FUNÇÕES DE FUNÇÕES DE MICRORGANISMOS MICRORGANISMOS NÃO CULTIVÁVEISNÃO CULTIVÁVEIS

““O mundo microbiano contém uma grande diversidade O mundo microbiano contém uma grande diversidade de organismos, estruturas e funções. Este trabalho surge de organismos, estruturas e funções. Este trabalho surge pela dificuldade de muitos microrganismos não serem pela dificuldade de muitos microrganismos não serem cultiváveis e por isso mesmo impossíveis de estudar pelas cultiváveis e por isso mesmo impossíveis de estudar pelas metodologias tradicionais da microbiologia. Os avanços metodologias tradicionais da microbiologia. Os avanços recentes no estudo dos genomas e o desenvolvimento de recentes no estudo dos genomas e o desenvolvimento de tecnologias que permitem aceder directamente ao DNA sem tecnologias que permitem aceder directamente ao DNA sem necessidade de cultivar os organismos, têm vindo a fornecer necessidade de cultivar os organismos, têm vindo a fornecer novas luzes sobre esta diversidade escondida”novas luzes sobre esta diversidade escondida”

Prof. António Correia, Univ. de AveiroProf. António Correia, Univ. de Aveiro

O que são microrganismos não O que são microrganismos não cultiváveis?cultiváveis?

Conteúdo celular do rRNA usado como Conteúdo celular do rRNA usado como medição de taxa de crescimentomedição de taxa de crescimento

Nem sempre se verifica para microrganismos com Nem sempre se verifica para microrganismos com crescimento lentocrescimento lento

Por exemplo, os quimiolitoautotróficos aeróbios, Por exemplo, os quimiolitoautotróficos aeróbios, oxidantes de nitrato e amónia retêm elevados oxidantes de nitrato e amónia retêm elevados níveis de rRNA celular em períodos de latência ou níveis de rRNA celular em períodos de latência ou de inibição de crescimentode inibição de crescimento

Novas técnicas desenvolvidas para o Novas técnicas desenvolvidas para o estudo de microrganismos não estudo de microrganismos não

cultiváveiscultiváveis FISH (Fluorescence in Situ Hybridization) FISH (Fluorescence in Situ Hybridization)

Técnica do MicroarrayTécnica do Microarray

MicroautoradiografiaMicroautoradiografia

PCR amplificação (Polymerase Chain Reaction)PCR amplificação (Polymerase Chain Reaction)

Quantitative Dot BlotQuantitative Dot Blot

Isótopos estáveisIsótopos estáveis

FISHFISH

É uma técnica pela qual É uma técnica pela qual um segmento de DNA um segmento de DNA conjugado previamente conjugado previamente com um fluorocromo com um fluorocromo (sonda) hibridiza numa (sonda) hibridiza numa metafase ou interfase com metafase ou interfase com determinado cromossomadeterminado cromossoma

MicroarrayMicroarray

Permite verificar os Permite verificar os níveis de expressão de níveis de expressão de diferentes proteínas, diferentes proteínas, independentemente do independentemente do seu ponto isoeléctricoseu ponto isoeléctrico

MicroautoradiografiaMicroautoradiografia

A microautoradiografia A microautoradiografia tem sido usada para tem sido usada para visualizar e contar visualizar e contar células dentro das células dentro das comunidades comunidades microbianas que microbianas que podem integrar os podem integrar os substratos marcados substratos marcados radioactivamente radioactivamente

FISH-MicroautoradiografiaFISH-Microautoradiografia

PCR PCR

A reacção em cadeia A reacção em cadeia da polimerase é um da polimerase é um método de método de amplificação de DNA amplificação de DNA sem o uso de um sem o uso de um organismo vivoorganismo vivo

Quantitative Dot BlotQuantitative Dot Blot

É a análise da É a análise da expressão proteica em expressão proteica em células e em tecidos células e em tecidos

Isótopos estáveisIsótopos estáveis

A sua utilização na pesquisa de DNA permite A sua utilização na pesquisa de DNA permite estabelecer ligações entre as identidades estabelecer ligações entre as identidades microbianas e as suas respectivas funções.microbianas e as suas respectivas funções.

A sua investigação consiste na colheita de A sua investigação consiste na colheita de substratos substratos 13C DNA através da centrifugação C DNA através da centrifugação (gradiente de densidade).(gradiente de densidade).

Não emitem radiaçõesNão emitem radiações

NitrospiraNitrospira

Bactéria não cultivávelBactéria não cultivável Proveniente de aguas residuais de ETARsProveniente de aguas residuais de ETARs Mais de 80% da população de Mais de 80% da população de NitrospiraNitrospira

está activa num ambiente de lamas está activa num ambiente de lamas activadas.activadas.

Cresce exponencialmente com piruvato mas Cresce exponencialmente com piruvato mas não acetato, na presença de oxigénio.não acetato, na presença de oxigénio.

Inactiva sob condições desnitrificantes e de Inactiva sob condições desnitrificantes e de fermentação fermentação

NitrospiraNitrospira

A importância de microrganismos A importância de microrganismos não cultiváveis para o ambientenão cultiváveis para o ambiente

Diversidade microbiana como Diversidade microbiana como indicador da qualidade do soloindicador da qualidade do solo

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FIMFIM Ana Rita DominguesAna Rita Domingues

Filipa ManzoniFilipa Manzoni João Canas RamalheiroJoão Canas Ramalheiro

Vasco Rosa Santos Vasco Rosa Santos