Ativação Neuronal e c-Fos
Ciclo de seminários do LCM 2011
Priscila Cassolla
Identificação das áreas cerebrais ativadas após um estímulo
Localização da atividade neuronal
Análise do RNAm c-fos ou da proteína
Ativação Neuronal e c-FosAtivação neuronal Neurônios/Sinapses
Comunicação celular
Introdução
c-Fos
Comunicação celular• Neurônios
Atividade Neuronal – Comunicação celular
Hansen, J. T. & Koeppen, B. M. – Netter’s Atlas of human physiology
Comunicação celular• Sinapses
Atividade Neuronal – Comunicação celular
http://www.mind.ilstu.edu/curriculum/neurons_intro/neurons_intro.php
Sinapses e expressão gênicaAtividade Neuronal – Comunicação celular
Sinapses e expressão gênicaAtividade Neuronal – Comunicação celular
West, A. E. et al, 2002
c-Fos???• O que é c-Fos?
• Qual o papel fisiológico da c-Fos no neurôrio?
• Por que c-Fos é um marcador de atividade neuronal?
• Como c-Fos é detectada?
Proteína c-Fos
O que é c-Fos?• 1ª proteína caracterizada da família Fos: c-Fos, FRA-1, FRA-2 e FosB ( porção N-terminal)
Proteína c-Fos
• 380 aas 90% homologia com o oncogene v-Fos
Retrovírus do Sarcoma murino osteogênico Finkel-Biskis-Jinkins
Immediate-early gene (IEG)
c-fos, c-jun e c-myc
Fatores de transcrição
Qual o papel da c-Fos no neurônio?Proteína c-Fos
• Após dimerização com membros da família Jun (c-Jun, JunB e JunD), o dímero Fos/Jun liga-se à região AP-1 para promover ou inibir a transcrição de diversos genes (proliferação, diferenciação e apoptose)
Zíper leu
Aprendizado e memória? (FRAs e FosB)
Proteína c-Fos
Clayton, D. F., 2000
Proteína c-Fos
Chinenov, Y e Kerppola, T.K., 2001
Por que c-Fos é marcador de atividade neuronal?
• Não é expressa (ou pouco expressa) em condições basais – sem geração de potencial de ação;
• É rapidamente expressa em resposta aos sinais de superfície celular (estímulos externos);
• Expressão transitória com meia-vida mais curta do que os outros membros da família Fos;
Proteína c-Fos
• O estresse da eutanásia não interfere;
Por que c-Fos é marcador de atividade neuronal?
• A proteína c-Fos é nuclear, portanto permite estudos com dupla-marcação para identificação do fenótipo neuronal
Proteína c-Fos
Por que c-Fos é marcador de atividade neuronal?
Proteína c-Fos
Kovács, K. J., 2008
Como c-Fos é detectada?• RNAm da c-Fos Hibridização in situ
• Proteína c-Fos Imunohistoquímica
Proteína c-Fos
Clayton, D. F., 2000
Como c-Fos é detectada?• RNAm da c-Fos Hibridização in situ
Proteína c-Fos
http://www.colorado.edu/intphys/Class/IPHY3730/image/figure6-9.jpg
Como c-Fos é detectada?• Proteína c-Fos Imunohistoquímica
Proteína c-Fos
http://www.komabiotech.co.kr/www/techniques/immunodection/immTechniques.html; Thaler, J. P. et al., 2009
Obrigada!