UNIVERSIDADE REGIONAL DO CARIRI - URCA
CENTRO DE CIÊNCIAS BIOLÓGICAS E DA SAÚDE - CCBSDEPARTAMENTO DE CIÊNCIAS BIOLÓGICAS – DCB
CURSO DE CIÊNCIAS BIOLÓGICASTÉCNICAS E IDENTIFICAÇÃO DE MICRORGANISMOS
PROFª: MARIA FLAVIANA MORAES BRAGA
MICROSCOPIA DE MICRORGANISMOS
Fernanda Gomes LeiteHerivelto Faustino de Oliveira
Crato – CE05/2012
MICROSCOPIA DE MICRORGANISMOSFernanda Gomes Leite
Herivelto Faustino de Oliveira
MICROSCOPIA DE MICRORGANISMOSFernanda Gomes Leite
Herivelto Faustino de Oliveira
Procariotos(bactérias e arqueas): variam entre 300nm e 1µmEucariotos(fungos, algas e protozoários): variam de 10µm a 100µm Virus:(variam de 27nm(bacteriófago ɸX 174) até 300 nm (por virus) de diâmetro
Os microrganismos constituem um grupo de seres vivos de dimensões reduzidas e bastante variáveis de acordo com o grupo a que pertence.
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Microscópio Óptico ou de Luz
Microscópio Eletrônico
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Herivelto Faustino de Oliveira
Microscópio Óptico ou de LuzA resolução é a capacidade que um sistema
óptico tem de distinguir objetos separados por pequenas distâncias.
Limite de Resolução
Limite de Resolução
MICROSCOPIA DE CONTRASTE DE FASE
Foi desenvolvida a partir da observação de que o material biológico era capaz de alterar a luz incidente sobre ele provocando difração.
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DIFRAÇÃO E MATERIAL BIOLÓGICO
Alguns materiais que retardam a onda de luz incidente em meio comprimento de onda podem ser observados no microscópio óptico.
Excelente contraste no meio que os envolve.
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DISCOS DE CONTRASTE Para produzir o contraste é preciso dois discos de contraste. 1° colocado anterior ao condensador > anulus 2° plano focal posterior a objetiva > disco de fase
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UTILIZAÇÃO
Lentes da objetiva > N° Ph1, Ph2 e Ph3 Anel tem de estar com n° correspondente a n° da objetiva
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CONTRASTE INTERFERENCIAL DIRECIONAL (CID)
Difração material biológico + polarização da luz. Gera imagem aparentemente tridimensional com excelente
contraste.
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OBTENÇÃO DE IMAGEM EM DIC
Plano de vibração de luz > Polarizador (colocado antes do condensador).
Prisma usado para regular contraste.
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VANTAGENS EM RELAÇÃO AO CONTRASTE DE FASE
Pode ser usado em material espesso Melhor análise das extremidades Observação em diferentes planos de foco
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MICROSCOPIA DE FLUORESCÊNCIA
Visualização de microrganismos Baseia-se na utilização de corantes fluorescentes.
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Os corantes são capazes de absorver luz de um determinado comprimento de onda, emitindo luz em comprimento maior.
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BASEIA-SE NO EFEITO TYNDAL
Explica como vemos partículas de poeira ao sol. O que vemos é o reflexo da poeira
O sist. Fluorescência é adaptado a um microscópio óptico de contraste de fase
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IMUNOFLUORESCÊNCIA Marcação da molécula é feita com uso de anticorpos e
fluorocromos.
MICROSCOPIA CONFOCAL Vantagens : elimina a fluorescência das regiões fora de
foco Pode-se aplicar a amostras vivas ou fixadas, e marcadas
com mais de um corante
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MICROSCOPIA ELETRÔNICA microscópio eletrônico apareceu em 1932 e vem sendo
rapidamente aperfeiçoado. As máquinas mais atuais permitem aumentos de 5 mil a 500 mil vezes, sem muita dificuldade
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A grande diferença desse microscópio para o óptico é q esse utiliza feixes de elétrons em vez de luz.
MICROSCOPIA ELETRÔNICA DE TRANSMISSÃO (MET) Os elétrons, assim como a luz no microscópio óptico,
necessitam atravessar a amostra para gerar uma imagem visível
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CONSIDERAÇÕES Não analisa material vivo A imagem é formada pela interação dos elétrons com
as diferentes regiões da amostra A passagem dos elétrons pela amostra gera alterações
devido ao aquecimento
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Herivelto Faustino de Oliveira
PARA ANALISAR A AMOSTRA
Amostra tem que ser fixada, desidratada e incluída em resina plástica
MICROSCOPIA ELETRÔNICA DE VARREDURA (MEV)
A imagem é formada pela interação dos elétrons com a superfície da amostra > gerando imagem tridimensional.
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AMOSTRA
Amostra deve ser fixada e desidratada, e recebe uma camada de ouro (20nm de espessura)
Os elétrons excitam um cintilador que gera fótons, os quais são então conduzidos por fibra óptica até a tela da TV.