Apostila Protocolos Bioquímica Experimental

7/23/2019 Apostila Protocolos Bioqumica Experimental

1/24

1

D B

I

A

BIICA EEIEA

B 0316

2013

C H

G A

E :

B B.

I , C

A

J.

.


2/24

2

1

.

A

( )

(EOH)100 M

(PMSF) EOH

20 / ()

100 M H 7,0 5M EDTA ( )

0,5

F

A F ATENO! MANTENHA OS TUBOS DE ENSAIO EM GELO

1. E 1 ( )

2. A 4 3. R 4. A 40 L PMSF (100 M) 5. H 6. A 8 7. A 1 ( )8. R 1 9. R 7 8 4 10. C + 850 2 11. R

F LISADO

12. M LISADO 13. R + 4 14. A 40 L PMSF (100 M) 15. H 16. R 10 15 2 , LISADO17. U , LISADO18. D 3 F19. I 20C

B ( )1. T

2. A 3. A 15 4. D (2)5. A 6. L 7. D 8. R 6 8 5 9. A 10. C


3/24

3

2 D

.

A

0,2 / (P1)

B ( 85%, C B G, )

A C 1.A T 1

2.A B

3.H

4.A 5 5.U ()

6.L 595

7.C T 2

8.C B

T 1

A0,2 / ()

()

R B

()

B 0 100 1,0

1 10 90 1,02 20 80 1,03 30 70 1,04 40 60 1,05 50 50 1,06 60 40 1,07 70 30 1,08 80 20 1,0

T 2

M ()

A595

12345678


4/24

4

B D

OBSERVAO: . P 100:

1.T 0,1 L1002.A 9,9 .3.H .

1.A T 32.A B3.H 4.A 5 5.U () 6.L 595 7.C T 4

OBSERVAO: C , .

T 3

L100()

()

R B ()

B 0 100 1,0A1 100 0 1,0A2 50 50 1,0A3 30 70 1,0A4 20 80 1,0

T 4

A595

A1A2A3A4


5/24

5

3 D

.

A

(P1)

8 M (NPG)

200 M (H 7,0)

250 M(H 11,0)

96

30C

A ATENO! MANTENHA OS TUBOS DE ENSAIO EM GELO

A .

1.T 0,2 L102.A 1,8 3.T 0,4 L10X L504.A 1,6 5.T 0,2 L50X L5006.A 1,8 7.M

B ATENO! E .

T , .

S .

1.P 2.A NPG T 13.A 4.T 30C5.I T 16.A , 2 H 11,07.A 8.C 100 96 , 9.U , 420 10.C T 2 4


6/24

6

T 1

8 MNPG ()

H 7,0

()

()

30 C ()

1 0,1 0,1 0,2 52 0,1 0,1 0,2 103 0,1 0,1 0,2 154 0,1 0,1 0,2 20B 0,4 20

B * 0,2 0,2 *

T 2 L10

1(A420)

2(A420)

3(A420)

(A420)

1234B B

T 3 L50

1(A420)

2(A420)

3(A420)

(A420)

1234B B

T 4 L500

1(A420)

2(A420)

3(A420)

(A420)

1234B B

y = 0.0049x + 0.014R = 0.9974

0

0.2

0.4

0.6

0.8

1

1.2

1.4

0 50 100 150 200 250 300

Abs420

nm

NPGlc (nmol)

Curva padro do NPGlc


7/24

7

4 C H

D H .

A

(P1)

8 M (NPG)

200 M (H 8,0)

200 M (H 9,0)

200 M (H 4,0) 200 M (H 5,0)

200 M (H 6,0) 250 M

(H 11,0)

96

30C

A D .C , 1.T 0,2 L102.A 1,8 3.T 0,1 L10X L1004.A 4,9 5.M

B E

1.R (NP G) 6 H

2.P , ,

T 1

3.M

4.A ( )

5.A

6.T 30 C

7.I T 1

8.A , 2

9.A

10.C 100 96 , 11.U , 420 12.C T 2, 3 4

13.D H


8/24

8

H =

T 1

8 M NPG()

T H

()

()

()

1 0,1 0,1 0,2 52 0,1 0,1 0,2 10

3 0,1 0,1 0,2 154 0,1 0,1 0,2 20

T 2

H = 4,0 H = 5,0

T 1(A420)

2(A420)

3(A420)

M(A420)

T 1(A420)

2(A420)

3(A420)

M(A420)

1 12 23 3

4 4

T 3

H = 6,0 H = 8,0

T 1(A420)

2(A420)

3(A420)

M(A420)

T 1(A420)

2(A420)

3(A420)

M(A420)

1 12 23 34 4

T 4

H = 9,0

T 1(A420)

2(A420)

3(A420)

M(A420)

1234


9/24

9

1P 1 L P 2 D P 3 D P 4 C H

O :

1.A (/) (). P :

) P A595) C ) A (/) L100) A (/)

2.

A (U/) H 7,0. P :

) C A420 NPG (M)) P NPG (M)

) C

) U (U) ) C (U/) ,

) C (U/)

3.O (U/) H. P :

) C A420 NPG H) P NPG H) C ) U H) C H. A

H ( P3 H 7,0 )

) P H

A , :)Q ?)P 100 M PMSF ?)Q ?)P NPG ?)Q ?)E H ? C H

?


10/24

10

5

I .

A H DEAE ( )

P 0,5 DEAES

1.A 100 10 M H 6,8

2.M

3.D

B ( )

M

1.U (20 )

2.P

3.C

4.C

5.L

6.A 6

7.F

P

8.F

9.H (P A)

10.A 1,0

11.D

12.R 1,0

13.C , 20 10 M NC

14.A ,

15.D 3

16.

NUNCA DEIAR A RESINA SECAR


11/24

11

C C

P

1.D , 1,0

10.000 13 . C .

2.P (0,4 ) , (0,6 )

() .

P

3.D 0,4 ( ) 0,6 10

M NC.

.

4.V .

5.U ( )

.

6.C 1 .

7.D 3 .

8.F 1 .

E

9.A NC (2 )

10.C 2

11.C 1

12.T 1

13.F 8

14.A 1,0 . A, 2,0

15.C ,

16.A 10, 3

E

17.A NC (2,0 )

18.A

19.C 1,0

20.T 1 21.F 18

22.A 1,0 . A, 2,0

23.C ,

24.F 20. N


12/24

12

D I ATENO! MANTENHA OS TUBOS DE ENSAIO EM GELO

1.P 1 20. A 0,2 4M NPG

2.T

3.A 0,2

4.T 30 C

5.I 10

6.A , 2 H 11,07.A 8.C 100 96 9.U , 420 7.C T 1

8.C A

9.U , (

) F MATERIAL DEAE

T 1

A420 A420

1 112 123 134 145 156 167 178 189 1910 20

E D

ATENO! MANTENHA OS TUBOS DE ENSAIO EM GELO

T ,

. S

.

1.D ( P3)2.A NPG T 23.A

4.T 30

C5.I T 26.A , 2 H 11,07.A 8.C 100 96 9.U , 420 10.C T 311.C (U/) .


13/24

13

T 2

4 M NPG()

()

()

30 C ()

1 0,2 0,2 52 0,2 0,2 103 0,2 0,2 154 0,2 0,2 20B 0,2 0,2 20

B 0,2 0,2

T 3

1(A420)

2(A420)

3(A420)

(A420)

1234B

F D DEAEE E

1.D DEAE, 0,2 DEAE 1,8 DEAE10. H 2.A NPG DEAE ( 10) T 43.T 30C T 44.A , 2 H 11,0

5.A 6.C 100 96 7.U , 420 T 58.C M DEAE.

T 4

4 M NPG()

M DEAE( 10)

()

30 C ()

1 0,2 0,2 52 0,2 0,2 103 0,2 0,2 15

4 0,2 0,2 20T 5

1(A420)

2(A420)

3(A420)

(A420)

1234


14/24

14

G D DEAEATENO! O DEAE

1.A DEAE T 62.A B3.H 5 4.U () 5.L 595 6.C T 7

T 6

T M DEAE()

()

R B()

B 0,1 1,01 0,1 1,02 0,1 1,03 0,1 1,0

T 7

T A595 M ()

V ()

C (/)

123

H D DEAEATENO! O DEAE

E G

1.D 20 . T 0,1 1,9

2.A T 83.H 5 4.U () 5.L 595 6.C T 9

T 8

T M DEAE()

()

R B()

1 0,1 1,02 0,1 1,03 0,1 1,0

T 9

T A595 M ()

V ()

C (/)

123


15/24

15

2P 5 P

O :

1.

U .I NC.2.A (U) . P ,

:) (U/)

3.

A (U/) . P , :

) (/) 4.A (U) . P , :

) (U/) DEAE5.

A (U/) DEAE. P , :

) (/) DEAE6.O

) A DEAE

) O ( DEAE ).


16/24

16

6 DAGE

A .

C100 / SDS5 /

3,55 1,25 2,50 2,00 0,20 0,05

ANN

29,2 0,80 100

C R

0,1 40 10

50

B1,5 M T( H HC)

H 8,8

40 10 50

C0,5 M T( H HC)

H 6,8

100 / SDS

3,03 14,4 1,0 1 L

O.: N H

A 1.A SDSPAGE:

. (30 ). ,

M DEAE ( 1 )

D

2.T .3.I :

. N .. N .

4.A , , 600 5.C 6.P 7.T 8.C 9.M 16


17/24

17

S ( )10.A , 11.S

D 12.T 20 13.T 14.I 5 15.A

B DAGE ( )P 1.A T 12.H 3.T , P, 4.A 60 5.C

P 6.A , T 2

7.H 8.T , P, ( ) 9.A 40 10.A , 11.A

T 1

4,02 100 / SDS 100 L A 3,33

B 2,5 TEMED 5 L 50 L

T 2

3,05 100 / SDS 50 L A 0,65 C 1,25 TEMED 5 L 25 L


18/24

18

C , 1.C 100V, 40 2.D 3.D 4.R 5.C 6.C 40 7.R 8.C

9.D 10.V

D ()1.C 2.T 3.R 4.C 50 /5.M 6.D 7.C

8.C , .9.R 10.E 11.D

F


19/24

19

7 C :

C (K) () (V) .

A

1,0 M (NPG) 100 M (H 7,0)

2,0 M NPG 100M (H 7,0)

8,0 M NPG 100M (H 7,0) 250 M(H 11,0)

100 M (H 7,0)

96

30

C

A D ATENO! MANTENHA OS TUBOS DE ENSAIO EM GELO

U P 3. O 5,0

1.T 0,1 L10

2.A 0,9

3.H SUAVEMENTE

4.T 0,5 L10 L100

5.A 4,5

6.H SUAVEMENTE

B ATENO! MANTENHA OS TUBOS DE ENSAIO EM GELO

1.A NPG T 1. ATENO:

2.P

3.A ( ) T 1.

A

4.T 30 C

5.I 40 (OU PELO DOBRO DO MAIOR TEMPO USADO NA PRTICA 3)6.R

7.A 2

8.A 9.C 100 96 10.U , 420 T 2 311.C K V


20/24

20

T 1

1 M NPG()

2 M NPG()

8 M NPG()

T 100 M H 7

()

L ()

1 0,02 0,28 0,102 0,04 0,26 0,106 0,08 0,22 0,104 0,12 0,18 0,10

5 0,16 0,14 0,106 0,20 0,10 0,107 0,16 0,14 0,108 0,20 0,10 0,109 0,10 0,20 0,1010 0,13 0,17 0,1011 0,15 0,15 0,10

T 2

1

(A420)

2

(A420)

3

(A420)

(A420)1264567891011

T 3

S (M)

(A420)

P()

T ()

V(/)

12645

67891011


21/24

21

8 C :

D (NPG)

A

1,0 M (NPG) 100 M (H 7,0)

2,0 M NPG 100M (H 7,0)8,0 M NPG 100M (H 7,0)0,4 M 100 M(H 7,0)

1,2 M 100 M(H 7,0)

1,6 M 100 M(H 7,0)

250 M(H 11,0) 100 M (H7,0)

100 M (H 7,0)

96

30C

A ATENO! MANTENHA OS TUBOS DE ENSAIO EM GELO

1.A NPG T 1. ATENO:

2.A ( ) T 1

( ) 2 ( ).

3.. A .

4.T 30 C

5.I 7

6.R .7.A 2 .

8.A 9.C 100 96 10.U , 420 T 3 411.C

.


22/24

22

T 1 ( )

1 MNPG

()

2 MNPG

()

8 MNPG

()

0,4 M

()

1,2 M

()

T

100 MH 7 ()

L

()

1A 0,08 0,10 0,12 0,101B 0,08 0,10 0,12 0,102A 0,20 0,10 0,10

2B 0,20 0,10 0,103A 0,16 0,10 0,04 0,103B 0,16 0,10 0,04 0,104A 0,20 0,10 0,104B 0,20 0,10 0,105A 0,10 0,10 0,10 0,105B 0,10 0,10 0,10 0,106A 0,15 0,10 0,05 0,106B 0,15 0,10 0,05 0,10

T 2 ( )

1 MNPG

()

2 MNPG

()

8 MNPG

()

0,4 M

()

1,2 M

()

T

100 M H7

()

L

()

7A 0,08 0,10 0,12 0,107B 0,08 0,10 0,12 0,108A 0,20 0,10 0,108B 0,20 0,10 0,109A 0,16 0,10 0,04 0,109B 0,16 0,10 0,04 0,1010A 0,20 0,10 0,10

10B 0,20 0,10 0,1011A 0,10 0,10 0,10 0,1011B 0,10 0,10 0,10 0,1012A 0,15 0,10 0,05 0,1012B 0,15 0,10 0,05 0,10

T 3

S (M)

I (M)

1(A420)

2(A420)

3(A420)

(A420)

1A1B2A

2B3A3B4A4B5A5B6A6B


23/24

23

T 4

S (M)

I (M)

1(A420)

2(A420)

3(A420)

(A420)

7A7B8A8B

9A9B10A10B11A11B12A12B


24/24

3P 6 P SDSPAGEP 7 C : K VP 8 C :

O :

1. O . P , :) I SDSPAGE.) C

.2.

O K V . P , :) C (/) P7) C MM ( ).) C LB (1/V 1/[S)]) D K V

3.

P . P , :) C (/) P8,

) C LB (1/V 1/[S)]

) D .

A , :) P ?) Q ?) Q SDS?) C

?) E .

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Apostila Protocolos Bioquímica Experimental