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Microscopia de microrganismos
Aula 1 Prática
Microbiologia FFI0751
Profa. Dra. Ilana L. B. C. Camargo
Rickettsia ricketsi dentro de células do sangue (bactéria).
Procariotos x Eucariotos
http://pathmicro.med.sc.edu/Portuguese/immuno-port-chapter1.htm
Trypanosoma em esfregaço sanguíneo. A membrana ondulante e o núcleo são visíveis.
http://www.fortunecity.com/greenfield/eco/813/mod2aula4.html
http://anhembi.br/publique/cgi/cgilua.exe/sys/start.htm?infoid=1758&sid=203
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http://clubeaprendiz.googlepages.com/observa%C3%A7%C3%B5esmicrosc%C3%B3picas
Célula da mucosa bucal
Células da mucosa vaginal
http://www.pathology.com.br/papanicolaou/papanicolaou.html
Célula superficial, cujo citoplasma é avermelhado e cujo núcleo é picnótico,
entre duas células intermediárias. Há grande quantidade de bacilos de
Döederlein.
Procariotos x Eucariotos
Comparação entre os tamanhos
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Microscopia de microrganismos
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O primeiro microscópico da história
Ampliação de 300x e resolução de 1 m
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-Microscópio óptico ou de Luz
-Microscópio confocal
-Microscópios eletrônicos (Varredura e Transmissão)
-Microscópio de tunelamento
-Microscópio de força atômica
Tipos de microscópios
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Microscópio óptico compostoMO
-com várias lentes-Utiliza a luz visível como fonte de iluminação
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Rota de Luz no microscópio de baixo para cima
Iluminador
Condensador
Amostra
Objetivas
Prisma
Oculares
Ampliação
Ampliação
Laboratório
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Objetivas
Correção de curvatura de campo
Tipo de aberração corrigida
AumentoAbertura numérica
Comprimento do tubo/ espessura da lamínula
Distância de trabalho
Código de aumento
São classificadas como:
• Acromáticas: Ajustadas para duas cores, geralmente o vermelho e o verde
(ou seja, permite que apenas algumas cores sejam observadas, selecionando a
frequência de luz visível de interesse por meio de seu índice de refração
durante a fase de fabricação da lente).
• Apocromáticas: Ajustadas para três cores, normalmente o vermelho, o verde
e o violeta.
• Não-acromática: Não ajustada para cor alguma. Possui a característica de
formar halos coloridos ao redor da imagem.
Objetivas
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Lente objetiva
Lente ocular
Imagem realInvertida Aumentada
Imagem virtual
Aumentada ainda mais!
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Ampliação total da amostra
Ampliação total =
potência de ampliação de lentes objetivas x da ocular
Objetivas:
10X (baixa potência)40X (alta potência)100X (imersão em óleo)
Ocular:Amplia a amostra por um fator de 10
100X400X1000X
Amplificação e resolução
Ampliação e aumento da resolução
Ampliação somente!!
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Resolução ou Potência de resolução
Capacidade das lentes de diferenciar detalhes finos e estruturas
Capacidade de individualizar dois pontos adjacentes
→ Diferenciar entre dois pontos com uma distância específica entre os mesmos
Ex: Microscópio com resolução de 0,4 nm→ pode distinguir 2 pontos se eles estão no mínimo a 0,4 nm de distância um do outro.
Quanto menor o comprimento de onda luminosa usado no instrumento, maior a resolução.MO → Luz branca com comprimento de onda longo e não pode oferecer resolução a estruturas menores que 0,2 m
Limitação da ampliação a cerca de 2000 X.
Microscópio eletrônico → resolução de cerca de 1000 vezes superior!
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Limite de resolução
D = 0,61 NA
D = limite de resolução (diâmetro do menor objeto que pode ser distinguido)= comprimento de onda da luz visível (em geral 0,5m)NA = Abertura numérica (medida da capacidade de concentrar a luz)
NA = sen
- metade do ângulo dos raios de luz extremos que ainda penetram a objetiva (> valor = 90°)
- Índice de refração do meio intercalante (espaço entre amostra e objetiva)
Ar → = 1Óleo → = 1,4
Luz azul com menor comprimento de onda
Melhor resolução = filtro azul!
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Limite de resolução
> Largura angular e abertura numéricaMelhor resolução< distância de trabalho
Abertura numérica (medida da capacidade de concentrar a luz)
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Índice de refração
Obtenção de imagem clara e detalhada em MOamostra com alto contraste com seu meio
Diferenciar o índice de refração das amostras daquele do seu meio
Velocidade relativa com que a Luz passa através de um material
ColoraçãoAltera a direção dos raios de luz sofrendo refração e aumenta o
contraste
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Ampliação alta (100X) com boa resolução, a lente deve ser pequena
Objetiva de imersão
Embora necessitemos que a luz percorra a amostra e o meio para ser refratada de mododiferente, não desejamos perder os raios de luz após eles terem passado através daamostra corada → óleo de imersão e a lente de imersão
Mesmo índice de refração que o vidro e torna-se parte da óptica do vidro do microscópio.
Para estes raios refratados sejam capturados a lente objetiva deveria ter um diâmetro maior
Sem óleo de imersão nessa lente, a amostra torna-se borrada
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Tabela 2. As propriedades das objetivas do microscópio
Objetivas
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Microscópio ópticoLimite de resolução é de ~0,2 µm
Aumento limite de ~1500x
Amplificação e resolução
Produto do aumento obtido com as lentes objetivas e ocular
10 X
10 X, 40X, ou 100X
Aumento
100 X, 400X, ou 1000X
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Como carregar o seu microscópio
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Como colocar a lâmina no seu microscópio
Charriot
Platina
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Como utilizar o seu microscópio
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Como utilizar o seu microscópio
Ajuste as oculares quanto à distância entre seus olhos, afim de observar um só campo!!
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Como limpar o MO
Solução de limpeza e algodão
Solução de limpeza:· Solução de limpeza (50% éter sulfúrico PA, 50% clorofórmio PA);
· Cotonete caseiro ou palito isento de ferpas, com ponta envolvido com algodão;
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Tabela 3.
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Campo escuro
Contraste de fase
Aguardem Biologia Celular!!!!
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