aula2

Técnicas para o Diagnóstico Automatizado de Enteroparasitoses

Aula n. 2 - Técnicas parasitológicas convencionais e kits comerciais

Profs. Alexandre Falcão e Jancarlo Gomes

Universidade Estadual de Campinas - UNICAMP

Técnicas parasitológicas convencionais e kits comerciais

Etapas de Coleta e Preservação de Amostras Fecais

• Parte geral

• Coleta de material fecal

– Fezes eliminadas espontaneamente: quantidade, livre de impurezas, local de evacuação, etc.

– Fezes eliminadas com a utilização de medicamentos, produtos químicos e laxantes

– Recipiente indicado para coleta de amostra fecal

– Estabilidade da amostra coletada

– Estruturas parasitárias, estágios de diagnóstico

• Número de amostra coletada

• Preservação temporária e permanente de material coletado

– Formaldeído, Schaudinn, APV, MIF, SAF e PAF

(Garcia, 2007; De Carli, 2007)

(Neves, 2009; Rey, 2008; Garcia, 2007; De Carli, 2007; Gomes et al., 2004; Hoshino-Shimizu et al., 2003; Van Gool, 2003)

Eliminação na semana de estruturas parasitárias


Eliminação Irregular de Estruturas Parasitárias


Exame Parasitológico das Fezes (EPF)

• Exame macroscópico

Adulto de Taenia saginata

Adultos de Ascaris lumbricoides

(Cortesia das imagens - Departamento de Biologia Animal do Instituto de Biologia da UNICAMP e CDC / USA)



• Exame microscópico

Ovos de Ascaris lumbricoides

Ovo de Schistosoma mansoni

(Cortesia das imagens - Instituto de Computação da UNICAMP e FAPESP)



• Uso de coloração temporária

– Soluções de Iodo, Quensel, Azul de Metileno, etc.

– Vantagens e desvantagens

• Uso de coloração permanente

– Derivadas da hematoxilina, Tricrômico, Tionina, etc.


• Uso de coloração para coccídios intestinais

– Kinyoun, Ziehl-Neelsen, Heine, Safranina, Giemsa, etc.



• Exame direto







• Técnicas convencionais

– Técnicas de flutuação (espontânea e centrifugada)

• Sulfato de zinco, cloreto de sódio e sulfato de magnésio

– Técnicas de sedimentação (espontânea e centrifugada)

• Sedimentação-espontânea, formalina-éter, formalina acetato de etila, etc.

– Técnicas de concentração para coccídeos

• Centrífugo-sedimentação com formaldeído-éter modificado, centrífugo-sedimentação com hidróxido de

potássio e centrífugo-flutuação em solução de sacarose

• Immunodiagnóstico e métodos moleculares

(Rey, 2008; Neves, 2008; Garcia, 2007; De Carli, 2007)


Evolução Cronológica das Técnicas Parasitológicas Convencionais

(Gomes , 2011)

(Baermann, 1917; Rugai, 1954; Harada & Mori, 1955; Ash, 1997 - Figura segundo Rey, Parasitologia 3ª Edição, Guanabara Koogan, 2008)

Técnicas Convencionais

A - Rugai, Mattos e Brisola

B - Baermann-Moraes

C - Harada e Mori

Funil e tubo

Fezes

Gaze dobrada

Recipiente com fezes

Água aquecida

Água aquecida

Fezes

Água

Papel filtro

Recipiente com fezes


Exame Parasitológico das Fezes (EPF) - Isolamento de Larvas

Técnica de Lutz (Hoffman, Pons & Janer)

(Lutz, 1919; Hoffman, Pons & Janer, 1934 - Figura segundo Dias, 2000 )

Fezes

Gaze umedecida

Copo ou

beaker

Água corrente

Copo cônico

Água corrente

Pipeta

Sedimento


Exame Parasitológico das Fezes (EPF) – Sedimentação-Espontânea

• Técnica de Willis

(Bass, 1910; Willis, 1921 - Figura segundo De Carli, Parasitologia Clínica, Ed. Atheneu, 2001)

Lamínula

Solução de

cloreto de sódio


Exame Parasitológico das Fezes (EPF) – Técnica de Flutuação

• Método de Stoll

(Stoll, 1926 - Figura segundo Araujo, Dissertação de Mestrado, USP, 2000)

Solução de hidróxido

de sódio

Fezes

Esferas de vidro

Rolha de borracha

Pipeta de Stoll


Exame Parasitológico das Fezes (EPF) - Quantificação de Ovos

• Técnica de Faust & Cols.

(Bass, 1910; Faust, 1939 - Figura segundo De Carli, Parasitologia Clínica, Ed. Atheneu, 2007)

A - Técnica da lamínula

B - Técnica da alça de arame


Exame Parasitológico das Fezes (EPF) - Técnica de Flutuação

• Técnica de Ritchie

(Telemann, 1908; Ritchie, 1948 - Figura segundo De Carli, Parasitologia Clínica, Ed., Ed.Atheneu, 2007)

A - Tubo de centrifugação

1 - Sedimento

2 - Formalina

3 - Impurezas

4 - Camada de Éter

B - Tubo de centrifugação

Limpeza da parede do tubo

com swab de algodão

C - Tubo de centrifugação

Sedimento

D - Preparação da lâmina


Exame Parasitológico das Fezes (EPF) - Técnica de Sedimentação

• Técnica de Kato-Katz

(Kato, 1954; Komiya, 1966; Katz, 1970; Katz, 1972 - Figura segundo Araujo, Dissertação de Mestrado, USP, 2000)

Fezes não preservadas

Tela metálica ou

de náilon

Cartão retangular com

orifício central

Papel absorvente

Papel celofane


Exame Parasitológico das Fezes (EPF) - Quantificação de Ovos

7 ml***3 ml**

* Amostra fecal;** acetato de etila; *** água destilada

1500rpm

2min.

7 ml *

*

1500rpm

2min.

1,4 g

fezes

Formalina 10%

tamponada: 12ml

(NL Comércio Exterior, 2006 - Figura segundo Araujo, Dissertação de Mestrado, USP, 2000)

Frasco

coletor

Solução de

formalina

Filtro

Tubo de

centrifugação


Exame Parasitológico das Fezes (EPF) - Kit Comercial

• Kit Coprotest®

1 g

fezes

(Diagnostek Ind. Com. Prod. Cient., 2006)

Filtro

Solução de

Formalina 10%


Exame Parasitológico das Fezes (EPF) - Kit Comercial

• Kit Paratest®

• Kit Parasep®

• Kit StillQuick®

• Coproseco®

• CoproKit®

(Medical Campinas, 2006; DiaSys Europe, 2006; Labo-Moderne, 2006)


Exame Parasitológico das Fezes (EPF) - Kits Comerciais

(Falcão et. al , 2011)

Motivação - Projeto Maior FAPESP/UNICAMP


(Cortesia: Universidade Estadual de Campinas, Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo, 2011)

Kit paciente

Conjunto de filtros

mais tubo de centrifugação

Conjunto processador


Exame Parasitológico das Fezes (EPF) - Inovadora Técnica Parasitológica

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