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8/7/2018 1 Microscopia de microrganismos Aula 1 Prática Microbiologia FFI0751 Profa. Dra. Ilana L. B. C. Camargo Rickettsia ricketsi dentro de células do sangue (bactéria). Procariotos x Eucariotos http://pathmicro.med.sc.edu/Portuguese/immuno-port-chapter1.htm Trypanosoma em esfregaço sanguíneo. A membrana ondulante e o núcleo são visíveis. http://www.fortunecity.com/greenfield/eco/813/mod2aula4.html http://anhembi.br/publique/cgi/cgilua.exe/sys/start.htm?infoid=1758&sid=203

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Microscopia de microrganismos

Aula 1 Prática

Microbiologia FFI0751

Profa. Dra. Ilana L. B. C. Camargo

Rickettsia ricketsi dentro de células do sangue (bactéria).

Procariotos x Eucariotos

http://pathmicro.med.sc.edu/Portuguese/immuno-port-chapter1.htm

Trypanosoma em esfregaço sanguíneo. A membrana ondulante e o núcleo são visíveis.

http://www.fortunecity.com/greenfield/eco/813/mod2aula4.html

http://anhembi.br/publique/cgi/cgilua.exe/sys/start.htm?infoid=1758&sid=203

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http://clubeaprendiz.googlepages.com/observa%C3%A7%C3%B5esmicrosc%C3%B3picas

Célula da mucosa bucal

Células da mucosa vaginal

http://www.pathology.com.br/papanicolaou/papanicolaou.html

Célula superficial, cujo citoplasma é avermelhado e cujo núcleo é picnótico,

entre duas células intermediárias. Há grande quantidade de bacilos de

Döederlein.

Procariotos x Eucariotos

Comparação entre os tamanhos

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Microscopia de microrganismos

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O primeiro microscópico da história

Ampliação de 300x e resolução de 1 m

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-Microscópio óptico ou de Luz

-Microscópio confocal

-Microscópios eletrônicos (Varredura e Transmissão)

-Microscópio de tunelamento

-Microscópio de força atômica

Tipos de microscópios

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Microscópio óptico compostoMO

-com várias lentes-Utiliza a luz visível como fonte de iluminação

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Rota de Luz no microscópio de baixo para cima

Iluminador

Condensador

Amostra

Objetivas

Prisma

Oculares

Ampliação

Ampliação

Laboratório

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Objetivas

Correção de curvatura de campo

Tipo de aberração corrigida

AumentoAbertura numérica

Comprimento do tubo/ espessura da lamínula

Distância de trabalho

Código de aumento

São classificadas como:

• Acromáticas: Ajustadas para duas cores, geralmente o vermelho e o verde

(ou seja, permite que apenas algumas cores sejam observadas, selecionando a

frequência de luz visível de interesse por meio de seu índice de refração

durante a fase de fabricação da lente).

• Apocromáticas: Ajustadas para três cores, normalmente o vermelho, o verde

e o violeta.

• Não-acromática: Não ajustada para cor alguma. Possui a característica de

formar halos coloridos ao redor da imagem.

Objetivas

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Lente objetiva

Lente ocular

Imagem realInvertida Aumentada

Imagem virtual

Aumentada ainda mais!

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Ampliação total da amostra

Ampliação total =

potência de ampliação de lentes objetivas x da ocular

Objetivas:

10X (baixa potência)40X (alta potência)100X (imersão em óleo)

Ocular:Amplia a amostra por um fator de 10

100X400X1000X

Amplificação e resolução

Ampliação e aumento da resolução

Ampliação somente!!

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Resolução ou Potência de resolução

Capacidade das lentes de diferenciar detalhes finos e estruturas

Capacidade de individualizar dois pontos adjacentes

→ Diferenciar entre dois pontos com uma distância específica entre os mesmos

Ex: Microscópio com resolução de 0,4 nm→ pode distinguir 2 pontos se eles estão no mínimo a 0,4 nm de distância um do outro.

Quanto menor o comprimento de onda luminosa usado no instrumento, maior a resolução.MO → Luz branca com comprimento de onda longo e não pode oferecer resolução a estruturas menores que 0,2 m

Limitação da ampliação a cerca de 2000 X.

Microscópio eletrônico → resolução de cerca de 1000 vezes superior!

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Limite de resolução

D = 0,61 NA

D = limite de resolução (diâmetro do menor objeto que pode ser distinguido)= comprimento de onda da luz visível (em geral 0,5m)NA = Abertura numérica (medida da capacidade de concentrar a luz)

NA = sen

- metade do ângulo dos raios de luz extremos que ainda penetram a objetiva (> valor = 90°)

- Índice de refração do meio intercalante (espaço entre amostra e objetiva)

Ar → = 1Óleo → = 1,4

Luz azul com menor comprimento de onda

Melhor resolução = filtro azul!

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Limite de resolução

> Largura angular e abertura numéricaMelhor resolução< distância de trabalho

Abertura numérica (medida da capacidade de concentrar a luz)

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Índice de refração

Obtenção de imagem clara e detalhada em MOamostra com alto contraste com seu meio

Diferenciar o índice de refração das amostras daquele do seu meio

Velocidade relativa com que a Luz passa através de um material

ColoraçãoAltera a direção dos raios de luz sofrendo refração e aumenta o

contraste

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Ampliação alta (100X) com boa resolução, a lente deve ser pequena

Objetiva de imersão

Embora necessitemos que a luz percorra a amostra e o meio para ser refratada de mododiferente, não desejamos perder os raios de luz após eles terem passado através daamostra corada → óleo de imersão e a lente de imersão

Mesmo índice de refração que o vidro e torna-se parte da óptica do vidro do microscópio.

Para estes raios refratados sejam capturados a lente objetiva deveria ter um diâmetro maior

Sem óleo de imersão nessa lente, a amostra torna-se borrada

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Tabela 2. As propriedades das objetivas do microscópio

Objetivas

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Microscópio ópticoLimite de resolução é de ~0,2 µm

Aumento limite de ~1500x

Amplificação e resolução

Produto do aumento obtido com as lentes objetivas e ocular

10 X

10 X, 40X, ou 100X

Aumento

100 X, 400X, ou 1000X

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Como carregar o seu microscópio

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Como colocar a lâmina no seu microscópio

Charriot

Platina

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Como utilizar o seu microscópio

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Como utilizar o seu microscópio

Ajuste as oculares quanto à distância entre seus olhos, afim de observar um só campo!!

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Como limpar o MO

Solução de limpeza e algodão

Solução de limpeza:· Solução de limpeza (50% éter sulfúrico PA, 50% clorofórmio PA);

· Cotonete caseiro ou palito isento de ferpas, com ponta envolvido com algodão;

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Tabela 3.

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Campo escuro

Contraste de fase

Aguardem Biologia Celular!!!!

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