VII Congreso naCIonal del laboratorIo ClínICo - labclin.orgjosepr37/sociedades/labclin/images/site/pdf/... · resolución de la enfermedad. Exposición del caso clínico: Antecedentes:

Lib

ro

de

co

mu

nic

ac

ion

es

VII Congreso naCIonal del laboratorIo ClnICo

23/25 octubre 2013Palacio de CongresosEuskalduna Jauregia

ilbaoB

isbn 10: 84-695-8699-8isbn 13: 978-84-695-8699-0

Queda prohibida la reproduccin total o parcial de los textos y grficos contenidos en esta publicacin, tanto en soportes digitales, electrnicos, mecnicos, como impresos sin previo conocimiento y autorizacin escrita de los editores.

Vii congreso nacional del Laboratorio clnico 3

ndice

comunicaciones PsTer

Autoinmunidad........................................................................................................4

Citogentica.y.biologa.molecular..........................................................................20

Diagnstico.y.tratamiento.de.la.infertilidad............................................................55

Endocrinologa......................................................................................................71

Enfermedades.infecciosas.y.microbiologa..........................................................108

Errores.metablicos,.diagnstico.prenatal...........................................................156

Estudios.y.casos.clnicos.....................................................................................182

Evaluacin.de.instrumentos.y.mtodos,.Point-of-care.e.interferencias................ 304

Frmacos:.Monitorizacin-Toxicologa.................................................................400

Funcin.renal......................................................................................................407

Garanta.de.calidad,.informtica.y.gestin...........................................................422

Hematimetra.y.coagulacin................................................................................460

Marcadores.cardiacos.y.riesgo.cardiovascular....................................................473

Marcadores.tumorales.........................................................................................492

Miscelnea..........................................................................................................505

Protenas.y.pptidos............................................................................................547

Vitaminas,.nutricin.y.elementos.traza................................................................565

ndice de auTores ............................................................................................................ 576


comunicaciones

Autoinmunidad

001GEstin ClniCA En El lABorAtorio dE AutoinmunidAd: EliAtm Ctd (ConnECtivE tissuE disEAsE) sCrEEn y ProtoColo diAGnstiCo CostE-EfECtivo dE lAs EnfErmEdAdEs dEl tEJido ConJuntivo (EtC)

J. Ferrer Caabate, B. Delgado Bertoln, M.I. Vials Bellido, J.M. Egea Caparrs, A.P. Espn Snchez, V. Nicols Serrano, A. Prez Martnez

Hospital General Universitario JM Morales Meseguer, Murcia, Servicio Murciano de Salud

La ayuda al diagnstico de una ETC proporcionada por la determinacin de anticuerpos antinucleares (ANA) por inmunofluorescencia indirecta (IFI) en HEP2 est supeditada a variabilidad segn interpretacin subjetiva, diluciones empleadas, posible presencia de patrones mixtos y la falta de especificidad y sensibilidad de los patrones nucleares.

Con la introduccin en noviembre-2011 en nuestro laboratorio del screening CTD (emplea antgenos recombinantes frente a anticuerpos IgG no slo tipo Ro/SSA, La/SSB, Scl70, U1RNP, RNP70, Sm, CENP y Jo1, sino adems PCNA, fibrilarina, RNApol-III, Mi-2 y DNA nativo) y en base a los resultados obtenidos ese ao, nos planteamos su repercusin en un protocolo diagnstico coste-efectivo de ETC. Valoramos igualmente qu autoanticuerpos especficos deberamos determinar por protocolo segn el patrn IFI obtenido.

Recibimos en 2012 un total de 4128 solicitudes de ANA (junto a DNA y ENAs), de origen tanto hospitalario como ambulatorio. Nuestro protocolo de actuacin hasta la fecha se basaba en una valoracin en cascada segn los resultados obtenidos:

ANA negativo sin orientacin diagnstica: fin del estudio (no se realizaba CTD ni DNA nativo (nDNA) por IFI).

ANA positivo o negativo con sospecha firme de ETC: se valoraba realizar screening CTD.

CTD positivo o dudoso: se realizaban determinaciones de todos los autoanticuerpos disponibles (Ro/SSA, La/SSB, Scl70, U1RNP, RNP70, Sm, CENP y Jo1) y/o

CtdAnA T=4128 sin Ctd Con Ctd Positivo negativo dudoso no procede

Positivos 946 200 746 177 470 41 (1ro, 4 dnA) 58

negativos 3182 2982 200 11(10 Ro)

152 10 (1 Ro) 27

Tabla 1

ANA negativo ANA positivo

N peticiones con...==>

CTD no realizado CTD negativo

CTD positivo

(realizado por sospecha diagnstica)

CTD dudosoNo procede

CTD

CTD

negativo

CTD

dudoso

No procede

CTD

2982 152 11 10 27 470 41 58

CTD (4,21 euros) 12554,22 113.67 244.18

DNA (2.58 euros) 7693,56 392.16 69.66 1212.6 149.64

8 autoanticuerpos(3.88 euros/determinac.)

4718298.76

(hacemos slo antiRo)

271.6(haciendo

antiRo)838.08 14588.8

1113.56(hacemos

slo antiRo)1800.32

Tabla 2: ahorro estimado por tcnica

Tabla 3: ahorro en autoanticuerpos segn patrn observado en ifi

Moteado (44%) Homogneo (26%) Nucleolar (18%) Centrmero (9%)Ac a realizar si CTD positivo(segn bibliografa&resultados ao 2012) Ro,La,RNP Ro,La,RNP,Sm Scl70, Ro Cenp

Ahorro (no realizar otros autoAc) 1071 489 675 407

totAl AHorro: 51399.81 E/ao(4283.32 E/mes)


de DNA por IFI en casos con sospecha de LES y/o seguimiento de la enfermedad.

CTD negativo: fin del estudio. Seguimiento nefritis lpica: nDNALa determinacin de ANA se realizaba en portas con

sustrato HEP2 de Imunoconcepts, y la de nDNA en portas de Crithidia luciliae (Menarini diagnostics), ambas tcnicas preparadas en un AP22 Speedy IFI. La determinacin de CTD y de los autoanticuerpos Ro, La, Scl70, CENP, Sm, Jo1, U1RNP y RNP70 con reactivos ELIA de ThermoFisher en un autoanalizador Immunocap 250.

La implementacin del screening CTD en un protocolo diagnstico coste-efectivo de ETC incrementa la utilidad diagnstica de este protocolo, permitiendo adems un ahorro conjunto considerable y posibilitando la adquisicin de nuevas tcnicas con una mnima inversin del ahorro obtenido.

002muJEr dE 46 Aos Con EsClErosis mltiPlE dE Curso rPido y AGrEsivo y AntiCuErPos Anti-Hu

A.J. Paredes Fuentes, L. Jimez Gamiz

Hospital Universitario Virgen de las Nieves, Granada

introduccin: Los sndromes neurolgicos paraneoplsicos (SNP) son infrecuentes, y causados por efectos remotos de un tumor, y no directamente por lesiones de la masa tumoral, metstasis, infecciones, factores nutricionales o tratamiento antitumoral. De entre los tumores asociados a los SNP, el cncer de pulmn de clulas pequeas es el ms frecuente, aunque se han descrito casos de timoma, carcinoma y teratoma ovricos, cncer de mama, cncer testicular y enfermedad de Hodgkin. El diagnstico de los SNP es muy importante dado que los sntomas neurolgicos preceden invariablemente a los sntomas directos del tumor primario, y el tratamiento en etapas iniciales supone mayores posibilidades de xito en la resolucin de la enfermedad.

Exposicin del caso clnico:Antecedentes: Mujer de 44 aos diagnosticada de

esclerosis mltiple tipo remitente-recurrente, con acmulo de discapacidad importante en unos 20 meses de evolucin. ltimo brote hace un mes. En tratamiento inmunomodulador con interfern beta-1b desde hace dos meses.

Motivo de consulta: Cansancio general, parestesias en ambas piernas y abdomen, dificultad para hablar y tragar, decaimiento, cambios bruscos de humor, estrs.

Exploracin fsica: TA 105/65, afebril, alerta, aspecto cansado, poco colaboradora, pares craneales normales, hipoestesia desde parte alta del abdomen hasta pies, estacin estable, prueba de Romberg negativa, marcha inestable (precisa bastn), diplopia en la mirada conjugada a la derecha, nistagmo horizontal lateral y en supraversin, campimetra normal, no alteracin motora (claudica el miembro superior izquierdo).

Pruebas complementarias:Hemograma y coagulacin: parmetros dentro de la

normalidad.

Bioqumica: parmetros bsicos (glucosa, urea, creatinina, iones), perfil heptico, metabolismo lipdico, enzimas musculares, inmunoglobulinas, protena C reactiva (PCR) y perfil tiroideo dentro de la normalidad.

Se solicita determinacin de anticuerpos anti-NMO (acuaporina 4) para despistaje de neuromielitis pica, con resultado negativo, y estudio bsico de autoinmunidad.

Estudio de autoinmunidad: anticuerpos antinucleares (ANAs) >1/320 (patrn moteado) [1/100) en tres ocasiones.

Ante los hallazgos de laboratorio, sugerentes de proceso paraneoplsico, se emprende despistaje tumoral mediante tcnicas de imagen y determinacin de marcadores tumorales.

PET/TC: no se aprecian lesiones hipermetablicas que sugieran la presencia de actividad tumoral macroscpica. En regin abdominal se observa, como hallazgo incidental, un ndulo hipodenso en glndula adrenal izquierda, compatible con adenoma no funcionante.

Marcadores tumorales: CEA, AFP, CA 19.9, CA 125, HCG, CA 72.4, CYFRA 21.1 negativos.

discusin: Los anticuerpos anti-Hu (ANNA-1) estn dirigidos contra protenas bsicas de unin al RNA de los ncleos de neuronas del SNC y SNP, y se asocian principalmente con encefalomielitis paraneoplsica y neuropata sensitiva. Su presencia debe dirigir la bsqueda inicial de un tumor oculto hacia la deteccin de un carcinoma pulmonar de clulas pequeas, ya que ste se presenta en el 80% de los casos. Si la bsqueda inicial es negativa, como el caso que nos concierne, el tumor puede aparecer muchos meses despus del inicio de los sntomas neurolgicos, por lo que debe hacerse un estrecho seguimiento del paciente.

003AntiCuErPos AntitrAnsGlutAminAsA tisulAr Como indiCAdor dE BioPsiA En lA EnfErmEdAd CEliACA

M. Oliveira Rodrguez, A. Arenas Pavn, E. Lpez Gmez, B. Gutirrez Cecchini, R. Venta Obaya

Hospital San Agustn, Avils

introduccin: La enfermedad celaca (EC) es una enfermedad sistmica inmunomediada que afecta al intestino delgado, producida por la ingesta de gluten y prolaminas relacionadas, en individuos genticamente predispuestos. Las manifestaciones clnicas de la EC son muy variadas. Se caracteriza por la presencia de atrofia de las vellosidades, anticuerpos especficos y haplotipos HLA (DQ2 y DQ8).

La nueva gua diagnstica publicada por la Sociedad Europea de Gastroenterologa, Hepatologa y Nutricin Infantil (ESPGHAN) en el 2012 seala que en nios sintomticos con altos niveles de anticuerpos antitransglutaminasa tisular (ATG) (>10 veces el lmite superior de la normalidad) se puede evitar la biopsia intestinal si los HLA y los anticuerpos


antiendomisio (EMA) son positivos y muestran una buena respuesta a la dieta sin gluten. Se ha comprobado que estos valores elevados de ATG tienen un alto valor predictivo positivo para la presencia de atrofia de vellosidades.

objetivo: Examinar los resultados positivos de ATG en pacientes adultos con sospecha de EC y determinar si se podra evitar realizar la biopsia intestinal en aquellos sujetos con ttulos elevados de anticuerpos.

material y mtodos: El periodo de estudio comenz en enero de 2011 y finaliz en abril de 2013, recogindose un total de 120 pacientes con ATG positivos (30 hombres, 56 mujeres y 34 nios) con edades comprendidas entre 1-85 aos. Las muestras fueron procesadas por enzimoinmunoanlisis con un kit de anti-tTgIgA (Evolis, Bio-Rad, punto de corte 15 U/mL). Se realiz una revisin de las historias clnicas con el fin de comprobar los resultados de las biopsias y el diagnstico final. El estudio estadstico de los datos se realiz con el programa SPSS (v15.0). La distribucin de las variables se estudi mediante la prueba de Shapiro-Wilk. Al no presentar los datos una distribucin gaussiana, las asociaciones entre las variables se estudiaron utilizando el coeficiente de correlacin de Spearman. La significacin estadstica se fij en p < 0,05.

resultados: La revisin de los datos mostr que slo en el 36% de los adultos se haba realizado la biopsia. En el caso de los nios, se realiz biopsia en el 24% y 11 de 34 haban sido diagnosticados de EC por aplicacin de los nuevos criterios de la ESPGHAN sin realizacin de biopsia y con respuesta a la dieta sin gluten. En adultos, en el estudio de correlacin se obtuvo una asociacin significativa de los ATG con el resultado de la biopsia expresada en funcin de los criterios de Marsh (r=0,814, p


de anticuerpos antimicrosomales de hgado y rin tipo 1 (LKM1), ms frecuente en la edad peditrica y se asocia con ms frecuencia a otras enfermedades autoinmunes. Suele tener peor pronstico por evolucionar de forma rpida a cirrosis y por presentarse frecuentemente como hepatitis fulminante. Por lo general, puede ser controlada con un tratamiento a base de esteroides y otros inmunosupresores. Presentamos un caso de hepatitis autoinmune que por su rareza, y ser el segundo caso diagnosticado de tres hermanos, nos parece relevante comunicar.

descripcin caso clnico:Antecedentes personales y familiares: Nia de 11 aos

que ingresa en nuestro hospital derivada de su Centro de Salud. Padres sanos, un hermano con anemia ferropenica y otro con hepatitis autoinmune tipo II. Crecimiento y desarrollo sin incidencias. Bien vacunada y sin alergias.

Exploracin fsica: Ictericia de una semana de evolucin que en los ltimos tres das se intensifica junto con abdominalgia y vmitos escasos. Refiere astenia y mialgias de miembros inferiores. Orinas algo colricas y heces normales. Buen estado general. Tinte ictrico en piel y mucosas. No signos menngeos ni dificultad respiratoria. Cardio-pulmonar normal. Abdomen blando y depresible, con hepatomegalia de 1-2 cms. Resto normal.

Pruebas complementarias: Hemograma y coagulacin normal. Estudio bioqumico: GOT 1694 U/l, GPT 1283 U/l, GGT 59 U/l y Bilirrubina total 14 mg/dl, fosfatasa alcalina 694 U/l. Perfil tiroideo normal, hierro, cobre y ceruloplasmina normales. Serologa de hepatitis A, B, C negativas. Virus CMV y herpes negativos. Positivo de Ig G de varicela y VEB.

Estudio inmunolgico: IgA, IgM normal. IgE 1172 UI/ml e IgG 2770 mg/dl. ANA positivos (Patrn homogeneo, ttulo 1/640), anti-DNA negativo. Anticuerpos asociados a hepatitis autoinmune: anti-LKM positivo, anti-msculo liso, anti-citosol del hepatocito, anti-antgeno soluble heptico negativos.

Ecografa abdominal: dudosa alteracin de la ecoestructura del parnquima heptico (hepatopata crnica).

Biopsia heptica: Hallazgos histolgicos compatibles con una hepatitis autoinmune con intensa actividad, amplia necrosis y afectacin de limitante y componente fibrtico cicatricial extenso.

diagnstico y evolucin: Los datos clnicos, antecedentes familiares, el aumento de bilirrubina, transaminasas y gammaglobulinas, junto con los anticuerpos ANA y anti-LKM positivos confirman el diagnstico de hepatitis autoinmune tipo II. Se inicia el tratamiento con prednisona 60 mg/dia, con descenso de cifras de bilirrubina y transaminasas, cursando alta domiciliaria con revisiones en la consulta de Digestivo Infantil.

Conclusiones: La deteccin de anticuerpos anti-LKM y los antecedentes familiares ha sido fundamental para el diagnstico de la hepatitis autoinmune tipo II, siendo especialmente interesante por la coexistencia de dos casos de hepatitis autoinmune tipo II en dos hermanos.

006sndromE HEmofAGoCtiCo: A ProPsito dE un CAso

M.A. Baos Llorente, M.D. Blanco Mercad, M.C. Ambrs Marigomez

Complejo Asistencial de Len, Len

introduccin: El sndrome hemofagoctico consiste en una alteracin de los lintocitos T y clulas NK, en los que se produce un aumento en la produccin de citocinas, lo que conduce a una activacin y proliferacin incontrolada de macrfagos e histiocitos en mdula sea, bazo, hgado y ganglios linfticos. sto lleva a una intensa actividad fagoctica de clulas hematopoyticas provocando pancitopenia, hepatoesplenomegalia, linfadenopatas y dao tisular irreversible. Puede ser de causa gentica o reactivo, generalmente por infeccin.

Exposicin del caso: Varn de 18 aos que acude a Urgencias por fiebre y odinofagia de una semana de evolucin. Refiere tambin nauseas, vmitos y coluria. Ha seguido tratamiento antibitico con betalactmicos, sin observar mejora. Los das previos a su ingreso ha presentado exantema no pruriginoso en tronco.

Exploracin fsica: Temperatura. 38,6C. Ictericia conjuntival, microadenopatas laterocervicales bilaterales y submandibulares, abdomen blando, discreta hepatomegalia a la palpacin y leve esplenomegalia. Exantema macular no pruriginoso en tronco. Resto de exploracin normal.

Hemograma: Hb: 12,7g/dl; L:7.600/L (22%Segmentado; 7%C; 2% Metamielocitos; %4%Linfocitos; 15% Monocitos), Plaquetas: 97.000/L; Coagulacin normal.

GOT: 700 U/L; GPT: 720 U/L; ALP: 764 U/L; GGT: 185U/L; BT: 4,76mg/dl; BD: 3,98mg/dl; LDH: 1.964U/L; PCR: 16 mg/L.

Paul-Bunnell Positivo.Serologas: Ig M frente al Virus del Epstein-Barr positiva,

Anti-HBs positiva, VHA, VHC, VIH, Les y CMV negativos.Hemocultivos y urocultivos negativos.Ecografa abdominal: hepatomegalia sin LOES, mltiples

adenopatas de aspecto inflamatorio. Esplenomegalia homognea. Lquido libre intraperitoneal.

Evolucin: con tratamiento sintomtico, aparece elevacin de la temperatura hasta 39C, aumenta la odinofagia y el tamao de las adenopatas.

En la analtica aparece leucocitosis con desviacin izquierda. Se prolonga el INR que no mejora con la administracin de vitamina K. Empeora la bioqumica heptica y aumentan los reactantes de fase aguda, mantenindose conservada la funcin renal.

Se solicitan Rx trax y senos paranasales con resultados normales, se inicia tratamiento con glucocorticoides para mejorar la actividad inflamatoria y antibioterapia de amplio espectro a la espera de hemocultivos y urocultivos.

36h ms tarde presenta disnea y confusin, por lo que se traslada a UCI.

Durante su estancia en UCI presenta: fallo heptico, elevacin de triglicridos y ferritina, asocindose pancitopenia y fracaso renal. Las pruebas de autoinmunidad son negativas. Neurolgicamente presenta encefalopata. Persisten fiebre, citopenias y alteraciones de la coagulacin.


Se realiza aspirado de mdula sea en cresta iliaca, confirmndose la sospecha de sndrome hemofagoctico.

Se realiza un estudio gentico con sondas especficas no mostrando afectacin alguna.

A pesar de pautar un tratamiento adecuado el paciente presenta un fracaso multiorgnico irreversible entrando en parada cardiorrespiratoria con desenlace fatal.

Conclusin: El sndrome hemofagoctico es un sndrome grave, infrecuente e infradiagnosticado. En la mayora de los casos de hemofagocitosis los resultados del aspirado de mdula sea son negativos al inicio del cuadro lo que hace muy importante tener esta patologa en cuenta ante todo paciente que tras un proceso inflamatorio presente alteraciones analticas tanto bioqumicas como hematolgicas e inmunolgicas no explicadas por el proceso inflamatorio ni por ninguna otra causa conocida.

007EstimACin dE lA PrEvAlEnCiA dE miAstEniA GrAvis En Adultos En nuEstrA rEA sAnitAriA

J.F. Ruiz Escalera, L. Snchez Godoy, E. Pitters Prez, C. Liranzo Medina, M.. Garca Rivero, A. Martn Garca

Hospital Regional Universitario Carlos Haya, Mlaga

introduccin: La Miastenia Gravis (MG) es una enfermedad neuromuscular autoinmune y crnica. La principal causa patognica es la existencia de auto-anticuerpos sricos que al unirse a los receptores de acetilcolina nicotnicos de la membrana muscular de la placa motora alteran la transmisin neuromuscular. Se caracteriza por grados variables de debilidad de los msculos esquelticos (voluntarios) del cuerpo. Las formas clnicas de presentacin son oculares, generalizadas y respiratorias. Se requiere de la combinacin de diferentes pruebas para poder ser diagnosticada con exactitud, aunque el diagnstico de confirmacin se hace mediante la determinacin srica de anticuerpos contra los receptores de acetilcolina (Ac. anti-RAch) y anticuerpos anti-musculo especifico kinasa (Ac. Anti-MuSK). El diagnstico precoz y la instauracin de un tratamiento rpido permiten una mejora en la calidad de vida y un aumento en los aos de supervivencia de los enfermos. Epidemiolgicamente la prevalencia de la enfermedad va a depender del rea geogrfica, as los diferentes trabajos realizados hasta la actualidad han determinado un amplio rango de la misma (9-35/100000 habitantes). Los estudios llevados a cabo para calcular la prevalencia en nuestro pas concluyeron que esta se encuentra en torno a 20/100000 habitantes.

objetivo: Estimar la prevalencia de la MG en el rea Sanitaria de nuestro Hospital, utilizando como mtodo de diagnstico la presencia de Ac. anti- RAch y Ac. Anti MuSK.

material y mtodos: Se realiz un estudio descriptivo a partir de las muestras recibidas en nuestro laboratorio durante el periodo 2011-2012, y a las que se les solicit la determinacin de Ac. anti- RAch y Ac. Anti MuSK. Se midieron las concentraciones sricas de los anticuerpos mediante Radioinmunoanalisis -RIA- (RSR Limited Diagnostics for Autoinmunity UK). Se consider Ac. anti- RAch positivo

a partir de valores > 0.2 nmol/L y Ac. Anti MuSK positivosi valor > 0.05 nmol/L. Los datos se han obtenido del Sistema de Gestin de nuestro laboratorio (Servolab). El clculo de la prevalencia se ha realizado en funcin de la poblacin asistida en nuestra rea Hospitalaria, y que se obtuvieron del Resumen de Memoria 2012 disponible en la web de nuestro Hospital, siendo esta de 623.301 habitantes.

resultados: El nmero de peticiones fue de 336 (308 Ac. anti- RAch y 28 Ac. Anti MuSK) en 2011 y 378 (339 Ac. anti- RAch y 39 Ac. Anti MuSK) en 2012 correspondientes a 181 pacientes en 2011 y 232 pacientes en 2012.

Los resultados obtenidos durante estos 2 aos fueron:

Ac anti-rAch

negativos Positivos Anulado/repetido o comprobado

muestra insuficiente

2011 120 165 22 1

2012 159 157 22 1

Ac anti-musK

negativos Positivos Anulado/repetido o comprobado

muestra insuficiente

2011 27 1 0 0

2012 28 3 7 1

Teniendo en cuenta los criterios de nuestros especialistas y la poblacin a la que asistimos, la prevalencia segn los resultados obtenidos fue:

negativos Positivos

2011 110 71

2012 101 131

Prevalencia: 2011: 11.39/100000 habitantes 2012: 21.02/100000 habitantes

Conclusin: Nuestro estudio de estimacin de la prevalencia en nuestra rea Sanitaria es semejante a los estudios previos realizados en Espaa.

008AntiCuErPos Anti fACtor intrnsECo: EstrAtEGiA PArA rACionAliZAr lA dEmAndA y EvAluACin dE CostEs

R. Gell Mir, A.M. Miguel Sanz, M.R. Navarro Badal, G. Padrs Soler, J. Ros Pau, B. Allende Moncls, . Lpez Garca

Laboratori LHospitalet, ICS, Barcelona

introduccin: Los anticuerpos anti factor intrnseco (Ac. anti-FI) y los anticuerpos anti clulas parietales gstricas son las solicitudes ms relevantes para el diagnostico de la gastritis crnica atrfica tipo A o gastritis autoinmune, patologa silente que puede derivar en una anemia megaloblstica. Estas pruebas forman parte de la cartera de servicios de los Centros de Asistencia Primaria. Se ha implantado un protocolo de optimizacin de la demanda de Ac. anti-FI estudiando previamente los resultados de otras magnitudes bioqumicas y hematolgicas relacionadas.


objetivo: Estudiar la racionalizacin de la demanda de Ac. anti-FI aplicando una estrategia de revisin previa de las peticiones de esta magnitud, valorando los resultados de su implantacin y la repercusin econmica para el laboratorio.

material y mtodos: Se han estudiado retrospectivamente 350 solicitudes de Ac.anti-FI correspondientes al ao 2012, preparando la informacin mediante la aplicacin Omnium-Roche . Se han considerado los datos demogrficos del paciente (edad y sexo), la especialidad del mdico solicitante, la orientacin diagnstica y los resultados de la concentracin de vitamina B12 y del valor corpuscular medio (VCM).

A partir del segundo semestre del ao, se ha implantado una estrategia para racionalizar la demanda aplicando el criterio: procede la determinacin de ac.anti-FI si VCM 100 y/o hay dficit de vitamina B12 (en la analtica actual o en alguna previa).

La vitamina B12 se ha analizado por electroquimioluminiscencia en un Modular E170 (Roche) y los ac.anti-FI por Elisa en un Triturus (Grifols).

resultados: Caractersticas de los pacientes: la mayor demanda se

concentra en mujeres (63.1%) y en edades superiores a 60 aos (62.6%).

Las especialidades mdicas de mayor solicitud de Ac. anti-FI son medicina familiar (61.4%) y digestivo (30.3%).

La orientacin diagnstica corresponde a: Estudio bsico de salud (23.1%), Anemia megaloblstica (20.6%), Anemia no especificada (12.6%), Gastritis atrfica (9.1%), Anemia ferropnica (8.0%), macrocitosis en estudio (3.4%), y otros (14.6%).

Todos los pacientes con ac.anti-FI positivos (28), presentan una concentracin baja de vitamnina B12, excepto un caso, mientras que el VCM slo es 100 fl. en 8 casos (25%).

Aplicacin de la estrategia para optimizar la demanda: Primer semestre: 180 peticiones, 15 con ac.anti-FI

positivo (8.3%). Segundo semestre: 170 peticiones, 45 no proceden,

y en las 125 restantes, 13 con ac.anti-FI positivo (10.4%).

Se constata la disminucin del nmero de Ac.anti-FI una vez aplicados los criterios de rechazo (-23.5%).

En trminos econmicos, la reduccin de 45 Ac. anti-FI supone un ahorro de 572 euros.

Conclusiones: La orientacin diagnstica de las solicitudes de

Ac.anti-FI no es adecuada en la mitad de ellas, siendo necesario reforzar la comunicacin con los clnicos.

La concentracin de vitamina B12 disminuida es el dato ms til para decidir la realizacin de los Ac.anti-FI.

La aplicacin de la estrategia descrita para optimizar la demanda supone la disminucin de aproximadamente la cuarta parte de las determinaciones de Ac.anti-FI manteniendo el rendimiento diagnstico.

La valoracin econmica muestra un ahorro no despreciable.

009sndromE nEurolGiCo PArAnEoPlsiCo: AntiCuErPos Anti-tr Positivo. A ProPsito dE un CAso

A. Rodrguez Muoz, L. Abelln Tejada, M.P. Villanueva Gil, E. Barba Serrano, A. Martn Bechet, S. Rivera Ballesteros, J.M. Santonja Llabata, P. Laporta Mart

Clnico Universitario, Valencia

introduccin: Los sndromes neurolgicos paraneoplsicos (SNPN) constituyen un grupo de trastornos consecuencia del efecto remoto de un tumor y de etiologa autoinmune. Pueden preceder hasta cinco aos el diagnstico de cncer, por lo que la deteccin de anticuerpos anti-neuronales (ANNA) es de gran utilidad en el diagnstico y tratamiento de estos sndromes, as como en la consideracin de una neoplasia como causa subyacente de un trastorno neurolgico. Ocurren en alrededor del 0.01% de los pacientes con cncer.

Exposicin del caso: Varn de 65 aos que acude al Servicio de Urgencias por presentar, desde hace dos semanas, marcha muy inestable con tendencia a la desviacin izquierda, torpeza en movimientos finos de la mano izquierda y alteracin de la articulacin del lenguaje. Refiere astenia y prdida de 4-5 Kg en el ltimo mes.

Antecedentes patolgicos: dislipemia, DM 2,cncer de colon en 2006 (aparentemente libre de la enfermedad, en seguimiento con controles anuales).

Exploracin fsica: presin arterial 163/90 mmHg. Auscultacin cardiopulmonar normal. Consciente, orientado y colaborador. Sin signos de irritacin menngea.

Examen neurolgico: pupilas isocricas y normoreactivas. Pares craneales normales. Fuerza, tono y sensibilidad conservadas. Disartria densa. Seguimiento ocular hipomtrico y sacdico, con dificultad para fijacin de la mirada a la derecha. Dismetra apendicular en dedo nariz izquierda, y en taln rodilla izquierda. Romberg negativo y marcha atxica.

Hemograma y coagulacin: normal.Bioqumica: destaca glucosa: 145 mg/dL (64-106),

triglicridos: 239 mg/dL (40-160), HDL: 32 mg/dL (>35), resto de parmetros dentro de la normalidad (urea, creatinina, sodio, potasio, cloro, calcio, protenas totales, bilirrubina total, GOT-AST, GPT-ALT, LDH, PCR, folato y vitamina B12). Funcin tiroidea normal.

Marcadores tumorales: CEA, CA-125, CA-19.9, PSA, 2-microglobulina dentro de la normalidad.

Microbiologa en LCR: Virus Herpes Simples, Virus Varicella-Zoster y Enterovirus, negativos.

Pruebas autoinmunidad: Ac anti-nucleares: negativo, Ac anti-cardiolipina IgG e IgM: negativo. ANNA en LCR y suero: anti-Yo, anti-Ri, anti-Hu: negativo y anti-Tr: positivo. Ac anti-canales de calcio (VGCC): positivo.

Pruebas de imagen: Se realizan radiografa de trax y abdomen, TAC toraco-abdmino-plvico con contraste y RMN cerebral que se informan como normales.

discusin: El diagnstico del SNPN se establece con la positividad de los Ac anti-Tr tanto en el suero como en el LCR del paciente, junto al cuadro clnico caracterstico del sndrome cerebeloso subagudo (ataxia, disartria y


nistagmus). Adems, se han descartado otras posibles causas: hemorragia cerebelosa, tumores cerebrales e infecciones con las pruebas de laboratorio y pruebas de imagen realizadas.

La deteccin de los Ac anti-Tr se realiz mediante la tcnica de inmunofluorescencia indirecta en cerebelo de mono, por lo que debe hacerse una distincin con los Ac anti-Yo, que presentan un patrn similar. En nuestro caso, observamos fluorescencia en las dendritas de las clulas de Purkinje, observndose mltiples puntos en la capa molecular del cerebelo caracterstico del Tr, y el Ac anti-Yo result negativo por inmunoblot.

El hecho de que se presentara anti-VGCC tambin positivo, hace que nuestro estado de alerta aumente para buscar el origen tumoral del cuadro, quedando en seguimiento por el Servicio de Oncohematologa.

010Estudio dE HlA En fAmiliArEs dE PrimEr GrAdo dE PACiEntEs CEliACos

L. Figuero Oltra (1), M.L. Vicente Saiz (1), J. Asensio Asanz (1), J. Jimnez Jimnez (2), C. Hernando De Larramendi (2), J. Otero De Becerra (1), J. Ledesma Guzmn (1), B. Gonzlez Trujillos (1)

(1) Hospital Infantil Universitario Nio Jess, Madrid; (2) Hospital Universitario Severo Ochoa, Legans, Madrid

introduccin: La gran mayora de celacos son HLA-DQB1*02 y DQA1*05 (DQ2) y/o HLA-DQB1*0302 (DQ8) positivos. Pero slo un 3% de los DQ2 y/o DQ8 positivos desarrollan enfermedad celiaca (EC). Por tanto, la presencia de marcadores genticos de riesgo no significa que el individuo vaya a desarrollar la EC, sin embargo, su ausencia permite descartarla debido al alto valor predictivo negativo de la prueba.

Es de especial inters el estudio de dichos marcadores para los grupos de riesgo, entre los que figuran los familiares de primer grado, clasificados de muy alto riesgo por el Ministerio de Sanidad. Abril 2008, ya que poseen un riesgo 20 veces mayor que la poblacin general de padecer EC. Determinando dichos marcadores genticos se puede optimizar el seguimiento de los familiares con HLA compatible y evitar pruebas innecesarias a los que no posean HLA de compatibilidad para EC, lo que supone un ahorro econmico y sanitario, as como la tranquilidad de dichos familiares.

objetivo: Valorar la utilidad del estudio de marcadores genticos en familiares de primer grado de enfermos celiacos.

material y mtodos: Se han estudiado 62 familias de enfermos celiacos diagnosticados en el plazo de un ao en nuestros hospitales (marzo 2012-2013), 127 familiares de primer grado con edades comprendidas entre 1 y 47 aos.

La tipificacin de los alelos HLA-DQA1* y HLA-DQB1* se realiz mediante PCR con hibridacin reversa: PCR-SSO (INNO-LIPA , Innogenetics).

resultados: 57 (45 % de los estudiados) eran padres de los enfermos celiacos, un 60 % madres y un 40 % padres.

70 (55 % del total) eran hermanos de los pacientes celiacos.

Presentaban HLA compatible con EC: 24 madres, 15 padres y 48 hermanos. De los cuales 76 (87% de los HLA compatibles) eran DQ2 y 11 (13% ) DQ8.

HLA no compatible con EC: 10 madres, 8 padres y 22 hermanos.

Conclusiones: La respuesta en cuanto a la realizacin de estudio

gentico ha sido buena, aunque existe un sesgo en la frecuencia de compatibilidad en las madres, porque son las que en mayor cantidad se han realizado el estudio gentico.

En 40 personas (31.5%) se pueden descartar las revisiones de control de EC que se realizan peridicamente, evitando el coste de analticas repetidas y de consultas medicas.

87 (68,5 %) personas presentan compatibilidad de HLA para enfermedad celiaca, lo que permitira hacer estudios mas dirigidos cuando presenten cualquier sintomatologa anodina que pueda estar relacionada con esta enfermedad.

El estudio gentico permite establecer bien que pacientes necesitan controles peridicos por ser familiares de primer grado de pacientes celiacos, optimizando su seguimiento y cuales actualmente pueden evitarse revisiones innecesarias, descartando la EC.

011diAGnstiCo dE EnfErmEdAd CElACA sin BioPsiA sEGn lAs rEComEndACionEs EsPGHAn 2012

R. Clari Momp, J. Molina Garca, A. Gmez Granell

Hospital Marina Baixa de Villajoyosa, Villajoyosa

introduccin: El diagnstico de Enfermedad Celiaca (EC) en la poblacin peditrica se ha basado desde 1969 en los criterios establecidos por la ESPGHAN (European Society for Pediatric Gastroenterology, Hepatology and Nutrition) y se requera la realizacin de al menos 3 biopsias intestinales. En 1989 estos criterios se modificaron reduciendo el nmero de biopsias necesarias para establecer el diagnstico.

Las nuevas guas ESPGHAN publicadas en enero de 2012 definen la Enfermedad Celaca como una enteropata con base inmunolgica causada por la ingesta de gluten y prolaminas relacionadas que afecta a personas genticamente predispuestas y que se caracteriza por la presencia de manifestaciones clnicas dependientes de gluten, anticuerpos especficos de EC y haplotipos HLA-DQ2 y/o DQ8. Con los nuevos criterios diagnsticos propuestos se puede omitir la biopsia intestinal en nios y adolescentes que cumplan los siguientes requisitos: presencia de sntomas clnicos sugestivos, Anticuerpos Antitransglutaminasa IgA (ATGt) al menos 10 veces el valor de referencia, verificados por Anticuerpos Antiendomisio (EMA) realizados en otra muestra diferente y susceptibilidad gentica demostrada (HLA-DQ2 y/o DQ8 positivos).

objetivo: Describir el nmero de pacientes peditricos diagnosticados de EC sin realizar biopsia en nuestra rea segn los nuevos criterios diagnsticos recomendados por la ESPGHAN.


material y mtodos: Desde enero de 2012 aplicamos en nuestra rea el algoritmo recomendado por la ESPGHAN (2011-2012) para el diagnstico de EC en pacientes peditricos.

Estudiamos retrospectivamente los resultados de ATGt, EMA y HLA de susceptibilidad a EC realizados desde enero de 2012 hasta marzo de 2013. Se excluyen los pacientes diagnosticados con anterioridad a la utilizacin del nuevo protocolo.

Los ATGt se determinaron por ELISA (INOVA) en un analizador QUANTA-Lyser 240. Las determinaciones de EMA y HLA se realizaron en el hospital de referencia de nuestra rea.

resultados: Durante el periodo descrito se realizaron 594 determinaciones de ATGt a 527 pacientes de ambos sexos con edades entre 7 meses y 14 aos.

Nueve pacientes cumplieron los requisitos para el diagnstico de EC sin realizar biopsia.

Edad (aos)/sexo AtGt (vr: 8 97,06 84,7 - 99,9 36,9 26,6 - 48,1

>9,8 88,24 72,5 - 96,7 60,71 49,5 - 71,2

>10,4 82,35 65,5 - 93,2 65,48 54,3 - 75,5

>13,7 * 82,35 65,5 - 93,2 77,38 67,0 - 85,8

>29,5 64,71 46,5 - 80,3 80,95 70,9 - 88,7

>51,8 50 32,4 - 67,6 89,29 80,6 - 95,0

>96,1 44,12 27,2 - 62,1 95,24 88,3 - 98,7

>120,6 38,24 22,2 - 56,4 95,24 88,3 - 98,7

>324,6 5,88 0,7 - 19,7 98,81 93,5 - 100,0

PCC (u/ml) sensibilidad 95% iC Especificidad 95% iC

>0,9 91,43 76,9 - 98,2 12,05 5,9 - 21,0

>2,3 88,57 73,3 - 96,8 75,9 65,3 - 84,6

>3 80 63,1 - 91,6 83,13 73,3 - 90,5

>3,8 * 77,14 59,9 - 89,6 91,57 83,4 - 96,5

>6,8 74,29 56,7 - 87,5 91,57 83,4 - 96,5

>8,8 68,57 50,7 - 83,1 92,77 84,9 - 97,3

>24 62,86 44,9 - 78,5 95,18 88,1 - 98,7

>89 45,71 28,8 - 63,4 95,18 88,1 - 98,7

>244 25,71 12,5 - 43,3 96,39 89,8 - 99,2

Segn el anlisis de la curca ROC, el rea bajo la curva (AUC) del FR fue de 0.83 (IC95% 0.75-0.90) y para el PCC de 0.85 (IC95% 0.77-0.91).Estos valores sugieren que tanto el FR como el PCC discriminan de la misma manera a los pacientes con o sin AR, debido a que el AUC de ambas son similares. El punto de corte para el FR y el PCC con mayor sensibilidad y especificidad sera de 13,7 U/ml y 3,8 U/ml respectivamente, como se muestra en las tablas adjuntas.


Conclusiones: Se observa que el PCC es ms especfico que el FR pero menos sensible, por lo que la determinacin de PCC combinado con FR tiene valor adicional sobre la determinacin aislada de FR.

013HEPAtitis AutoinmunE EnmAsCArAdA: A ProPsito dE un CAso

E. Jimnez Santos, E. Martin Garca, P. Cortes Mora, L. Garca De Guadiana Romualdo, C. Bernal Maas, R. Carbonell Muoz, J. Nuevo Garca, A. Debejar Almira

Hospital Universitario Santa Luca, Cartagena

introduccin: La hepatitis autoinmune (HAI) es una hepatopata de etiologa desconocida, caracterizada por actividad necroinflamatoria crnica, presencia de autoanticuerpos circulantes y una concentracin elevada de gammaglobulinas sricas. Tiene una baja prevalencia, y predomina en mujeres, aunque tambin puede afectar a nios o varones. Las manifestaciones clnicas son muy variables y para su diagnstico se requiere la exclusin de otras causas de dao heptico, ya que no existe un marcador patognomnico. El diagnstico se realiza en base a una combinacin de criterios clnicos, genticos, bioqumicos y por hallazgos histopatolgicos y de anticuerpos establecidos por el IAHG (International Autoimmune Hepatitis Group) en el ao 1992.

Caso clnico: Nio varn de 8 aos que acude a la puerta de urgencias de nuestro hospital por fiebre de un mes de evolucin, de predominio vespertino. A su ingreso presenta ligera coloracin ictrica, buena hidratacin, sin adenopatas, no exantemas ni petequias, esplenomegalia, con hgado de tamao y estructura normal. En la analtica de urgencia destaca una anemia normoctica y normocrmica, ligera trombopenia y elevacin significativa de aminotransferasas (ALT: 510 UI/L y AST: 1003 UI/L), Lactato-deshidrogenasa de 329 UI/L y bilirrubina de 3,9 mg/dL.

Durante su ingreso se obtienen los siguientes resultados analticos: test de Coombs directo positivo, IgG de 4490 mg/dL, descenso de las fracciones del complemento C3 y C4, anticuerpos antinucleares (ANA) mediante CTD Screen de Phadia por Inmunocap negativos, y serologa infecciosa positiva, nicamente, para Mycoplasma pneumoniae, tanto IgG como IgM. Ante dichos resultados se sospecha una anemia hemoltica debido a sndrome de Evans y se asocia el sndrome febril y la transaminasemia a una hepatitis por Mycoplasma, por lo que se le pauta Claritromicina y Prednisona adecuado a tratamiento.

Al principio responde al tratamiento con corticoides pero a los dos meses se produce un repunte en los niveles de aminotransferasas, por lo que ante la sospecha de hepatitis autoinmune, se solicita estudio de autoinmunidad asociado a hepatopata. Los resultados obtenidos por IFI sobre triple tejido de rata fueron anticuerpos anti-musculo liso positivo (ttulo 1/160) y anticuerpos anti-actinaF positivo en clulas Hep2, confirmado mediante dot-blot. El anlisis gentico demostr la presencia de un haplotipo HLA-DR3 asociado a HAI.

El diagnstico se confirma mediante biopsia heptica,

que demuestra una necrosis erosiva de los hepatocitos, frecuente infiltracin de linfocitos y de clulas plasmticas y la formacin de rosetas periportales, datos todos ellos sugestivos de una hepatopata crnica de etiologa autoinmune.

Ante estos hallazgos, se contina tratamiento con corticoides suplementado con inmunosupresores, producindose un considerable descenso en los valores de las aminotransferasas y una mejora evidente del estado del paciente.

Conclusiones: Al ser la hepatitis autoinmune una enfermedad con etiopatogenia desconocida y con unos sntomas clnicos y patolgicos poco especficos, comunes a varios trastornos del metabolismo heptico, establecer un diagnstico diferencial es complicado, por lo que el papel del laboratorio, fundamentalmente mediante la deteccin de autoanticuerpos, es clave para contribuir a los scores establecidos por el IAHG para el diagnstico de la enfermedad.

014inmunoBlot Como mtodo ConfirmAtorio dE lA ifi En lA dEtErminACin dE AC. Anti-ClulAs PAriEtAlEs

I. San Segundo Val, B. Aparicio Hernndez, M.D.R. Caro Narros, G.I. Hincapie Lpez, M.P. Sendn Hernndez, M.L. Rivera Reigada

Hospital Universitario de Salamanca, Salamanca

introduccin: La produccin de anticuerpos anti-clulas parietales gstricas (APCA) es caracterstica de la gastritis autoinmune. Estos anticuerpos generan una prdida total de las clulas de la mucosa gstrica. El problema principal para la observacin de dichos anticuerpos mediante Inmunofluorescencia Indirecta (IFI) es la subjetividad en la interpretacin de los resultados.

objetivo: Validar los resultados obtenidos por Inmunoblot (Alphadia diagnostics products) con los resultados observados por IFI sobre Triple Tejido (Biocientifica S.A.), para emplearla como tcnica confirmatoria.

materiales y mtodos: Se realiza IFI e inmunoblot sobre 19 muestras de pacientes con clnica relacionada con gastritis autoinmune. La IFI fue realizada con Inmunofluor ANA-AMA-ASMA-APCA, (Biocientifica S.A.) y el Inmunoblot con el Blot kit Atrophic Gastritis DOT (Alphadia diagnostics products). Se realizan ambos segn protocolo establecido por la casa comercial, procesando en el ensayo 4 controles de APCA (2 positivos y 2 negativos).

Se realiz un estudio de asociacin entre los resultados de ambos mtodos empleando el ndice kappa mediante SPSS 20.0.

resultados: ndice kappa = 0,956. 18 pacientes de los 19 dieron positivo para clulas parietales con el kit Atrophic Gastritis DOT.

Conclusiones: El problema principal para la observacin de anticuerpos anti-clulas parietales mediante IFI es la subjetividad en la interpretacin de los resultados cuando la observacin la realiza personal poco experimentado, sobretodo en muestras que presentan anticuerpos


heterfilos. En estos casos, el inmunoblot podra presentarse como prueba complementaria para la identificacin de estos anticuerpos, ya que muestra un grado alto de concordancia con la IFI.

015diAGnstiCo dE EnfErmEdAd CElACA: A ProPsito dE un CAso

J.G. Martnez Fernndez, M.P. Benayas Bellido, D.S. Sosa Moncayo, C. Porrino Herrrera, I. Gamez Gmez, A.M. Gimnez Gila, M.A. Molina Arrebola, C. Avivar Oyonarte

Hospital de Poniente, El Ejido

introduccin: La enfermedad celaca (EC) es una enfermedad autoinmune sistmica con agente etiolgico conocido, el gluten. El contacto de la mucosa intestinal con el gluten conduce a la aparicin de un dao de sta, provocando una reaccin inflamatoria caracterizada por infiltracin de la lmina propia, epitelio y atrofia de vellosidades. Ocurre en sujetos genticamente predispuestos (HLA DQ2, DQ8). En la actualidad, la EC es un proceso muy prevalente, de distribucin mundial, que afecta tanto a nios como adultos y que puede tener manifestaciones clnicas muy variables especialmente en el adulto que puede presentar una clnica atpica. El nico tratamiento disponible es la dieta exenta de gluten de forma estricta. Este tratamiento es eficaz, aunque comporta una carga social importante para los enfermos afectados.

Caso clnico: Mujer de 24 aos que acude a consulta para revisin de hepatopata autoinmune. Antecedentes: revisando la historia clnica observamos que fue diagnosticada de hipertiroidismo primario y hepatopata autoinmune. Se solicita hemograma y bioqumica, destacando: TSH de 0.019 UI/ml (0.27-4.2); T4L 1.16 UI/ml (0.93-1.7); T3L 2.97 UI/ml (2-4.4); Ac. Anti- receptor TSI 3.47 UI/L (0-1.75); GOT 44 U/L (1-32); GPT 42 U/L (1-33); IgA < 10 mg/dl (82-453); IgG 2160 mg/dl (751-1560). Se realiza estudio de autoinmunidad: Ac. Antinucleares (ANAs): patrn positivo moteado > 1/320; Ac. Anti DNA 24 UI/ml (0-30); ENAs negativo; Ac Anti-mitocondriales negativo; Anti-LKM-1 negativo; Anti-musculo liso negativo; Otros anticuerpos de hepatitis autoinmune son negativos. Al observar Inmunofluorescencia indirecta (IFI) en tejido triple, utilizando como sustrato rin, hgado y estmago de rata, vemos la presencia de anticuerpos anti- reticulina, mostrando un patrn peritubular caracterstico. Se trata de anticuerpos no organoespecficos que van dirigidos frente a transglutaminasa tisular (tTG). Este hecho, junto con la hipertransaminasemia existente, dficit de IgA, patologa tiroidea, hepatitis autoinmune nos hace sospechar de un posible diagnstico de Enfermedad celaca. Realizamos estudio de anticuerpos implicados en el diagnstico de sta: Ac. Anti-transglutaminasa IgG: 550 U/ml (0-10); Ac. Anti endomisio IgG: positivo, con ttulo > 1/100; Ac- anti-gliadina IgG deaminada: 140 U/ml (positivo > 10).

Se realiza biopsia de la mucosa duodenoyeyunal, mostrando resultado compatible con EC. Ante los resultados obtenidos diagnosticamos a la paciente de Enfermedad celaca, estableciendo como nico tratamiento la retirada del gluten en la dieta.

Conclusiones: Es de gran importancia el conocimiento de una serie de condiciones en los cuales el riesgo de padecer EC es elevado, estableciendo de esta forma posibles grupos de riesgo. Se ha descrito una alta prevalencia de celiaqua en casos de dficit de IgA y en diversas enfermedades autoinmunes, incluyendo enfermedades tiroideas, hepatitis autoinmune, diabetes mellitus , artritis reumatoide, sndrome de Sjgren, lupus eritematoso sistmico, endocrinopatas mltiples, etc. Dada la alta prevalencia de EC y su asociacin con otras enfermedades autoinmunes, debera investigarse la presencia de EC en pacientes con otras enfermedades autoinmunes.

016trAnsfEriBilidAd dE rEsultAdos EntrE tEst ComErCiAlEs dE AntiCuErPos AntitrAnsGlutAminAsA tisulAr dE ClAsE iGA

L. Altimira Queral, M. Molero Lus, M. Tondo Colomer, M. Hernndez Garca, T. Marqus Valls, S. Mir Cas, C. Farr Masip

Hospital Sant Joan de Deu, Esplugues de Llobregat, Barcelona

introduccin: Los Anticuerpos Antitransglutaminasa tisular de clase IgA (AcTGt-IgA) son los marcadores de eleccin para la deteccin y seguimiento serolgico de la Enfermedad Celaca (EC). La EC se diagnostica por estudio histolgico intestinal, indicado en pacientes con clnica sospechosa de EC y/o elevacin srica de los AcTGt-IgA.

La cuantificacin de estos anticuerpos se realiza por mtodos inmunolgicos con distintos sistemas de lectura (IFI, ELISA, Fluoroenzimainmunoensayo, Quimioluminiscencia, etc.), no existiendo un patrn universal de calibracin, por lo que cada fabricante establece sus unidades arbitrarias y sus valores de referencia.

La actividad asistencial y los estudios de colaboracin chocan frecuentemente con marcadores serolgicos obtenidos en distintos laboratorios cuya correlacin y transferibilidad de resultados es desconocida.

objetivo: Estudiar la transferibilidad de resultados entre test comerciales de AcTGt-IgA, que emplean distintas tcnicas inmunolgicas.

material y mtodos: Se comparan las concentraciones de AcTGt-IgA obtenidas por:

UniCAP h-tTG IgA EliATM (Phadia; ThermoFisher). FLUOROENZIMOINMUNOENSAYO; Negativo 10 U/ml.

Con las obtenidas mediante: Bioflash Quanta Flash TM h-tTG IgA CLIA (Izasa).

QUIMIOLUMINESCENCIA. Negativo 30 CU. (n=70).

Orgentec h-tTG IgA ELISA (Palex). Cut-off: 10 U/ml. (n= 48).

Zenit RA h-tTG IgA CLIA (Menarini). QUIMIOLUMINESCENCIA. Positivo > 10 UA/ml. (n=66).

resultados: El estudio de transferibilidad segn el mtodo de regresin no paramtrica de Passing-Bablok de


cada tcnica frente a los resultados de UniCAP EIA Phadia, tcnica validada e integrada en la rutina asistencial de nuestro laboratorio, muestra las siguientes ecuaciones:

Bioflash h-tTG IgA CLIA (Izasa): y=5.69 x + 0.08 [IC 95%: 5.29-6.541; -0.3 0.2].

Orgentec h-tTG IgA ELISA (Palex): y=1.242 x 0.05 [IC 95%: 1.118-1.359; -0.9 0.43].

Zenit RA h-tTG IgA CLIA (Menarini): y=0.633 x 0.46 [IC 95%: 0.577-0.698; -0.99-0.12].

En ningn caso hay un error constante, dado que en los tres la ordenada en el origen pasa por el punto 0.00 [-0.30.2; -0.90.43; -0.99-0.12]. En cambio, en los tres casos hay un error proporcional, ya que en ninguno de ellos la pendiente pasa por 1 [5.29-6.541; 1.118-1.359; 0.577-0.698].

Por ello, el uso de las siguientes ecuaciones permite la intercambiabilidad entre los resultados de los distintos test:

1. [AcTGt] CLIA Bioflash = 5.69 x [AcTGt] EliA UniCAP Phadia.

2. [AcTGt] ELISA Orgentec = 1.242 x [AcTGt] EliA UniCAP Phadia.

3. [AcTGt] Zenit RA = 0.633 x [AcTGt] EliA UniCAP Phadia.

Conclusin: La inexistencia de un error constante verifica que todos los mtodos determinan especficamente los AcTGt-IgA.

La existencia de un error proporcional es previsible dada la inexistencia de un patrn universal de calibracin para los AcTGt-IgA.

Este estudio proporciona las ecuaciones que permiten intercambiar resultados obtenidos entre algunas de las tcnicas habitualmente empleadas en la prctica asistencial.

017lA susCEPtiBilidAd GEntiCA PArA lA EnfErmEdAd CElACA En lA PrCtiCA ClniCA: dEtErminAr los AlElos dEl dQ2 (dQ8) o HACEr El tiPAdo HlA-dQ ComPlEto

T. Marqus Valls, L. Altimira Queral, M. Molero Lus, M. Tondo Colomer, M. Hernndez Garca, C. Farr Masip

Hospital Sant Joan de Deu, Esplugues de Llobregat, Barcelona

introduccin: La Enfermedad Celaca (EC) es una alteracin genticamente restringida por el heterodmero HLA-DQ2 codificado por DQA1*05 y DQB1*02. Los dos alelos DQA y los dos DQB heredados de los progenitores configuran el doble serotipo DQ de cada individuo. La susceptibilidad gentica para la EC se puede obtener mediante: Anlisis especfico de los alelos del DQ2 (o DQ8) Tipaje completo HLA-DQ identificando los dos alelos DQA y los dos DQB.

objetivos: Comparar la informacin proporcionada por ambos mtodos y valorar sus ventajas e inconvenientes en la prctica clnica.

material y mtodos: En 752 pacientes histolgicamente diagnosticados de EC, se comparan los resultados del anlisis de los alelos del DQ2 y DQ8 por PCR-SSP no comercial (Olerup 1993), con los que se obtendran mediante el tipaje completo HLA-DQ.

Se codifica de 1 a 5 la gradacin del riesgo susceptibilidad gentica para la EC (segn Bourgey 2007 y Megiorni 2009).

resultados: El 93.5% (703/752) de los casos son DQ2 positivos, y corresponderan a resultados del tipaje completo: DQ2/DQ2 en homocigosis(1); DQ2conDQB1*02 en homocigosis(1); DQ2 en heterocigosis cis o trans(2) y DQ2/DQ8(2).

Entre los DQ2 negativos:El 2.5% son DQ8+ en homocigosis(4) o en

heterocigosis(5).El 2.5% tienen el alelo DQB1*02 del DQ2 (DQ2.2) en

homocigosis(2) o en heterocigosis(4).El 1.1% tienen el alelo DQA1*05 del DQ2(5).El 0.3% tienen el alelo DQA1*03 del DQ8(5).El 0.1% (1/752) ningn alelo del DQ2 y DQ8(5).Conclusiones: El anlisis PCR-SSP de los alelos DQ2/

DQ8 es til para la exclusin de la EC por su elevado VPN y capaz de detectar todos los individuos de riesgo para la EC (excepto los casos con DQB1*02 en homocigosis). El tipaje completo HLA-DQ es una opcin interesante en proyectos de investigacin y en casos concretos, a pesar de su elevado coste y la eventual dificultad de interpretacin.

018utilidAd dE lA CAlProtECtinA fECAl En lA EnfErmEdAd dE CroHn

M. Suescun Gimnez, S. Collado Lpez, E. Bonet Estruch, A. Sarnago Gonzalo, M.L. Martnez Triguero, A. Alba Redondo, C. Olmeda Herreros, P. Nos Mateu

S Anlisis Clnicos. U Hormonas, Hospital Universitario La Fe, Valencia

introduccin y objetivos: La enfermedad de Crohn (EC) es una enfermedad inflamatoria transmural, granulomatosa, de origen desconocido que se asocia a una respuesta inmune inadecuada. Su inters es creciente en Espaa porque la incidencia est aumentando en los pases del Sur de Europa.

El diagnstico segn las ltimas Guas Clnicas se basa en la sospecha clnica, datos endoscpicos, anatomopatolgicos, radiolgicos, pruebas de laboratorio, marcadores serolgicos y la utilizacin de calprotectina fecal.

La calprotectina fecal (CPF) es una tcnica fcil, rpida y reproducible, que se ha instaurado como el marcador ms sensible de enfermedad inflamatoria intestinal. La TC y RM son los estndares actuales para la evaluacin del intestino delgado porque aunque la colonoscopia es el diagnstico de eleccin es una tcnica invasiva no exenta de riesgos. La enteroRMN es una tcnica con buena tolerancia y buena correlacin con la colonoscopia.

El objetivo de nuestro trabajo es llevar a cabo un estudio retrospectivo (de 6 meses de duracin) de pacientes diagnosticados de enfermedad de Crohn ileal o ileoclica, a los que se les ha realizado calprotectina y EnteroRMN, para valorar si existe una buena correlacin entre ellos y pueden ser tiles tanto en el cribado como en el seguimiento y diagnstico de la enfermedad.

material y mtodos: Se incluyeron 55 pacientes


diagnosticados de enfermedad de Crohn ileal o ileoclica en el Servicio de Digestivo con una edad 15 aos, recogiendo parmetros clnicos y de laboratorio, tanto serolgicos (PCR, fibringeno calculado, n leucocitos) como fecales (CPF). La CPF se lleva a cabo mediante ensayo inmunoenzimatico (Calprest . Eurospital). Se les practic una EnteroRMN, con una diferencia mxima de 1 mes con determinacin de CPF, con gadolinio como contraste iv para valorar el Score MaRIA (Magnetic Resonance Index of Activity) (3.4-35.0).

Score MaRIA=1.5 x grosor pared (mm) + 0.02 x RCE + 5 x edema + 10 x ulceracin

(> 7 enfermedad activa // > = 11 enfermedad severa)

resultados:Edad Hombres /

mujeresCalprotectina(mg/Kg heces)

PCR (mg/L)

Fibringeno (mg/dL)

Leucocitos (103/L)

Media DS

3913 33/22 6721364 1339.3 449120 7.442.18

Se observ una buena correlacin del Score MaRIA con CPF (p=0.035), mientras no se observ correlacin con los marcadores serolgicos (PCR, n leucocitos, fibringeno).

Conclusiones: La calprotectina fecal es una tcnica fcil y rpida de realizar que nos permite evaluar la actividad inflamatoria de la enfermedad de Crohn sin necesidad de tcnicas invasivas, ya que tiene una buena correlacin con la enteroRMN. Aunque el diagnstico de eleccin es la colonoscopia, cuando la enfermedad est en actividad, el valor de la colonoscopia es limitado por el riesgo de la tcnica, y en ese caso la determinacin de CPF tienen una gran utilidad.

019utilidAd dE lA CAlProtECtinA fECAl En nios PArA diAGnstiCo difErEnCiAl dE PAtoloGiA diGEstivA

E. Bonet Estruch, S. Collado Lpez, M. Suescun Gimnez, A. Sarnago Gonzalo, M.L. Martnez Triguero, A. Alba Redondo, C. Olmeda Herreros, B. Laiz Marro

Hospital Universitario La Fe, Valencia

El dolor abdominal y la diarrea son sntomas frecuentes en la consulta de pediatra, constituyendo una sintomatologa inespecfica que hace difcil distinguir si estamos ante una patologa grave, sobre todo una enfermedad inflamatoria intestinal (EII).

La EII es un problema que est afectando cada vez a gente a edades ms tempranas y que est aumentando su incidencia en los pases del Sur de Europa. El diagnstico de eleccin sera la colonoscopia pero es una tcnica que conlleva cierto riesgo, sobre todo en nios, lo cual obliga a buscar mtodos menos invasivos, sensibles y especficos para llevar a cabo un buen diagnstico diferencial entre EII y otras patologas digestivas.

La calprotectina fecal (CPF) es una protena que se encuentra en los neutrfilos y que aumenta en heces cuando hay una patologa inflamatoria intestinal.

Hemos llevado a cabo un estudio retrospectivo en nios a los que se les ha solicitado CPF en nuestro laboratorio

por sospecha de patologa digestiva para evaluar su utilidad clinica en el diagnstico diferencial de patologa digestiva.

material y mtodos: Hemos estudiado 118 nios, a los que se determina CPF a lo largo de 6 meses, dividindolos en grupos segn su patologa, Enfermedades autoinmunes (EA, n= 33), Diarreas inespecficas (DI, n=9), Dolor abdominal inespecfico (DAI, n=13), ileitis, gastritis y colitis inespecficas (II, n=7), Sndromes de malabsorcin (SMA, n=11), Fibrosis qustica (FQ, n=13), Colitis ulcerosa (CU, n=17), Enfermedad de Crohn (EC, n=15) y un grupo Control (GC, n=11). La CPFse lleva a cabo mediante ensayo inmunoenzimatico (Calprest . Eurospital).

resultados: GC EA GI DDI DDAI SMA FQ CU EC

Media 46.33 91.71 86.67 103.13 55.71 169.29 304.00 1298.79 1319.40

DS 8.74 77.14 56.57 102.98 69.97 134.99 265.15 1486.97 1697.79

Valores de calprotectina fecal en grupo control y distintas patologas gastrointestinales en nios (mg/kg heces).

Si comparamos el grupo de EII (mediaDS= 1214.741535.09) con el resto de patologas (158.33200.95), la diferencia es estadsticamente significativa (p


material y mtodos: Hemos estudiado 118 pacientes adultos (> 14 aos), a los que se les ha determinado CPF, dividindolos segn su patologa: Enfermedades autoinmunes (EA, n= 8), Colitis inespecficas (CI, n=6), Diarreas inespecficas (DI, n=15), Dolor abdominal inespecfico (DAI, n= 18), Sndromes de mala absorcin (SMA, n=12), Ileitis inespecifica (II, n=7) Rectorragias (R, n=12), Colitis ulcerosa (CU, n= 20), Enfermedad de Crohn (EC, n=20) y un Grupo Control (GC, n= 18). La CPFse lleva a cabo mediante ensayo inmunoenzimatico (Calprest . Eurospital).

resultados:

GC EA CI II DI DAI SMA R CU EC

Media 47.13 86.38 173.80 146.14 175.67 153.92 111.50 308.70 2000,50 725,45

DS 32.46 101.4 197.75 146.10 207.72 102.35 90.62 283.23 2713,26 1031,61

Valores de calprotectina fecal en grupo control y distintas patologas digestivas (mg/Kg heces).

Si comparamos el grupo de Enfermedad inflamatoria intestinal (mediaDS= 1395.792143.97) con el resto de patologas (143.08172.37), la diferencia es estadsticamente significativa (p


El LES es una enfermedad caracterizada por una hiperactividad policlonal de linfocitos B. Se ha observado que en patologa autoinmune se producen marcados aumentos de cadenas ligeras libres (CLLs). La existencia de marcadores de actividad sensibles junto con la clnica del paciente ayuda a conocer cuando la enfermedad un paciente afectado de LES est en brote. En recientes trabajos publicados CLLs correlacionan con procesos de actividad en LES, lo que no ha sido demostrado para protena C reactiva ni velocidad de sedimentacin. CLLs tienen una vida media muy corta (2 6 horas) lo que supone una ventaja frente a otros marcadores de actividad ya que puede dar informacin rpida para identificar cambios en la actividad de la enfermedad.

objetivo: Evaluar la suma de CLLs Kappa y Lambda ( CLLs) en pacientes diagnosticados de LES y comparar el aumento policlonal con marcadores especficos de actividad de la enfermedad: dsDNA y complemento.

mtodos: 79 pacientes (67 mujeres y 12 varones), edad media 41 aos (17 74) previamente diagnosticados de LES y que cumplan al menos 4 de los criterios del ACR y 23 muestras control de pacientes sin enfermedad reumatolgica reconocida. Se descart la presencia de componente monoclonal en los pacientes. Se cuantificaron CLLs (Freelite), inmunoglobulinas totales, C3 y C4 (nefelometra. BNII Siemens, anti-dsDNA, ANAS (Inmunoconcept. Menarini), creatinina (Roche). El estudio estadstico se realiz mediante correlacin Spearman, anlisis Mann-Whitney y ANOVA.

resultados: Se encontr correlacin entre CLLs y creatinina (r: 0,2706, p: 0,0181), C3 (r: - 0,4070, p: 0,0006) y C4 (r: - 0,3179, p: 0,0088).

Las medianas de la c para los cuatro grupos: dsDNA negativo, dsDNA positivo, ANA negativo y ANA positivo fueron significativamente diferentes de las medianas del grupo control.

Las medianas de c de los grupos dsDNA negativo y dsDNA positivo fueron significativamente diferentes (p


024muJEr dE 30 Aos Con ArtrAlGiAs, lEsionEs CutnEAs y AntiCuErPos Anti-ElAstAsA

A.J. Paredes Fuentes, L. Jimez Gamiz

Hospital Universitario Virgen de las Nieves, Granada

introduccin: Los anticuerpos anti-citoplasma de neutrfilo (ANCAs) dirigidos contra la proteinasa 3 (PR3) o la mieloperoxidasa (MPO) son marcadores especficos y sensibles de vasculitis idiopticas de pequeos vasos. Sin embargo, tambin se han reportado casos de ANCAs positivos en pacientes con lesiones de las vas respiratorias altas atribuidas al consumo de cocana.

Exposicin del caso clnico:Antecedentes: Mujer de 30 aos, bebedora de fin de

semana, con antecedentes de hepatitis txica fulminante por paracetamol hace 3 aos, fenmeno de Raynaud, aftosis oral recurrente, cefaleas frecuentes, secreciones nasales sanguinolentas ocasionales y ndulos subcutneos en regin frontal y flexura de codos (eritema elevatum diutinum, diagnosticado por biopsia cutnea).

Motivo de consulta: Acude a Urgencias por malestar general, artralgias generalizadas, y exacerbacin de las lesiones cutneas, con extensin de las mismas a orejas, tronco y MMSS. Procede a ingreso hospitalario (Dermatologa).

Exploracin fsica: TA 122/70, afebril, no se palpan adenopatas. Edema labial y mltiples aftas orales en mucosa y lengua. Mltiples ndulos eritematosos, dolorosos a la palpacin, en espalda, escote, glteos y muslos.

Pruebas complementarias:Hemograma y coagulacin: a destacar 594.000

plaquetas/L [150.000-410.000].Bioqumica: parmetros bsicos (glucosa, urea,

creatinina, iones), perfil heptico, metabolismo lipdico, enzimas musculares, inmunoglobulinas y perfil tiroideo dentro de la normalidad. Protena C reactiva (PCR) 4.9 mg/dL [0.1-1].

Estudio de autoinmunidad: Ac antinucleares (ANAs) >1/320 (patrn centriolar) [1/320 [


resultados: El resultado de anticuerpos anti P-Rib ser positivo en ELISA si >20 U/mL y, en FEIA si >10 U/mL. De las 20 muestras analizadas se obtuvieron resultados discordantes en 7 (35 %):

ELISA (U): FEIA (U/mL): IgG (mg/dL):

96,56 7 4890

25,54 4,8 5430

133,93 2,2 1810

20,53 6,1 2890

31,24 0,7 2430

21,89 1,1 1010

21,19 7 0

Del anlisis de estas discordancias se observa que 5 pacientes presentaban un valor de Inmunoglobulina-IgG elevado (1810-4890 mg/dL, media= 3490 mg/dL). En un paciente el valor era normal (1010 mg/dL) y en otro se desconoca su valor. Las patologas de los pacientes con resultados discordantes: Hepatitis autoinmune (2 pacientes), LES (3), Esclerosis sistmica y Cirrosis biliar primaria (1) y Colitis ulcerosa (1).

Los 13 pacientes restantes presentaban: LES (2), LES y nefritis lpica (7), LES y afectacin neurolgica (1), LES con Sndrome antifosfolipdico (2), VIH/VHC y miositis en toxicmana (1).

Conclusiones: El 35 % de los pacientes evaluados mediante ELISA dan resultados discordantes frente a los obtenidos mediante FEIA, en pacientes clnicamente relevantes.

Una posible causa de esta discordancia puede deberse a la presencia de inmunocomplejos o agregados que en ELISA producen falsos positivos. Ello explicara porque los pacientes discordantes presentaban valores elevados de anticuerpos anti P-Rib por ELISA y de Inmunoglobulina-IgG. Con el mtodo FEIA se obvian dichas interferencias debidas a inmunocomplejos.

De los resultados discordantes, 4 presentaban patologas distintas al LES y un resultado de anticuerpos anti P-Rib positivo para ELISA y negativo para FEIA. Ello parece indicar que el mtodo FEIA sea ms especfico para la determinacin de estos anticuerpos en LES.


Citogentica y biologa molecular

026Estudio funCionAl dE dos nuEvAs mutACionEs dEl GEn CITOCROMO P450 1B1 (CYP1B1) idEntifiCAdAs En PACiEntEs Con GlAuComA ConGnito PrimArio

L. Snchez Gancedo (1), P. Lpez Garrido (2), J. Escribano Martnez (2), C. Medina Trillo (2), L. Navarro Casado (1)

(1) Hospital General Universitario de Albacete, Albacete; (2) Facultad de Medicina de Albacete, Albacete

introduccin: El glaucoma congnito primario (GCP) es una enfermedad grave que se caracteriza por el incremento de la presin intraocular, aumento del tamao del globo ocular (buftalmos u ojo de vaca), edema corneal, fotofobia y blefarospasmo. Las mutaciones del gen CYP1B1 son la principal causa conocida de GCP. Este gen codifica una enzima de la familia de los citocromos P450, posee actividad monooxigenasa y es capaz de metabolizar una gran variedad de sustratos. El estudio de las mutaciones del gen CYP1B1 en pacientes con GCP permite realizar diagnstico y asesoramiento genticos aunque el mecanismo por el que las mutaciones de este gen causan la enfermedad es desconocido, por lo que su estudio funcional puede contribuir a conocer mejor la base molecular de la enfermedad.

objetivos: En este trabajo experimental se busca el anlisis funcional de 2 nuevas mutaciones en las que aparece la enfermedad: F123L (Familia: GCP111) con genotipo F123L/+ en heterocigosis y L89P (Familia: GCP108) con genotipo R355fsX69/L89P en heterocigosis compuesta, encontradas en un estudio previo de 177 familias afectadas por GCP.

mtodos: Para el estudio funcional en primer lugar, las dos mutaciones se obtuvieron mediante mutagnesis dirigida. Las protenas mutantes recombinantes se expresaron transitoriamente en la lnea celular humana HERK 293T para determinar por fluorimetra su actividad enzimtica. Por ltimo se realiz un ensayo de estabilidad de los mutantes a lo largo del tiempo (entre 0 y 8h) tratando las clulas transfectadas con el ADN recombinante, con el inhibidor de sntesis proteica cicloheximida. La protena recombinante se cuantific mediante Western-Blot. Por ltimo se analiz la localizacin subcelular de las protenas CYP1B1 recombinantes mediante microscopa de fluorescencia empleando un anticuerpo primario myc.

resultados: La mutacin F123L posee una actividad enzimtica del 21,17% respecto a la forma silvestre mientras que la mutacin L89P presenta una actividad enzimtica del 0,94% respecto a la forma silvestre. Cinco horas despus de la inhibicin de la sntesis de protenas con cicloheximida la cantidad de protena mutante F123L fue aproximadamente la mitad de la protena silvestre, mientras que no se detect la variante L89P. Estos resultados muestran que ambas mutaciones disminuyen significativamente la estabilidad de la protena. Por otra parte el estudio de la localizacin subcelular de ambas variantes mostr una acumulacin de la variante L89P en el retculo endoplasmtico, mientras que la expresin de la mutacin F123L fue similar a la de la forma

silvestre aunque algo menos intensa.Conclusiones: El estudio funcional indica que

las mutaciones F123L y L89P son hipomorfa y nula, respectivamente, lo que apoya su carcter patognico.

027PAPEl dEl lABorAtorio En El diAGnstiCo dE lA nEurofiBromAtosis tiPo 1. A ProPsito dE un CAso

D. Antn Martnez, M.P. Atienza Morales, F.J. Polo Romero, M. Esteso Perona, A. guilar Campos

Hospital de Helln, Helln

introduccin: La neurofibromatosis tipo1 (NF1) o Enfermedad de Von Recklinghausen es una enfermedad de herencia autosmica dominante que tiene una expresividad muy variable.

El Instituto Nacional de la Salud de EEUU, defini en1987, los criterios de la NF-1. Para el diagnstico de neurofibromatosis, un paciente debe tener al menos 2 de los siguientes 7 criterios:

1. 6 ms manchas caf con leche, iguales o mayores de 5 mm en pacientes prepberes y de 15 mm de dimetro en pacientes postpberes.

2. 2 o ms neurofibromas de cualquiertipo, o uno plexiforme.

3. Presencia de pecas en axilas o ingles.4. Glioma del nervio ptico.5. 2 o ms ndulos de Lisch (hamartomas deliris).6. Lesin sea definida como displasiadelesfenoides o

adelgazamiento de lacorticaldelos huesos largos con o sin pseudoartrosis.

7. Un familiar de primer grado afecto (padre, hermano o hijo) de acuerdo con los criterios previos.

Exposicin del caso. Clnica: Varn de 3 meses de edad con fenotipo normal y buen estado general en el que se aprecian manchas cutneas de color caf con leche.

A la exploracin la auscultacin cardiopulmonar es normal, igual que la palpacin abdominal. Contacta bien, con tono, fuerza, motilidad, reflejos osteotendinosos y pares craneales normales.

Presenta 6 manchas cutneas color caf con leche distribuidas por cuello cabelludo, pabelln auricular derecho y mentn, todas ellas de ms de 5 mm de dimetro, junto con eflides axilares. No presenta neurofibromas cutneos y en ecografa craneal y ocular no mostr alteraciones.

Ante la sospecha de NF1 se solicit anlisis gentico.Estudio gentico del gen NF1 (Localizacin cromosmica:

17q11.2).Se realiz la extraccin de ADN a partir de sangre

mediante MagNA Pure (Roche). Posteriormente se realiz la amplificacin con primers especficos de 57 fragmentos correspondientes a la regin codificante y zonas intrnicas flanqueantes del gen NF1, segn la secuencia de referencia NM_000267.3 del GenBank.

Los fragmentos amplificados se secuenciaron en doble sentido mediante secuenciador automtico ABI 3130 (Applied Biosystems) y se analiz posteriormente la secuencia mediante software SeqScape v2.5. Se estudiaron


las variantes encontradas en la secuencia en distintas bases ded atos, incluyendo: NCBI, HGMD y LOVD (LeidenOpen Variation Database).

Se ha identificado por secuenciacin la presencia en heterocigosis de una delecin patognica c.1019_1020delCT en el gen NF1.

Se estudi posteriormente esta mutacin en sus padres y hermano mellizo, no detectndose en ninguno de ellos.

discusin: La presencia de la delecin patognica c.1019_1020delCT en el genNF1 confirmara el diagnstico de neurofibromatosis tipo I en el paciente.

Esta delecin da lugar a un cambio en la pauta de lectura, lo cual tiene como resultado un codn de parada prematuro (mutacin frameshift): p.Ser340CysfsX11. As, la delecin c.1019_1020delCT puede dar lugar a una protena truncada con ausencia del 88% de sus aminocidos o a una disminucin del ARNm de NF1 debido a un deterioro del mismo.

Esta delecin se encuentra descrita en la base de datos Human Gene Mutation Database (HGMD) con el nmero de acceso CD972347 asociada a un fenotipo de neurofibromatosis tipo I.

028mEdidA dEl nivEl dE ExPrEsin dE Cd30 En linfoCitos t En PACiEntEs Con luPus EritEmAtoso sistmiCo

C.M. Cabrera Morales (1), J.M. Urra Ardanaz (1), A. Carreo Parrilla (2), E. Fernndez Grande (1), J. Zamorano (3)

(1) Servicio de Anlisis Clnicos, Hospital General Universitario de Ciudad Real, Ciudad Real; (2) Servicio de Nefrologa, Hospital General Universitario de Ciudad Real, Ciudad Real; (3) Unidad de Investigacin, Hospital San Pedro de Alcntara de Cceres, Cceres

introduccin: El lupus es una enfermedad autoinmune multisistmica en cuya base se encuentra una desregulacin del perfil de citoquinas Th1/Th2. El marcador de activacin CD30 soluble ha sido implicado en patologas mediadas fundamentalmente por respuestas tipo Th2. Habindose descrito en el lupus una mayor concentracin de CD30 soluble en pacientes con enfermedad activa con respecto a controles sanos y a enfermedad inactiva.

objetivo: El objetivo del presente trabajo ha sido medir la expresin de CD30 en las sub-poblaciones de linfocitos-T (LT) CD4 y CD8 positivos; as como los niveles de citoquinas intracelulares: IFNg (Th1), IL-4 (Th2), IL-10, y TGFb, en clulas CD3 positivas.

material y mtodo: Estudio analtico observacional de cohortes dinmicas prospectivas. En el que se han estudiado un total de 21 pacientes con lupus del Servicio de Nefrologa de nuestro hospital: 17 con forma inactiva, y 4 con activa (SLEDAI, SLE Disease Activity Index > 4); y 10 controles sanos de donantes voluntarios del Banco de Sangre. 18 de los pacientes eran mujeres, y 3 hombres (18/3); con una media de edad de 43 13.81 (media DS). 10 de los 21 pacientes (10/21) presentaban adems positividad para los anticuerpos anti-DNAdc. 16 presentaban nefritis lpica: a) 12 con clase IV; b) 2 con clase V; c) 1 con clase III; y d) 1 con

clase II. Los pacientes con nefritis estaban en tratamiento con micofenolato (n=12), y ciclofosmamida (n=4); y aquellos sin afectacin renal estaban siendo tratados con prednisona y/o hidroxicloroquina.

La expresin del marcador de activacin CD30, as como los niveles de citoquinas intracelulares tanto en condiciones basales como tras estimulacin policlonal con PMA (ster de forbol) e ionomicina se midieron por citometra de flujo. Se consideraron valores significativos aquellos con una p


por conglomerados, procedentes de un estudio poblacional de fragilidad y dependencia (FRADEA) (n=1.172). Se calcul el ndice musculoesqueltico (SMI) aplicando la frmula de Janssen. Se emplearon los criterios de sarcopenia severa de Janssen, es decir: en hombres SMI8,50 kg/m2 y en mujeres SMI5,75 kg/m2. Adems, se recogieron variables demogrficas (edad, gnero), antropomtricas (IMC) y de actividad fsica (gasto calrico).

La extraccin de ADN genmico de la sangre total fue con el kit Qiagen. Mediante la reaccin en cadena de la polimerasa y utilizando cebadores diseados a tal fin se determin (GSTM, GSTT, VNTR intrn 4). Se analiz la asociacin entre la sarcopenia y los polimorfismos mencionados, ajustada por covariables, mediante regresin logstica multivariante (SPSS 17.0).

resultados: La edad media fue 76,2 aos (DE:4,3), con el 53,2% de mujeres. Asimismo, 80 pacientes cumplan criterios de sarcopenia severa (17,2%). La distribucin poblacional de los genotipos del gen GST1 se muestra en la Tabla 1. El anlisis del polimorfismo en el intrn 4 del gen eNOS se detalla en la Tabla 2.

Tabla 1. Polimorfismos del gen GST1

Polimorfismos del gen Gst1 Genotipo nulo Genotipo positivo

Gstm 52% (n=234) 48% (n=216)

Gstt 22% (n=99) 78% (n=351)

Tabla 2. Polimorfismo VNTR intrn 4Polimorfismos de la xido ntrico

sintasa endotelial 4a/4a 4a/4b 4b/4b

vntr intrn 4 enos 67% (n=301)30%

(n =136) 7% (n=13)

En los polimorfismos analizados no se evidencia asociacin con las variables demogrficas, antropomtricas, de actividad fsica y de comorbilidad consideradas en el estudio. En los modelos de regresin, ajustado y sin ajustar por covariables (edad, gnero, IMC y gasto calrico), no se obtuvieron diferencias estadsticamente significativas (p>0,05).

Conclusiones: Los polimorfismos de los genes de la glutatin transferasas y la xido ntrico sintasa endotelial no han resultado estar asociados con sarcopenia. Sin embargo, la distribucin poblacional se caracteriza por ser bastante homognea, pues se trata de una cohorte de ancianos no institucionalizada, autnoma y no dependiente. Por tanto, sera conveniente analizar los polimorfismos en otra cohorte ms heterognea antes de descartar su utilidad como factor de riesgo en sarcopenia.

Consecuentemente, se trata de un posible fenmeno de supervivencia selectiva, donde los ancianos que podran mostrar una mayor asociacin de los polimorfismos con la sarcopenia han fallecido o estn discapacitados, lo que manifiesta la dificultad de este tipo de estudios.

030frECuEnCiA GEnotPiCA dEl Polimorfismo rs12979860 dEl GEn il28B . EvAluACin dE lA rEsPuEstA trAs El trAtAmiEnto Con triPlE tErAPiA En PACiEntEs Con HEPAtitis C

B. Cands Estbanez, S. Mir Cas, M. Huguet Ruiz De Gopegui, E. Berlanga Escalera

Corporaci Sanitari Parc Tauli, Sabadell

introduccin: La prevalencia de la infeccin crnica por el virus de la hepatitis C (VHC) oscila entre el 1,5 y el 3%. La combinacin de interfern pegilado y ribavirina consigue curar alrededor del 50% de los enfermos infectados por el virus con genotipo 1, que es la forma ms comn (75%). La introduccin de la triple terapia incluye un agente antiviral directo como telaprevir o boceprevir y permite que se alcance una tasa de curacin del 75% en los enfermos infectados por virus con el genotipo 1 que no hayan recibido nunca tratamiento y alrededor del 50% en los que no hayan tenido respuesta viral sostenida (RVS) al tratamiento doble previo. Adems, los portadores del alelo T del polimorfismo rs12979860 del gen IL28B poseen una respuesta al tratamiento estndar (doble terapia) peor que los no portadores.

objetivo: Calcular las frecuencias genotpicas del polimorfismo rs12979860 del gen IL28B en nuestra poblacin y evaluar la respuesta al tratamiento en los pacientes tratados con doble y con triple terapia durante el ao 2012.

material y mtodos: En el estudio se incluyeron 207 pacientes VHC (genotipo 1) en los que se estudi el polimorfismo rs12979860 del gen IL28B mediante PCR a tiempo real (LightMix Kit) en LightCycler de Roche Diagnostic. A los 28 pacientes que cumplieron los criterios establecidos por el Catsalut para tratamiento con triple terapia, se les midi la carga viral antes y despus del tratamiento y se evalu la respuesta (como concentracin de RNA) segn el genotipo del polimorfismo rs12979860 del gen IL28B.

resultados: Tras el anlisis de los 207 genotipos, se encontr que: la frecuencia genotpica para CC fue del 28%, ms baja que la encontrada en la bibliografa para poblaciones similares a la nuestra (aproximadamente un 40%). La obtenida para el genotipo CT fue de un 56%, mayor de la esperada en poblaciones similares y para el TT aproximadamente la misma (9%). En cuanto a la respuesta al tratamiento segn el genotipo, se encontr lo siguiente: de los 58 pacientes CC que siguieron con doble terapia, un 75% consiguieron alcanzar un RNA indetectable tras el tratamiento, un 15% un RNA


de pacientes que alcanz una carga viral indetectable o RNA


033mutACin dE novo idEntifiCAdA En un nuEvo GEn rElACionAdo Con lA muErtE sBitA

C. Prez Ruescas, E. Garca Molina, I. Prez, I. Gmez Milanes, M. Sabater, L. Albert Botella, F. Ruiz Espejo, J.R. Gimeno Blanes

Hospital Universitario Virgen de la Arrixaca, Murcia

Antecedentes y objetivos: La muerte sbita inexplicable (MSI) es un problema de salud de primer orden que en ocasiones afecta a individuos jvenes y deportistas, pudiendo ser la primera manifestacin de una en miocardiopata o una canalopata en un individuo previamente asintomtico.

La realizacin de la autopsia molecular y posterior estudio gentico familiar permitira identificar la causa de la MSI as como el riesgo de sufrir una MSI en los familiares asintomticos.

Nuestro objetivo fue realizar el anlisis clnico y gentico de un caso de MSI y posterior estudio familiar.

material y mtodos: Se presenta un caso de MSI resucitada durante el ejercicio en un varn de 13 aos. El paciente nunca haba presentado sntomas y no exista afectacin familiar. Se realiz el estudio clnico del caso ndice, incluyendo ECG, ECO,prueba de esfuerzo, Holtery resonancia. Se realiz el estudio gentico del probando mediante secuenciacin directa (ABI3130); DSC-2, JUP, KCNE1, KCNE2, KCNJ2, KCNQ1, KCNH2, SCN5A; y NGS mediante un panel de cardiopatas hereditarias que incluye 126 genes (plataforma Hi-Seq Illumina). Los estudios bioinformticos fueron realizados con los sofwares de prediccin de patogenicidad: Polyphen-2, Sorting Intolerant From Tolerant (SIFT) y Pmut.

resultados: Se realizaron ECO y ECG aparentemente normales, aunque en uno de los primeros ECG exista elevacin mnima del ST en V1 y V2, con repolarizacin precoz y elevacin del punto J. La resonancia cardiaca mostr una salida de las coronarias adecuada y ventrculo derecho normal. El ventrculo izquierdo con FE normal. Tras el anlisis mediante secuenciacin directa no se detect ninguna variante patognica relacionada. Posteriormente se analiz en la plataforma de NGS detectndose una variante no descrita en la bibliografa en el gen GJA1, H126n. El gen GJA1 codifica para la protena conexina43, que constituye uno de los componentes ms abundantes de las uniones gap en el corazn, por lo que podra estar implicado en el desarrollo de arritmias. Mutaciones en este gen han sido asociadas a la displasia oculodentodigital y malformaciones cardacas congnitas como hipoplasia del ventrculo izquierdo, anomalas conotruncales cardacas y defectos septales.Se realiz el anlisis de prediccin de patogenicidad resultando una mutacin de patogenicidad incierta. Posteriormente se realiz el estudio gentico familiar para la deteccin de la variante, sin ser hallada esta en ninguno de los familiares estudiados.

Conclusion: Nuevas tcnicas de diagnstico gentico como la NGS nos ayudan a la deteccin de nuevas variantes en genes antes no asociados a la MSI.

La mutacin encontrada se considera una mutacin de novo, ya que no ha sido hallada en ninguno de los familiares estudiados hasta el momento.

034idEntifiCACin dE unA mutACin fundAdorA (BRCA1 c.3582-3589del8) En fAmiliAs CAnAriAs Con CnCEr dE mAmA y ovArio HErEditArio

A. Snchez De Abajo (1), A. Soria Lpez (1), M. Riao Ruiz (1), J.R. Ojeda Ramos (1), C. Pont Invernon (1), C. Cudero Surez (1), T. Dorta Ramos (1), M. Fbregas Brouard (1), T. Calds Llopis (2), M. De La Hoya Mantecn (2)

(1) Hospital Universitario Insular de Gran Canaria, Las Palmas de Gran Canaria; (2) Hospital Clnico San Carlos, Madrid

introduccin: La existencia de antecedentes familiares de cncer de mama (CM) es uno de los principales factores de riesgo de desarrollo de la enfermedad. Aproximadamente de un 5 a un 10% de todos los casos de CM son debidos a predisposicin hereditaria. Estudios epidemiolgicos han demostrado la participacin de al menos 2 genes de susceptibilidad: BRCA1 (17q21) y BRCA2 (13q12-13). Las mutaciones heredadas en ambos genes son responsables de una amplia proporcin de casos (30-65%) en mujeres con extensos antecedentes familiares. Se ha identificado un gran nmero de mutaciones en la lnea germinal de BRCA1 y BRCA2. En la mayora de los casos se han descrito una sola vez, pero algunas alteraciones son mutaciones fundadoras para algunas poblaciones de origen tnico o geogrfico especfico. Las mutaciones recurrentes son un reflejo de las estructuras poblacionales, el aislamiento geogrfico o cultural y los movimientos migratorios a lo largo de la historia. La identificacin de mutaciones recurrentes en una determinada poblacin nos facilita el diseo de algoritmos ms eficientes de bsqueda de mutaciones en genes complejos.

objetivo: Testar la posibilidad de que existan mutaciones fundadoras en Canarias que simplifiquen los estudios genticos en BRCA1 y BRCA2.

material y mtodos: El estudio de mutaciones en BRCA1 y BRCA2 se realiz en 140 familias canarias con historia de CM y/o ovario. El cribado de mutaciones puntuales en estos genes se llev a cabo en los exones codificantes y secuencias intrnicas adyacentes por HRM (High Resolution Melting) y posterior caracterizacin de los patrones alterados por secuenciacin directa. El estudio de grandes reordenamientos genmicos se realiz por MLPA (Multiplex Ligation-dependent Probe Amplification). El anlisis del haplotipo se realiz en 16 portadores de mutacin c.3582-3589del8 (p.His1195PhefsX20) en BRCA1, pertenecientes a 6 familias, mediante el estudio de 4 STRs Short Tandem Repeat (D17S1299, D17S855, D17S1322, D17S1323) y 3 SNPs Single Nucleotide Polymorphism (rs1799966, rs1799949, rs4986850). Los STRs se analizaron mediante amplificacin por PCR y posterior anlisis de fragmentos por electroforesis capilar. Los SNPs se genotiparon por HRM. Los orgenes geogrficos de las distintas familias se averiguaron mediante entrevistas personales a los probandos.

resultados: De las 140 familias estudiadas se identificaron mutaciones patognicas en 22 familias, 12 en BRCA1 (5 mutaciones distintas) y 10 en BRCA2 (8 mutaciones distintas). De las 12 familias con mutacin en BRCA1, 6 compartan la misma mutacin c.3582-3589del8 (p.His1195PhefsX20), previamente no descrita en otras poblaciones. Las seis familias procedan de un rea


geogrfica muy restringida (zona centro de Gran Canaria), lo que reforzaba la hiptesis de un efecto fundador. Finalmente, el anlisis gentico nos permiti identificar un haplotipo de BRCA1 compartido por las seis familias.

Conclusiones: La hiptesis de partida parece cierta. La mutacin fundadora identificada se localiza en una zona geogrfica delimitada. Este estudio ha incluido principalmente familias del rea sur de Gran Canaria y Fuerteventura, por tanto es muy probable que existan mutaciones recurrentes pendientes de ser identificadas. Estudios con un mayor nmero de familias que incluyan las siete islas canarias nos ayudaran a optimizar algoritmos para el estudio de mutaciones en BRCA1/2.

035AnomAlAs CromosmiCAs En CAriotiPo dE sAnGrE PErifriCA dE 723 vAronEs infrtilEs

B. Garca Garca, L.A. Varela Sanz, M.J. lvarez Blanco, M. Barrionuevo Gonzlez, L. Maceda Garca, C. Coca Martin

Hospital Prncipe de Asturias, Alcal de Henares, Madrid

introduccin: Las causas de infertilidad son heterogneas pero se estima que tienen un origen gentico en el 15% de los varones y en el 10% de las mujeres. La frecuencia de anomalas cromosmicas constitucionales es ms alta en los varones infrtiles que en la poblacin general, y tanto las alteraciones numricas como estructurales pueden producir disminucin de la fertilidad. Presentamos los resultados de los estudios citogenticos en sangre perifrica, realizados a varones infrtiles en nuestro laboratorio en el perodo 2001-2012 con las frecuencias relativas de las alteraciones cromosmicas observadas.

material y mtodos: Se han estudiado 723 muestras de sangre perifrica de pacientes varones infrtiles procedentes de la consulta de Reproduccin Asistida de nuestro Hospital.

Se han utilizado tcnicas de citogentica convencional con una resolucin de 550-700 bandas GTL. El protocolo habitual incluye el estudio de 20 metafases, que se amplan a 50 en casos de sospecha de mosaicismo.

En los casos requeridos el estudio se completa con tcnicas de FISH.

resultados: Se han encontrado un total de 19 anomalas cromosmicas (incidencia de 2.63 %) de las cuales 10 (1,38%) son numricas (8 con afectacin de los cromosomas sexuales y 2 mosaicos con un cromosoma marcador) y 9 (1.24%) son estructurales (dos translocaciones robertsonianas, una translocacin X-autosoma, dos inversiones, 3 cromosoma Y dicntrico y un fra(16)).

En cuanto a la inversin pericntrica del cromosoma 9 (p11q13), con la que existe controversia en cuanto a su relacin con la infertilidad, hemos encontrado 6 casos (0.83%) una incidencia incluso ms baja que en la poblacin general (1-3%).

discusin: La incidencia de anomalas cromosmicas en la poblacin general es de 0.6-0.7%.En nuestra serie la incidencia es del 2.63 % lo que demuestra la mayor prevalencia de alteraciones cromosmicas en varones infrtiles y confirma la obligatoriedad del anlisis del cariotipo

en sangre perifrica antes de iniciar tcnicas de reproduccin asistida (FIV, ICSI) en parejas con problemas de fertilidad.

036CArACtErstiCAs ClniCAs E inmunoHistoQumiCAs dE PACiEntEs Con tEst GEntiCo BrCA Positivo

X. Gabald Barrios, A.I. Snchez Bermdez, A. Sarabia Meseguer, P. Snchez, A. Martnez Ruiz, M. Marn Vera, J.L. Alonso Romero, F. Ruiz Espejo

Hospital Universitario Virgen de la Arrixaca, Murcia

introduccin: El cncer de mama es el ms frecuente en mujeres. Hasta un 10% de los cnceres de mama y ovario (CMO) son debidos a mutaciones en la lnea germinal en

Documents

VII Congreso naCIonal del laboratorIo ClínICo - labclin.orgjosepr37/sociedades/labclin/images/site/pdf/... · resolución de la enfermedad. Exposición del caso clínico: Antecedentes: