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MICROBIOLOGÍA AMBIENTAL 358010
PROTOCOLO DE PRÁCTICA
Nombre de curso Microbiología Ambiental
Código de curso 358010
Créditos del curso 3Valor de esta actividadpráctica
150 Puntos ( 60 puntos calificados por virtual, 90puntos
calificados por tutor de Laboratorio)
Nombre del director decurso Jorge Alejandro Rodríguez
Palacios
Correo institucional deldirector del curso
[email protected]
Contacto del director decurso
Teléfono fijo y teléfono celular
CEAD al que pertenece ZCBOY- CEAD Tunja
Espacio donde se debedesarrollar la práctica
Laboratorios CEAD o convenios
Objetivos de la práctica
- Normas de Bioseguridad en el Laboratorio
Entender las normas de bioseguridad necesariaspara el trabajo en
laboratorio.Identificar los implementos de protecciónpersonal.
- Técnicas de aislamiento de microorganismosManipulación de
microorganismos en medios decultivo.Recuento de Microorganismos por
medio dediluciones.
-Técnicas de tinciónColoración de Gram ( Bacterias)Tinción de
Azul de lactofenol (Hongos)
- Técnicas de interés en Ingeniería AmbientalFiltración por
membrana para coliformes fecalesy E.coli
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Justificación de lapráctica
El estudiante pondrá en práctica los conocimientosadquiridos en
el curso, reforzando los temas vistos enel aula virtual, destrezas
y habilidades para lamanipulación de materiales, equipos, reactivos
ymicroorganismos.
Competencias adesarrollar
El estudiante desarrolla destrezas y habilidades para
lamanipulación de materiales, equipos, reactivos ymicroorganismos
en el laboratorio.
Duración de la práctica. 8 horas
Mecanismo mediante elcual se evaluará lapráctica:
A través de la rúbrica de evaluación la cual vaadjunta al final
del presente protocolo, debe ser lamisma del aula virtual
METODOLOGÍA
El componente práctico del curso de Microbiología Ambiental está
dividido en dosfases, la primera denominada Actividad 3
Experimentación I, que hace referencia ala fase que desarrollará
cada estudiante de manera individual en el campus virtualy será
calificado por el tutor virtual.
La segunda fase de la práctica hace referencia a la actividad 4
experimentación II,que será guiada por el tutor de práctica en los
distintos laboratorios de la rednacional de laboratorios.
A continuación se relaciona la guía de la fase II
actividad 4 experimentación II, parael tutor de práctica y los
estudiantes.
PRACTICA FASE II ACTIVIDAD 4 EXPERIMENTACIÓN II
(Laboratorio)
Los estudiantes deben consultar por su cuenta propia y basada en
las referenciasbibliográficas entregadas en el curso la información
necesaria para las siguientesprácticas. El tutor práctico guiará y
despejará las dudas a los estudiantes en ellaboratorio
PRACTICA 1- BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO
Los laboratorios de microbiología están regidos por normas de
seguridad e higieneque deben cumplirse a cabalidad para garantizar
la protección contra infeccionesde los estudiantes u otro personal
que labora en estas instalaciones, así comogarantizar la calidad de
las técnicas y la confiabilidad de los resultados.
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Los estudiantes deberán identificar las normas de bioseguridad
en el laboratorio unavez ingresen al mismo.
El tutor práctico dará una breve explicación sobre las normas
con las que cuentanen el laboratorio donde se esté desarrollando la
práctica.
REFERENCIAS BIBLIOGRAFICASBENSON, HAROLD J. Microbiological
applications: Laboratory Manual in GeneralMicrobiology. McGraw
– Hill. U.S.A. 1998.COLLINS, C. H. and M LYNE, PATRICIA.
Traducción del inglés por José MaríaTarazonaVilas. Métodos
microbiológicos. Editorial ACRIBIA, S. A. ZARAGOZA
(España).1989.OMS – Organización Mundial de la Salud.
Manual de bioseguridad en el laboratorio.Ginebra. 2005.
IMPORTANTE: LOS ESTUDIANTES DEBEN LEER Y CUMPLIR LAS NORMASDE
LABORATORIO, EL INCUMPLIMIENTO DE LAS MISMAS ACARREARÁ LASANCIÓN DE
LA NOTA PRÁCTICA.
PRÁCTICA No. 2RECONOCIMIENTO DEL LABORATORIO Y MATERIALES
DEMICROBIOLOGIA
Realizar una descripción de los materiales que utilizarán en la
práctica, esto incluye
equipos y materiales de vidrio. Realizar un boceto de cada uno y
una brevedescripción.
PACTICA No 3MÉTODOS DE SIEMBRA –PARTE ALa inoculación de
medios de cultivo para la recuperación, mantenimiento
y/oaislamiento de microorganismos, es un procedimiento fundamental
e importante.Debe tenerse cuidado con las técnicas de siembra
microbiana para evitar en lo
posible la contaminación por otros microorganismos diferentes al
deseado.MATERIALES1. Microorganismos previamente aislados (
Bacterias y hongos)2. Agar nutritivo en caja de Petri3. Agar PDA4.
Asa redonda5. Gradilla6. Mechero
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7. Incubadora8. Vinipel9. Marcador de vidrioPROCEDIMIENTO1.
Desinfectar el área de trabajo, prender el mechero y preparar el
material detrabajo.2. Abrir la caja de Petri y seguir el esquema
para el aislamiento para el caso debacterias.
3. Para el caso de Hongos tomar con el asa recta el
microorganismo y por punciónsembrar en la caja de Petri con medio
PDA.
4. Incubar a 37° por 24 horas para bacterias y a 25° por 8 días
para hongos.
5. Terminado la siembra, marcar las cajas en el borde de la base
de la caja yenvolverla en papel vinipel..6. Desinfectar el área de
trabajo, apagar el mechero y entregar el material
MÉTODOS DE SIEMBRA –PARTE B
En esta etapa los estudiantes utilizarán una de las técnicas de
siembra más usadasen laboratorio, que permite el recuento de
microorganismos en una muestra comoaguas, suelos etc. La técnica a
realizar en este punto hace referencia a losrecuentos de
microorganismos utilizando diluciones seriadas en base 10, donde
sedispersa la población de microorganismos permitiendo conocer el
númeroaproximado en una muestra.
MATERIALES
1. Muestra de suelo o agua residual.2. Frascos con solución
salina 0.85% o agua peptonada al 0.1% (90 ml)
3. Tubos tapa rosca con 9 ml de solución salina o agua peptonada
al 0.1% (6
tubos)
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4. Cajas de Petri con agar Nutritivo, Chromocult o King B.( 6
cajas)5. Pipetas de vidrio o pipeta automática. ( 100 microlitros y
1000 microlitros)6. Rastrillos.
PROCEDIMIENTO
1. Pesar 10 gramos de la muestra, mezclarla con los 90 ml de
solución salina oagua peptonada.
2. Realizar diluciones seriadas desde 10-1 hasta 10-6 3.
Tomar las 6 cajas de Petri con agar y marcar 2 con dilución 102, 2
cajas con
dilución 104, 2 cajas con dilución 106
4. Sembrar por duplicado las diluciones 10-2 10-4 10-6
tomando 0,1 ml de cadadilución por superficie, con ayuda del
rastrillo homogenizar la microgota sobre
la superficie del agar sin romperlo.
5. Incubar por 24 horas a 37°C y realizar el recuento. 6.
Realizar los cálculos donde se toman las diluciones donde se
encuentrenentre 30 y 300 colonias para realizar el recuento, sacar
promedio y aplicar la
fórmula: Número de colonias x Factor de dilución x 10 (factor de
corrección)
El resultado es informado en UFC ( unidades formadoras de
colonia)/ g o ml
de la muestra.
PRACTICA 4. TECNICAS DE TINCIÓN
Parte A Tinción de Gram para bacterias.
Para poder observar al microscopio los distintos tipos de
microorganismos existen
distintos tipos de coloraciones o tinciones que tienen afinidad
con ciertas partes de
la célula y permite diferenciarlas y observar algunos órganos de
las células. Para el
caso de bacterias la técnica más usada es la tinción de Gram,
donde se permite
clasificar las bacterias en Grampositivas (violetas) y
Gramnegativas (Fucsias).
MATERIALES
1. Muestras de Microorganismos, ( practica aislamiento)
2. Colorantes para tinción de Gram (Cristal violeta, lugol.
Alcohol acetona,Fucsina de Gram)
3. Aceite de inmersión
4. Microscópio.
5. Asas redondas
PROCEDIMIENTO
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1. Tomar las colonias de bacterias que los estudiantes
sembraronanteriormente ( técnicas de aislamiento) y realizar un
frotis en una lámina
portaobjetos, colocando una gota de agua y con ayuda del asa
redonda
homogenizar para expandir el frotis en la lámina.
2. Dejar secar al aire libre la muestra, una vez se encuentre
seca, fijar al calorla muestra en el mechero ( se coloca 3 veces
rápidamente sobre el fuego la
lámina) 3. Una vez se encuentra la muestra fijada se
procede a colocarle varias gotas
de cristal violeta, dejando por un minuto y luego lavar en el
grifo (solo para
quitar el exceso de colorante. 4. Colocar unas gotas de
lugol, dejar por un minuto y lavar. 5. Colocar una gota de
alcohol acetona, dejar por 15 minutos, lavar. 6. Colocar unas
gotas de Fucsina de Gram, dejar por un minuto, lavar y dejar
secar la muestra. 7. Una vez se encuentra seca la muestra
agregar una gota de aceite de
inmersión y observar en el microscópio en el objetivo de
100x. 8. Observar las morfologías ( bacilos, cocos,
Grampositivos, Gramnegativos)
Parte B Tinción de Azul de Lactofenol para hongos.
Para ver la morfología de los hongos filamentosos se utiliza la
tinción de azul de
lactofenol, la cual permite contrastar y ver las diferentes
partes de un hongo ( hifa,
conidios, septos, etc)
MATERIALES
1. Muestras de Microorganismos, ( practica aislamiento)
2. Azul de lactofenol.
3. Microscópio
4. Cinta transparente.
5. Asas rectas o agujas de disección.
6. Láminas y laminillas.
PROCEDIMIENTO
1. Tome con una cinta o con las agujas de disección un trozo del
hongo ( tomarmicelio, parte algodonosa)
2. En una lámina portaobjetos colocar una gota de azul de
lactofenol.
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3. Si tomó la muestra con aguja de disección, ponerla en
contacto sobre la gotae ir desglosando las hifas, colocarle una
lámina portaobjetos, si utilizó la cinta
transparente sólo debe colocarla sobre la gota sin necesidad de
laminilla
cubreobjetos.
4. Llevar al microscópio y observar en el objetivo de 40x.
5. Observar las estructuras y anotarlas para el informe.
PRACTICA 5 ALGUNAS TECNICAS APLICADAS EN
MICROBIOLOGÍAAMBIENTAL.
La microbiología enfocada en la parte ambiental ha permitido
diagnosticar eimplementar nuevas alternativas para el desarrollo
agrícola, en el ámbito de laingeniería ambiental y la
industria.
Con los conocimientos adquiridos en el curso y teniendo un
conocimiento básico dela microbiología, los estudiantes realizaran
las siguientes pruebas que actualmentese utilizan a nivel mundial y
específicamente en el país.
INDICADORES DE CONTAMINACION DE AGUAS POTABLESLos indicadores de
contaminación son utilizados para medir el grado decontaminación o
afectación de cuerpos de agua, agua de consumo etc, en Colombiapara
el caso de aguas potables la normatividad exige un valor de 0
unidadesformadoras de colonia en 100 ml de agua muestreada para el
caso de coliformes
totales como indicador.
Para esta prueba si el laboratorio de su CEAD, UDR, CERES no
tiene los elementosnecesarios para realizarla, deberán consultar
cual es la normativa vigente y quéotros indicadores
(microorganismos) se utilizan en el ámbito de contaminación
deaguas.
Materiales
1. Equipo de filtración por membrana (equipo millipore de
plástico)
2. Membrana de nitrocelulosa de 0.45 micrometros para
filtración.
3. Jeringa (para hacer vacío)4. Cajas de Petri con
agar Chromocult para coliformes.
Procedimiento
1. Tomar 100 ml de agua de la llave, la cual se inoculará con
una asada
de cultivo de E. coli, agitar muy bien.
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2. Colocar la muestra en la parte superior de la campana de
filtración y
con la ayuda de la jeringa realizar el vacío para permitir el
paso del
agua de un lado al otro.
3. Con unas pinzas estériles retirar la membrana y colocarla
sobre el
agar Chromocult, la parte de la cuadrícula debe ir mirando
haciaarriba.
4. Incubar por 24 horas a 37° c y observar el número de colonias
con las
características típicas de E. coli y coliformes
totales (consultar la
coloración en este medio, se encuentra por internet)
NOTA: SI NO CUENTAN CON LOS MATERIALES DEBEN CONSULTAR
LANORMATIVIDAD Y CÓMO SE INFORMAN LOS RESULTADOS, DEBENREALIZAR LOS
DIBUJOS CORRESPONDIENTES A LA ACTIVIDAD.
PRODUCTOS A ENTREGAR
Los estudiantes deben entregar un informe de la
práctica realizada con lassiguientes condiciones:
El documento debe tener la estructura básica de un informe de
laboratorio, unabreve introducción sobre la práctica, el
procedimiento realizado, las fotografías obocetos de lo observado,
conclusiones y referencias bibliográficas con normas APA.No debe
exceder el número de 8 páginas, la forma de entrega deben
coordinarlacon el tutor de práctica.
EVALUACION
# temevaluado
Valoraciónbaja
ValoraciónMedia
ValoraciónAlta
MáximoPuntaje
1
Desarrollo del
Quiz
El estudianteno presentóel desarrollodelaspreguntas
El estudiantepresentó eldesarrollo delas preguntas,pero
estascarecen deargumentos oprofundización.
El estudiantepresentó eldesarrollo detodas las
preguntas demaneraargumentada.
10
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Puntos =0 Puntos= 5 Puntos=10
2
Estructura delInforme
El grupo notuvo en
cuenta lasnormas
básicas paraconstrucciónde informes
Aunque eldocumento
presenta unaestructura
base, la mismacarece dealgunos
elementos delcuerpo
solicitados
El documentopresenta una
excelenteestructura
10
Puntos=0 Puntos= 5 Puntos= 10
3
Redacción yortografía
Eldocumentopresenta
deficienciasen redacción
y erroresortográficos
No hay erroresde ortografía yel documentopresenta una
medianaarticulación de
las ideas y laestructura delos párrafos
La redacción esexcelente, lasideas están
correlacionadasy el cuerpo del
texto escoherente ensu totalidad.
10
Puntos= 0 Puntos= 5 Puntos= 10
4
Referencias
Eldocumentono presentareferencias
bibliográficas
N.A
El documentopresenta
referenciasbibliográficassegún normas
APA
10
Puntos= 0 N.A 10
5
Asistencia yparticipación al
laboratorio
El estudianteno asisitió allaboratorio
en sutotalidad
El estudianteasistió al
laboratorio ylas sesiones
programadas,pero noparticipó
El estudianteasistió a las
sesiones en sutotalidad yparticipó
activamente
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activamente enlas mísmas.
Puntaje=0 Puntaje= 20 Puntos= 50
Total de puntos posibles 90
ACTIVIDADES DEL TUTOR PRÁCTICO
METODOLOGÍA
El tutor de práctica, debe entrar en contacto desde el inicio
del períodoacadémico con el director de curso, con el objetivo de
conformar la red detutores, la cual se trabajará desde los correos
institucionales.
En el laboratorio el tutor deberá garantizar que se cuenten con
parte o latotalidad de los materiales descritos en la guía para
desarrollar los puntos.
EL INFORME DE LABORATORIO SERÁ ENTREGADO AL TUTOR PRÁCTICO,EL
TUTOR PRÁCTICO REALIZARÁ LA EVALUACIÓN CORRESPONDIENTE ALA
PRÁCTICA, ÉL SERÁ EL ENCARGADO DE EVALUAR Y ENTREGAR LOSPUNTOS
CORRESPONDIENTES A LA ACTIVIDAD AL DIRECTOR DEL CURSO,TENIENDO EN
CUENTA LO DESCRITO EN LA RUBRICA DE CALIFICACIÓN.
El tutor práctico deberá realizar un Quiz para evaluar los
conocimientos adquiridosen la práctica. La metodología y las
preguntas son de libre autonomía del tutor y
deberán ceñirse a la rúbrica de calificación adjunta.
1. Selección del sitio de práctica
El tutor debe coordinar con su zona, CEAD, UDR, CCAV la
disponibilidad delaboratorios.
2. Aseguramiento logístico para el desarrollo de la práctica.El
tutor práctico debe cerciorarse con el personal de laboratorio
sobre ladisponibilidad de los materiales necesarios para la
realización del mismo.
3. Seguimiento de la prácticaEl tutor debe llevar a cabo el rol
de orientador y verificar el desarrollo de lapráctica acorde a la
guía suministrada y a la rúbrica de evaluación.
Adicionalmente debe evaluar el proceso de aprendizaje de
los estudiantespor medio del quiz, igualmente debe coordinar con
los estudiantes larecepción del informe práctico, su calificación y
retroalimentación.
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4. EvaluaciónEl tutor realizará la evaluación de acuerdo a la
rúbrica.
PRODUCTOS A ENTREGAR
El tutor de prácticas deberá elaborar un informe sobre el
desarrollo de lasactividades del componente práctico el cual debe
ser entregado al directorde curso. Dicho informe estará compuesto
por los siguientes formatosdiligenciados
Formato 1: Datos generales de la práctica
CONTROL Y SEGUIMIENTO AL DESARROLLO
DEL COMPONENTE PRÁCTICO
Nombre del tutor
Correo del tutor
Contacto deltutor
Teléfono fijo y teléfono celular
CEAD al cualpertenece eltutor
Curso
Fecha derealización
Día:_____ Mes: _______________ Año:_________
Lugar donde se
desarrolló lapráctica
Temasabordados en lapráctica
Materiales yequiposempleados en lapráctica
Observaciones
Costoaproximado
Transporte: ________________________________________
Materiales y equipos: ________________________________
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Formato 2: registro de asistencia de los estudiantes a las
actividades prácticas
REGISTRO DE ASISTENCIA DE ESTUDIANTES
A LAS ACTIVIDADES PRÁCTICAS
No NOMBRES APELLIDOS CODIGO FIRMA12345678910
1112131415161718192021
22232425
Datos del tutor
Nombre: _________________________________________
Cédula: ____________ Firma: ________________________Correo:
___________________________________________Teléfono fijo:
_____________ Celular: __________________
AnexosEvidencias del desarrollo de la práctica
(Fotografías)
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Formato 3: Reporte de calificaciones obtenidas por los
estudiantes
REPORTE DE CAL IFICACIONES
Curso: ________________________________ __________Código:__________________________
_______________Título de la práctica:
_______________________________ ________________________________ ________________
CEAD: _______________________________ _________Fecha:
_______________________________ _________Tutor:
_______________________________ __________Firma:
__________________ Cédula:
________________
No
Puntaje del tem de larúbrica de evaluación
obtenido
Justificación de lacalificaciónotorgada al
trabajoNombres
Apellidos
Código
1 2 3 4 5Total
1
2
3
4
5
67
8
9
10
11
12
1
314
15
16
Muchos éxtitos!!!!
Si ustedes tienen más de5 ítems en la rúbrica de
evaluación, deben
colocar más columnas enesta parte
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