Meios de cultivo utilizados na Bacteriologia Clínica

Meios de cultivo utilizados Meios de cultivo utilizados na Bacteriologia Clínicana Bacteriologia Clínica

Introdução à Microbiologia Clínica

O exame microbiológico deve responder às seguintes perguntas:- Há bactérias presentes na amostra? - Qual?- Quais medicamentos devem ser utilizados?

Exame bacterioscópico

CulturaProvas de identificação

Teste de sensibilidade aos antimicrobianos

Cultura de bactérias – Aspectos Gerais

Coleta da amostra:

Uso de antibióticos? Evitar contaminação da amostra Quantidade de amostra suficiente Transporte da amostra Qual o sítio anatômico da coleta Correta identificação da amostra Em que momento deve ser feita a coleta?

Cultura de bactérias – Aspectos Gerais

Semeadura: Quais meios de cultura semear? Como semear?

Incubação: Qual temperatura? Quanto tempo? Qual concentração de CO2?

Semeadura - Técnicas

Técnicas de isolamento de microrganismos:

técnica de esgotamento

técnica de semeadura em superfície

método de pour-plate

Semeadura por esgotamento

Semeadura em superfície

Semeadura – Qual meio utilizar?

MacConkey: seletivo e diferencial (lactose) para Gram negativos

Sangue: enriquecimento e diferencial (hemólise)

Tioglicolato: enriquecimento, cultura de anaeróbios estritos

SS: seletivo e diferencial (lactose).

Thayer-Martin: enriquecimento e seletivo

Meios de cultura e amostras biológicas

Ferida cirúrgica: Ferida cirúrgica: AS, MC, LJ e SABAS, MC, LJ e SABCoprocultura:Coprocultura: MC e SSMC e SSEscarro:Escarro: AS e MCAS e MCEscarro-tuberculose:Escarro-tuberculose: LJLJSecreção nasal:Secreção nasal: AS e MCAS e MCPonta de cateter:Ponta de cateter: ASASUrina:Urina: CLED e MCCLED e MC

AS: agar sangueAS: agar sangue LJ: Lowenstein-JensenLJ: Lowenstein-JensenMC: MacConkeyMC: MacConkey SAB: SabouraudSAB: Sabouraud

Condições de crescimentoOxigênio

Aeróbicos estritos

Anaeróbicos facultativos

Anaeróbios obrigatórios

Anaeróbios aerotolerantes

Microaerófilas

Incubação

EstufaEstufa

Jarra de anaerobioseJarra de anaerobiose

Meios de CulturaAspectos gerais

Cultivar e manter microrganismos viáveis no laboratório

Substâncias essenciais para o crescimento das bactérias

Crescimento seletivo Demonstração de propriedades biológicas Isolamento

Meio de CulturaPrincipais produtos e compostos utilizados

Hidrolizados de proteínas Carboidratos Tampões Enriquecimento Inibidores

Meio de CulturaPrincipais produtos e compostos utilizados

Indicadores de pH Outros indicadores Ágar Substratos para a ação de enzimas

ClassificaçãoFormulação

Sólidos (ágar) 1 a 2,0 %

Semi-sólidos (ágar) 0,05 a 0,3 %

Caldos Ativação das culturas, repiques de micro-

organismos, provas bioquímicas

FinalidadeMeios de pré-enriquecimento

Microrganismos injuriados Ex: Água peptonada,, Caldo lactosado

Caldo lactosadoCaldo lactosado

Caldo lactosado

Finalidade Meios de Enriquecimento

Ideal para quando há poucos micro-organismos, crescimento lento, exigentes e fastidiosos.

Ex: infusão de cérebro e coração (BHI), Caldo Tioglicolato

Caldo tioglicolato

FinalidadeDiferenciais

Identifica micro-organismos parecidosEx: Ágar Sangue, Ágar MacConkey

Ágar MacConkey

FinalidadeSeletivos

Contém substâncias que inibem o desenvolvimento de determinados grupos de microrganismos, permitindo o crescimento de outros

Ex: Ágar Salmonella-Shigella (SS) - Isolamento Salmonella e Shigella sp

Ágar Salmonella-Shigella (SS)

FinalidadeIdentificação

Realização de provas bioquímicas e verificação de funções fisiológicas de organismos

Ex: Ágar Citrato, Ágar Bile-Esculina

Ágar bile-esculina

FinalidadeIdentificação

Avaliam determinadas atividades metabólicas permitindo caracterização e identificação Ex: Uréia, Ágar TSI (Tríplice açucar ferro)

Ágar TSI (tríplice açúcar ferro)

Meios de Transporte e Conservação

Meio Stuart

Cary Blair

Salina Tamponada

Ágar Nutriente

Meios de Transporte e ConservaçãoMeio Stuart

Impede a multiplicação do microrganismos e garante apenas sua sobrevivência. Cor original do meio: Branco opalescente. Não há evidência de crescimento bacteriano.

Meios para Crescimento e Meios para Crescimento e IsolamentoIsolamento

Ágar Chocolate

Meio rico e não seletivo Microrganismos exigentes Base - sangue de cavalo, carneiro ou coelho

em temperatura alta (hemina e hematina)

Haemophilus sp., Neisseria sp.,

Meios para Crescimento e IsolamentoÁgar Chocolate

Haemophilus sp.

Neisseria sp.

Meios para Crescimento e Isolamento

Thayer MartinÁgar Chocolate com Vancomicina (G+), Colistina (G-), Nistatina (f)

e Trimetoprim

Meio rico e não seletivo Gram negativo e Gram positivo, fungos filamentosos (bolores)

e leveduras Eritrócitos íntegros (padrões de hemólise nítidos)

Meios para Crescimento e Isolamento

Ágar Sangue

S. aureus - colônias -hemolíticas

Meios para Crescimento e IsolamentoÁgar Sangue

Meios para Crescimento e Isolamento

Ágar MacConkey

Isolamento de bacilos Gram negativos (seletivo) Inibe bactérias Gram positivas

Utilização de lactose (diferencial) Lactose positiva – coloração avermelhada Lactose negativa – coloração inalterada

Salmonella. E.coli

Meios para Crescimento e IsolamentoÁgar MacConkey

Meios para Crescimento e IsolamentoÁgar MacConkey

Klebsiella sp

Meios para Crescimento e IsolamentoÁgar Salmonella-Shigella (SS)

Inibem microrganismos Gram positivos (sais de bile, verde brilhante e citrato de sódio)

Tiossulfato de sódio e o citrato férrico

Colônias com centro negro (H2S) ou colônias incolores: suspeita de Salmonella.

Colônias incolores: suspeita de Shigella spp

Salmonella e Shigella

Meios para Crescimento e IsolamentoÁgar Salmonella-Shigella (SS)

Utilizado para semear amostras de urina Isolar e quantificar microrganismos Gram positivos,

Gram negativos e leveduras.

Cor original do meio: azul claro. Colônias lactose positiva: cor amarela. Colônias lactose negativa: cor azul.

Meios para Crescimento e IsolamentoÁgar CLED – cystine lactose electrolyte

deficient

Meios para Crescimento e IsolamentoÁgar CLED – cystine lactose electrolyte deficient

Meios para Crescimento e Isolamento

Löwenstein Jensen

Base formada por ovos integrais Isolamento primário de micobactérias.

Cor original do meio: verde claro Positivo: Crescimento de colônias

amarelas/vermelhas Negativo: ausência de crescimento

Meios para Crescimento e IsolamentoLöwenstein Jensen

esverdeado

Identificação e ClassificaçãoÁgar Sangue

S. aureus - colônias -hemolíticas

Alpha-hemólise (Streptococcus pneumoniae)

Beta-hemólise (Streptococcus pyogenes)

Gama-hemólise (Enterococcus faecalis)

Identificação e ClassificaçãoÁgar Sangue

Provas de IdentificaçãoÁgar DNAseÁgar DNAse

Meios para Teste de Sensibilidade aos Antimicrobianos

Ágar Mueller Hinton

Ágar Sangue

Kirby e Bauer e pelo CLSI - condições de crescimento das principais bactérias.

Avaliação da resistência aos antimicrobianos - métodos de difusão em disco e E-test para enterobactérias, não fermentadores, Staphylococcus, Enterococcus sp.

Sensibilidade aos AntimicrobianosÁgar Mueller Hinton

Teste de Sensibilidade aos AntimicrobianosÁgar Mueller Hinton

Sensível a novobiocina

S. Saprophyticus Resistente

S. epidermidis

Resistente e sensível à oxacilina MRSA

Teste de Sensibilidade aos AntimicrobianosÁgar Mueller Hinton

Resumo dos tipos de meio e quais micro-organismos costumam crescer

Meios de cultura para fungos

Ágar Sabouraud (meio sólido)

BHI (meio líquido)

Semeadura: em superfície

Incubação: temperatura de 25 a 30 graus por até 4 semanas.

Agar Sabouraud