GERAÇÃO E CARACTERIZAÇÃO DE ANTICORPOS MONOCLONAIS PARA DENGUE 

E HANTAVÍRUS ‐ DESENVOLVIMENTO DE INSUMOS COM POTENCIAL 

BIOTECNOLÓGICO APLICADO A SAÚDE

Giovanny Camacho Antêvere MazzarottoUNIVERSIDADE FEDERAL DO PARANÁINSTITUTO CARLOS CHAGASPROGRAMA DE PÓS‐GRADUAÇÃO EM PROCESSOS BIOTECNOLÓGICOS

Orientadora: Dra. Claudia N. Duarte dos Santos

Co‐orientador: Dr. Juliano Bordignon

Giovanny Camacho Antêvere Mazzarotto

PROCESSOS BIOTECNOLÓGICOS g

1 Introdução A dengue1. Introdução ‐A dengue

www.opiniaodeipiau.com.br/.../02/dengue2791.jpg

Não existem vacinas ou drogas antivirais específicas contra a dengue.

http://dengue.zip.net/images/dengue_hemo.jpg

Direto: isolamento viral, imunohistoquímica e as variações de PCR.

1. Introdução ‐ Diagnóstico da dengue

Indireto: formato do tipo ELISA é o mais comumente utilizado.

Inclusão de anticorpos monoclonais (mAbs) visamelhorar a especificidade dos kits de diagnóstico.

1. Introdução ‐ A hantavirose

http://emedicine.medscape.com/article/830594-media

Duas manifestações clínicas:

Febre hemorrágica com síndrome renal (FHSR)

Síndrome cárdio‐pulmonar por hantavírus (SCPH) 

Não existe vacina drogas antivirais ou imuno‐moduladoras para

Taxa de mortalidade de 50%

Não existe vacina, drogas antivirais ou imuno‐moduladoras paratratamento da hantavirose.

1. Introdução ‐ Diagnóstico da hantaviroseDireto: isolamento viral PCR e imunohistoquímica

Indireto: Ensaio de imunofluorescência indireta (IFI) e ensaios do tipo ELISA

Direto: isolamento viral, PCR e imunohistoquímica

Kit de diagnóstico desenvolvido pelo ICC.

IBMP EIE IgG e IgM HANTEC

Os mAbs anti‐hantavirus têm aplicação em kits de diagnósticos,pesquisa básica e imunoterapia.

2. Produção de anticorpos monoclonais (mAbs) utilizando a tecnologia de hibridomas

Baço Ag8xp36531:5

tecnologia de hibridomas

PEG

HAT - 12 diasAdaptado de Kohler & Milstein (1975)

HT - 4 dias{Triagem ELISA rNH

Triagem por IFI

Milstein, (1975).

Expansão/Estabilização/Crescimento

Western blot,

dengue

Diluição Limitante Caracterização

Western blot, IFI, IHC

Cinética de produção deIsotipagem

Cinética de produção de mAbs anti rNH

3. Resultados ‐ IFI dos mAbs anti‐dengue 

DENV-1 DENV-2

DENV-3

DENV-2

3. Resultados ‐Western blot mAbs anti‐dengue

DENV 3Domínio B da prot. de E

DENV 2 DENV-3prM/E

3. Resultados ‐ Ensaios dos  mAbs anti‐nucleoprotéína de Hantavirus

Ag8xp3653572/7A

Crescimento Vs Secreção de mAbsg p

664/10G

305/5A

572/7A651/6G572/7A

350/8C

423/6BF

651/6G

572/7A651/6G

313/11E

475/8A

572/7A

MAZZAROTTO et al., Production and characterization of

475/8A

581/8G

572/7A

572/7A651/6G 651/6G 651/6G

651/6G

MAZZAROTTO et al., Production and characterization ofmonoclonal antibodies against the recombinantnucleoprotein of Araucaria hantavirus. J Virol Methods. 2009Dec;162(1-2):96-100.

3. Resultados ‐ Imuno‐histoquímica de um caso fatal de hantavirose

mAb 313/11E

BA

FiFim…

DC

Raboni et al., Evidence of circulation of Laguna Negra-like hantavirus in the Central West of Brazil: case report. J Clin Virol. 2009 Jun;45(2):153-6.