Anticorpos Monoclonais Hat

8/2/2019 Anticorpos Monoclonais Hat

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Anticorposmonoclonais

Aula 4

Maio de 2003


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Os anticorpos que surgem num animal em resposta a um

nico antgeno complexo so heterogneos. So

formados vrios clones diferentes de clulas B que

diferenciam-se em plasmcitos, cada um deles

expressando e secretando, respectivamente, um tipo de anticorpo,

capaz de reagir com um diferente eptopo no antgeno complexo.

Estes anticorpos so denominados policlonais.

linfcitos/plasmcitos ...

anticorpos

antgeno


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Os anticorpos que surgem a partir de um nico clone de

clulas, como, por exemplo, num tumor de plasmcitos

(mieloma) so homogneos, isto , so iguais entre si.

So ditos anticorpos monoclonais.

Esse histograma mostra uma distribuio tpica de afinidadesde anticorpos em um antissoro para um determinante

antignico comparando-as com a afinidade nica com que

um anticorpo monoclonal se liga ao seu determinante

antignico.Anticorpo monoclonal

Afinidade de anticorpo (K)

Frao de

anticorpo

total (%)

(escala log)

Plasmcitos derivados de

um nico linfcito B pro-

duzem anticorpos monoclonais,portanto idnticos entre si.


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O mtodo envolve fuso celular (ou hibridizao de clulas

somticas), entre um linfcito B normal produtor de anticorpoe uma linhagem de mieloma , seguindo-se subsequentemente

a seleo de clulas fusionadas que secretem anticorpo da

especificidade desejada , derivada do linfcito B normal. Tais

linhagens celulares imortalizadas, produtoras de anticorpos

e derivados de fuses, so chamadas hibridomas. Os anticorpos

que elas produzem so anticorpos monoclonais

Clulas do bao isoladas de camundongo

imunizado com antgeno X.

Mtodo de produo de anticorpo monoclonal

(tecnologia dos hibridomas)

Antgeno X

Os monoclo-

nais tm sido

produzidos prin-

cipalmente em

camundongos.

Ve a a se uir


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Mistura de clulas do bao incluindo algumasprodutoras de anticorpos anti -X

Linhagem tumoral de mieloma mutante,imortalizada e no cresce em meioseletivo (HAT). incapaz de produziranticorpos.

Fuso in vitro

Mistura de clulas fusionadas e no fusionadas.

Seleo in vitro em meio de cultivo - HAT


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Pesquisa de anticorpo anti- X nos sobrenadantes para posterior expanso dos clones positivo

Hibridomas produzindo anti corpo anti- X (Ac monoclonal anti-X).

.

Somente clulas

fusionadas

hbridas

(hibridomas)crescem.

Preparada a diluio no cultivo de modo que em cada poo fique s uma clula me /clone.


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O sucesso dessa tcnica depende do desenvolvimento das

linhagens de mieloma que cresam em meio normal de cultura

mas no cresam em um meio seletivo (HAT - hipoxantina,

aminopterina e timidina), porque lhes faltam genes funcionais,necessrios para a sntese de DNA pela via de salvao (genes que

codificam as enzimas TK e HGPRT). Esses genes esto presentes

nas clulas normais, de modo que somente os hbridos e os

linfcitos B continuam a crescer no meio seletivo. Aps a fuso, a

aminopterina presente no meio bloqueia a sntese de DNA pela via

de novo. As clulas podem ento utilizar a via de salvao, j que

o meio suplementado com timidina e hipoxantina. Como as

linhagens mutantes, no expressam as enzimas necessrias para

a referida via de salvao, no vo conseguir sobreviver nessemeio. Como os linfcitos normais possuem vida curta em cultura,

somente os clones hbridos sobrevivero e proliferaro secretando

anticorpos com a especificidade da clula me que cresceu

sozinha e foi selecionada no poo no incio do procedimento.


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Via de novo

Fosforribosilpirofosfato

+Uridilato

Nucleotdeos

Via de salvao

Timidina Hipoxantina

timidina cinase (TK)

hipoxantina

guaninafosforribosil

transferase

(HGPRT)bloqueio comaminopterina

Veja um resumo dos dois caminhos possveis para

a sntese de nucleotdeos pela clula. Se a via denovo estiver bloqueada (como abaixo), s resta a viade salvao:


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A hibridizao de linfcitos o melhor mtodo

para produzir um anticorpo monoclonal

contra um

determinante antignico conhecido. Este

anticorpo pode ser usado para

identificar antgenos desconhecidos presentesnuma mistura,

porque cada anticorpo especfico para

apenas um

determinante antignico . Algumas dasaplicaes mais

comuns dos anticorpos monoclonais incluem

as que se seguem.


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1. Identificao de marcadores fenotpicos nicos para os

tipos celulares individuais. A base para a classificao

moderna de linfcitos e fagcitos mononucleares a ligao

de anticorpos monoclonais populao especficos . Estes tm

sido usados para definir molculas tpicas de cada clula.

CD3TCR

CD2

CD28

CD5

CD7

CD4

CD8

Th

Tc

MFRCD64

CD32

CD16

HLA-D

CD35

CD11b

LFA-1

Macrfago


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2. Imunodiagnstico: o diagnstico de muitas doenas

infecciosas e degenerativas, depende da deteco de ant-

genos e/ou anticorpos especficos na circulao ou nostecidos, usando anticorpos monoclonais em imunoensaios.

anticorpos

monoclonais

soro do pacientecontendo antgeno

com vrios epitopos

idnticos

aglutinao

partculas de latex

adsorvidas com os

monoclonais

Exemplo: reao de aglutinao em latex

Para a imunodosagem de hormnios,

marcadores tumorais e de outras

protenas sricas, sempre se usa

anticorpos monoclonais


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3.Diagnstico e terapia de tumores:

anticorpos monoclonaisespecficos para tumores so usados

para a deteco de

tumores por tcnicas de imagens e

para a imunoterapia.


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4. Anlise funcional de molculas da superfcie celular esecretadas: na pesquisa imunolgica, os anticorpos

monoclonais que se ligam a molculas da superfcie celular

e estimulam ou inibem funes celulares, so instrumentos

inestimveis para definir a funo das molculas de

superfcie, incluindo os receptores para antgenos .

Anticorpos que neutralizam citocinas so usados para

detectar a presena e os papis funcionais destes compostos

proteicos in vitro e in vivo .


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A Biologia Molecular tem traado o caminho para a

produo de anticorpos monoclonais (mAc) de

especificidade, afinidade e isotipos definidos.

Isto permite aos imunologistas o desenvolvi-

mento de anticorpos de determinada especificidade no

camundongo, utilizando-se ento os genes que expressam

esta especificidade (genes que codificam VH e VL),

para a construo de vetores de clona-

gem e expresso, associando-os aos genes para

os domnios constantes de anticorpos humanos.O mAc resultante (humanizado) de muito baixa

imunogenicidade para a nossa espcie, podendo ser

utilizado em tratamentos especficos.

FIM

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