22/2019 trabalhoo mestrado

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Avaliao da Contaminda gua por hormnio

matriz biolgicaOrientador: Prof. Dr. Fernando Schimidit

Colaboradora: Prof. Dra. Simone Sabia UFG ICBIV Laboratrio de ComCelular

Linha de Pesquisa: Fontes Alternativas de gua

Instituto Federal de Educao, Cincia e Tecnologia dePrograma de Ps-Graduao Stricto Sensu em Tecnologia de Proce


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Sustentabilidade

Preocupao mundial

Economia de gua

Controle de qualidade da gua

Descontaminao de guas


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Poluentes emergentes

Agrotxicos

Influenciadores, indutivos ou obrigatrios

Hormnios

Concentrao em ngL-1


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Micropoluentes

Formas ativas

Bioacumulativas

Disruptores Endcrinos, Exgenos e Endgenos

Sistema de tratamento insuficiente


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Hormnios

Esterides

Obrigatrios

Deficincia ou excesso

Naturais e sintticos


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Tibolona

Hormnio Sinttico (Rymer, 2002)

Esteroide com funo exgena e endgena (British Pharmac

Possui atividade especfica em diferentes tipos de tecido (Ke

Speroff, 2005)

Indicado para mulheres na menopausa com no mnimo um ultimo evento menstrual. (Rymer, 2002)


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Tibolona Administrado via oral em doses de 2,5 mg dirias

Possui mnimos efeitos colaterais

Pode ser utilizado em mulheres com cncer de mama

Corta efeito de ondas de calor, ressecamento vaginal, prote

aumenta ndice de HDL, diminui triglicrides e doenas card

Efeitos equivalentes a: Etinilestradiol, Gestodeno e Estrgeno


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Tibolona

Aumento de prescrio mdica

Nenhum trabalho relacionado a presena deste hormnio n

Nenhum trabalho publicado com matriz biolgica contamin

hormnio

Livial - Supera, Klimater (S) Cifarma, Libiam (S) Libbs, LivBiolab Sanus, Farmcia Magistral


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Poecilia Reticulata Barrigudinho ou Guppy

Variam de tamanho de 2 a 5 cm

Os machos so mais coloridos e vistosos porm de menor voAs fmeas so mais simples e maiores.

Peixes pacficos, de fcil reproduo e resistentes a poluente

Alteram suas caractersticas biolgicas e metablicas para sambiente.

Aceito mundialmente como indicador biolgico em estudos


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Objetivo Geral

Avaliao da resposta de peixes vivendoambiente contaminado pelo hormnio sintconhecido comercialmente como Tibolona.


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Avaliar toxicidade da Tibolona em guas de rios

Avaliar a influncia da presena de disruptores endcrinos eciclo de vida

Determinar concentrao letal da Tibolona para o Guppy

Determinar formas de contaminao sofrida pelos peixes

Avaliar impacto da contaminao em rgos vitais e sistem

Avaliar degradao natural da Tibolona em guas de rios

Objetivos Especficos


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ExperimentaoDisposio dos animais

[CELLRANGE];[PORCENTAGEM]




Co

Grupo

Grupo

Grupo

Grupo

Cada copor 4


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Figura 1: Esquema dos aq

ExperimentaoEsquema do sistema


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Sistema Utilizado UFGLaboratrio de Comportamento Ce

Imagem 1: Disposio dos aq


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ExperimentaoEsquema do sistema

Os pealocaaleat

Evitarlumintemp

Os grsepar

Figura 2: Esquema dos aqurios em paralelo


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Imagem 2: Aqurios em paralelo


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Experimentao

Coleta dos peixes: Piscicultura na ETE de Goinia

Aclimatao 1: gua sem cloro e oxigenada 48 horas

Separao de machos e fmeas

Aclimatao 2: Peixes so transferidos para aqurios limpos

descontaminados onde sero expostos

Contaminao do ambiente e observao por 24 horas.

Sacrifcio e Fixao


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Concentrao 6,25 e 3,14 g/mL

Volume de solvente (MeOH): 5,0 mL

Volume de gua: 4 litros

Tempo de exposio esperado 24 horas

Expectativas e Pontos a serem avaliados:

Concluso do Tempo de Exposio Alteraes comportamentais

Alteraes bioqumicas em tecido e endcrino

Alteraes em nveis celulares de fgado, brnquias e gnada.

ExperimentaoExpectativas do experimento


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Resultados 6,25 e 3,14 g/mL

Alteraes Comportamentais do Grupo Controle

O grupo controle no apresentou nenhum tipo de alterao docomportamento do animal.


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Alteraes Comportamentais do Grupo Controle Negativo

Aumento de agressividade nas primeiras 5 horas de observao

Aumento na velocidade de deslocamento do animal pelo aqu

Normalizao do efeito aps as 5 horas de exposio

Para exposio em concentrao de menor no houve altcomportamento dos peixes



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Alteraes comportamentaisdo Grupo Exposio Lquida

Para Fmeas:

30 min - Defecao

1h Permaneceram nasuperfcie

2h 2 animais estavamnadando freneticamente

4h todas as fmeas nadavam

muito lentamente

6h perca do senso deequilbrio, nadando curvado

7h Nadavam para trs

8h Midrase e se chocavamcontra as paredes do aqurio

9h - Morte

Alteraes comportamdo Grupo Exposio L

Para Machos:

1h 2 animais nadafreneticamente

2h Todos com midchocavam contra onadavam sem diresentido.

3h

Escurecimento 4h - Morte

Resultados 6,25 g/mL


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Para as Fmeas Defecaram assim que entraram em contato com a substncia

Leve alterao de cor

Sem alterao aparente de comportamento

Para os Machos

Midrase em 2 horas

Alterao de cor

Leves mudanas de comportamento na 5 primeiras horas

Resultados 3,14 g/mL


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Alteraes Comportamentais do Grupo Exposio Matria P 30 min Comportamento normal, os animais comeram a Tibolon

2h Os animais permaneciam imveis. As Fmeas na Superfcie fundo.

4h Os animais estavam imveis: Os Machos na superfcie e as Ffundo.

6h

Permaneceram imveis e aglomerados at o fim do experim No houve morte.



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Comportamento

Imagem 3: Grupo Tibolona dissolvida - m


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Comportamento

Imagem 4: Grupo Tibolona matria prima - m


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Sacrifcio

Pesagem: Bquer com gua tarado

Medio de tamanho: Paqumetro

T Tamanho

TP Tamanho Total ou Padro

Dessecao

Fixao: Paraformoldedo


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Peso (mg) Macho Fmea

Mdio 96,4

Mximo 216,6

Mnimo 53,3

Tamanho Total (mm) Macho Fmea

Mdio 1,9

Mximo 2,7

Mnimo 1,6

Tamanho Parcial (mm) Macho Fmea

Mdio 1,4

Mximo 2,1

Mnimo 1,0

Experimentao e Resultados


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Fgado: 3 das 6 Fmeas do Grupo Exposio Lquida apresentaram esc

fgado e uma com fgado se desintegrando

3 Machos e duas fmeas do Grupo Exposio Matria Prima apfgado plido.

Brnquias: Sem Alterao

Gnada: Sem alterao Vescula Biliar: 85% dos peixes estavam com Vsicula Biliar co

alterado

Determinao da concentrao letal: 6,25 g/mL



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Imagem 5: Peixes sacrificados e fixados em rea

Imagem 6: Micrografia das brnquias do grupo controle


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Imagem 6: Micrografia das brnquias do grupo controle

Imagem 7: Micrografia das brnquias do grupo tratado


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Imagem 8: Micrografia do Fgado do grupo controle

Imagem 9: Micrografia do Fgado do grupo tratado


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Prximas etapas

Avaliao celular de rgos Fixados em Paraformoldedo. Exposio de 96 horas

Exposio de 24 e 96 horas para grupos mistos

Dessecao e fixao de Orgos para avaliao celular

Avaliao da degradao da tibolona

Bsica, cida, Oxidativa, Trmica, Fotoestabilidade e Umidade

Investigao e avaliao de tibolona presente nos tecidos d


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Concluso ao fim do Experimen

As Fmeas tem maior tolerncia ao hormnio Peso e aumento de metabolismo

Os machos sofrem efeito maior e mandam respostas mais rexposio

O etanol no apresente grandes efeitos

A Tibolona em p parece no ter grande efeito sobre os pei

A Tibolona dissolvida em etanol tem efeito devastador

Maiores concluses a nvel celular


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Referncias

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SANTANA,J. A ameaa dos desruptores endcrinos. Agraecol. E Desenv.Porto Alegro. v.2 n.3, jul/set 2011.

BILA, D.M.; DEZOTTE, M. Desreguladores endcrinos no meio ambiente: efconsequncias. Univerisdade Federal do Rio de Janeiro, 2007.

GUIMARAES, J.R.P.F. Desreguladores Endocrinos no meio ambiente: um psade pblica e ocupacional. 2005

KLOOSTERBOER, H.J. Tissue-selectivity the mechanism of action of tiboloneResearch and Development Laboratories P.D box.20. The Netherlands, 20

RYMER, J. Why Tibolone is Different? Guys St Thomas Hospital, Guys St ThomMedicine, United Kigdoom, 2002.

KENEMANS, P.; SPEROFF, L. Tibolone: Clinical recommendations and praticreport of the Internetional Tibolone Consensees Group. Oregon Health ScPortland, USA. 2004.

ALBERTEZZI,P. RAFFAELE, M. ZANARDI, E. Tibolone a Review. Centro di FisioMenopausa, Bologna, Itally. 2004

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